学术投稿

实时荧光定量PCR快速鉴定短乳杆菌

赵敏;潘劲草;叶榕;孟冬梅;汪皓秋;孙培龙

关键词:实时荧光定量PCR, 短乳杆菌, 快速鉴定
摘要:目的:建立鉴定短乳杆菌的实时荧光定量PCR法.方法:根据GanBank登录的乳酸杆菌序列,以gyrB基因为靶目标设计引物和探针,对啤酒中分离到的6株乳酸杆菌进行实验,并对其中一个短乳杆菌样本作定量检测.结果:实时荧光定量PCR对短乳杆菌可产生特异扩增信号,对其他乳酸杆菌无响应.标准曲线的相关系数为0.97739,测得短乳杆菌样本浓度为15635拷贝/ml.结论:实时荧光定量PCR是一种快速、特异、灵敏检测短乳杆菌的方法.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 游泳池水中弧菌科病原菌的调查研究

    目的:为了解室内游泳池中弧菌科病原菌的分布情况,预防和控制病原菌在游泳池中的传播流行.方法:采用碱性胨水增菌、TCBS平板分离和系统生化鉴定分离病原菌.并对分离到的菌株进行小白鼠毒力试验及药敏试验.结果:60份游泳池水中有25份水样检出了弧菌科病原菌,其中以嗜水气单胞菌为优势菌,其次为温和气单胞菌与非O1群霍乱弧菌.小白鼠毒力试验等证明了这些菌株都具一定的毒力.药敏试验结果表明这些弧菌科细菌存在一定的耐药现象,特别是对羟氨苄青霉素100%耐药,且嗜水气单胞菌、非O1群霍乱弧菌对头孢噻吩、头孢西丁也100%耐药.结论:弧菌科病原菌在室内游泳池水中具有较高的检出率.常规方法结合病原菌分析,能综合评价游泳池水的卫生状况.

    作者:章乐怡;李毅;李小春;陈慧燕;洪程基;王良怀;吴跃进 刊期: 2007年第02期

  • 气管骨形成症3例报告并文献复习

    目的:探讨气管骨形成症(tracheopathia osteoplastica,TO)的临床特点,诊断要素,提高对TO的认识.方法:回顾性总结我院收治的经手术或经纤维支气管镜活检确诊的3例TO患者的临床资料,分析其临床特点、病理表现和诊疗依据.结果:3例TO患者均为男性,均有慢性咳嗽、咯痰,反复肺部感染的病史.纤维支气管镜检查可见气管、支气管软骨部结节样或鹅卵石样突起,活检可见粘膜下软骨和骨组织形成.结论:综合上述3个病历和文献认识到TO是一种罕见的病因不清的临床病理变化,可能与化学物质、油烟等慢性刺激及病人自身内分泌变化导致钙磷代谢异常有关.慢性不明原因的咳嗽应警惕本病的存在,纤维支气管镜检查是发现和确诊此病的主要手段.

    作者:张歆刚 刊期: 2007年第02期

  • 固相萃取-高效液相色谱法同时测定牛奶中3种四环素类抗生素残留量

    目的:为快速、简便、灵敏地检测牛奶中土霉素、四环素、金霉素残留量,建立固相萃取(SPE)-高效液相色谱(HPLC)分析法.方法:样品用Mcllvaine缓冲液提取,硫酸锌-亚铁氰化钾体系沉淀蛋白质后,再经超声波提取,固相萃取,高效液相色谱法同时测定3种抗生素.固相萃取小柱为Waters Sep-Pak C18 Cart,洗脱液为甲醇柠檬酸溶液;色谱柱为Kromasil C18柱(5 μm,150 mm ×4.6 mm),流动相为乙腈:0.01 mol/L柠檬酸溶液=25:75(v/v,pH=2.5),流速0.4~0.8 ml/min,检测波长为355 nm.结果:本方法的低检出浓度分别为:土霉素(0.009 μg/ml)、四环素(0.007 μg/ml)、金霉素(0.034 μg/ml),标准曲线线性良好,其回归方程及相关系数r分别为:土霉素:Y=490379X-13947,r=0.9998;四环素:Y=454806X-17029,r=0.9995;金霉素:Y=156256X-20479,r=0.9996,回收率在86.5%~95.0%之间,相对标准偏差(n=6)小于3%.结论:该方法简单、快速、灵敏度高,适用于牛奶中四环素类抗生素残留量检测.

    作者:蔡志斌;张英;刘丽 刊期: 2007年第02期

  • 不同提取剂对春花胡枝子黄酮含量及抑菌活性影响的研究

    目的:研究不同溶剂提取对春花胡枝子黄酮含量及其体外抑菌活性的影响.方法:分别用水、乙醇、甲醇做提取剂,可得粗黄酮粉,将粗黄酮经大孔树脂纯化得精制黄酮.采用盏碟法及平板计数法测定4种黄酮粉抑菌活性.结果:以甲醇、乙醇、水作溶剂可从春花胡枝子叶粉中提取到黄酮含量不同的粗黄酮粉,经大孔树脂纯化后可得到含黄酮74.8%的精制黄酮粉.4种黄酮粉对6种受试菌均有抑制作用,但存在很大差异.相同条件下,春花胡枝子黄酮粉对酵母菌、小麦赤霉菌、苹果炭疽菌的抑制作用大于对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌的抑制作用.pH值对春花胡枝子黄酮粉的抑菌活性有较大的影响,超过或低于佳pH值范围时,抑菌活性急剧下降.结论:不同溶剂提取的春花胡枝子黄酮粉黄酮含量及体外抑菌活性不同.

    作者:陈乃东;周守标;罗琦;胡金蓉;柳后起 刊期: 2007年第02期

  • 广州市售糕点、熟肉制品中人工合成色素含量的现状分析

    目的:为全面了解广州市售糕点、熟肉制品中人工合成色素含量情况.方法:对市场上销售的糕点、熟肉制品进行随机抽样调查,用高效液相色谱法检测分析了72份糕点、91份烧卤熟肉制品中人工合成色素柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝的含量.结果:发现检出样品中,糕点中人工合成色素的不合格率为36.11%,熟肉制品中人工合成色素的不合格率为6.59%,以上结果说明,糕点、熟肉制品中滥用人工合成色素情况比较严重,特别是糕点行业,合格率仅为60.66%,应引起有关部门的高度重视.结论:为了进一步提高市民食用糕点、烧卤熟肉制品的安全性及减少对人体健康的危害,建议加强消费市场的卫生监督.

    作者:刘虹;谢承恩;郑绍珍 刊期: 2007年第02期

  • 浙江省海、水产品霍乱弧菌污染状况调查及分子生物学研究

    目的:了解浙江省海、水产品霍乱弧菌污染情况及海、水产品中霍乱弧菌的毒力特征,并对其进行耐药性和同源性分析,研究其分子特征及流行病学意义.方法:2005年7~9月采集浙江省温州、宁波、舟山的海、水产品及杭州某批发市场的甲鱼,对检出的霍乱弧菌菌株进行耐药性分析,采用聚合酶链反应(PCR)方法进行霍乱弧菌肠毒素基因(Ctx)、小带联结毒素基因(Zot)、辅助霍乱肠毒素(Ace)的检测,并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并作同源性分析.结果:从采集的990份海、水产品标本中检出14株霍乱弧菌,其中分离自青蛙1株、甲鱼9株、贝类1株、甲壳类1株、鱼类1株、其它1株.经耐药性分析,菌株对诺氟沙星、头孢噻肟100%敏感;对复方新诺明、萘啶酸耐药率高,达64.3%,其次为庆大霉素、利福平,耐药率为35.7%.毒力基因检测表明,14株霍乱弧菌中3种毒力基因均阳性的有5株,占35.7%;携带Ctx的有7株,占50.0%;只携带Zot的有4株,占28.6%;另有3株毒力基因均阴性,占21.4%.脉冲场凝胶电泳分型显示,2株稻叶1f同源;2株小川1k同源;1株小川19k降解;9株O139群霍乱弧菌除1株死亡未作分析外,其余8株分为3个型.结论:此次海、水产品检测的霍乱弧菌血清型较多,但以O139群霍乱弧菌为主,其脉冲场凝胶电泳分型较多,这与浙江省近几年霍乱时有散发和多菌型并存的特点一致.耐药率及毒力基因携带情况与广州省有较大的差别.

    作者:叶菊莲;程苏云;陆群英;罗芸;吕华坤;孟真;姜理平 刊期: 2007年第02期

  • 应用大型水蚤对农药和无机砷污染的饮用水和地表水源水毒性检测

    目的:验证采用大型水蚤检测农药和无机砷污染的饮用水和地表水源水毒性的可行性.方法:采用大型水蚤的急性毒性试验方法检测饮用水和地表水源水的毒性,用SPSS12.0统计分析计算大型水蚤的LC50.结果:大型水蚤能够灵敏检测饮用水和地表水源水的0.2%高渗甲维盐和25%毒死蜱氯氰菊酯乳液污染,在农药浓度达到微克时,仍然有响应;对砷酸钠的敏感度相对较低,但仍然可以达到毫克.结论:大型水蚤的急性毒性测试方法可以用来检测饮用水和地表水源水中农药和无机砷的污染.

    作者:潘力军;高世荣;孙凤英;王俊起 刊期: 2007年第02期

  • 液相色谱串联质谱法同时检测饮用水中8种氨基甲酸酯类农药的方法学研究

    目的:建立自来水中8种氨基甲酸酯农药(仲丁威,异丙威,速灭威,甲萘威,灭多威,残杀威,苯氧威,猛杀威)的液相色谱-串联质谱分析方法.方法:水样在离心或液液萃取后通过C18色谱柱,以含0.2%的甲酸的甲醇和0.2%的甲酸溶液进行梯度洗脱,采用电离喷雾电离方式(ESI+),通过多反应监测(MRM)定量.结果:在20 min完成分析,离心处理后8种农药在0.05~5 μg/ml浓度范围内线性相关系数>0.9973.加标回收率为96.67%~111.52%(添加水平分别为0.1,1和5 μg/ml),相对标准偏差5.4%~14.2%,低检出限介于0.02~0.03 μg/ml.对0.1 μg/L的加标样在液液萃取后回收率在75.5%~128.3%,相对标准差4.7%~31.5%.结论:本法灵敏度高,选择性强,分析时间短,适合于对水中该8种氨基甲酸酯类的分析.

    作者:韩嘉媛;赵人(王争);乔善磊;张淳文;周建伟 刊期: 2007年第02期

  • 用于禽流感H9亚型检测的压电免疫蛋白芯片的研制

    目的:研制禽流感H7亚型检测的压电免疫蛋白芯片.方法:采用聚乙烯亚胺(PEI)粘附、戊二醛(Glu)交联的方法,将禽流感H9抗原固定于石英晶体的金电极表面.研究了敏感材料的浓度、pH值对其固定的影响.结果:该芯片用于检测浓度范围为0.123~1.23 mg/ml的禽流感H9血清时,呈线性相关,相关系数0.9854.结论:检测阳性样品的响应值与阴性样品的噪声值之比大于2,可用于定性定量检测.

    作者:刘毅新;刘仲明;王弘;孙远明 刊期: 2007年第02期

  • 慢性乙肝患者CD25及CD25 mRNA表达及临床意义

    目的:探讨慢性乙肝患者CD25、CD25 mRNA表达水平及其临床意义.方法:选择249例典型慢性乙肝患者,用生物素-链霉亲和素(BSA)法和Real-time PCR法分别检测PHA诱导前后患者PBMC CD25和CD25 mRNA表达水平;用PCR法检测患者HBV-DNA载量.结果:慢性乙肝患者静息态和诱导态CD25、CD25 mRNA表达水平与正常对照组相比均降低,差异有显著性(P<0.05或P<0.01).慢性乙肝、肝硬化患者CD25和CD25 mRNA的表达水平不完全相同,但差异无显著性(P>0.05).结论:乙肝患者存在一定程度的免疫功能低下,CD25、CD25 mRNA表达水平降低,其表达水平与病情活跃程度、病毒复制水平相关.

    作者:王瑜;刘新矿;王健 刊期: 2007年第02期

  • 工作场所空气中过氧化苯甲酰高效液相色谱测定方法

    目的:建立工作场所空气中过氧化苯甲酰的高效液相色谱测定方法.方法:空气中过氧化苯甲酰用微孔滤膜采集,乙醚洗脱,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测.结果:本法的检出限为1.0 μg/ml,低检出浓度0.22 mg/m3(采集45 L样品).在1.0~200 μg/ml范围内,线性关系良好,r=0.9999.RSD在1.7%~5.2%之间.平均加标回收率为99.2%.用微孔滤膜采样,样品可保存2周.结论:方法操作简便、灵敏,可用于工作场所空气中过氧化苯甲酰的采集及测定.

    作者:曲宁;伊平;聂莉;杨琳 刊期: 2007年第02期

  • 137名中老年旅行者血脂水平调查分析

    目的:了解中老年旅行者的血脂水平,为有关疾病的早期预防提供科学依据.方法:于2005年分别对137名55~80岁的中老年旅行者进行血清血脂4项(总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇)检测.结果:血脂异常总检出率为58.3%;男、女性总胆固醇升高检出率分别为6.6%和11.6%,女性高于男性;甘油三酯升高检出率分别为21.6%和10.3%,男性高于女性;低密度脂蛋白胆固醇升高检出率分别为51.6%和64.9%,女性高于男性.结论:通过保健体检对血脂水平异常的中老年旅行者尤其是更年期妇女给予正确的防治知识,有利于预防或减少心血管疾病的发生,提高中老年旅行者晚年的生活质量.

    作者:谭华 刊期: 2007年第02期

  • 海水产品副溶血性弧菌污染定量检测分析

    目的:为了掌握副溶血性弧菌在海水产品中污染情况,以不同季节,定量检测副溶血性弧菌在海水产品中污染程度的动态变化,提出有效的控制措施,减少食物中毒的发生.方法:根据不同季节,从不同的农贸市场采取鱼类、虾类标本;采用MPN法进行副溶血性弧菌定量检测;并完成分离菌株血清型和毒力基因的检测.结果:副溶血性弧菌在海水产品中的污染有明显的季节性,并且与我省的细菌性食物中毒的发生季节基本一致;副溶血性弧菌的血清型分布以O4/O5/O1/O11血清型为主;海产品分离株,其携带TDH基因明显低于食物中毒标本中分离株.结论:通过检测分析,得出副溶菌在鱼虾等海产品中的污染具有明显的季节性,虾和鱼的污染密度也有差别(x2=12.40;P<0.05).而且检测的两类海产品中,高污染量的副溶菌对食品安全存在高风险.加强对TDH阳性副溶菌的检测,是控制副溶菌食物中毒发生的重要方面.

    作者:程苏云;张俊彦;王赞信;童贵忠;孟真 刊期: 2007年第02期

  • 快速溶剂萃取-气相色谱法测定鱼肉中三氯联苯和五氯联苯

    目的:用铝粉做吸附剂,观察其对脂肪干扰三氯联苯和五氯联苯的消除效果以及其对测定值的影响.方法:取一定量的铝粉放人萃取池中做吸附剂,对鱼肉进行快速溶剂萃取.然后用本方法和国标法分别对其测定,检测结果进行分析比较、探讨是否存在差异.结果:浓度在O.05~4.0 μg/ml之间,线性关系良好(r>0.9993~0.9996),测定值与国标法无显著性差异.结论:整个方法具有简便、快速、准确的特点,尤其是简化了萃取过程,消除了脂肪对三氯联苯和五氯联苯的干扰,防止了污染,减少了损耗.

    作者:陈京闽;杨绯 刊期: 2007年第02期

  • HPLC法测保健品中红景天甙

    目的:建立快速测定保健品中红景天甙的液相色谱测定方法.方法:准确称取样品0.1~0.5 g,经甲醇超声提取处理,定容,过0.45 μm滤膜.滤液10 μl进HPLC分析.色谱条件:Agilent C18柱(4.6×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.25 mol/L磷酸二氢钾水溶液(20:80,pH 5.8),流速1.0 ml/min,柱温40℃,测定波长220 nm.结果:红景天甙不同水平的样品回收率为91.2%~104.2%.RSD均小于5.4%.红景天甙标准溶液浓度0~200 mg/L,与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0.9994,检出限为:0.10 mg/L.结论:方法简便快速、准确可靠,可有效监控保健品的质量,防止不法商贩制造假冒伪劣产品.该体系还可同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠,减少了实验步骤,节省了时间,适于实际工作需要.

    作者:文君;缪红;王鲜俊;彭喜雨 刊期: 2007年第02期

  • 有机磷农药残留检测的研究进展

    农药由于具有高效、速效、方便、适应性广、经济效益显著等特点而被广泛应用于农产品生产、采后保鲜等过程.

    作者:陈芳;杨冰仪;龙军标;张健雄 刊期: 2007年第02期

  • 公共场所公用物品卫生状况调查分析

    目的:了解铁岭市公共场所公用物品卫生状况,明确监督检测工作重点.方法:对铁岭市内4类公共场所(旅店、洗浴场所、理发店、美容院)共410份公用物品卫生进行微生物检测.结果:410份公用物品总合格率为68.3%.结论:公共场所公用物品的卫生质量还有待进一步提高,卫生监督部门应加强公共场所卫生监督执法力度,努力提高对重点公共场所卫生管理水平.

    作者:孙波 刊期: 2007年第02期

  • 水中大肠菌群快检纸片的研究及应用效果观察

    目的:探讨大肠菌群快检纸片的研制方法及其检测水中大肠菌群的可行性.方法:大肠菌群快检纸片制作、包装和使用;以国标试管发酵法为对照,对大肠菌群快检纸片法的特异性、敏感性、抗干扰和各种类型水样进行大肠菌群平行检测,比较两法的符合率.结果:大肠菌群快检纸片法检测水中大肠菌群的效果与国标试管发酵法结果无显著差异,符合率97.1%.结论:大肠菌群快检纸片法可用于检测水中的大肠菌群.

    作者:马乐好;阚方琦 刊期: 2007年第02期

  • C肽化学发光免疫诊断分析方法的建立及临床应用

    目的:建立一种特异、敏感的临床C肽的化学发光免疫分析诊断方法并应用于临床.方法:采用特异性的两株C-P单克隆抗体,辣根过氧化物鲁米诺酶促增敏化学发光体系,利用双抗体夹心法检测.结果:敏感度为0.02 μg/L;检测线性范围为0.02~20 μg/L;多人次检测证实试剂盒批内变异均小于10%,分析间变异小于15%;与18 μg/L人胰岛素原、2 000 mIU/L的人胰岛素无显著交叉反应.结论:该方法灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,适合应用于临床.

    作者:钮心怡;路晟;孙旭东;江振友 刊期: 2007年第02期

  • 蓖麻毒素及其检测技术

    蓖麻毒素(ricin toxin,RT)是一种从蓖麻种子的胚乳中提取的植物蛋白毒素.一个多世纪以来,RT因其具有强毒性而引起人们的兴趣.由于RT来源广泛,毒性较高,已被外军作为武器化的一种毒素加以研究[1].禁止化学和生物武器公约把RT列为为严格的控制对象之一,本身就反映了人们对RT军事价值的关注.

    作者:王俊虹;康琳;高姗;贾杨;王景林 刊期: 2007年第02期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会