学术投稿

rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA在乏氧条件下对MiaPaCa2细胞Glut-1表达的影响

关键词:缺氧诱导因子-1α, 葡萄糖转运体-1, 小干扰RNA, 重组腺相关病毒
摘要:目的:以重组腺相关病毒(rAAV)为载体介导以HIF-1α为靶点的小干扰RNA,在厌氧培养条件下作用于Mia-PaCa2人胰腺癌细胞,观察其对糖代谢反应关键酶--葡萄糖转运体-1(Glut-1)表达的影响.方法:构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF.将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF-1α分别转染对数生长的MiaPaCa2人胰腺癌细胞.在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、RT-PCR、Western Blot法观察其对Mia-PaCa2细胞HIF-1αmRNA、蛋白以及Glut-1 mRNA、蛋白表达的影响.结果:Real-Time PCR和Western Blot检测发现.rAAV-siHIF-1α能够抑制MiaPaCa2细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达.RT-PCR和Western Blot检测发现,rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2细胞Glut-1mRNA和蛋白的表达.结论:rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2人胰腺癌细胞糖代谢关键酶Glut-1表达的作用.
天津医科大学学报杂志相关文献
  • 高效液相色谱法检测人血浆中非对称性二甲基精氨酸

    非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethyeargi nine,ADMA)在体内的生理作用是通过抑制内源性-氧化氮合酶(NOS)的活性,阻止内皮细胞一氧化氮(NO)的合成,导致血管内皮功能降低.血浆ADMA浓度的变化与血管内皮功能损害、动脉粥样硬化、脑梗死、高血压、高脂蛋白异常、糖尿病、肾功能衰竭等血管性病变的严重程度密切相关,是目前临床研究的重点课题之一,倍受重视.检测血浆中AD-MA,多采用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生的高效液相色谱法.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 香丹联合物理治疗对寻常型银屑病的疗效观察

    银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,由于确切病因尚未清楚、病程较长,一般药物治疗效果欠佳,笔者在临床中发现香丹联合物理治疗对寻常型银屑病有较好的治疗作用,为进一步评价其疗效和安全性,作如下临床研究.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 重组人脑利钠肽联合硝普钠治疗急性心力衰竭的疗效评价

    目的:观察国产重组人脑利钠肽(rh-BNP)联合硝普钠治疗急性心力衰竭的疗效及安全性.方法:急性心力衰竭住院患者40例,心功能III-Ⅳ级,随机分为试验组(rh-BNP+硝普纳)20例,对照组(硝普纳)20例.分别在给药后0、15、30min和1、2,4、8、12、24h记录呼吸频率、心率、收缩压、舒张压等指标,比较两组参数变化情况.其中试验组10例.对照组10例,分别在与前面相同时间段测量记录治疗前后的肺毛细血管楔压(PCWP)、肺动脉压(PAP).结果:上述指标试验组和对照组差异均有统计学意义.两组无症状低血压发生情况相似,未发现与药物相关的症状性低血压及其他严重不良反应.结论:rh-BNP和硝普纳联合应用治疗急性心力衰竭有着更好的血流动力学效应和临床效果.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B活性位点Asp48突变理论研究

    目的:利用点突变研究PrPlB中Asp 48的重要性.方法:理论研究采用分子力学原理,使用HyperChem 7.0的AMBER99力场.首先对PTP1B中Asp 48进行点突变,然后利用Polak-Ribiere共轭梯度法对复合物结构进行优化.计算优化结构的静电相互作用能、范德华相互作用能、二面角等指标,并通过比较突变后这些指标的变化,分析酶与底物的相互作用变化.结果:突变后活性位点的形状、PIP1B的空间构象及底物与催化相关残基的相互作用能均未发生显著变化.而D48K、D48I和D48T则导致底物与非催化相关残基的相互作用降低.结论:点突变对活性位点的形状、PTP1B的空间构象和催化活性的影响较小,但D48K、D48I和D48T会导致底物与PTP1B的结合能力下降.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 缬沙坦和血管紧张素Ⅱ在不同状态下对成人冠状动脉内皮细胞NOS和NO的影响

    目的:研究缬沙坦和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)分别在有氧和无氧状态下对成人冠状动脉内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)含量的影响.方法:将培养的第三代成人冠状动脉内皮细胞分为I组(有氧组)和n组(缺氧组).每组再分为6个亚组,即对照组、AngⅡ组、缬沙坦组、AngⅡ+不同浓度缬沙坦组.在每组中分别加入不同浓度缬沙坦和AngⅡ进行36 h细胞培养,其中Ⅱ组(缺氧组)后4h在5%CO2/95%N2的缺氧环境下进行培养,然后分别检测NO含量及NOS活力.结果:缺氧和AngⅡ均能显著降低NOS活力及NO含量;单独应用缬沙坦对NOS活力及NO的合成无影响.当缬沙坦和AngⅡ联合作用时可逆转AngⅡ对NOS及NO的抑制作用,且呈剂量依赖性;与缺氧对照组及单独应用AngⅡ组相比较.缺氧+AngⅡ组能进一步降低NOS活力并抑制NO的合成.结论:缺氧和AngⅡ均能造成成人冠状动脉内皮细胞损伤,且二者具有协同作用;缬沙坦能逆转AngⅡ对内皮细胞的损伤,且呈剂量依赖性.提示缬沙坦可改善成人冠状动脉内皮细胞的功能,缬沙坦的合理运用可起到预防冠状动脉粥样硬化的作用.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 多层螺旋CT扫描在胰腺癌诊治中的价值

    目的:利用腹部胰腺CT数据进行三维重建和显示,研究胰腺癌病变组织及其与周围血管的形态和位置关系.对胰腺癌进行术前评估,提高其诊疗效果.方法:对58例胰腺癌患者进行腹部螺旋CT检查,并做二维、三维重建图像.结果:重建胰腺及其周围血管图像真实,能实时旋转、任意厚度多次重建、切割,多角度观察胰腺病变情况和周围血管受累程度,对胰腺癌进行分期.结论:通过对胰腺及周围血管三维重建图像显示,可帮助临床对胰腺癌进行分期并做术前评估,对胰腺癌的诊治有重要临床指导意义.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 异丙酚对肠缺血再灌注大鼠肾损伤的影响

    目的:探讨异丙酚对大鼠肠缺血再灌注后致肾损伤的影响.方法:24只健康清洁Wistar大鼠随机分为3组.每组8只.假手术组(S组)分离肠系膜上动脉(SMA),下腔静脉微量输液泵持续输注0.9%生理盐水10 ml/(kg·h).肠缺血再灌注组(I/R组)阻断SMA 1 h,下腔静脉微量输液泵持续输注O.9%生理盐水10ml/(kg·h].异丙酚组(P组)阻断SMA1 h,再灌注前5 min将持续输注的0.9%生理盐水10 ml/(kg·h)更换为等容异丙酚10 mg/(kg·h).于再灌注2h后下腔静脉取血,测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Bcr);处死大鼠后取双侧肾,右肾皮质部制作组织均浆测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,左肾作病理标本.结果:与S组相比,I/R组SOD活性降低,MDA、BUN及Bcr含量升高(P<0.05);与I/R组相比,P组MDA、BUN及Bcr含量降低,SOD活性升高(P<0.05).病理结果显示:光镜下I/R组肾小球及球后毛细血管明显扩张,细胞水肿,球后毛细血管内堆积大量破裂红细胞;P组肾结构接近S组.结论:大鼠肠缺血再灌注后可造成肾损伤,异丙酚对其具有保护作用.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 食源性肥胖对大鼠免疫功能的影响

    目的:利用食源性肥胖(DIO)大鼠模型研究肥胖对脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞含量的影响.并探讨其是否与脾细胞内JAK/STAT通路相关联.方法:(1)通过高能饲料喂养建立DIO大鼠模型.(2)利用流式细胞术检测大鼠脾脏CD4+和CD8T淋巴细胞含量.(3)利用Western blot检测大鼠淋巴细胞长型的leptin受体(Ob-Rb)以及活化的STAT3蛋白的表达.结果:(1)高能饲料喂养的大鼠体重高于普通饲料喂养大鼠,发育为DIO大鼠.(2)DIO大鼠脾脏CD8+T 淋巴细胞含量高于肥胖抵抗(DR)组以及对照组的大鼠,CD4+/CD8+细胞比值低于DR组以及对照组的大鼠.(3)各组大鼠脾脏淋巴细胞Ob-Rb以及活化的STAT3蛋白的表达没有统计学差异.结论:DIO大鼠脾脏CD8+T淋巴细胞含量高于非肥胖大鼠,CD4+/CD8+细胞比值低于非肥胖大鼠,其处于免疫抑制状态;这一变化与DIO大鼠脾脏淋巴细胞的Ob-Rb-STAT3信号转导通路并没有直接的关系.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 超声在早期类风湿性关节炎手关节病变诊断的初步研究

    目的:探讨彩色多普勒超声在早期类风湿性关节炎手部小关节病变中的应用价值.方法:超声检查32例患者双手腕关节、掌指关节及近端指间关节(共704个关节).结摹:32例病例中滑膜增生水肿28例共210个关节,关节腔积液25例共88个关节,滑膜血管翳8例共15个关节,关节周围渗出5例共5个关节,骨破坏3例共11个关节.结论:彩色多普勒超声可为临床诊断类风湿性关节炎早期手部小关节滑膜病变提供诊断依据.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 2型糖尿病合并认知功能障碍的相关因素分析

    目的:研究2型糖尿病(T2DM)合并认知功能障碍的相关危险因素.方法:选择2型糖尿病患者198例为调查对象,以简易智能精神状态量表(MMSE)对每位受检者的认知功能进行评定,将患者分为认知功能障碍组和认知功能正常组,比较两组的一般状况及临床资料.进行非条件logistic回归分析认知功能障碍的相关因素.结果:认知功能障碍组相对于认知功能正常组在年龄、病程、DM家族史、高血压病史、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、CHO、尿UMA、是否存在抑郁、焦虑、是否合并DM视网膜病变、DM周围神经病变以及是否使用胰岛素治疗、是否坚持运动等方面的差别具有统计学意义.进行非条件logistic回归分析,共6个变量进入方程:年龄、抑郁、HbAlC、CHO、DM视网膜病变、是否坚持运动.结论:年龄、抑郁、血糖控制不好、高胆固醇、并发DM视网膜病变均是T2DM合并认知功能障碍的独立危险因素,而坚持运动则是保护因素.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 不同剂量有机硒对大鼠血脂代谢影Ⅱ向的实验研究

    硒是人体必需的微量元素,在人体中的含量较低,约为6~21 mg,广泛分布于脂肪组织以外的所有组织,以肝、胰、肾、心脏、脾、牙釉质、指甲、眼球等含量较高,与人体健康密切相关,1973年世界卫生组织确定为人体必需的营养素之一田.目前认为硒与心血管疾病、糖尿病、肿瘤等疾病发生有关.本实验研究不同剂量的有机硒蛋白粉对大鼠血清胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)的影响,阐述有机硒对脂代谢的作用,为心血管疾病的防治提供依据.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 新阴式子宫切除术临床应用体会

    宫经阴道切除手术(transvaginal hysterectomy,TVH)42例.其中25例子宫体积≥12孕周.选择我院住院患者中完成经腹子宫切除术(transabdominal hys-terectomy,TAH)的病例,子宫体积、年龄、合并症相近的患者42例为对照组.根据子宫体积、肌瘤生长位置、患者体重指数及腹壁厚度为影响因素观察手术时间、术中出血量、术后排气时间、术后镇痛需要及术后并发症,阐述新阴式子宫切除术临床应用的体会.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 囊性肾细胞癌的动态增强CT表现

    目的:探讨单房囊性和多房囊性肾细胞癌的动态增强cT表现特征,以提高其诊断准确性.方法:经手术病理证实的8例囊性肾透明细胞癌术前均行螺旋CT平扫及增强皮髓交界期、实质期、排泄期扫描;分析每一肿瘤的囊壁、囊内间隔、壁及隔结节的平扫,尤为动态增强cT表现.结果:8例囊性肾透明细胞癌中,多房囊性者6例, 单房囊性者2例.CT平扫所有肿瘤均表现为肾实质内圆形或分叶状低密度囊性病变.部分病灶突向肾轮廓外:囊内密度不均7例;5例可见囊壁和,或内隔,其中囊壁不规则增厚和,或有结节者3例,3例伴有囊壁和,或内隔钙化.多期动态增强检查,与平扫相比囊壁、内隔、结节显示更为清楚;7例显示囊壁、内隔、壁结节发生不同形式的强化,其中,4例呈快进快退型强化,3例呈轻至高度进行性延迟强化;1例因囊壁钙化,有无强化分辨不清.结论:囊性肾细胞癌的CT动态增强表现具有一定特征,有助于正确诊断,但表现不典型者,还需与其他肾脏良性囊性疾病相鉴别.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性治疗前列腺癌的实验研究

    日曲:观察腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)自杀基因系统在人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下对人前列腺癌细胞的靶向性体外杀伤效应.方法:利用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因感染前列腺癌细胞LNCaP和人成纤维细胞MRC-5, 荧光显微镜下观察其感染效率;利用携带不同启动子的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV/TK以及Ad-CMV-HSV/TK感染LNCaP和MRC-5细胞.加入不同浓度GCV,MTY法观察受转染细胞的存活率.结果:重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP能特异地转染LNCaP, 其转染效率随重组病毒的MOI增加而升高(P<0.01),MOI为1时转染率为8.3%,MOI为1000时转染率达100%;应用GCV处理后,Ad-CMV-HSV/TK对LNCaP和MRC-5细胞均有杀伤作用,而Ad-hTERTp-HSWTK只杀伤LNCaP(P<0.001),随着MOI和GCV浓度的增加,LNCaP细胞存活率明显降低(P>0.01),MOI为1和GCV浓度为1μmol/L时存活率为95.4%,MOI为100和GCV浓度为1000μmol/L时存活率仅为6.1%,并有旁观者效应.结论:重组腺病毒携带EGFP报告基因可准确、简便地确定转染效率;hTERT启动子调控的重组腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统对人前列腺癌细胞有靶向杀伤作用.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA在乏氧条件下对MiaPaCa2细胞Glut-1表达的影响

    目的:以重组腺相关病毒(rAAV)为载体介导以HIF-1α为靶点的小干扰RNA,在厌氧培养条件下作用于Mia-PaCa2人胰腺癌细胞,观察其对糖代谢反应关键酶--葡萄糖转运体-1(Glut-1)表达的影响.方法:构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF.将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF-1α分别转染对数生长的MiaPaCa2人胰腺癌细胞.在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、RT-PCR、Western Blot法观察其对Mia-PaCa2细胞HIF-1αmRNA、蛋白以及Glut-1 mRNA、蛋白表达的影响.结果:Real-Time PCR和Western Blot检测发现.rAAV-siHIF-1α能够抑制MiaPaCa2细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达.RT-PCR和Western Blot检测发现,rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2细胞Glut-1mRNA和蛋白的表达.结论:rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2人胰腺癌细胞糖代谢关键酶Glut-1表达的作用.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 利多卡因对缺血再灌注离体大鼠心功能的影响

    目的:探讨利多卡因对缺血再灌注离体大鼠心功能的影响及其可能机制.方法:40只健康成龄雌性Wistar大鼠,随机分为5组(n=8),建立Langendorff模型.缺血再灌注组(A):灌注Krebs-Henseleit(K-H)缓冲液;利多卡因1 mg/L组(B):灌注含1 mg,L利多卡因的K-H液;利多卡因2.5 mg/L组(c):灌注含2.5 mg/L利多卡因K-H液;利多卡因5 mg/L组(D):灌注含5mg/L利多卡因的K-H液;利多卡因+格列苯脲组(E):灌注含2.5mg/L利多卡因和10μmol/L格列苯脲的K-H液.各组分别缺血前灌注相应灌流液20 min,全心缺血30 min,再灌注60 min.记录缺血前5 min及再灌注30 min和60 min的心率(HR)、左心室形成压(LVDP)、左室内压上升大速率(+dp/dtmax)、左室内压下降大速率(-dp/dtmax)等心功能参数.结果:与A组比较,再灌注30 min和60 min时,c组的HR、LVDP、±dp/dtmax均升高(P<0.05),B、D两组上述参数变化无统计学意义(P>0.05).与C组比较,再灌注30 min和60 rain时,E组各项参数均降低(P<0.05).结论:含2.5 mg/L利多卡因的K-H液可显著改善缺血再灌注离体大鼠心功能,部分机制可能与心肌细胞和线粒体ATP敏感性钾通道有关.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 经颈部纵隔镜手术在肺癌诊断中的应用

    目的:探讨纵隔镜检查在肺癌诊断中的应用价值和临床经验.方法:对258例初步诊断或疑诊肺癌的患者行纵隔镜淋巴结活检并将标本送病理检查,根据病理报告对疾病作出明确诊断.结果:全部病例中获得明确病理诊断者245例,确诊率95.0%(245/258).术前检查确诊为肺癌并纵隔淋巴结转移的67例患者中,纵隔淋巴结阳性49例.阴性18例,CT检查准确率73.1%(49/67);术前拟诊为恶性肿瘤72例患者中,术后病理确诊为恶性肿瘤41例(其中肺癌24例,纵隔恶性肿瘤17例),良性疾病25例,术后诊断不明6例,术前诊断准确率为56.9%(41/72);术前拟诊为良性疾病119例患者中,术后病理诊断为良性疾病104例(其中结节病74例,纵隔淋巴结结核15例,纵隔淋巴结炎15例),恶性疾病(肺癌)8例,术后诊断不明7例,术前诊断准确率为87.4%(104/119).结论:在肺癌诊断及肺癌术前分期方面,纵隔镜检查是一种准确、安全、可靠的有效方法.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 卡维地洛对慢性心衰患者血浆脑钠肽水平及左心功能的影响

    目的:观察卡维地洛对慢性心力衰竭(CHF)患者血浆脑钠肽(BNP)及左心室收缩功能的变化.方法:CHF患者87例,分卡维地洛治疗组(B组)44例和常规治疗组(A组)43例.随访6个月,评估两组治疗前、治疗后1个月、3个月及6个月患者心功能指标和血浆BNP浓度.结果:治疗后1个月两组血浆BNP水平较治疗前下降(P<0.05),3个月时下降更明显.3个月组间比较有显著性差异(P<0.05);两组患者治疗1个月后左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室舒张末容积(LVEDV)、左心室收缩末容积(LVSDV)及左心室射血分数(LVEF)与治疗前比较均无统计学差异(P>0.05);6个月时的上述指标与治疗前比较均有显著性差异(P<0.05).两组患者血浆BNP水平与同期测定的左心室舒张末内径呈正相关(r=0.51,P<0.01),与LVEF呈负相关(r=-0.43,P<0.01).结论:卡维地洛能有效地改善CHF患者的心功能;CHF患者BNP水平的变化早于心脏超声指标的变化;血浆BNP水平可以作为治疗心力衰竭的一个可靠观察指标.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 银屑病患者外周血叶酸水平与其高凝状态的相关性研究

    目的:探讨银屑病患者外周血叶酸水平与其高凝状态的相关性.方法:采用CA-7000型血液凝固仪测定凝血酶原时间国际标准化比值(PT INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、蛋白C活性(PC:A)、D-二聚体(D-dimer),采用ELISA法测定凝血酶原片段1+2(F1+2).采用BayerACS:180分析仪测定血清叶酸(sFA).结果:与对照组比较,银屑病叶酸正常组及银屑病叶酸减低组F1+2、D-dimer均显著增高(P<0.01),PC:A均显著减低(P<0.01),APTT、PT INR均无显著性变化(P>0.05).银屑病叶酸减低组F1+2、D-dimer显著高于叶酸正常组(P<0.01),PC:A显著低于叶酸正常组(P<0.01).银屑病叶酸减低组叶酸水平与PC:A水平呈显著正相关,与F1+2、D-dimer呈显著负相关,与APTT、PT INR 无显著相关性.结论:银屑病患者外周血叶酸水平的显著减低与其高凝状态密切相关,并成为影响高凝状态发展的重要因素.

    作者: 刊期: 2009年第04期

  • 胎儿体重的超声预测概况

    随着超声诊断技术在产科的广泛应用.B型超声检查已成为胎儿体重预测的重要手段.准确预测胎儿体重对巨大儿、宫内生长受限的诊断以及分娩方式和分娩时机的选择都有重要意义.

    作者: 刊期: 2009年第04期

天津医科大学学报杂志

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主管:天津市教育委员会

主办:天津医科大学