莫珩；高承志；王少杰；曲姗
目的：探讨Wnt／β-连环蛋白（β-catenin ）通路对大鼠脑出血的保护作用机制。方法：96只成年SD雄性大鼠随机分为假手术组、脑出血组、脑出血假干预组、siDkk-1干预组4组，采用Real-time PCR方法检测各组大鼠脑出血后24、72 h脑组织中Wnt-1和糖原合成酶激酶3β（ GSK-3β） mRNA表达的变化，采用Western blot法检测各组大鼠脑出血后24、72 h脑组织中β-catenin表达的变化，各组大鼠处死前均进行行为学检测。结果：大鼠脑出血后24和72 h，Wnt-1 mRNA水平与假手术组相比均降低，经siDkk-1干预后，Wnt-1 mRNA水平较脑出血假干预组升高（F＝9．040和26．400， P均＜0．05）。大鼠脑出血后24和72 h，GSK-3βmRNA 水平与假手术组相比均升高，经siDkk-1干预后，GSK-3βmRNA水平较脑出血假干预组下降（F＝41．100和17．800， P均＜0．001）。大鼠脑出血后24和72 h，β-catenin蛋白的表达较假手术组均升高，经siDkk-1干预后，其表达较脑出血假干预组进一步升高（ F＝15．100和14．000， P均＜0．05）。大鼠脑出血后24和72 h，刺激触须前肢上抬比例较假手术组降低，经siDkk-1干预后，前肢上抬比例较脑出血假干预组升高（F＝2450．000和2230．000，P均＜0．001）。结论：Wnt／β-catenin通路对脑出血大鼠有保护作用，可能是通过活化Wnt-1、抑制GSK-3β，进而导致β-catenin 在胞浆中聚集、移位入核后启动Wnt下游靶基因的转录所致。
作者：李治华；陈曦；臧卫东；郭付有 刊期： 2015年第06期
目的：研究枸杞多糖及其硫酸酯体外免疫和抗肿瘤活性。方法：分别采用水提一步醇沉法和分步醇沉法提取不同的多糖LBPS30、LBPS70和LBPSt，纯化后用氯磺酸-吡啶法修饰得到3种硫酸化枸杞多糖sLBPS30、sLB-PS70和sLBPSt。采用MTT法检测多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖和食管癌EC109细胞抑制的影响，ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-2、IFN-γ和IL-24的含量，划痕法检测细胞迁移情况。结果：sLBPSt和 sLBPS30的淋巴细胞增殖率和不同时间点对EC109细胞的抑制率都较高； sLBPSt组细胞上清液中4种淋巴细胞因子含量均显著高于细胞对照组（P＜0．05）；sLBPSt组细胞迁移数显著低于其余各组（P＜0．05）。结论：硫酸化修饰能显著增强体外脾淋巴细胞增殖，促进淋巴细胞四种细胞因子的分泌，并能抑制EC109细胞生长，降低EC109细胞迁移速率，且与硫酸基含量有一定的关系。 sLBPSt和sLBPS30总体效果较好。
作者：王君敏；薛敬礼；葛蓓蕾；庄玉伟；杜春燕；薛昆 刊期： 2015年第06期
目的：建立RP-HPLC法测定生物转化液中利斯的明中间体含量及ee值的方法。方法：以Lux 3u Cellu-lose-1为手性分离柱，以正己烷砄异丙醇（V砄V＝92．5砄7．5）为流动相，检测波长217 nm，进样量20μL。结果：中间体能够完全分离，在测定中间体含量的同时能够测定样品的ee值。结论：该方法准确、灵敏、精密度良好，适合生物转化液中利斯的明中间体含量及ee值的测定。
作者：李永红；周方方；付路平；刘宏民 刊期： 2015年第06期
目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）患者情绪障碍与唾液皮质醇和脱氢表雄酮（DHEA）水平的相关性。方法：采用汉密尔顿焦虑量表（HAMA）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评定非糜烂型OLP组（40例）、糜烂型OLP组（31例）和对照组（31例）的焦虑、抑郁状况，并在早晨采集唾液，通过放射免疫法对受试者的唾液皮质醇和DHEA水平进行测定，分析量表得分与唾液皮质醇和DHEA水平的相关性。结果：3组受试者的HAMA得分、HAMD得分、唾液皮质醇水平差异均有统计学意义（F＝15．892、4．876和14．375，P＜0．05），糜烂型OLP组HAMA得分、HAMD得分、唾液皮质醇水平均高于对照组和非糜烂型OLP组（P＜0．05）。糜烂型OLP组唾液皮质醇水平与HAMA得分和HAMD得分（r＝0．965、0．923，P ＜0．001）呈正相关，而唾液 DHEA 水平与 HAMA 得分和 HAMD 得分（r ＝－0．948、－0．966，P＜0．001）呈负相关。非糜烂型 OLP组唾液皮质醇水平与 HAMA 得分和HAMD 得分（r ＝0．963、0．957，P＜0．001）呈正相关，而唾液DHEA水平与HAMA得分和HAMD得分（ r＝－0．962、－0．971，P＜0．001）呈负相关。结论：糜烂型OLP的发生、发展与焦虑、抑郁等情绪障碍有关，其作用机制可能是通过应激反应导致糜烂型OLP患者的唾液皮质醇水平升高，但是否与唾液DHEA水平的降低相关还有待进一步的研究。
作者：莫珩；高承志；王少杰；曲姗 刊期： 2015年第06期
目的：探讨河南省青少年吸烟行为的影响因素，为有针对性地预防和控制青少年吸烟提供科学依据。方法：采用多阶段分层整群随机抽样方法，全省抽取16个调查点48所初中共7789名学生进行问卷调查。结果：河南省青少年尝试吸烟率和现在吸烟率分别为20．87％和5．87％。单因素分析结果显示青少年的尝试吸烟率和现在吸烟率均为男生高于女生，且随着年龄的增长，每周零花钱的增多，烟草广告暴露程度、父母吸烟和好朋友吸烟比例、看到老师吸烟频率的增高而增高（P＜0．001）。多因素logistic回归分析显示青少年尝试吸烟和现在吸烟行为的危险因素均包括男生、每周零花钱21～元组和＞40元组、好朋友吸烟、看到老师在学校吸烟及认为在社交场合吸烟使人更舒服，好朋友吸烟是重要的影响因素；保护因素包括认为吸烟能使年轻人减少吸引力及在社交场合吸烟使人更不舒服[OR（95％CI）＝0．762（0．651～0．900）、0．661（0．552～0．798）和0．710（0．527～0．953）、0．421（0．321～0．560）]。结论：青少年吸烟受多方面因素的影响，好朋友吸烟是重要的影响因素，在开展青少年吸烟防控工作时尤其应注重同伴控烟教育。
作者：孙盼盼；王卫峰；周刚；李建彬 刊期： 2015年第06期
目的：对豫医卷毛大鼠的Krt71基因进行比较生物学分析。方法：采用PCR方法对豫医卷毛大鼠Krt71的cDNA序列进行克隆、测序，并与BN大鼠、小家鼠、家牛、家绵羊、家猫、苏门答腊猩猩和人的Krt71 cDNA序列及其编码产物的氨基酸序列进行同源性比较和系统遗传学分析。结果：获得了豫医卷毛大鼠Krt71基因全长1573 bp的cDNA序列（ GenBank登录号：KF303588）。豫医卷毛大鼠与BN大鼠、小家鼠、家牛、家绵羊、家猫、苏门答腊猩猩和人的同源性分别为99．9％、95．2％、88．5％、87．5％、88．0％、88．1％、88．1％，氨基酸序列的同源性分别为99．9％、98．9％、92．4％、91．2％、91．4％、92．3％、92．1％。结论：Krt71基因在哺乳动物进化过程中具有较高的保守性，是一个具有重要功能的“持家基因”。
作者：张明昊；章金涛 刊期： 2015年第06期
目的：构建长QT综合征（ LQTS ）2型hERG 基因G604 S突变的真核表达载体G604 S-hERG-pcDNA3、G604S-hERG-pEGFP。方法：采用重叠延伸PCR 法在pEGM-hERG基础上构建G604S突变体PGEM-hERG-G604S，通过限制性内切酶法和基因重组技术将突变体插入到真核表达载体pcDNA3和pEGFP-C2中并测序验证，用脂质体转染法将G604 S-hERG-pEGFP转染至HEK293细胞并观察其荧光表达。结果：构建的含有突变位点的真核表达载体经DNA测序均成功验证hERG基因1810位点碱基G突变为A，构建的G604 S-hERG-pEGFP在HEK293细胞中成功表达绿色荧光。结论：成功构建hERG基因G604 S h-ERG-pcDNA3和G604 S-hERG-pEGFP表达载体。
作者：韩稳琦；霍建华；李国良；蒋永荣；武金娥；孙超峰 刊期： 2015年第06期
目的：探讨特发性弱精子症患者精子中TEKT3表达的特点。方法：采用非连续密度梯度离心法分离、纯化正常对照组和弱精子症组精子标本各35份，分别采用RT-PCR和Western blot检测精子中TEKT3 mRNA和蛋白的表达。结果：与正常对照组比较，弱精子症组TEKT3 mRNA 和蛋白表达均显著降低（t ＝9．610、10．090，P＜0．001），相关性分析显示弱精子症组精子TEKT3 mRNA和蛋白表达水平与前向运动精子率呈正相关（r＝0．684， P＝0．001；r＝0．483，P＝0．013）。结论：TEKT3表达降低可能在特发性弱精子症发病中具有重要作用。
作者：李玉山；陈河涛；杨夕阳；王全先；刘军杰；王琳凯；苏彦华；孙琳 刊期： 2015年第06期
目的：探讨血清肿瘤标志物检测结合决策树模型在肝癌诊断中的价值。方法：运用肿瘤标志物定量检测试剂盒对119例肝部良性疾病及98例肝癌患者血清中9项肿瘤标志[甲胎蛋白（ AFP）、癌胚抗原（ CEA）、CA125、CA242、CA199、神经元特异性烯醇化酶（ NSE）、铁蛋白（ Ferritin）、人生长激素（ HGH）和CA153]水平进行检测，应用logistic回归筛选肿瘤标志物，并于筛选前后建立决策树模型和Fisher判别分析模型。结果：肝癌组9项血清肿瘤标志物水平均高于肝良性疾病组（P＜0．05）。筛选前基于9项肿瘤标志物、筛选后基于3项肿瘤标志物分别建立Fisher判别分析模型、决策树模型，其预测准确度分别为76．5％、91．2％、74．4％、90．8％。筛选前后决策树模型ROC曲线的AUC分别为0．912和0．908，高于Fisher判别分析的0．745和0．727（Z＝4．512和4．589，P均＜0．05）；但决策树模型和Fisher判别分析筛选前后自身相比，差异均无统计学意义（Z＝1．855和1．122，P均＞0．05）。结论：基于3项血清肿瘤标志物建立的决策树模型诊断肝癌的效果优于 Fisher 判别分析。
作者：张永；李晓勇；宋瑜；周百中；崔卫东；赵甦；陈艳军；杨战锋；郜宇；杨华 刊期： 2015年第06期
目的：探讨CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达的负调控作用。方法：设计合成包含CYP3A4*1G G或A等位基因的一系列基因片段（外显子10与内含子10交界处287和181 bp），构建CYP3A4*1G正向位于CYP3A4启动子上游的荧光素酶报告基因载体，与内参质粒pRL-TK共转染HepG2细胞，通过双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果：与CYP3 A4启动子相比较， G与A等位基因在287 bp DNA片段中均降低了荧光素酶表达（F＝795．575，P＜0．001），且G与A等位基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与CYP3A4启动子相比较，G 与A 等位基因在181 bp DNA 片段中均降低了荧光素酶表达（F＝23．218，P＜0．001），而G与A等位基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：在CYP3A4内含子10与外显子10交界处CYP3A4*1G存在与CYP3A4*1G变异无关的CYP3A4启动子的抑制元件，该抑制元件对CYP3 A4*1 G增强CYP3 A4基因表达起负调控作用。
作者：杨卫红；闫良；刘利娥；赵登职；张卫；张莉蓉 刊期： 2015年第06期
目的：通过构建pCAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法：PCR无义突变去除pCAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点，并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点，构建启动子陷阱载体pCAT3。 TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组，插入pCAT3载体中，转化至大肠杆菌DH5α，通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌；随机挑取1株提取质粒，测序及比对分析插入序列；根据分析结果设计引物，扩增可能的启动子序列，并插入验证载体p-3lysm-egfp，转化DH5α，荧光显微镜观察。结果：成功构建pCAT3启动子陷阱载体，获得约100启动子文库菌，其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的 ORF4启动子；插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论：该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子，为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。
作者：曾韦锟；毛普加；洪愉；冯梦蝶；许泽仰；宋武战；杨洪文；赵继华；王纪爱；黄芬；井申荣 刊期： 2015年第06期
目的：探讨睾酮受体（ AR）蛋白表达水平的改变对高血压大鼠血管重构（ VR）的影响及其信号转导机制。方法：将30只大鼠随机分为对照组、假手术组、高血压组3组（每组10只）。采用“两肾一夹”法制备肾血管性高血压大鼠模型。 HE染色观察主动脉组织形态结构，免疫组化法检测3组大鼠主动脉组织中AR、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（MKP-1）蛋白表达水平。结果：与对照组相比，假手术组主动脉形态结构基本正常，AR、MKP-1蛋白表达水平无显著改变（P＞0．05）；与对照组及假手术组相比，AR和MKP-1蛋白表达水平下降（P＜0．001）；且在高血压组AR与MKP-1蛋白的表达呈正相关（r＝0．657，P＝0．039），在对照组及假手术组无关（r＝0．589和0．436， P＞0．05）。结论：高血压VR过程中存在AR及MKP-1蛋白表达水平的改变。
作者：于超男；王颖；燕树勋；杨国杰；张彦周；杨晓村；李渊；孙丽娜 刊期： 2015年第06期
目的：建立黄曲霉菌感染小鼠角膜动物模型，并观察病变后不同时期角膜组织病理学变化。方法：用培养接种棒对40只C57 BL／6小鼠进行仿真临床角膜划痕导致真菌感染。在第1、3、5、7和14天行裂隙灯显微镜检查评分，随后处死小鼠制作角膜铺片，免疫荧光染色后进行激光扫描共聚焦显微镜观察。结果：术后第1、3和5天，接种眼临床评分升高迅速，在第5天达到峰值，随后第7和14天临床评分逐渐降低；术后第1天接种眼角膜缘组织已有中性粒细胞浸润、角膜巩膜缘血管扩张充血等明显急性炎症变化，第3天角膜巩膜缘出现新生血管芽，中性粒细胞向角膜中央溃疡灶浸润、聚集，第5天中性粒细胞浸润进一步加重，见侵入角膜基质层放射状生长的新生血管，第7天中性粒细胞浸润仍较严重，新生血管向角膜中央溃疡灶生长明显，管腔增粗，第14天中性粒细胞明显减少，新生血管萎缩、减少。结论：成功建立黄曲霉菌角膜炎小鼠动物模型；感染第5天可能是角膜炎症过程中的关键时间窗。
作者：张伟宏；蒋莉莉；汪晓凯；赵秋民；杨东斌；黄贯峰；张焕云；杨阳；梁芳；韩雷；吴细丕 刊期： 2015年第06期
脊髓小脑共济失调（ spinocerebellar ataxia ，SCA）是一组具有临床和遗传异质性的神经系统遗传疾病［1-2］，多呈常染色体显性遗传，主要表现为慢性进行性加重的肢体共济失调、构音障碍及眼球运动障碍，影像学研究［1-4］表明病变主要累及大脑、小脑、脑干及脊髓。目前报道［1，5-6］的SCA亚型多达40种，其发病年龄及临床症状多数相互重叠，因此仅仅依据临床表型特征及影像学评估对患者诊断分型较为困难，而基因检测则有助于明确诊断。该研究主要对临床诊断为SCA的一家系9例患者及有血缘关系、临床表现正常的27例家系成员进行基因检测，以确定基因型，同时对患者的临床特点进行总结分析，为临床诊断提供相关资料。
作者：夏明荣；黄月；张杰文；李书剑 刊期： 2015年第06期
目的：观察重复经颅磁刺激（rTMS）对抑郁大鼠学习记忆功能及海马CA3区突触素（SYP）表达的影响。方法：SD雄性大鼠40只，随机分为对照组、抑郁组、rTMS组和伪刺激组，每组10只，后3组采用为期21 d的孤养结合慢性不可预见轻度应激制备抑郁模型。造模成功后，rTMS组给予3个疗程15 Hz的rTMS治疗；伪刺激组只施予同样次数的声音刺激而无电流脉冲。采用Morris水迷宫的定位航行实验及空间探索实验评定大鼠学习记忆功能。应用免疫组织化学方法检测大鼠海马CA3区SYP蛋白的表达情况。结果：4组大鼠逃避潜伏期、原平台象限游泳时间及原平台象限游泳路程占总路程的百分比及海马CA3区SYP蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F＝39．608、646．088、198．940、388．673，P＜0．001）。与对照组比较，抑郁组、伪刺激组大鼠逃避潜伏期延长，原平台象限游泳时间缩短，原平台象限游泳路程占总路程的百分比减小，SYP蛋白表达水平降低（P＜0．05）；与抑郁组、伪刺激组比较，rTMS组上述指标均明显改善（P＜0．05）。结论：rTMS干预可以改善抑郁模型大鼠的学习记忆功能，其机制可能与rTMS增加大鼠海马CA3区SYP的表达有关。
作者：欧阳华；白冰；赵琳；任慧聪；张朝辉 刊期： 2015年第06期
目的：制备人微管蛋白抗体，并用其观察大鼠死亡后肾脏组织中微管蛋白的降解规律与死亡时间的关系。方法：通过分子生物学方法制备小鼠抗人微管蛋白多克隆抗体。取48只大鼠，分为断颈致死组和溺死组，每组24只，采用Western blot观察死亡后24、48、72和96 h大鼠肾脏组织中微管蛋白的降解规律。结果：制备的小鼠抗人微管蛋白多克隆抗体效价超过1砄8000；2组大鼠死亡后，肾脏组织中微管蛋白均呈逐步降解的趋势；断颈致死组大鼠死后96 h肾脏组织检测不到微管蛋白；溺死组大鼠死后72 h肾脏组织检测不到微管蛋白。结论：大鼠死亡后，肾脏组织中微管蛋白呈逐步降解的趋势；溺死和断颈大鼠死亡后肾脏组织中微管蛋白的降解速度存在差异。
作者：齐麟；李伟 刊期： 2015年第06期
目的：探讨PPARγ上调对PCOS患者卵巢颗粒细胞P450 arom mRNA表达的调控作用及对T转化效应的影响。方法：提取10例雄激素正常的PCOS 患者（ NA-PCOS组）、10例伴高雄激素血症的PCOS患者（ HA-PCOS组）及10例仅因输卵管因素不孕患者（对照组）的卵巢颗粒细胞，分别给予0、1、10 nmol／L的PPARγ激动剂罗格列酮培养48 h后，采用RT-PCR测定PPARγ、P450 arom mRNA的表达，采用 ELISA法测定培养液中E2值，计算T转化率。结果：PPARγ上调后，3组患者P450arom mRNA 的表达均降低，T转化率下降，尤其是HA-PCOS 组（P＜0．05）。 PPARγ上调（10 nmol／L罗格列酮处理）后，HA-PCOS组卵巢颗粒细胞中PPARγmRNA的表达水平和T转化率负相关，P450arom mRNA的表达水平和T转化率正相关（r＝－0．633、0．829，P＜0．05）。结论：PPARγ可能通过抑制P450 arom参与PCOS高雄激素血症的发生。
作者：王碧君；郭艺红；张慧红；李婧；杨新红 刊期： 2015年第06期
促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白，作用于骨髓中红系造血祖细胞，能促进其增殖、分化。1977年从再生障碍性贫血患者的尿液中分离提纯得到EPO后［1］，人们第一次能够用重组人EPO治疗慢性肾脏病贫血和化疗导致的非髓性恶性肿瘤相关的贫血。近年来研究［2-3］发现其不仅具有促进骨髓造血作用，还有一系列非造血作用，如抗炎、抗凋亡、抗氧化应激等。作者针对EPO研究的新进展及其在临床的应用综述如下。
作者：文建国；冯锦锦 刊期： 2015年第06期
目的：研究Notch1和HES1基因在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系U2OS中的表达及其对U2OS侵袭能力的影响。方法：组织学水平研究中，配对选取23例骨肉瘤及临近瘤旁正常骨骼肌组织标本；细胞学水平研究中，选取骨肉瘤细胞系U2OS及人正常成骨细胞系hFOB1．19；采用免疫组化法检测组织学水平Notch1及HES1蛋白的表达，采用Western blot及Real-time PCR法检测组织学及细胞学水平Notch1、HES1蛋白及mRNA的表达。用Notch1-siRNA沉默U2OS细胞中Notch1基因后，应用Western blot及Real-time PCR法检测U2OS细胞中Notch1及HES1的表达，Transwell法检测U2OS侵袭能力的变化。结果：相比于正常组织，骨肉瘤组织中Notch1、HES1 mRNA和蛋白呈高表达（t配对＝22．567，14．830和8．439，7．100，P＜0．001）。 U2OS细胞中Notch1、HES1 mRNA和蛋白表达强于hFOB1．19细胞（t＝11．053，20．482和28．845，34．681，P＜0．001）。沉默Notch1基因后，U2OS细胞Notch1、HES1 mRNA和蛋白表达下降（t＝6．294，9．209和9．151，13．953，P＜0．05），侵袭能力下降（t＝71．387，P＜0．001）。结论：Notch1和HES1在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系中呈高表达，沉默Notch1基因可降低U2OS细胞侵袭能力。
作者：王勇；赵伟；马骥 刊期： 2015年第06期
作者： 刊期： 2015年第06期
郑州大学学报（医学版）杂志
主管:河南省教育厅
主办：郑州大学
