学术投稿

稳定高表达人野生型DNA polβ食管癌细胞Ec9706的生物学特征

李敏;付庆;赵国强;董子明

关键词:DNA聚合酶beta, 转染, 细胞周期, 食管癌细胞, 四甲基偶氮唑蓝
摘要:目的:建立稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系Ec9706,并对该细胞系的生物学特征进行分析.方法:脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,荧光显微镜观察转染效果,经G4l8筛选得到稳定转染细胞系.RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,绘制生长曲线,软琼脂实验测细胞克隆形成率,MTr法测转染前后细胞对顺铂的敏感性.结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,RT-PCR结果表明转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞增加.转染前后细胞生长速度接近,转染细胞周期分布发生改变,多被阻滞在S期,在软琼脂实验中克隆形成率增加,对顺铂的敏感性降低.结论:成功建立了稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达与细胞的细胞周期分布、恶性增殖能力及耐药性有一定关系.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 气管骨形成症3例报告并文献复习

    目的:探讨气管骨形成症(tracheopathia osteoplastica,TO)的临床特点,诊断要素,提高对TO的认识.方法:回顾性总结我院收治的经手术或经纤维支气管镜活检确诊的3例TO患者的临床资料,分析其临床特点、病理表现和诊疗依据.结果:3例TO患者均为男性,均有慢性咳嗽、咯痰,反复肺部感染的病史.纤维支气管镜检查可见气管、支气管软骨部结节样或鹅卵石样突起,活检可见粘膜下软骨和骨组织形成.结论:综合上述3个病历和文献认识到TO是一种罕见的病因不清的临床病理变化,可能与化学物质、油烟等慢性刺激及病人自身内分泌变化导致钙磷代谢异常有关.慢性不明原因的咳嗽应警惕本病的存在,纤维支气管镜检查是发现和确诊此病的主要手段.

    作者:张歆刚 刊期: 2007年第02期

  • TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR快速检测副流感3型病毒

    目的:建立特异、快速、灵敏的荧光定量RT-PCR方法用于副流感3型病毒核酸检测.方法:对副流感3型病毒的N基因应用ClustalW软件进行序列同源性比对,在保守区设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,并对荧光RT-PCR反应条件进行优化,验证方法的特异性,敏感性和稳定性,同时应用于疑似患者临床标本检测.结果:该方法对副流感3型病毒核酸检测有高度特异性,与副流感1、2、4型,甲型、乙型流感病毒,麻疹病毒,风疹病毒,腮腺炎病毒,呼吸道合胞病毒和腺病毒等均无交叉反应.检测的灵敏度达0.1TCID50,可从疑似患者含漱液标本中直接检出,从病毒核酸提取至完成检测仅需3 h左右.结论:本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测副流感3型病毒特异、敏感的方法,适用于临床早期诊断.

    作者:徐昌平;严菊英;卢亦愚;史雯;茅海燕;陈小芳 刊期: 2007年第02期

  • 不同提取剂对春花胡枝子黄酮含量及抑菌活性影响的研究

    目的:研究不同溶剂提取对春花胡枝子黄酮含量及其体外抑菌活性的影响.方法:分别用水、乙醇、甲醇做提取剂,可得粗黄酮粉,将粗黄酮经大孔树脂纯化得精制黄酮.采用盏碟法及平板计数法测定4种黄酮粉抑菌活性.结果:以甲醇、乙醇、水作溶剂可从春花胡枝子叶粉中提取到黄酮含量不同的粗黄酮粉,经大孔树脂纯化后可得到含黄酮74.8%的精制黄酮粉.4种黄酮粉对6种受试菌均有抑制作用,但存在很大差异.相同条件下,春花胡枝子黄酮粉对酵母菌、小麦赤霉菌、苹果炭疽菌的抑制作用大于对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌的抑制作用.pH值对春花胡枝子黄酮粉的抑菌活性有较大的影响,超过或低于佳pH值范围时,抑菌活性急剧下降.结论:不同溶剂提取的春花胡枝子黄酮粉黄酮含量及体外抑菌活性不同.

    作者:陈乃东;周守标;罗琦;胡金蓉;柳后起 刊期: 2007年第02期

  • 重庆市9 528例体检人群脂代谢特点及脂代谢异常的临床研究

    目的:探讨重庆市体检人群脂代谢水平和脂代谢异常状况及影响因素.方法:将调查对象按性别和年龄分组,分析14 918例健康体检人中进行了血脂检查的9 528例人群的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)四项血脂指标,比较不同年龄段及男女间脂代谢水平和各类脂代谢异常的发生率,采用多因素Logistic回归分析脂代谢异常与性别、年龄、体重指数(BMI)、血压和血糖(GLU)的相关性.结果:9 528例健康体检人群中脂代谢异常数为3853(40.4%),高TG2504(26.3%)、高TCl901(20.0%)、高LDL-C1573(16.5%)、低HDL-C383(4.0%),其中一项指标异常1978(51.3%)、两项指标异常1260(32.7%)、三项指标异常597(15.5%)、四项指标均异常18(0.5%);高TC、高TG和高LDL-C发生率随着年龄的增加而明显增高,而70~年龄段各项脂代谢水平和高TG和高LDL-C有降低的趋势;男性体检人群脂代谢水平和脂代谢异常率明显高于女性(P<0.001).性别、年龄、BMI、血压和GLU五项因素均对TG和LDL-C异常发生率有显著影响;影响TC代谢的因素是年龄、血压和GLU;性别、BMI和GLU对低HDL-C发生率也有显著影响.结论:脂代谢异常在重庆市体检人群中发生率较高,应加强对高危人群的定期体检,通过控制体重、血压、血糖等与脂代谢异常的相关因素而利于对脂代谢异常疾病的防治.

    作者:郑隽;王永红;王继红;李启富;谢友红;谢微波;邓学洁;刘正淑 刊期: 2007年第02期

  • 2005年广东省健康人群流脑免疫水平和带菌状况调查

    目的:了解我省健康人群流脑带菌状况和免疫水平,预测流脑发病的趋势,为流脑的防控提供依据.方法:按照中国疾病预防控制中心的要求并结合广东省的实际情况开展流脑监测工作.选择广州市番禺区、茂名化州市、韶关乐昌市、东莞市及汕头市潮阳区作为流脑监测点.各监测点按广东省流脑监测方案要求采集市内0~、5~、10~、15~、25~、35~及45岁以上共7个年龄组人群的咽拭子及静脉血,分别进行健康人群带菌调查及人群抗体水平检测.结果:广东省健康人群A群流脑IgG抗体的总阳性率为78.9%(675/856),C群流脑IgG抗体的总阳性率为23.7%(203/856);健康人群脑膜炎奈瑟氏菌(简称Nm)的带菌率为0.65%(7/1077).健康人带菌以B群Nm为主.结论:广东省不同年龄组健康人群A群流脑IgG抗体的阳性率维持在较高水平,而Nm的带菌率也很低,提示大部分人对A群流脑有免疫作用.但我省健康人群C群IgG抗体水平较低,一旦有传染源传人,易引起局部暴发流行.

    作者:刘美真;杨华可;廖国东;黄忠生;徐亮;邓小玲;谭海玲;陈经雕;宋铁 刊期: 2007年第02期

  • mtDNA 4 977 bp缺失突变的研究进展

    线粒体是真核细胞的重要细胞器,在细胞的能量代谢和氧自由基生成过程中扮演重要角色.线粒体DNA(mitochon-drial DNA,mtDNA)是独立于细胞核染色体外的基因组,具有自我复制、转录和编码功能,以母系遗传的方式进行遗传[1].研究表明,mtDNA突变与电离辐射、肿瘤和生物衰老等有着很紧密的关系.在这些情况下,mtDNA会发生许多不同的缺失,从而影响生物体正常功能的行使.特别是对mtDNA 4 977 bp缺失的研究国内外学者做了很多的尝试.

    作者:陈晓培;王平;吕玉民 刊期: 2007年第02期

  • 生活饮用水中半挥发性有机物的测定

    目的:了解鞍山市生活饮用水中半挥发性有机物含量.方法:用液-液萃取/气相色谱法对生活饮用水中半挥发性有机物进行了提取、分离以及定性定量分析,优化了半挥发性有机物的气相色谱分离条件.结果:在佳条件下,方法的检出限大多数小于1.0 μg/L(按水样体积1 L,提取液定容体积为1.0 ml计),回收率为60%~130%之间.结论:此方法快速、准确、可靠,可用于生活饮用水中半挥发性有机物日常监测.

    作者:孙艳 刊期: 2007年第02期

  • 山东省2003~2005年艾滋病确认实验室检测指标分析

    目的:分析山东省艾滋病实验室检测的有关指标及相关资料,为艾滋病防治提供依据.方法:采用EXECL数据库和SPSS11.5统计软件对山东省2003~2005年艾滋病实验室检测数据和网络直报个案资料进行整理、分析.结果:2003~2005年我省累计报告艾滋病病毒(HIV)感染者703例,其中外来人员376例,占总数的53.5%.结论:应进一步加强艾滋病检测实验室网络建设,积极组织有针对性的HIV抗体专项调查工作,尤其是加强对流动人口、外来妇女的监测,尽快发现HIV感染者,有效遏制艾滋病的传播.

    作者:王同展;尤向东;吕翠霞;苏生利;傅继华;林琳;林彬;孙晓光 刊期: 2007年第02期

  • 改良李斯特菌增菌液的研究

    目的:研制改良李斯特菌增菌液.方法:用不同浓度的吖啶黄、萘啶酮酸、亚碲酸钾、氯霉素对单增李斯特菌、大肠杆菌及蜡样芽胞杆菌进行抑制效果试验.结果:浓度在15~10 mg/L时,吖啶黄对蜡样芽胞杆菌有较强的抑制性,对单增李斯特菌、大肠杆菌几乎不起作用;20~10 mg/L浓度的萘啶酮酸、25~15 mg/L浓度的亚碲酸钾对大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌均有较强的抑制性,但对单增李斯特菌无抑制性;15~3 mg/L 4种浓度的氯霉素对3种菌均有较强的抑制性;用吖啶黄15 mg/L、萘啶酮酸20 mg/L、亚碲酸钾15 mg/L的李斯特菌改良增菌液增菌,单增李斯特菌检出率明显高于国标法(P<0.05).212件样品的单增李斯特菌检出率由0.94%提高到7.08%.结论:该增菌液选择性强,检出率高,值得推广和应用.

    作者:朱敏;梅玲玲;程苏云 刊期: 2007年第02期

  • 深圳市南山区口腔诊疗器械消毒卫生专项监测结果分析

    目的:通过开展南山区口腔诊疗器械消毒卫生专项监测,了解南山区口腔诊疗器械消毒的卫生状况,为提高南山区医疗机构口腔诊疗器械消毒工作质量,保障医疗安全提供依据.方法:按照《消毒技术规范》2002版及GB15982-1995,GB15979-2002中检验方法进行样品检验.结果:61所医疗机构共抽查786份样品,总合格率为91.2%,其中医院合格率95.5%,社康中心合格率90.1%,社会医疗机构合格率86.4%;医护人员手及物体表面合格率分别为78.3%及88.1%.结论:南山区口腔诊疗器械消毒监测合格率有待进一步提高,医院消毒质量优于社康中心和社会医疗机构,医护人员手及物体表面应加强清洁及消毒.建议卫生监督部门对各医疗机构消毒工作加强监督、指导,督促他们在日常工作中要严格执行《医疗机构口腔诊疗器械消毒技术操作规范》[1].

    作者:袁月明;刘楚云;李保云 刊期: 2007年第02期

  • 大兴区2004.6~2006.6卫生从业人员体检结果分析

    目的:了解大兴区食品和公共场所从业人员HBsAg阳性携带的状况,更好地为食品和公共场所的卫生监督提供依据.方法:取受检者静脉血,ALT采用全自动生化分析仪速率法,HBsAg采用酶联免疫吸附试验(ELISA).结果:大兴区企业单位参加2004.6~2006.6年度健康体检的食品和公共场所从业人员共44 182人,HBsAg阳性总检出率为2.05%,行业之间有显著性差异,食品卫生行业的检出率明显高于公共场所(食品行业占73.2%,公共场所占26.8%);性别之间也有显著性差异,男性明显高于女性(男性占53.8%,女性占46.2%);属地之间有显著性差异,外地人口明显高于北京本地(外地人口占84.8%,北京本地占15.2%);各年龄组之间也有显著性差异,尤其以21岁以下的小年龄组HBsAg阳性检出率较高;单纯ALT异常总检出率为1.96%,行业之间有显著性差异,食品卫生行业的检出率明显高于公共场所(食品行业占61.8%,公共场所占38.2%);性别之间也有显著性差异,男性明显高于女性(男性占80.9%,女性占19.1%);属地之间有显著性差异,外地人口高于北京本地(外地人口占57.9%,北京本地占42.1%);各年龄组之间也有显著性差异,尤其以21岁以上的大年龄组单纯ALT异常检出率较高.年度之间无显著性差异.结论:加强宣传力度,使食品生产经营单位和每一个食品从业人员为了自己和人民群众的身体健康,重视并坚持每年进行的健康检查.

    作者:付桂英;秦红;王海云 刊期: 2007年第02期

  • HPLC法测保健品中红景天甙

    目的:建立快速测定保健品中红景天甙的液相色谱测定方法.方法:准确称取样品0.1~0.5 g,经甲醇超声提取处理,定容,过0.45 μm滤膜.滤液10 μl进HPLC分析.色谱条件:Agilent C18柱(4.6×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.25 mol/L磷酸二氢钾水溶液(20:80,pH 5.8),流速1.0 ml/min,柱温40℃,测定波长220 nm.结果:红景天甙不同水平的样品回收率为91.2%~104.2%.RSD均小于5.4%.红景天甙标准溶液浓度0~200 mg/L,与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0.9994,检出限为:0.10 mg/L.结论:方法简便快速、准确可靠,可有效监控保健品的质量,防止不法商贩制造假冒伪劣产品.该体系还可同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠,减少了实验步骤,节省了时间,适于实际工作需要.

    作者:文君;缪红;王鲜俊;彭喜雨 刊期: 2007年第02期

  • 固相萃取-高效液相色谱法同时测定牛奶中3种四环素类抗生素残留量

    目的:为快速、简便、灵敏地检测牛奶中土霉素、四环素、金霉素残留量,建立固相萃取(SPE)-高效液相色谱(HPLC)分析法.方法:样品用Mcllvaine缓冲液提取,硫酸锌-亚铁氰化钾体系沉淀蛋白质后,再经超声波提取,固相萃取,高效液相色谱法同时测定3种抗生素.固相萃取小柱为Waters Sep-Pak C18 Cart,洗脱液为甲醇柠檬酸溶液;色谱柱为Kromasil C18柱(5 μm,150 mm ×4.6 mm),流动相为乙腈:0.01 mol/L柠檬酸溶液=25:75(v/v,pH=2.5),流速0.4~0.8 ml/min,检测波长为355 nm.结果:本方法的低检出浓度分别为:土霉素(0.009 μg/ml)、四环素(0.007 μg/ml)、金霉素(0.034 μg/ml),标准曲线线性良好,其回归方程及相关系数r分别为:土霉素:Y=490379X-13947,r=0.9998;四环素:Y=454806X-17029,r=0.9995;金霉素:Y=156256X-20479,r=0.9996,回收率在86.5%~95.0%之间,相对标准偏差(n=6)小于3%.结论:该方法简单、快速、灵敏度高,适用于牛奶中四环素类抗生素残留量检测.

    作者:蔡志斌;张英;刘丽 刊期: 2007年第02期

  • 电化学乙肝免疫传感器中抗体的固定条件探讨

    目的:优化乙肝传感器中抗体的固定条件以制得免疫传感器.方法:以金电极为基底,自组装半胱胺,通过戊二醛交联法将抗体蛋白固定在电极上,制成乙肝修饰电极.以Fe(CN)36-/Fe(CN)46-为电活性指示剂,利用循环伏安法考察了该修饰电极在不同阶段的电化学性能.结果:结果显示优化抗体固定条件后的传感器能对乙肝HBsAg阴阳性抗原进行区分检测.结论:用半胱胺/戊二醛方法固定乙肝抗体制得免疫传感器能与相应的抗原发生免疫反应,具有实际应用的前景.

    作者:覃柳;刘仲明;邹小勇 刊期: 2007年第02期

  • 血中甲胺磷的气相色谱分析及灌流吸附后的清除效率

    目的:研究血中甲胺磷的分析方法及血样灌流吸附后对毒物的定量清除率.方法:采用HA230树脂吸附柱对中毒血样进行灌流吸附,将吸附后血样经乙酸乙酯萃取后,用带有火焰光度检测器的毛细管气相色谱法测定其含量并计算清除率.结果:分析方法的检出限为0.05 ng,低、中、高3种浓度的加标回收率为94.3%~102.7%,相对标准偏差为4.38%~5.12%.灌流吸附后血中毒物的清除效率为94.3%%~98.9%.结论:用HA230树脂吸附剂进行血液的灌流吸附,能清除大部分毒物,迅速降低血中甲胺磷浓度.对抢救重度甲胺磷中毒的危重病人有重要价值.

    作者:陈雁君;高知义;卢英华;张建萍;程晓平;闫慧芳;王林 刊期: 2007年第02期

  • 茜素红共振光散射法检测金属硫蛋白

    目的:建立一种灵敏、简便的测定金属硫蛋白(MTs)的共振光散射(RLS)新方法.方法:在pH 2.5 BrittonRobinson缓冲溶液中,在十二烷基苯磺酸钠(SDBS)存在下,茜素红(AR)与MTs作用,导致体系的RLS明显增强.结果:在实验适条件下,MTs-AR-SDBS体系的共振光散射强度随着MTs的加入在505 nm处急剧增强,且增加的强度与MTs加入量成线性关系(r=0.9994).方法的线性范围为0.06~16.5 μg/ml,检出限为19.05 ng/ml.结论:方法简便、灵敏、选择性好,检测加标样品中MTs,结果较满意.

    作者:薛金花;王永生;欧阳运富;王英;李乐 刊期: 2007年第02期

  • 食品中苏丹红一号的检测方法研究

    目的:应用高效液相色谱和固相萃取技术测定食品中的苏丹红一号.方法:用固相萃取法对样品提取液进行净化处理,利用反相高效液相色谱法分析食品中的苏丹红一号,在C18色谱柱上,95%的甲醇水溶液做流动相,流速为1.00 ml/min,柱温为40℃,紫外检测波长为478 nm,可以较好地检测食品中的苏丹红一号,阳性样品由液相色谱-多极串联质谱联用仪确证.结果:该方法相对标准偏差在1.00%~2.36%之间,回收率在87.2%~95.0%之间.线性相关系数r>0.9992.结论:本方法准确可靠,可应用于食品中苏丹红一号的测定.

    作者:仲岳桐;陈春晓;徐锦洪;刘桂华 刊期: 2007年第02期

  • 公共场所公用物品卫生状况调查分析

    目的:了解铁岭市公共场所公用物品卫生状况,明确监督检测工作重点.方法:对铁岭市内4类公共场所(旅店、洗浴场所、理发店、美容院)共410份公用物品卫生进行微生物检测.结果:410份公用物品总合格率为68.3%.结论:公共场所公用物品的卫生质量还有待进一步提高,卫生监督部门应加强公共场所卫生监督执法力度,努力提高对重点公共场所卫生管理水平.

    作者:孙波 刊期: 2007年第02期

  • 游泳池水中弧菌科病原菌的调查研究

    目的:为了解室内游泳池中弧菌科病原菌的分布情况,预防和控制病原菌在游泳池中的传播流行.方法:采用碱性胨水增菌、TCBS平板分离和系统生化鉴定分离病原菌.并对分离到的菌株进行小白鼠毒力试验及药敏试验.结果:60份游泳池水中有25份水样检出了弧菌科病原菌,其中以嗜水气单胞菌为优势菌,其次为温和气单胞菌与非O1群霍乱弧菌.小白鼠毒力试验等证明了这些菌株都具一定的毒力.药敏试验结果表明这些弧菌科细菌存在一定的耐药现象,特别是对羟氨苄青霉素100%耐药,且嗜水气单胞菌、非O1群霍乱弧菌对头孢噻吩、头孢西丁也100%耐药.结论:弧菌科病原菌在室内游泳池水中具有较高的检出率.常规方法结合病原菌分析,能综合评价游泳池水的卫生状况.

    作者:章乐怡;李毅;李小春;陈慧燕;洪程基;王良怀;吴跃进 刊期: 2007年第02期

  • 实验室中的化学品安全管理

    SARS病毒在实验室造成人员感染事件后,世界各国都意识到了实验室生物安全管理的重要性,2004年WHO出版了《实验室生物安全手册》(第三版),加拿大出版了《实验室生物安全指南》.我国也先后颁布了《病原微生物实验室生物安全管理条例》(2004)、《国家突发公共事件总体应急预案》(2006)、《人间传染的病原微生物名录》(2006)、《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》(2006)、《实验室生物安全通用要求》GB19489-2004、《CNAL实验室生物安全认可准则》(2005),使实验室生物安全的管理更加科学、规范.

    作者:徐东群 刊期: 2007年第02期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会