王爱民；阴赪宏；魏艳荣；马雪梅；李洵；王宝恩
目的 用纯化的人血管生成素2(Ang2)蛋白,通过噬菌体展示技术从非免疫小鼠噬菌体展示抗体库中淘选、鉴定Ang2单链抗体.方法 以纯化的人Ang2蛋白为抗原,对非免疫小鼠噬菌体展示抗体库进行富集和筛选,获得Ang2单链抗体,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot法检测目的蛋白的表达并测序.结果 经过3轮富集和筛选,获得了1个能特异性识别Ang2蛋白的阳性噬菌体克隆,DNA测序表明其含有完整的单链抗体基因片段,大小约750 bp,表达蛋白相对分子质量约33.7×103；通过SDS-PAGE进一步实现Ang2单链抗体(phage-Ang2-scFv)的鉴定.结论 成功分离并鉴定人Ang2-scFv,为进一步的功能学研究奠定了基础.
作者：张中林；艾勇彪；张吉发；袁玉蜂；刘志苏；何跃明 刊期： 2012年第11期
目的 探讨结肠癌Rho解离抑制因子2(RhoGDI2)基因的表达及其与临床病理的关系.方法 运用组织芯片技术、免疫组织化学法检测75例结肠癌患者原发癌灶和癌旁正常结肠组织的RhoGDI2的表达及其与相应结肠癌临床病理参数之间的关系.运用Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测18例配对结肠腺癌原发灶组织和癌旁5 cm正常结肠组织的RhoGDI2的表达.结果 RhoGDI2阳性率在结肠癌原发癌灶和癌旁正常组织分别为73.33％和33.33％ (P＜0.05)；RhoGDI2阳性率与临床TNM分期相关(P＜0.01),与原发灶T分期范围相关(P＜0.05),与淋巴结N分期、远处转移M无明显相关(P＞0.05).18例结肠癌RhoGDI2 Western blot灰度值高于正常组织的4.8倍(P＜0.05).Real-time PCR结果显示癌灶组RhoGDI2相对表达量高于癌旁对照组(P ＜0.05)；RhoGDI2表达阳性率与临床TNM分期明显相关(P＜0.01),与原发灶T分期明显相关(P＜0.05).结论 RhoGDI2在结肠癌中表达上调,与临床TNM分期明显相关.
作者：李守峰；刘璐；伍衡；曾育杰；许鹤洋；来伟；褚忠华 刊期： 2012年第11期
目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肝细胞生长因子(HGF)促进人结肠癌细胞SW620增殖、移行中的作用.方法 在细胞培养液中加入MAPK通路中丝裂原细胞外激酶(MEK1/2)的拮抗剂U0126(终质量浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L),之后加入终质量浓度为20 μg/L的HGF.用噻唑蓝(MTT)比色法检测SW620细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,划痕试验检测移行.二甲基亚砜(DMSO)组加终质量浓度为0.1％体积浓度的DMSO,加入同体积的培养液作为对照组.结果 (1) U0126与20 μg/L HGF共同作用SW620细胞48 h后,低浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)U0126组、DMSO组与对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),当U0126浓度≥4.0μmol/L时能抑制HGF促SW620增殖,但未表现出浓度依赖性.4.0、8.0 μmol/LU0126组增殖抑制率分别为24.6％和28.4％ (P ＜0.05).(2)2.0、4.0、8.0 μmol/L U0126组G1期细胞数增多,而S期细胞数减少,3组的增殖指数(32.32±6.64、23.87±4.88、20.28±5.22)均低于对照组,P＜0.05),且4.0、8.0μmol/L U0126组与2.0 μmol/L组差异有统计学意义(P＜0.05).(3)加入U0126 24 h后,仅8.0μmol/L组SW620细胞移行受到明显抑制,抑制率为60.9％(P＜0.05),DMSO组、4.0mol/L U0126组与对照组移行距离差异无统计学意义(P ＞0.05)；48、72 h后,8.0 μmol/L和4.0μmol/L U0126组细胞移行均受到抑制(P＜0.05),48 h抑制率分别为46.5％、61.8％,72 h抑制率分别为44.2％、54.3％,但8.0μmol/L组与4μmol/L组细胞移行距离差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MAPK信号通路参与了HGF促人结肠癌细胞SW620增殖和移行的作用.
作者：贾漪涛；王振宝；黄万刚；耿瑞超；王金西；李中信 刊期： 2012年第11期
目的 观察雷帕霉素对大鼠肝内胆管缺血术后血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的影响.方法 120只雄性SD大鼠随机分为4组,A组为对照组(假手术组)28只；B组为假手术+雷帕霉素组28只；C组为缺血组32只,D组为缺血+雷帕霉素组32只.雷帕霉素按2.0 mg/(kg·d)胃内注入.术前、术后7d及术后14d分别测量实验大鼠体质量.各实验组于术后第1、3、7天分别处死6只大鼠,术后14 d处死全部大鼠.切取肝脏组织,免疫组织化学染色分析观察肝组织内VEGF表达,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR,染料法)检测VEGF mRNA表达.多个独立样本比较采用Kruskal-Wallis H检验,两样本间的比较经秩转换处理后行one way ANOVA检验,两独立样本比较采用Mann-Whitney U检验.结果 对照组及假手术+雷帕霉素组未见明显VEGF阳性染色；缺血组术后VEGF阳性染色明显,主要定位于汇管区内血管内皮；缺血组及缺血+雷帕霉素组术后VEGFmRNA明显升高,术后3d达到峰值(5.19±0.15),术后1、3、7d,缺血组血清VEGF mRNA水平高于缺血+雷帕霉素组(P＜0.05).结论 雷帕霉素抑制胆管缺血后VEGF mRNA表达,这可能是雷帕霉素抑制胆管缺血后代偿性增生的机制之一.
作者：吴田田；李虎城；黄辉；张维；赵军；杨广顺 刊期： 2012年第11期
大量研究结果显示营养支持与肠屏障功能的维护有着密切的关系,特别是肠内营养的应用,不仅为机体代谢提供底物,满足能量和蛋白质需求,而且在改善和维护肠黏膜结构和屏障功能及肠道免疫方面也发挥着关键作用[1-3].尤其是近年来免疫营养素、生态免疫营养以及维持黏膜屏障功能的细胞因子的研究和应用,推动了临床营养的发展.
作者：王文生；杨桦 刊期： 2012年第11期
目的 调控前列腺癌干细胞(PCSCs)中微小RNA-101(miR-101)表达,观察细胞中EZH2表达及其增殖迁移能力的变化.方法 通过流式分选从LNcap细胞株中获取PCSCs;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、双荧光素酶、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移实验观察miR-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移能力影响.结果 在PCSCs中转染miR-101后,实验组较未处理组EZH2表达量下降46％ (P ＜0.05)；双荧光素酶实验证实PCSCs中miR-101直接调控EZH2；凋亡实验中,实验组细胞凋亡率为(3.79±0.24)％,较对照组凋亡率明显增加(P＜0.05)；周期实验中,实验组细胞G1期比例为(82.95±0.78)％,较对照组比例增加(P＜0.05),细胞被阻滞在G1/S期；迁移试验中,细胞迁移率为0.38±0.01,明显低于对照组(P＜0.05).结论 过表达miR-101能下调前列腺癌干细胞中EZH2的表达并能降低细胞的增殖迁移能力.
作者：周邦奋；李奎庆；范新兰；毕良宽；刘成；许可慰 刊期： 2012年第11期
目的 观察小鼠胚胎腭突间充质(EPM)细胞中7-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr7)的表达,筛选出针对EPM细胞Dhcr7的有效小干扰RNA(siRNA)序列.观察RNA干扰(RNAi)沉默Dhcr7的表达后,对EPM细胞增殖的影响.方法 化学合成3条针对Dhcr7 mRNA的siRNA,阳性脂质体介导转染EPM细胞.荧光显微镜观察转染效率,Western blot法检测Dhcr7蛋白表达变化,噻唑蓝(MTT)检测沉默后增殖率的变化.结果 siRNA转染效率为72.6％.3条siRNA对EPM细胞Dhcr7基因表达都有抑制作用,siRNA-3抑制作用明显,达60.2％,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Dhcr7沉默后EPM细胞增殖抑制率为56.4％,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 筛选出针对EPM细胞Dhcr7有效的siRNA序列.siRNA可抑制EPM细胞Dhcr7基因表达,Dhcr7表达降低可抑制EPM细胞增殖.
作者：庄翠竹；马秀兴；肖文林；张春阳；王双义 刊期： 2012年第11期
目的 观察柴胡皂苷d(SSd)对阻塞性黄疸大鼠胆汁酸代谢、肝细胞游离钙及基质交联分子1(STIM1)基因表达的影响.方法 将108只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、阻黄组、阳性药物对照组、高、中、低剂量SSd组,同时各组随机分7、14、21d3个时段,每时段每组6只,建模成功后,分别连续给药7、14、21 d,于各时段末取肝组织和下腔静脉血标本,检测血清总胆汁酸(TBA)；应用流式细胞仪通过荧光指示剂Fluo-3/AM测定肝细胞内钙离子浓度；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测STIM1的mRNA表达.结果 阻黄模型建立7、14、21 d后,阻黄组血清TBA逐步增加,肝细胞游离钙平均荧光强度(MFI)值逐步上升,STIM1 mRNA表达逐步减弱；SSd治疗组7d末,与阻黄组比较,低、中、高剂量组TBA水平逐步下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；肝细胞游离钙MFI值逐步下调,差异有统计学意义(P＜0.05)；STIM1 mRNA表达逐步增强,差异有统计学意义(P＜0.05)；14、21 d末各检测指标变化趋势与7d末相同.结论 SSd能降低血清TBA浓度,上调STIM1 mRNA表达,抑制肝细胞钙超载,从而减轻阻塞性黄疸大鼠肝脏损害.
作者：戴维；陈念平；陈赛红；包仕廷；廖博懿；刘刚 刊期： 2012年第11期
随着人工髋关节置换日益普及,假体无菌性松动、下沉、脱位或各种技术因素造成人工关节失败,需再次手术翻修的病例愈来愈多.现将武汉市普爱医院2005年1月至2011年12月31例非感染性全髋关节翻修术的资料进行回顾分析,探讨非感染性全髋关节翻修术常见原因、困难及对策.
作者：沈波；魏忠民；张克良；许闫严 刊期： 2012年第11期
胃旁路术治疗2型糖尿病具有很高的治愈率和缓解率,其治疗机制已成为糖尿病研究的热点[1].本研究旨在探讨构建大鼠胃旁路术模型的手术技巧.一、材料和方法1.材料:清洁级雄性SD大鼠30只,体质量200-220 g,由中山大学实验动物中心提供.许可证号:SCXK(粤)2009-0011.参照文献[2]经高脂饮食加STZ诱导为2型糖尿病模型.
作者：彭海峰；都敏；张环；阎玉矿 刊期： 2012年第11期
目的 探讨胆囊良恶性病变组织中环氧合酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达及其临床病理意义.方法 采用免疫组织化学法检测44例胆囊腺癌、10例胆囊腺瘤组织中COX-2与VEGF-C的表达.结果 胆囊腺癌和胆囊腺瘤组织中COX-2表达阳性率分别为72.7％和40.0％,胆囊腺癌COX-2的表达率明显高于胆囊腺瘤(P＜0.05).VEGF-C在胆囊腺癌组织中的表达明显高于胆囊腺瘤(63.6％比20.0％,P＜0.05).COX-2与VEGF-C的表达与胆囊腺癌的Nevin分期和淋巴结转移相关.COX-2与VEGF-C表达显著相关.结论 COX-2与VEGF-C表达与胆囊腺癌的发生和生物学行为密切相关.
作者：穆宏凌；吕海涛；王文斌；刘三光；张树彬 刊期： 2012年第11期
肝细胞癌(HCC)是典型的多血管肿瘤,新生血管不仅为癌细胞的生长提供所需的营养和氧气,排出代谢产物,也是癌细胞进入血液循环发生转移的重要途径[1].螺旋CT在肿瘤血管生成的评价中起着至关重要的作用,是临床中评价肝癌血管生成活力的重要方法[2-3],通过螺旋CT表现特征可以间接地反映血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度,有助于肿瘤侵袭能力的预测、治疗方案的选择、疗效及预后的评估.
作者：郝雪佳；姜慧杰 刊期： 2012年第11期
目的 观察印度刺猬蛋白(Ihh)对成骨细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK)的调节作用.方法 取子鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测成骨细胞中p38 MAPK的表达量,检测成骨细胞在不同浓度(0、10、50、200μg/L)及不同时间(0、1、2、3d)的Ihh作用下p38 MAPK的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 成骨细胞表达p38 MAPK；Ihh促进成骨细胞增殖,促进p38 MAPK的表达(P＜0.05)；阻断p38 MAPK信号转导通路后,成骨细胞增殖明显受抑制,但不能明显抑制Ihh刺激下的成骨细胞增殖(P＜0.05).结论 p38 MAPK在成骨细胞增殖分化中起作用,Ihh通过p38 MAPK通路促进成骨细胞增殖.
作者：赵恒伍；廉明；郑学成；曾祥一 刊期： 2012年第11期
目的 观察封闭负压引流技术对创面血管化的影响.方法 制作幼猪肌腱外露创面模型2×12个,设为封闭负压引流组(VSD组)和对照组,对表达CD31的新生血管、表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的成熟血管和表达血管内皮生长因子(VEGF)的细胞数进行统计学比较.结果 第7天,VSD组CD31阳性新生血管数为(19.90±1.36)个,α-SMA阳性成熟血管数为(11.90±1.32)个,VEGF阳性新生血管数为(69.90±1.27)个,CD31 mRNA表达量为(1.543±0.072)；对照组分别为(13.20±1.02)、(8.20±1.05)、(44.20 ±0.72)个以及(0.988 ±0.031),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 封闭负压引流能加速创面血管化,肉芽覆盖肌腱,促进创面愈合.
作者：刘君；刘兴邦；陶圣祥；余国荣；胡祥 刊期： 2012年第11期
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)和微小RNA17-92 (miR-17-92)家族成员在结肠癌中异常表达的意义.方法 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo-PRL-3和LoVo-VC,用MicroRNA芯片筛查表达异常的促癌microRNA,从中选取miR-17-92家族成员miR-17、miR-19a行荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证.在LoVo-PRL-3细胞中对STAT3信号传导与转录激活因子-3(STAT3)进行RNA干扰,检测miR-17、miR-19a的表达,在稳转细胞株中转染miR-17、miR-19a或对其进行敲除,用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Tanswell试验对细胞增殖侵袭能力的变化进行研究.在13例患者结肠癌原发灶、转移灶及癌旁正常组织中行免疫组织化学及qRT-PCR检测PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达.结果 在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-17、miR-19a的表达明显上调(P＜0.05),干扰STAT3可以抑制miR-17、miR-19a的表达.在LoVo-VC细胞中过表达miR-17、miR-19a促进了细胞的增殖(P＜0.05及P＜0.01)和侵袭(P＜0.01),而在LoVo-PRL-3细胞中敲除miR-17、miR-19a抑制了细胞的增殖侵袭(P＜0.05).在结肠癌组织中PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达呈正相关.结论 PRL-3通过上调miR-17、miR-19a的表达在结肠癌细胞增殖侵袭中起到促进作用.
作者：张建龙；孙健；何传超；张贺云；张育超；褚忠华 刊期： 2012年第11期
目前,关于钙离子对成骨细胞增殖分化的影响已有少量研究,研究结果表明钙离子与成骨细胞活性及成骨分化基因的表达都有密切关联[1],但对骨髓基质于细胞(BMSCs)成骨分化过程的影响报道尚少.我们采用柠檬酸钙作为钙源,添加到无钙培养基中配制不同浓度的含钙培养基,检测钙离子对BMSCs增殖及成骨分化的作用.
作者：程少文；聂鹏飞；张伟；寇冬权；王伟；陈庆玉；林忠勤；彭磊 刊期： 2012年第11期
近年来研究表明组蛋白甲基转移酶SET-和MYND-结构域含有蛋白(SMYD3)在多种肿瘤中均呈高表达,可能与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路及其下游原癌基因c-myc有关.我们通过microRNA沉默SMYD3基因,探讨其分子机制.
作者：张怡；王娟娟；郭宇；戴永平；柯孔亮 刊期： 2012年第11期
目的 探讨乳腺癌复发/转移部位及生存与血清癌抗原15-3(CA153)、碱性磷酸酶水平(ALP)的关系.方法 分析192例晚期乳腺癌患者的血清CA153、ALP水平.结果 血清CA153、ALP水平的均值及联合检测阳性率与转移部位无明显相关；单纯骨骼/软组织/肝脏/肺脏转 移组,CA153阳性率均高于ALP(52.2％比14.3％、64.4％比7.0％、83.3％比0.0％、69.2％比0.0％),差异有统计学意义(P＜0.05)；不同病理分子分型的CA153、ALP单独及联合检测阳性率差异无统计学意义(P ＞0.05)；CA153阈值为17 U/ml时,阴性组中位无疾病进展时间(PFS)为12.0个月,阳性组为10.0个月,差异有统计学意义(P ＜0.05)；ALP水平对PFS无明显影响.结论 血清CA153、ALP水平对乳腺癌复发/转移部位可能有一定的提示意义,与病理分子分型无明显相关,CA153水平影响晚期乳腺癌患者的生存.
作者：盛雅娟；刘卫国；曹文明；王晓稼 刊期： 2012年第11期
表观遗传对小分子核糖核酸(microRNA)的表达方式以及肿瘤的诱发起着重要的调控作用.microRNA受甲基化和组蛋白修饰等经典表观遗传机制调控[1],另一方面microRNA对DNA(脱氧核糖核酸)甲基化也能够产生一定的调节作用[2].鉴于microRNA与DNA甲基化在肿瘤发生发展过程中的共同作用,现阐述microRNA与DNA甲基化的相互关系在基因表达调控、肿瘤形成以及在抗肿瘤领域内应用研究的新进展.
作者：洪涛；何小东；万鑫 刊期： 2012年第11期
目的 探讨异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用和意义.方法 选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,实验组在异基因移植前7d取供体BMC行受体胸腺内注入,对照单纯同基因及异基因大鼠移植模型了解异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能否减少移植后急性排斥反应的发生,观察其生存时间、病理结果及CD4、CD8、CD25的变化.结果 (1)A组移植大鼠平均存活时间为(7.33±1.03) d;B组为(43.76 ±4.57) d;C组为(55.28±7.48)d.(2)异基因大鼠异位全小肠移植术后3、7、15 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和实验组中未出现排斥反应.(3)异基因移植组术后CD4、CD25+,高于其他组(P＜0.05).而CD8的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 移植术前7d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能显著减少小肠移植后急性排斥反应的发生,并可以抑制移植肠CD4、CD25细胞的表达.
作者：罗长江；焦作义；李继鹏；王为忠 刊期： 2012年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
