涂传涛；朱新宇；张顺财；胡锡琪；王吉耀
目的 观察高脂饲料喂养的小鼠心脏和肺组织中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric-oxide syn-thase,eNOS)及血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的含量变化,探讨高脂血症对eNOS和HO-1表达的影响.方法 高脂饮食组(n=8)和普通饮食组(n=8)C57BL/6小鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养18周后,测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipopro-tein,HDL)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)含量,采用Real-time PCR检测心脏和肺组织中eNOS及HO-1的mRNA水平,以免疫组化方法检测其蛋白表达.结果 高脂饮食组TC、TG和LDL明显高于普通饮食组,HDL则低于普通饮食组;高脂饮食组心脏和肺组织中eNOS的mRNA和蛋白水平低于普通饮食组,HO-1的mRNA和蛋白水平高于普通饮食组.结论 高脂饲料喂养能使小鼠形成高脂血症,并引起心脏和肺组织中eNOS的表达降低,同时HO-1的表达升高.
作者：江一峰；曹晓娥；王丽；赵凤娣；殷莲华 刊期： 2008年第03期
目的 探讨Snmd 7基因对大鼠肾小球系膜细胞(MsC)Ⅰ、Ⅲ型胶原(col工、ColⅢ)表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据.方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定;又分别采用RT-PCR和Western blot法,检测转染阳性MsC克隆Col Ⅰ、Col Ⅲ表达改变.结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆(S-22与S-26),并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制,其中S-22克隆COl Ⅰ及ColⅢ mRNA表达分别降低47%和56%,其蛋白表达分别降低65%和54%.结论 Smad 7可能通过抑制组织内Col Ⅰ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用.
作者：于鸿；陈琦；刘晔；赵仲华；郭慕依 刊期： 2008年第03期
目的 探索一个高效分离和扩增人骨髓问充质干细胞的方法,并通过形态学和多向分化能力进行鉴定.方法 抽取人胸椎骨髓标本,联合利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs,体外扩增后传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR.在地塞米松、左旋Vit C、β磷酸甘油、FK506作用下向成骨细胞诱导分化;在TGF-beta 3、重组人胰岛素、丙酮酸钠、亚硒酸等作用下向软骨细胞诱导分化;在地塞米松、IBMX、吲哚美辛的作用下向脂肪细胞诱导分化;在VEGF、bFGF作用下向血管内皮细胞分化.结果 原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好.细胞表面标记物CD13、CD29,HLA-2阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性.经定向诱导分化后,细胞分别呈现成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞的表型特征.结论 该方法能从人骨髓中高效分离和扩增MSCs,能成功定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞.
作者：戴文达；方涛林；李熙雷；林红；董健；陈峥嵘 刊期： 2008年第03期
氯普鲁卡因(Chloroprocaine,CP)经动物和临床证实,是一种起效快、效果确切、没有快速耐药、毒副反应小的短效局麻药.近国外已经证实去除防腐剂(亚硫酸盐)和稳定剂后的纯盐酸CP可安全用于硬膜外麻醉,重新燃起了业界将CP用于脊麻的兴趣.本文总结了近几年关于CP脊麻临床特点的观察,针对目前使用中存在的争议,探讨其神经毒性的相关因素及发生机制,为进一步研究CP鞘内给药安全性提供有效手段和可靠途径.
作者：解轶；黄绍强；梁伟民 刊期： 2008年第03期
目的 采用随机对照临床试验的方法对两点法和单点法这两种定位方法在锁骨下喙突入路臂丛阻滞中的效果进行比较.方法 57名拟于锁骨下臂丛神经阻滞下行前臂和手部手术的患者被随机分为单点组(Group Single,n=29)和两点组(Group Dual,n=28),采用神经刺激仪在锁骨下部定位臂丛神经,单点组定位臂丛后束,引发伸腕伸指动作后注入0.5%罗哌卡因30 mL;两点组除定位后束外,追加定位臂丛外侧束肌皮神经组分,引发屈肘反应,分别注入0.5%的罗哌卡因20 mL和10 mL.阻滞后每隔10 min评价臂丛神经所支配的所有上肢7支终末神经的感觉阻滞情况,同时记录总体评分、操作时间和不良反应的发生率.结果 阻滞后10 min,两点组的肌皮神经的阻滞率高于单点组,阻滞后30 min,两点组中肌皮神经和前臂内侧皮神经的阻滞率高于单点组(89.3%vs 62.1%;85.7%vs58.6%,P<0.05).两组的总体评分无差异(11.5±2.4vs10.8±4.3).结论 对于锁骨下喙突入路神经阻滞,用神经刺激器引发2个运动反应后分次注入局麻药的方法优于单点法.
作者：车薛华；梁伟民；李佩盈 刊期： 2008年第03期
目的 构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的 蛋白的生物学活性.方法 采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定.再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRESTIMP1.把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量.结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒.双重免疫荧光和Western blot检测到目的 蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白.结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的 蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础.
作者：魏见伟；王德春；胡有谷 刊期： 2008年第03期
目的 比较慢病毒载体和腺病毒载体转染人脐带血间充质干细胞后,外源基因的表达.方法 采用人脐带血分离培养间充质干细胞,制备表达GFP的慢病毒载体和腺病毒载体,用以转染间充质干细胞,观察其外源基因的表达.结果 脐带血间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;转染5周后,慢病毒载体转染的GFP阳性表达明显高于腺病毒载体.结论 慢病毒载体较腺病毒载体作为基因转导系统更有优势.
作者：马晓生；吕飞舟；姜建元；李小康 刊期： 2008年第03期
脑肿瘤,特别是恶性脑肿瘤的治疗目前仍是临床医生面临的一个难题,重要的原因之一是由于对脑肿瘤的发生发展机制尚不明了.新研究表明:神经干细胞、脑肿瘤干细胞都可能参与这一过程,针对干细胞水平的研究将给脑肿瘤的治疗带来新希望.Hedgehog-Gli信号通路正是一条影响干细胞生物学行为的重要通路.本文就该通路在神经系统发育、神经干细胞分化和脑肿瘤发生的研究作一综述.
作者：王柯；车晓明 刊期： 2008年第03期
目的 研究静脉注射胚胎干细胞(ESC)对肺纤维化小鼠的治疗作用.方法 气管内滴注博来霉素8.5mg/kg制作C57/BL6雌性小鼠的肺纤维化模型.治疗组(n=20)静脉注射S8小鼠ESC,对照组(n=10)注射生理盐水.治疗组又分为单次治疗(n=10)和重复治疗(n=10),两者均在造模后1 h静脉注射ESC,重复治疗组在造模后3 d再次静脉注射ESC.记录小鼠的生存时间,测定小鼠肺组织的羟脯氨酸含量,肺脏病理学观察炎症状态.利用秩和检验统计3组小鼠生存时间,方差分析3组小鼠肺羟脯氨酸含量的差异.结果 接受干细胞治疗后,肺纤维化模型小鼠的生存时间(d)延长,重复治疗组更加明显(对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为7.8±2.8、8.4±3.8、13.5±5.6,P<0.01);肺羟脯氨酸含量(ug/mL)降低(对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为8.59±1.14、8.23±1.09、5.51±0.39,P<0.01);肺脏病理检查显示肺组织炎症程度降低,结构破坏减轻.结论 静脉注射胚胎干细胞可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和肺纤维化,延长肺纤维化小鼠的生存时间.
作者：余慧；胡洋；李惠萍；褚建新；唐帆 刊期： 2008年第03期
目的 调查2006年1月1日至12月31日复旦大学附属中山医院非内分泌科出院的成年住院患者糖代谢异常的分布和糖代谢的检测现状.方法 以空腹血糖(FBG)或餐后2小时血糖(211PBG)或糖化血红蛋白(HbAlc)为检索参数,通过HIS系统提取2006年非内分泌科出院的所有成年住院患者(≥18岁)的相关信息,包括姓名,性别,年龄,住院号,病区,出院诊断,FBG,2hPBG,HbA1C等.根据出院诊断将研究对象定义为糖尿病患者和非糖尿病患者.组间计数资料比较采用X2检验.结果 中山医院非内分泌科住院患者FBG,2hPBG和HbA1c的检测率分别为83.5%,3.3%和5.0%;在非糖尿病患者中,联合检测FBG和2hPBG,糖代谢异常检出率为45.7%,其中糖尿病和糖调节受损(IGR)检出率分别为16.5%和29.2%;其中>60岁组的糖代谢异常者占55.3%,明显高于≤460岁组的37.7%(X2=27.7,P<0.05).结论 大型综合医院住院患者是糖尿病的高危人群,建议常规对这些患者同时进行FBG和2hPBG的检测.
作者：凌雁；阴忆青；高鑫 刊期： 2008年第03期
目的 观察风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的生物学特性.方法 利用相差显微镜、透射电子显微镜、免疫细胞化学技术观察风疹病毒R16株在人胚晶状体上皮细胞中的形态学及生长特性.结果 风疹病毒R16株体外感染人胚品状体上皮细胞后,细胞不产生明显的病变效应.受病毒感染的人胚晶状体上皮细胞生长速度较慢,10d后可在细胞质内观察到呈不规则球形、由单层脂质膜包绕、直径60～80 nm的病毒颗粒,包括致密核心和无致密核心两种颗粒.而在胞核中未发现病毒颗粒.结论 风疹病毒R16株能在人胚晶状体上皮细胞中增殖,为进一步研究风疹病毒感染后先天性白内障的发生机制打下基础.
作者：邹俊；卢奕；褚仁远 刊期： 2008年第03期
目的 研究类胰蛋白酶对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435侵袭力的影响及其机制.方法 通过体外细胞侵袭力试验观察不同浓度、不同时间类胰蛋白酶对乳腺癌MDA-MB-435细胞跨膜侵袭力的影响,并利用RT-PCR以及明胶酶谱法研究类胰蛋白酶对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)表达水平的调节.结果 150～500 pmol/L的类胰蛋白酶可以促进MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭;还可以促进MMP-2、TIMP-2的mRNA表达(P<0.01)和MMP-2的蛋白表达(P<0.05).结论 类胰蛋白酶可以促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭,该作用可能与增加MMP-2的mRNA和蛋白表达、TIMP-2的mRNA表达相关.
作者：顾漪萍；向萌；陆超；赵凤娣；李晓波；殷莲华 刊期： 2008年第03期
目的 通过研究窒息动物肝细胞超微结构及其元素含量的变化,探讨窒息引起肝脏损害的发病机制,为临床抢救窒息患者时对保肝措施予以关注提供科学依据.方法 SD大鼠经腹腔麻醉后,经气管插管由人工呼吸机维持通气,窒息组在关闭人工呼吸机使呼吸停止3、6、9、12、15 min后取肝脏.窒息一复氧组在呼吸停止后3、6、9、12、15 min后重新开启呼吸机120 min,再取肝脏.样本经处理后进行透射电镜观察和元素显微分析.结果 大鼠窒息3 min时肝细胞已出现滑面内质网囊管扩张和线粒体基质变深.窒息6 min时线粒体肿胀、粗面内质网脱颗粒.窒息12 min时线粒体破坏,核异染色质聚集成团块状.窒息15 min时可以出现部分肝细胞坏死.经过120 min复氧,仅窒息6 min时线粒体肿胀程度减轻,其余各组均未见改善.窒息后,肝细胞及其线粒体Na、K元素含量明显降低,而CI、ca元素含量则显著升高;窒息后经过120 min复氧,除Ca含量有所恢复外,Na、K、Cl的变化没有改善.结论 肝脏在窒息早期即发生细胞结构损伤,窒息后虽然经过及时复氧,但细胞结构损伤改善有限,窒息引起肝细胞Na、Cl、K、Ca浓度的持续变化可能是造成肝脏损伤的原因之一.
作者：朱会耕；叶若兰；方勇 刊期： 2008年第03期
目的 通过星点设计-效应面法优化柘树提取物片剂处方.方法 以微晶纤维素(microcrystallinecellulose,MCC)的用量、乳糖的用量和黏合剂聚维酮(polyvinylpynolidone,PVP)的浓度为考察因素,以崩解时间和3个有效成分的溶出度为考察指标,分别用多元线性模型、二次多项式模型描述考察指标和3个考察因素之间的数学关系,绘制效应面和等高线图,确定较优处方并进行验证试验.结果 根据二次多项式模型,发现3个考察因素和4个考察指标之间存在可信的定量关系;优选的佳处方为MCC的用量40 mg,乳糖的用量为70mg,PVP浓度为4%,优化处方各设定的预测值和测定值非常接近.结论 采用星点设计-效应面法,得到了基于二次多项式模型的柘树提取物片剂处方优化模型,实现了该片剂的处方优化.
作者：吴海健；王建新；黄建明；韩丽妹；侯爱君 刊期： 2008年第03期
目的 研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性.方法 将野生型沙门氏菌(对照组)和VNP20009(研究组)分别通过尾静脉注射感染正常小鼠,观察其生存期差别;将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记VNP20009,红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和GFP分别标记小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma cell,MFC)的胞质和胞核,尾静脉注射感染离体肿瘤细胞和荷瘤小鼠,以双色荧光成像的定性方法和组织匀浆细菌培养的定量方法显示细菌在离体肿瘤细胞、在体肿瘤和正常组织中的生长情况.结果 接受野生型沙门氏菌注射的对照组小鼠在注射后4 d全部死亡,而接受VNP20009注射的研究组小鼠在注射后10 d依然全部存活;VNP20009能在离体肿瘤细胞中持续增殖并引起核碎裂;在体实验中,感染后第6天,正常组织中的细菌明显减少,到第18天时几乎消失,但在肿瘤组织中依然持续增殖.细菌在肿瘤/正常组织(肝脏)中的比例在感染后第4天约为224:1,第6天为1020:1.结论 基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009有着良好的低毒性以及肿瘤靶向性,具有作为肿瘤基因治疗载体的潜力.
作者：周易明；刘常星；邬剑华；王依婷；陈宗祜 刊期： 2008年第03期
目的 观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况,验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(Morpholi-no oligonucleotides,MO)使hand2表达下调的有效性.观察hand2表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型,初步探讨hand2在斑马鱼胚胎发育中的作用,为利用斑马鱼开展hand2的功能研究提供线索.方法 采用胚胎整体原位杂交的方法观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况.利用向斑马鱼受精卵显微注射MO的方法使hand2表达下调,并进行hand2表达下调的效率验证.将斑马鱼单细胞受精卵分为4组进行显微注射,即对照MO(Con MO)注射组、hand2 MO注射组、hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2 MO注射组.在荧光显微镜下观察hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2 MO注射组的荧光表达情况以验证hand2表达下调的效率.在显微镜下观察hand2 MO注射组斑马鱼胚胎的各器官发育情况并进行评定.结果 hand2在斑马鱼胚胎的侧板中胚层、咽弓、心脏和鳍有较强表达.hand2-GFP mRNA注射组在8 hpf(hours post fertilization)时胚胎有较强的荧光表达,而hand2-GFP mRNA+hand2 MO注射组胚胎几乎无荧光表达.与Con MO注射组相比,hana2 MO注射组斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节有明显的发育异常.结论 向斑马鱼受精卵显微注射hand2 MO的方法可有效的使hand2表达下调.hand2在斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节的发育过程中有重要作用.
作者：孙淑娜；桂永浩；宋后燕；蒋璆；王跃祥 刊期： 2008年第03期
宫颈妊娠是一种严重的异位妊娠,可以导致阴道大出血甚至危及生命,这也是其治疗中的一个难点.血管性介入治疗(子宫动脉栓塞术)能够安全有效地控制阴道出血,单独应用或联合其他治疗取得良好的效果,正逐渐被采用.
作者：赵文荣；杨丹 刊期： 2008年第03期
目的 通过制作早产儿脑白质损伤动物模型,探讨自由基在早产儿脑白质损伤发病机制中的作用及别嘌呤醇的保护作用.方法 利用新生1日龄SD大鼠32只行双侧颈总动脉结扎(BCA0)制作脑白质损伤模型,随机分为假手术组(Sham,n=8)、BCAO组(BCAO,n=12)及别嘌呤醇干预组(ALLO,n=12).BCAO后48 h检测脑白质XO、iNOS、Na+-K+-ATP酶、谷胱甘肽转移酶(GST)及·OH活力、尿酸(UA)及丙二醛(MDA)含量.结果 MDA含量(nmol/mg prot):BCAO组(2.56±0.78)较Sham组(1.36±0.23)明显升高(P<0.01),而ALLO组(1.59±0.19)较BCAO组明显降低(P<0.01).UA含量(mg/g prot):BCAO组(13.57±0.72)及ALLO组(12.34±0.21)均较Sham组(11.42±0.56)明显升高(P<0.01),而ALLO组较BCAO组明显降低(P<0.01);·OH活力(U/mg prot):与Sham组(156.0±8.07)比较,BCAO组(206.6±21.27)明显升高(P<0.01),而ALLO组(191.7±13.04)较BCAO组显著降低(P<0.05).XO及iNOS活力:BCAO组较Sham组明显升高(P<0.01),而ALLO组较BCAO组明显降低(P<0.05);Na+-K+-ATP酶活力(umol pi/mg prot/h):与Sham组(3.04±0.26)比较,BCAO组(2.30±0.37)及ALLO组(2.11±0.26)均明显降低(P<0.01),而ALLO组与BCAO组相比差异无显著性(P>0.05);GST活力(U/mg prot):与Sham组(56.75±4.22)比较,BCAO组(37.60±8.32)明显降低(P<0.01),而ALLO组(43.39±4.44)比BCAO组显著提高(P<0.05).结论 自由基在早产儿脑白质损伤中可能发挥了核心作用.别嘌呤醇对缺血引起的早产大鼠脑白质损伤具有一定的保护作用.
作者：胡勇；邵肖梅；张旭东 刊期： 2008年第03期
随着对自身免疫性肝病认识的加深,近年来国内原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)和自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的病例报道增多,发病率有增加的趋势,因此不再认为是少见的疾病.PBC和AIH在临床症状、生化指标和组织学表现方面有所不同而易于鉴别.然而,文献报道5%的AIH和19%的PBC患者存在疾病的相互重叠现象,即所谓的重叠综合征(overlap syndrome)<'[1]>.AIH-PBC重叠综合征是指在同一时间段或病程中具备PBC和AIH两种疾病的临床表现、血清学及组织学特征.目前临床对重叠综合征的研究不多,由于病例数的限制和存在明显异质性等,尚无大规模的临床随机对照研究资料,对其诊断与治疗仍是临床的难点.本文报道我院确诊的6例PBC-AIH重叠综合征病例及分析,并就近年国内外的文献报道进行复习,以加深对此病的认识.
作者：涂传涛；朱新宇；张顺财；胡锡琪；王吉耀 刊期： 2008年第03期
目的 探讨小鼠腹部心脏移植术的手术技巧及并发症的预防和处理.方法 雄性昆明(KM)小鼠60只,随机分供、受体2组,采用大鼠Ono术式进行小鼠腹部异位心脏移植,小鼠供体升主动脉与受体腹主动脉端侧吻合,供体肺动脉与受体下腔静脉吻合,实验30例.结果 实验成功率86.7%(26/30).取供心时间(9.4±1.2)min,供心修取时间(14.8±1.2)min,受体手术时间(60.4±2.4)min,其中吻合时间(29.8±2.5)min.结论 掌握小鼠心脏移植的显微外科技巧和正确的处理手术并发症,可以成功建立小鼠腹部心脏移植模型.
作者：彭润生；王春生；杨兆华 刊期： 2008年第03期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
