胡静；徐永健；张珍祥；田锋
目的 探讨蛋白激酶Cα相互作用蛋白(PICK1)基因敲除小鼠的优化繁育方法及 PICK1 基因敲除小鼠子代鼠的鉴定方法,为进一步研究 PICK1蛋白的功能奠定基础.方法 用 6 种不同的交配方式观察子代鼠的各表型比率及雌、雄性PICK1 基因突变纯合子小鼠的繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组 DNA,用 PCR 方法扩增 PICK1 基因片段,电泳后观察结果.结果 PICK1 + / +、PICK1 + /-、PICK1-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性PICK1 基因突变纯合子小鼠有繁殖能力,雄性PICK1 基因突变纯合子小鼠无繁殖能力.琼脂糖凝胶电泳显示PCR 产物分子量大小为 400 bp 和 200 bp,与目的 基因片段相对分子质量大小一致.结论 雌、雄性PICK1 基因突变杂合子小鼠交配是繁育PICK1 基因突变纯合子子鼠的较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定PICK1 基因突变纯合子子鼠,为PICK1 蛋白功能的实验研究提供了较理想的动物模型.
作者：金悠；吴鹏飞；王芳；陈建国 刊期： 2008年第03期
目的 建立检测肝脏中氟康唑的高效液相色谱快速分析方法.方法 以正常人肝脏添加标准氟康唑及内标物,对肝脏样品的前处理方法、仪器测试条件、定性定量分析方法进行考察和优化,并对法医学案例中的肝脏样本进行鉴定.结果 正常人肝脏中氟康唑在0.25～10.0 μg/g范围内线性关系良好,相关系数r=0.999 8;定量检测的浓度下限是0.25 μg/g;检出限为0.1 μg/g;分析方法的精密度日内相对标准差(relative standard deviation,RSD)≤3.0%、日间RSD≤8.1% (n=5);氟康唑在肝脏中的相对回收率在(96.4±2.4)% 和 (101.6±3.0)% 之间.结论 所建高效液相色谱分析方法准确、便捷,适用于法医学鉴定.
作者：金鸣；黄河；梁曼；刘咏；李炼；高娃；杨德隆 刊期： 2008年第03期
目的 通过探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用淋巴瘤细胞系Raji细胞后Notch1蛋白表达的变化,进一步明确TNF-α对淋巴瘤细胞Notch信号途径的影响.方法 采用半定量RT-PCR方法检测Raji细胞Notch1 mRNA的含量;用流式细胞术分析Raji细胞Notch1蛋白的表达及TNF-α作用后Notch1蛋白的变化.结果 ①半定量RT-PCR检测结果表明Raji细胞经TNF-α作用后Notch1 mRNA的含量明显增高,且随TNF-α浓度的增加而增高,与对照组比较,差异有极显著性意义(P<0.01);②流式细胞术分析表明,Notch1蛋白在Raji细胞呈阳性表达,TNF-α作用组Notch1蛋白的平均荧光强度明显高于对照组,差异亦有极显著性意义 (P<0.01).结论 TNF-α可上调Raji细胞内Notch1蛋白的表达;TNF-α可通过影响Notch信号途径在淋巴瘤细胞内发挥作用.
作者：崔国惠；陈卫华；陈燕 刊期： 2008年第03期
目的 探讨23例大田原综合征的临床与脑电图特点.方法 回顾性分析23例大田原综合征临床与脑电图资料.结果 23例患儿主要临床表现为强直痉挛性发作,脑电图均为暴发抑制型脑电图, 21例患儿精神运动发育迟滞,15例患儿4～6月龄时转变为婴儿痉挛症,脑电图表现为高度失律, 2例患儿在1.5～3岁时转变为Lennox-Gastaut综合征, 脑电图发作间歇期可见2 Hz慢棘慢波综合.结论 大田原综合征大部分病因明确,除依据典型发作形式和精神运动发育障碍诊断外,其特异性脑电图改变也是确诊该病的主要依据.
作者：高晶；王丽丽；吴革菲 刊期： 2008年第03期
目的 探讨以骨骼肌脓肿为突出表现的间变性大细胞淋巴瘤的组织学特点和免疫表型特征.方法 运用组织形态学和免疫组织化学方法研究1例以骨骼肌脓肿为突出表现的间变性大细胞淋巴瘤.结果 坏死肿瘤组织中存在大量中性粒细胞,行苏木精-伊红染色后见变异淋巴细胞和组织细胞弥漫性浸润,免疫组织化学研究显示肿瘤组织中CD30散在大细胞阳性、上皮膜抗原(EMA)散在大细胞阳性,CD3、CD45Ro、CD68阳性,CD20、CD79a、肌红蛋白阴性.结论 伴骨骼肌脓肿形成的间变性大细胞淋巴瘤罕见报道,该患者为T细胞性淋巴组织细胞型间变性大细胞淋巴瘤,应与炎性疾病、恶性组织细胞增生症等鉴别,组织形态学结合免疫组织化学法是较好的鉴别诊断方法.
作者：付圣灵；吴亮；周晟；齐俊英；廖永德 刊期： 2008年第03期
目的 探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用.方法 构建针对TKTL1 mRNA 的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL1、转酮醇酶2(TKTL2) mRNA表达水平的变化,通过流式细胞术和MTT法检测转染前后LoVo细胞周期和细胞增殖的改变.结果 转染组(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)、质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和未转染组(未转染细胞)中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无显著性意义(P>0.05).转染组细胞中TKTL1的表达水平与质粒对照组和未转染组相比,明显下调,且转染组LoVo细胞总转酮醇酶活性明显下降,细胞增殖明显被抑制,LoVo细胞被阻滞在G0/G1期.结论 TKTL1在人类结肠癌细胞(LoVo细胞系)的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗的新靶点.
作者：杨菊红；胡丽华；张德太；蔡鹏程 刊期： 2008年第03期
目的 探讨可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化.方法 原核高效表达的HLA-G重链及轻链(β2m)在抗原肽(人工合成九肽NH2-KGPPAALTL-COOH)的存在下,通过稀释复性折叠成HLA-G-肽复合物,采用凝胶过滤层析对折叠复合物进行纯化.利用特异性抗体(mAb W6/32和兔抗人β2m抗体)进行ELISA和Western blot对纯化产物进行鉴定.结果 折叠复合物中,主要含有HLA-G重链聚合体、HLA-G-肽复合物及β2m 3种成分,纯化后主要为HLA-G-肽复合物.结论 成功地获得纯度较高的可溶性HLA-G-肽复合物单体,为进一步研究HLA-G的生物学功能奠定了基础.
作者：钟茂华；翁秀芳；梁智辉；夏芳珍；李佳楠；陈雪玲；吴雄文 刊期： 2008年第03期
结膜吸吮线虫病是由结膜吸吮线虫寄生在人的眼部所致.该虫是一种人兽共患病的病原体,主要寄生在犬、猫和兔等的眼部,同时也可寄生于人眼.
作者：何花；张虹 刊期： 2008年第03期
目的 探讨EphB/Ephrin-B1信号对鸡胚睫状神经节(ciliary ganglion,CG)神经元上α3-尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors, α3-nAChRs)电流的影响.方法 用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α3-nAChRs电流,细胞被随机分为:对照组;Ephrin-B1Fc治疗组--用Ephrin-B1与IgG重组后形成的Ephrin-B1Fc刺激细胞;IgG治疗组--用重组Ephrin-B1Fc所需相同浓度的IgG刺激细胞;Ephrin-B1治疗组--用重组Ephrin-B1Fc所需相同浓度的Ephrin-B1刺激细胞,观察电流的变化.结果 对照组、IgG治疗组和Ephrin-B1治疗组之间α3-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而此3组与Ephrin-B1Fc治疗组之间有显著差异(均P<0.05),Ephrin-B1Fc可浓度依赖性抑制α3-nAChRs电流,该过程可快速发生并呈现可逆性.培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为4.9 μg/ml和8.4 μg/ml.结论 本研究表明Eph/Ephrin-B1信号可影响CG神经元α3-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控.
作者：胡波；童萼塘；梅元武 刊期： 2008年第03期
目的 研究大鼠体神经-内脏神经及体神经-体神经吻合术后神经再生过程中,脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脊髓前角运动神经元中的表达,比较两者有无差异,探讨相关因子在异类神经元再生过程中所起的作用.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型对照组.建立大鼠体神经-内脏神经吻合(模型组)及体神经-体神经吻合(模型对照组)模型,运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常对照组、模型组和模型对照组术后7、14、30、60 d脊髓腰4(L4)运动神经元中BDNF及TrkB mRNA的表达.结果 在正常大鼠L4前角运动神经元中,BDNF及其受体TrkB均存在一定水平的表达.大鼠体神经-内脏神经吻合术后7、14、30、60 d BDNF和TrkB mRNA表达均升高,于术后7 d达峰值,14 d开始下降.大鼠体神经-体神经吻合术后BDNF和TrkB mRNA的表达水平逐渐增高,于术后14 d达峰值.结论 大鼠体神经-内脏神经反射弧建立后脊髓L4前角运动神经元BDNF及TrkB的表达增高,BDNF及TrkB作为内源性保护性因子,其增高可能有利于受损神经元的存活和再生.大鼠体神经-内脏神经及体神经-体神经吻合术后BDNF及TrkB上调趋势存在一定的差异.
作者：程时刚；陈朝晖；李兵；肖传国 刊期： 2008年第03期
目的 构建具有免疫学活性的抗小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)单链抗体ScFv (single chain fragment of variety region),为进一步将其应用到动物体内奠定基础.方法 采用RT-PCR技术,从分泌抗小鼠CTLA-4 单克隆抗体(mAb) 的杂交瘤细胞中扩增mAb 的VH、VL 基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL 型的ScFv 片段.将ScFv 片段亚克隆至pGMET 载体,测序正确后将其克隆至真核分泌型表达载体pSect2-GFP,将pSect2-GFP-ScFv 纯化质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)并进行表达,同时经Zeocin筛选稳定表达株.用Western blot方法检测ScFv 融合蛋白的表达,采用ELISA检测 ScFv 的亲和活性.结果 经Zeocin 筛选2周后,CHO细胞株可稳定表达GFP-ScFv 蛋白.Western blot法证实GFP-ScFv 蛋白在细胞上清和细胞裂解液中均有表达,大小约55 kD.ELISA检测表明,CHO 培养上清中的GFP-ScFv 蛋白经浓缩初纯后能与重组小鼠CTLA-4 纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力.结论 成功构建了抗小鼠CTLA-4 的ScFv 真核表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv 融合蛋白.
作者：彭国平；周承；吴炜；孙雯；田锋；贺纪凯；陈智 刊期： 2008年第03期
目的 通过研究潜在抑癌基因KLF6在肝细胞癌的表达,探讨KLF6基因作为肝癌抑制基因的可能性.方法 分别用荧光定量PCR、半定量RT-PCR和Western blot方法检测肝细胞癌及癌旁组织中KLF6基因在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 实时荧光定量PCR显示经过看家基因GAPDH标化的KLF6 cDNA 起始浓度,在配对癌旁组织约为肝癌组织的3倍.26例肝癌组织的KLF6 mRNA表达水平与配对癌旁组织相比,差异具有显著性意义(P<0.01).在肝癌细胞株HepG2及Hep3B,KLF6 mRNA的表达亦显著低于正常对照细胞L02(P<0.01).实验还发现,在肝细胞癌中KLF6蛋白表达变化与mRNA表达变化一致,即KLF6蛋白在癌组织及肝癌细胞的表达明显低于癌旁组织及L02(P<0.01).结论 KLF6表达下调可能是肝细胞癌的遗传学改变之一, KLF6基因可能为新的肝癌相关抑癌基因.
作者：王少平；亢黎莉；陈孝平；周鹤俊；周卫江；徐江 刊期： 2008年第03期
目的 观察UUO大鼠模型(单侧输尿管结扎)中血小板反应蛋白1(TSP-1)的表达,以及阿托伐他汀对TSP-1的干预作用.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和阿托伐他汀干预组1[0.5 mg/(kg·d)×14 d]、阿托伐他汀干预组2[2.5 mg/(kg·d)×14 d].UUO模型组分别于术后第0、1、2、4周处死;假手术组和两个干预组于术后2周处死.分别取结扎侧肾脏行Masson染色,免疫组化检测肾脏中CD31标记的血管内皮细胞和TSP-1的表达,用RT-PCR检测TSP-1 mRNA的表达.结果 ①免疫组化检测显示CD31在假手术组只有较弱的表达;模型组术后1周CD31染色增强,术后2周表达明显减弱,术后4周肾小球内及肾小管周毛细血管几乎无表达;干预组1 CD31的表达较模型组2周增强(P<0.01),干预组2 CD31表达较模型组2周减弱(P<0.01).TSP-1在假手术组仅有较弱的表达;模型组中随术后时间延长TSP-1表达持续升高;干预组1 TSP-1表达较模型组2周减弱(P<0.01);干预组2 TSP-1表达则较模型组2周增强(P<0.01).②RT-PCR结果显示TSP-1 mRNA在假手术组表达较低;模型组表达持续升高(P<0.01);干预组1表达比模型组2周减弱(P<0.05);干预组2则比模型组2周表达增强(P<0.05).结论 在UUO模型中TSP-1表达随时间持续升高,与肾脏微血管密度成反比.小剂量的阿托伐他汀可能通过下调TSP-1的表达来保护肾脏的微血管,从而改善肾脏的缺血、缺氧状态,减轻肾脏纤维化;而较大剂量的阿托伐他汀可能上调TSP-1的表达致肾脏微血管密度降低,从而加重肾脏纤维化.
作者：杨晓；夏青 刊期： 2008年第03期
目的 探讨骶部硬脊膜动静脉瘘的诊断与治疗方法.方法 回顾性分析近17年来收治的21例骶部硬脊膜动静脉瘘患者的临床资料、治疗方式及术后转归.结果 男性17例,女性4例.年龄25～64岁,平均48.2岁.病程10～36个月,平均16.3个月.所有患者均在脊髓血管造影后得到确诊.其中单纯手术治疗15例,单纯栓塞治疗4例,两种方法合用治疗2例;所有患者术后症状得到改善.21例随访2～120个月,未见复发.结论 选择性血管造影是确诊骶部硬脊膜动静脉瘘的方法.早期诊断和早期治疗是取得良好疗效的关键.治疗方法有手术治疗和栓塞治疗.术后抗凝非常重要.
作者：于加省；陈劲草；雷霆；陈坚；李龄 刊期： 2008年第03期
目的 研究抑肽酶对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)IL-8表达和核因子κB(NF-κB)活性的影响.方法 将培养的HUVECs分为空白对照组、凝血酶组以及半量和全量抑肽酶组,抑肽酶组细胞采用800 KIU/ml(半量)和1 600 KIU/ml(全量)抑肽酶预处理1 h,后续处理与凝血酶组相同,均以凝血酶(4 U/ml)诱导刺激作用. ELISA法测定细胞培养上清液中IL-8的含量;荧光实时定量PCR检测IL-8 mRNA的表达,扩增产物进行熔解曲线图和琼脂糖电泳分析;采用激光共聚焦显微镜观察NF-κB p65在细胞胞质和胞核的分布情况.结果 凝血酶明显刺激HUVECs IL-8的分泌和IL-8 mRNA的表达,细胞中游离的NF-κB增加并发生核转位.半量和全量抑肽酶均能减少凝血酶诱导的HUVECs IL-8的分泌和IL-8 mRNA的表达,且对细胞内游离NF-κB的产生和核转位具有明显抑制作用,半量和全量抑肽酶组对NF-κB表达的抑制作用差异无显著性意义(P>0.05).结论 抑肽酶均能够减少凝血酶诱导的HUVECs IL-8的表达,该作用与其抑制细胞内活化的NF-κB核转位有关.
作者：闵心平；胡志伟；张凯伦；孙宗全 刊期： 2008年第03期
目的 探讨高晶体-高胶体渗透压混合液(HHS)对缺氧/氧再灌状态下人脐静脉内皮细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)、线粒体膜电位和细胞存活率的影响.方法 将人脐静脉内皮细胞分为A、B、C、D 4组,A组细胞于常氧状态下(37 ℃,95% 空气, 5%CO2)培养24 h;B组细胞经HHS作用15 min后,在常氧状态下培养24 h;D组细胞先经HHS处理15 min,C、D组细胞在缺氧环境(37 ℃, 95% N2, 5% CO2)中培养8 h,然后在常氧状态下培养16 h.[Ca2+]i采用Fluo-2荧光分光光度计测定,线粒体膜电位采用罗丹明123(rhodamine123)流式细胞仪测量,细胞存活率则采用锥虫蓝染色法检测.结果 常氧状态下培养的A、B组细胞[Ca2+]i、线粒体膜电位和细胞存活率间的差异无显著性意义(P>0.05).与A组相比,缺氧/氧再灌状态下,C、D组细胞[Ca2+]i明显增加(P<0.05), 线粒体膜电位和细胞存活率明显降低(均P<0.05). 而D组细胞[Ca2+]i 较C组降低,线粒体膜电位和细胞存活率较C组明显增高.结论 HHS可阻止缺氧/氧再灌引起的人脐静脉内皮细胞的钙超载,并减轻线粒体膜电位和细胞存活率的下降.
作者：袁世荧；张雪萍；姚尚龙；曾邦雄 刊期： 2008年第03期
槲皮素(quercetin，Que)是一种植物界分布广泛的黄酮类化合物,具有抗氧化、抗感染、抗肿瘤、降血压、抗心律失常及防止心肌缺血再灌注损伤等作用,其毒副作用小,极具临床价值[1].
作者：李继；刘如；黄浩；李咏生；张力；吴萍；周晓燕；熊维；张小玲；叶笃筠 刊期： 2008年第03期
目的 探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙 (intracellular free calcium, [Ca2+]i) 和兴奋性的调节作用.方法 体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态下和持续电流去极化条件下BK通道特异性阻断剂Iberiotoxin对神经元[Ca2+]i和动作电位频率的影响,并采用显微荧光测钙法观察Iberiotoxin对高钾条件下[Ca2+]i的影响.结果 生理状态下,Iberiotoxin灌流(100 nmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2+]i无显著影响.持续电刺激去极化后,Iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2+]i显著升高.高钾溶液(20 mmol/L KCl)引起神经元[Ca2+]i升高, 而Iberiotoxin灌流(100 nmol/L) 则使[Ca2+]i进一步显著升高.结论 生理条件下,BK通道不参与脊髓神经元[Ca2+]i和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或在高钾条件下,BK对神经元[Ca2+]i和兴奋性具有显著的调节作用.
作者：赵鸿；杨文华；白祥军 刊期： 2008年第03期
目的 探讨紫杉醇增加肺腺癌细胞系SPC-A1放射敏感性的作用机制.方法 用MTT法检测紫杉醇对SPC-A1的细胞毒性;分单纯放射组(单放组)和紫杉醇+放射组(药放组),克隆形成法检测紫杉醇对SPC-A1的辐射增敏作用,及其在分次照射中对亚致死损伤修复的影响;单细胞凝胶电泳法研究紫杉醇对辐射后DNA损伤修复的影响.结果 紫杉醇对SPC-A1的IC50为50 nmol/L;紫杉醇对SPC-A1的放射增敏比为1.42.分次照射(3Gy×2)试验中,单放组在照射间隔5 h的细胞存活率较无间隔时增加了1.96倍,而药放组在照射间隔5 h的细胞存活率较无间隔时仅增加了1.53倍.单细胞凝胶电泳试验中,0 min时两组间尾矩(tail moment,TM)值差异无显著性意义(P>0.05),15、30、60 min时两组间TM值差异均有显著性意义(均P<0.05),药放组的TM值显著大于单放组.结论 紫杉醇增敏肺腺癌细胞系SPC-A1可能与抑制其辐射后亚致死损伤修复有关.
作者：罗爱华；陈元；吴辉塔；梅齐；熊华 刊期： 2008年第03期
目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响及蛋白激酶C(PKC)信号转导途径在其中所起的作用.方法 ①不同浓度的CSE作用于人PASMC 24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测PASMC增殖,锥虫蓝排斥法检测活细胞率.②PASMC与PKC激活剂PMA预孵24 h或与PKC抑制剂Ro31-8220(简称Ro)预孵30 min,然后暴露于5%CSE 24 h,采用MTT法、流式细胞术、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色等方法观察细胞增殖的变化.③5%CSE作用于PASMC 24 h,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测PKC-α mRNA和蛋白的表达.结果 ①20%和30%的CSE对PASMC有细胞毒性作用;5%和10%CSE不影响PASMC的活细胞率;MTT检测结果示5%CSE组PASMC的吸光度(A)值较对照组明显增高.②5%CSE组PASMC 的MTT A值、增殖指数(PI)、S期细胞分数(SPF)、PCNA阳性表达率增高,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05).PMA+5%CSE组和Ro+5%CSE组以上指标均降低,与5%CSE组比较,差异有显著性意义(P<0.05),与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05).③5%CSE组PKC-α mRNA和蛋白表达量增加,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05).结论 高浓度的CSE对PASMC有细胞毒性作用,低浓度(5%)的CSE则能促进PASMC的增殖.PKC特别是PKC-α可能在CSE促人PASMC增殖的信号转导机制中起重要作用.
作者：胡静；徐永健；张珍祥；田锋 刊期： 2008年第03期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
