沈红杰；郭海英；回良杰；蔡岩；刘志强；齐风霞
目的在构建高效表达IFN-α1b重组大肠杆菌工程菌的基础上,建立适合该工程菌的发酵和纯化工艺.方法采用高密度培养方法(HCDC)和柱层析纯化技术.结果发酵密度A600可达70,表达量为菌体总蛋白的30%左右.经破菌、离心、离子交换和分子筛凝胶过滤得到IFN-α1b纯品,FPLC测定纯度为100%,活性为4.99×107U/ml,比活为2.5×107U/mg,均符合2000版<中国生物制品规程>要求.结论已建立了适用于规模化生产的发酵纯化工艺.
作者：徐帆洪；吴腾捷；路煜；叶凡；王月红；刘朝阳；郭盛淇 刊期： 2003年第05期
目的通过对人蛋白C cDNA的定点突变,构建人蛋白C突变体cDNA,以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物.方法针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法,从人胎肝总RNA中分别钓取人蛋白C的重链和轻链,经重组PCR反应将两者连接,然后将其克隆入pGEM-T载体中,经酶切和PCR鉴定后进行测序.结果经RT-PCR和重组PCR扩增获得大小为1 374bp的cDNA片段,并成功构建了人蛋白C cDNA突变体的克隆质粒pGEM-T/mhPC,序列分析证实所引入的编码8个氨基酸短肽的核苷酸序列突变位点正确取代了人蛋白C的活性肽,获得人蛋白C突变体cD-NA的克隆.结论已成功进行了人蛋白C cDNA的突变,获得了人蛋白C cDNA突变体的克隆,为进一步进行人蛋白C突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础.
作者：贾莉玮；吕茂民；徐斯日古愣；沈永才；赵保全；章金刚 刊期： 2003年第05期
目的确定组织胺人免疫球蛋白组织胺测定的适宜方法.方法通过对组织胺HPLC-柱后衍生物荧光分析法和酶标仪微孔板荧光分析法的比较,对样品制备、衍生物形成条件和检测参数进行了优化.结果HPLC-柱后衍生物生成温度为40℃,荧光检测器激发光波长为340 nm,发射光波长为425nm,但组织胺信号峰前的倒峰使组织胺的峰形不完整且不对称;酶标仪微孔板荧光分析法测定的线性范围2.5～1 000 ng,灵敏度1.25ng,标准品测定在2.5～100ng呈稳定性关系,样品测定的标准偏差小于5%.结论酶标仪微孔荧光分析法可以用于游离组织胺含量测定.
作者：白坚石；王威；张洪超；程雅琴 刊期： 2003年第05期
目的观察肾细胞中游离钙([Ca2+]i)及氧自由基在缺血再灌注损伤过程中的改变情况,探讨二者在再灌注肾损伤中发生作用机制.方法摘除Wistar大鼠左肾,钳夹右侧肾蒂,建立急性缺血再灌注肾损伤模型,应用Fura-2/AM荧光指示剂测定缺血再灌注大鼠肾细胞内[Ca2+]i浓度的变化,同时测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果缺血再灌注不同时期肾细胞内[Ca2+]i浓度均有不同程度增高,与对照组相比差异有显著意义,各实验组SOD活力水平降低,与对照组相比差异有显著意义,MDA生成高于对照组,GSH-Px在再灌注早期活力减弱,明显低于对照组,晚期活力基本恢复.结论1.缺血再灌注不同时期大鼠肾细胞内[Ca2+]i超载和不同程度的氧化侵袭,在缺血再灌注肾损伤病理过程中起重要作用;2.再灌注时间与肾细胞内[Ca2+]i超载呈正相关,提示再灌注损伤通过不同机制加重细胞钙超载.
作者：史明；张文岚；薄立华 刊期： 2003年第05期
目的应用化学发光免疫分析法(CLIA)检测人血清催乳素(Prolactin,PRL).方法采用双抗体夹心法.碱性磷酸酶标记抗体,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物.结果低检测限低于5.0μIU/ml,定量范围在10～4000μIU/ml之间的样本;PRL浓度为100、500和2 000μIU/ml时,批内变异为3%～5%(n=20),批间变异为5%～8%(n=20),回收率在91%～109%之间.与LH、TSH、HCG和FSH无交叉反应;稳定性良好,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度＜20%.本试剂与进口的全自动化学发光试剂Beckmen Access比较有较好的相关性.结论本试剂灵敏度高,特异性强,稳定性好,检测范围宽,有很好的准确性和重复性,且使用方便,无污染,是放免试剂的理想替代试剂,适应于临床应用.
作者：刘均生；屈长江；黄建平；韩建星；买制刚；李振勇 刊期： 2003年第05期
目的对两种市售HCV-Ab辅助确认试剂的灵敏度进行比较,以便选定用于献血者终确认的试剂.方法应用Chiron公司的RIBA和Genelabs公司的WB确认试剂,对6种ELISA试剂检测阳性的168份血样进行确认检测.结果168份标本中,124份标本两种试剂结果一致;在125份有反应的标本中,Chiron公司的RIBA对Core、NS3、NS4和NS5区抗体分别检出51、6、53、和37份;Genelabs公司的WB对Core、NS3、NS4和NS5区抗体分别检出77、69、56和30份.结论两种试剂检测不同抗原的反应性存在差别,Genelahs公司的WB的灵敏度高于Chiron公司的RIBA.
作者：邱艳；王全立；叶建伟；高波；高国静 刊期： 2003年第05期
目的探讨实用有效的普通狨猴血清酶学检验方法.方法常规法分离血清,采用2,4二硝基苯腙比色法,24h内测定狨猴血清中异柠檬酸脱氢酶(ICD)活力,IFCC法测定丙氨酸转氨酶(ALT)、草氨酸转氨酶(AST)及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活力,平板琼脂糖凝胶电泳测定乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的活力水平,并与国内外相关实验结果进行比较.结果75只普通狨猴的ALT、AST、γ-GT和ICD活力水平与国内外相关实验结果基本相符,不同试剂等实验条件会造成实验结果出现较大差异.结论ALT、AST和ICD是甲型肝炎研究中狨猴肝脏损伤的有效指标.采用动物实验前自身对照值是可靠和科学的血清酶学分析方法.
作者：黄小琴；王祥；曹逸云 刊期： 2003年第05期
目的以HIV-1、VSV和Sindbis为模型病毒,验证低pH法(pH2.0)灭活人白细胞干扰素α病毒效果.方法将模型病毒按1:9(V/V)加入干扰素中,混匀后调pH至2.0.4℃放7 d后,测病毒滴度.未发现细胞病变(CPE)的样品须盲传3代并观察7 d,若仍无CPE,则判定无病毒存在.结果4 log的HIV-1、6.63 log的VSV和6.38 log的Sindbis病毒被灭活,干扰素活性未受影响.结论低pH法(pH2.0)灭活病毒经济有效,可提高人白细胞干扰素的安全性.
作者：刘兰军；葛永红；唐安芬；陈学奎；谢觉林；沈富兵；邓杰；吴永林；钱汶光 刊期： 2003年第05期
目的探讨E.coli表达的戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码蛋白第112～607氨基酸片段(pORF256K)的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性.方法pORF2-56K免疫小鼠和豚鼠,用ELISA检测血清抗体效价.将HEV毒种与高效价豚鼠灭活血清在体外孵育后,接种于2BS细胞,用RT-PCR检测病毒RNA的复制情况.结果E.coli表达的pORF2-56K可诱导机体产生高水平的HEV特异性抗体和强烈的免疫记忆.该抗体可在体外有效中和HEV,使之失去在2BS细胞中有效复制的能力.结论E.coli表达的pORF-56K具有良好的免疫原性,且其诱生抗体具有中和HEV的能力,可作为HEV重组疫苗的候选抗原.
作者：李洪钊；江宏映；刘晓；张光明；孙强明；李燕；马雁冰；孙茂盛 刊期： 2003年第05期
目的探讨HCV/HBV联合抗原PCX/S免疫原性.方法将纯化的HCV复合多表位抗原蛋白PCX与HBV的S蛋白按一定比例混合并免疫小鼠,用ELISA的方法检测抗-HBs和抗-HCVAb;3H-TdR掺入法检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖;51Cr释放法检测免疫小鼠特异性CTL杀伤作用.结果免疫后5、10及15μg的3组均能诱导抗-HBsAb和抗-HCVAb,但抗HCVAb水平明显低于抗-HBsAb水平.免疫小鼠可诱发针对PCX或S蛋白的CTL反应,前者更明显,并刺激T细胞增殖.结论HCV/HBV联合抗原PCX/S蛋白可诱导特异性免疫应答,为HCV/HBV双价疫苗的研究提供一定实验基础.
作者：马绍辉；董承红；胡方；顾建友；陈丽珊；任大明；李琦涵 刊期： 2003年第05期
目的研究梅花鹿免疫细胞活性因子(SIAF)对病毒性心肌炎的治疗作用.方法采用柯萨奇B3型病毒(CB3V)性心肌炎小鼠模型,检测心肌酶、心电图,观察心肌病理改变及死亡率.采用MTT法测定淋转及NK细胞毒活性.结果SLAF能明显改善心肌损伤模型鼠的心电图及心肌病理损害;降低心肌酶含量;调节淋转及NK细胞毒活性.结论SLAF对病毒性心肌炎具有一定治疗作用.
作者：孙蕾；常雅萍；于永利 刊期： 2003年第05期
目的研制水痘IgG(VZV-IgG)酶联检测试剂盒.方法将VZV接种二倍体细胞,收获病毒,经纯化后用作包被抗原;辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG制备酶联检测试剂盒并进行质量检定.结果VZV-IgG酶联检测试剂盒敏感度与膜抗原荧光抗体法(FAMA)近似.结论成功地制备了VZV-IgG酶联检测试剂盒.
作者：邵华；李莉；郭桥；李占春；陈子阳；张勇；李冰；郭立君；马吉瑞；郭凤云 刊期： 2003年第05期
肿瘤细胞对多种细胞毒药物的拮抗性是影响肿瘤化疗的主要障碍.它是以肿瘤细胞对亲脂性细胞毒药物,包括各种植物碱类抗肿瘤药物的交叉拮抗为特征,可分为天然性和获得性耐药,区别在于后者是在化疗过程中诱导的对一种抗肿瘤药物产生耐药后,同时对其他不相关非同类药物亦产生耐药性,即多耐药性(multidrug resistance,MDR).MDR的产生机制复杂,常见原因是P-糖蛋白(Pgp)的超表达.
作者：安立彬；谭岩；刘力华 刊期： 2003年第05期
目的探索炭疽减毒活疫苗A16R诱导黏膜与系统免疫的规律.方法将6～8周龄的BALB/c小鼠随机分为3组,每组5只,将炭疽疫苗A16R以5×107 cfu(相当于人用1/20剂量)和2×108 cfu(相当于人用1/5剂量)经皮下接种,每周采集尾血,采用ELISA间接法检测血清中特异性抗PA的IgG抗体;在免疫8周后,活杀小鼠,分离NALT、鼻通道、脾、小肠Peyer结及腹股沟淋巴细胞,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化;并收集肺灌洗液,采用ELISA法检测特异性抗PA的sIgA抗体.结果1/5剂量组能诱导较高、较快血清IgG的增加,免疫8周后,血清抗体效价仍然持续在高水平,但1/5剂量组肺灌洗液中仅能检测到微弱的aIgA抗体,而1/20剂量组基本检测不到;NALT、NP、PP和腹股沟淋巴结中CD+3、CD+4、CD+8和CD45R+的细胞差异无显著意义,但是脾细胞中CD+3细胞构成比小于对照组,CD45R+细胞构成比高于对照组,T/B比值低于对照组;1/20剂量与1/5剂量组差异无显著意义.其他部位的淋巴组织的细胞表型无显著变化.结论炭疽疫苗A16R主要诱导系统免疫应答,而不能诱导有效的呼吸道和消化道黏膜免疫.
作者：寇志华；魏茂提；张松乐；彭虹；赵秋敏；李彬；曹务春 刊期： 2003年第05期
目的构建Aspergillus oryzae新的红色表现型菌株用于天然色素生产.方法构建Aspergillus oryzaeRIB40 cDNA文库,应用BLAST网络服务对Aspergillus oryzae RIB40 cDNA文库的EST数据进行同源性比较,从EST克隆扩增Asperergillus oryzae类SAICAR合成酶基因(sh1919f片段),反向插入pUSA真核表达载体.结果完成反义表达载体的构建.Aspergillus oryzae类SAICAR合成酶氨基酸序列与Pichiaj jadinii、Saccharomy cescerevisiae和Schizosac-charomycespombe的SAICAR合成酶氨基酸序列具有高度同源性.结论类SAICAR合成酶基因反义表达载体的构建为其转染入Aspergillus oryzae菌株筛选红色突变菌株奠定了实验基础.
作者：谢林；谢欣；鞠桂芝 刊期： 2003年第05期
为了解流行性腮腺炎在本地区流行病学特征和评价国产流行性腮腺炎减毒活疫苗的免疫效果,现将1991～2002年流行性腮腺炎的疫情资料进行统计分析,结果如下.
作者：赵铁军；马彩荣；徐万军 刊期： 2003年第05期
目的研究共刺激分子4-1BBL对T淋巴细胞的作用,并进一步研究肿瘤的免疫治疗.方法按照4-1BBL的基因序列,设计合成了可扩增4-1BBL胞外区的引物序列,用RT-PCR方法从急性B淋巴白血病Raji细胞系细胞中提取总RNA,扩增出4-1BBL胞外区片段,并克隆到载体中,经酶切鉴定后再进行序列分析.结果所克隆的目的片段经EcoRI和XhoI双酶切和序列分析证明正确.结论已成功地钓取4-1BBL胞外区基因并克隆到pMD-18载体上.
作者：程绍辉；于继云；陈兴；许红莲 刊期： 2003年第05期
目的建立监测狂犬病纯化疫苗质量的一种快速有效的方法.方法应用ELISA法检测狂犬病纯化疫苗效价并与NIH法进行对比.结果ELISA法与NIH法检测狂犬病纯化疫苗效价结果一致.结论ELISA法是快速监测狂犬病纯化疫苗质量的一种有效方法.
作者：沈红杰；郭海英；回良杰；蔡岩；刘志强；齐风霞 刊期： 2003年第05期
目的考察化学发光免疫诊断试剂盒(Lumiassay(R) 促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4))在临床诊断甲状腺功能上的价值.方法用Lumiassay(R)试剂盒和Bayer ACS:180系统的同类试剂,同时测定415份临床标本以及试剂盒的各项技术指标.结果化学发光试剂对甲亢的灵敏度分别为95.2%、96.4%和86.7%;对甲减的灵敏度分别为93.1%、85.1%和94.1%.对甲亢的特异度分别为99.1%、98.3%和99.1%;对甲减的特异度分别为99.6%、99.6%和99.6%.Lumiasssay(R)试剂结果与Bayer ACS:180系统的同类试剂的结果高度一致.结论应用Lumiassay(R)试剂临床诊断甲状腺功能是可行的.
作者：买制刚；刘均生；杨青；屈长江；韩建星；姚海燕；李振勇 刊期： 2003年第05期
赤峰市在保持常规免疫接种率较高的基础上,1997～1998年开展1～15岁人群麻疹疫苗初始强化,并将麻疹监测和麻疹疫情动态分析结果纳入AFP监测系统,共采集522份血清样本.采用ELISA法检测麻疹特异性IgG抗体,试剂由中国预防医学科学院提供.结果判定标准为抗体滴度＜1:200为阴性,抗体滴度≥1:200为阳性,抗体滴度≥1:800达保护水平,现将调查结果报告如下.
作者：张凤华；鲍健光；孙翠莲 刊期： 2003年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
