IN-1重组单链抗体表达载体的构建与融合表达

郑伟；王勇；吴安华；王运杰

关键词：IN-1重组单链抗体, 原核表达, 融合蛋白

摘要：目的: 设计并人工合成IN-1重组单链抗体(recombinant IN-1 single-chain antibody)的cDNA克隆,构建其表达载体,在原核系统中实现初步表达.方法:根据gene bank中发表的IN-1抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段,该基因双链分35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到克隆载体pUC-18中,经全自动序列分析仪测序证实后,再亚克隆至表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,诱导表达.结果:测序结果合成的基因序列与设计的仅差一个碱基;SDS-PAGE检测显示,表达出相对分子量31 kd的融合蛋白.结论:IN-1重组单链抗体基因表达载体的构建和表达,为深入研究其生物活性奠定了基础.

中国医科大学学报杂志相关文献

沈阳市居室γ射线放射性水平监测

通过在几种居室直接采样并加以比较,观察结果得到γ射线放射性水平由高到低的顺序为:水磨石地面居室、地板地面计算机房、瓷砖地面及墙壁居室、水泥地面居室.由此可见,减少居室中水磨石、瓷砖等材料的应用及计算机的陈列可能会降低居室γ射线放射性水平,从而提高居室放射卫生质量.

作者：陆娜；王磊；陈艳；代九龙；俞航刊期： 2002年第05期
牛磺酸对哮喘豚鼠气道炎症疗效的初步观察

目的: 探讨哮喘豚鼠气道内嗜酸粒细胞浸润和牛磺酸的治疗效果.方法:采用卵蛋白腹腔注射法复制哮喘豚鼠模型,分3组分别给予生理盐水、牛磺酸和地塞米松治疗,比较治疗后支气管肺组织嗜酸粒细胞浸润.结果:3组豚鼠肺实质内嗜酸粒细胞数(个/HP)差异无显著性(P>0.05),与地塞米松组差异非常显著(P＜0.01);支气管粘膜下嗜酸粒细胞数(个/mm2 )哮喘组与牛磺酸组差异显著(P<0.05);支气管肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞数哮喘组与牛磺酸组差异显著(P<0.05).结论:牛磺酸能有效抑制哮喘豚鼠的气道炎症,可能对气道重塑起防治作用.

作者：刘玉琪；孔灵菲；王鲁宁刊期： 2002年第05期
长效钙离子拮抗剂Pranidipine对大鼠离体心脏的保护作用

目的:探讨Pranidipine对离体大鼠心脏心功能的影响及对缺血再灌注后心脏的保护作用.方法:用Langendorff装置观察Pranidipine对冠脉灌流量及左心室压力的影响及对缺血25 min,再灌注30 min后心脏功能的影响.结果:Pranidipine在1 nmol/L时明显增加冠脉灌流量,达100 nmol/L时左室收缩压明显降低.与对照组比较,在缺血前应用1 nmol/L及10 nmol/L 的Pranidipine可以改善缺血再灌注后的心功能.结论:Pranidipine具有明显的扩冠作用,大剂量可降低心脏收缩功能,应用不影响心功能的剂量,对缺血再灌注心脏具有保护作用.

作者：郑丽霞；贾大林；刘闺男；齐国先；胡健；曾定尹刊期： 2002年第05期
多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达和预后

目的: 研究非小细胞肺癌中多药耐药相关蛋白(MRP)的表达同临床病理特征和病人预后生存期的关系.方法:采用免疫组织化学S-P法检测62例非小细胞肺癌中MRP的表达.结果:62例非小细胞肺癌中MRP总阳性率为83.88%(52/62),强阳性率为46.77%(29/62),其中鳞癌的阳性率为87.50%(35/40),腺癌为77.27%(17/22).MRP表达与患者性别、组织分化程度、淋巴结转移均无关.MRP表达阴性者术后平均生存期为(69.81±17.41)月,表达阳性者为(25.38±4.46)月,二者差异具有显著性(P=0.0156).鳞癌中MRP阴性和阳性者术后生存期存在显著差异(P=0.0153).结论:非小细胞肺癌中,尤其是鳞状细胞癌MRP的表达与术后生存期呈负相关,是影响病人预后的因素.MRP阴性表达者术后生存期相对较长.

作者：郝军；王妍；王恩华刊期： 2002年第05期
共聚焦显微镜观测鼠脑损伤后早期的微循环变化

目的: 对鼠脑皮质微循环损伤前、后的变化进行活体的、动态的观测.方法 :将戊巴比妥麻醉下的10只大鼠制成开放性骨窗模型,保持硬脑膜完整.荧光素标记血浆后,应用共聚焦激光扫描显微镜观测血管口径、形状及血流速率在脑损伤前后的变化.结果:伤后10 s即出现血管痉挛,随后管径逐渐增粗,30 min后基本恢复伤前水平.伤后10 s血流量降至低(下降33.6%),以后有所回升,但始终低于伤前水平,处于缺血状态.结论:损伤后早期降颅压对改善微循环具有重要的临床意义.

作者：欧绍武；王义宝；刘薇；王运杰；吴安华；杨国瑞刊期： 2002年第05期
幽门螺杆菌感染与冠心病关系的探讨

目的:探讨幽门螺杆菌(HP)感染与冠心病的关系.方法:通过检测血清中抗-HP IgG抗体、C反应蛋白(CRP)和高密度脂蛋白(HDL),研究HP感染对血清中CRP和HDL调节在冠心病发生中的作用.结果:冠心病病人的HP感染率明显高于对照组(P＜0.05).在抗-HP IgG阳性的冠心病病人中CRP明显高于抗-HP IgG阴性组(P＜0.01),而HDL则相反(P＜0.01).结论:幽门螺杆菌感染导致CRP升高和HDL降低与冠心病发生密切相关.

作者：曹乾；郝庆；郑华川；李晓东刊期： 2002年第05期
幽门螺杆菌相关性胃疾病端粒酶活性检测和分析

目的: 探讨幽门螺杆菌(HP)相关性胃疾病、端粒酶活性与胃癌三者之间的关系.方法:利用TRAP-ELISA方法,检测94例胃粘膜活检标本,其中正常胃粘膜10例,浅表性胃炎21例,萎缩性胃炎33例,不典型增生7例,胃癌23例.胃粘膜病变中HP阳性41例,HP阴性20例.结果:端粒酶活性表达在萎缩性胃炎、不典型增生及胃癌组织中与正常胃粘膜比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),在胃癌组织中表达强;HP阳性胃粘膜病变组与HP阴性胃粘膜病变组比较有十分显著性差异(P<0.01).结论:HP感染可使端粒酶活性表达增强,促进细胞增殖.HP相关性胃疾病增殖特性与胃癌的增殖特性相似.

作者：高华；戴文颖；王兰；董明；袁媛刊期： 2002年第05期
老年急性心肌梗死冠状动脉造影及急性期PTCA的临床评价

通过冠状动脉造影(CAG)及经皮冠状动脉成形术(PTCA),对比分析了老年及非老年急性心肌梗死(AMI)患者冠状动脉病变程度、范围及急性期实施PTCA后再狭窄发生率.结果表明,老年组AMI多支病变的发生率显著高于非老年组(P<0.01);老年组急性期与恢复期病变冠脉记分均显著高于非老年组(P<0.05,P<0.01);急性期获得成功的冠状动脉再灌注后,在恢复期又发生冠状动脉再狭窄的发生率老年组显著高于非老年组(P<0.01).

作者：林杰；吴岚；李廷富；竹越襄刊期： 2002年第05期
小鼠卵巢巨噬细胞的免疫组化研究

目的:探讨卵巢内巨噬细胞在卵巢微细结构中的分布特征.方法:用抗巨噬细胞表面的F4/80抗原的单克隆抗体对小鼠卵巢组织中巨噬细胞进行免疫组化染色后观察.结果:巨噬细胞主要分布在卵巢的卵泡膜层、卵巢皮质和髓质的间质、闭锁卵泡和黄体组织中.排卵前卵巢表面包膜层出现大量的巨噬细胞, 而妊娠期黄体中巨噬细胞骤减.结论:巨噬细胞可能在不同的卵巢结构中对卵巢的生殖内分泌起不同的调节作用.

作者：李秀琴；银铎；伊藤正裕刊期： 2002年第05期
血浆置换抢救重型肝炎2例报告

为提高重型肝炎病人的生存率,应用血浆置换方法成功救治了2例重型肝炎并发Ⅲ°肝性脑病的患者.因此,早期、必要时重复应用血浆置换可减少各种毒素对人体的危害,并应积极预防及处理并发症,以增加患者的生存机会.

作者：吕飒；王静艳；刘沛；李智伟；白菡；赵彬刊期： 2002年第05期
免疫细胞化学染色技术在浆膜腔积液涂片中的应用

对应用免疫细胞化学染色技术检测浆膜腔积液中癌细胞的方法进行了探讨.并谈了个人的体会.

作者：方长清；范滨；林国宏；吴广彦刊期： 2002年第05期
PKC在NGF促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用

目的: 研究蛋白激酶C(PKC)在神经生长因子(NGF)促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用.方法:体外培养胚胎大鼠颈段脊髓神经元,施加NGF,观测神经元生长发育情况并检测胞膜及胞浆PKC活性.结果:培养2,4 d时,实验组与对照组相比细胞膜PKC活性增强;膜质比增高,4,7 d时神经元存活数量增多,神经突起生长明显增强.结论:在NGF促进体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元生长发育过程中,PKC有可能发挥了正向调节作用.

作者：路磊；范广宇；王心刊期： 2002年第05期
颅内软骨瘤3例报告

报道3例颅内软骨瘤,均行手术切除,痊愈出院.并对其病原学、诊断及治疗进行讨论.

作者：赵红宇；王成林；刁宏宇刊期： 2002年第05期
铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响

目的: 观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响. 方法:出生4～8 d Wistar大鼠海马神经元原代细胞培养,显微照相,并不同时间不同浓度染铅,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化. 结果:0.1～1.0 μmol/L染铅,PKC活性依浓度依赖方式被激活,染铅浓度>1.0 μmol/L,PKC活性下降;染铅15 min后PKC活性升高并保持.低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长,呈浓度依赖方式.结论:低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC,抑制原代神经元细胞生长.

作者：孙黎光；朱延松；侯伟健；邢伟；刘素媛刊期： 2002年第05期
HSV-McAb对致死性感染小白鼠的被动保护实验研究

为探讨疱疹性疾病的特异性治疗,将25只小白鼠随机分为5组,单纯疱疹病毒1型(HSV-1)攻击感染和单克隆抗体(McAb)的应用均采用腹腔接种法.结果空白对照组小鼠100%健康存活;感染对照组小鼠100%发病死亡;HSV-1攻击前24 h注射HSV-McAb组和HSV-1攻击同时注射HSV-McAb组小白鼠全部存活;HSV-1攻击24 h后注射HSV-McAb组1只死亡其余全部存活.表明HSV-McAb对致死性感染小白鼠有保护治疗作用.

作者：樊晓红；赵谨；王双艳；王心；王静舒；赵玉坤刊期： 2002年第05期
烧伤病人医院感染临床分析

对1187例烧伤病人进行临床调查,分析我院烧伤病区医院感染发生原因,探讨防治措施.医院感染发生率为22.3%,与烧伤严重程度呈正相关.创面感染在医院感染的机率大,病原菌以革兰阴性杆菌占主导,阴沟肠杆菌、粪肠球菌、微球菌、嗜麦芽黄单胞菌、白色念珠菌占有一定比例.严重烧伤病人应做为医院感染监测重点,应做好病区细菌监测.

作者：刘晓虹；唐明睿；薛宝升刊期： 2002年第05期
测右下腹部皮温诊断急性阑尾炎

惠普监护仪皮温探头分别置放在急性阑尾炎患者右下腹部及左下腹部,安放次序是随机的.监护仪自动记录双下腹部皮温及温度差(精确到0.1℃),皮温测定结果与术中所见及术后病理检查进行对照.结果32例急性阑尾炎皮温测定敏感性为62.5%(20/32),化脓性阑尾炎敏感性为81.8%(18/22).表明皮温测定对急性化脓性阑尾炎可作为一个有用的辅助性诊断方法.

作者：王镇；马凯；王海全；朱策刊期： 2002年第05期
七氟醚和安氟醚对维库溴铵增效作用的时间依赖性

目的:观察低肺泡有效浓度(1MAC)七氟醚和安氟醚对维库溴铵增效作用的时间依赖性.方法:40例择期手术病人在异丙酚-芬太尼-N2O麻醉期间持续输注维库溴铵,维持90%的肌松,达到稳态后,病人随机吸入1MAC呼气末浓度的七氟醚或安氟醚,调整维库溴铵的注入速率,维持90%的肌松,观察吸入七氟醚或安氟醚后维库溴铵的注入速率随时间变化的趋势.结果:七氟醚、安氟醚都显著降低了维库溴铵的注入速率.并且这个效应随着吸入七氟醚或安氟醚时间的延长逐渐增加,吸入七氟醚或安氟醚90 min后达到大效应即维库溴铵的注入速率下降到大值.大下降率:七氟醚组为68%,安氟醚组为67%.结论:七氟醚、安氟醚都明显增强维库溴铵的肌松作用,但这种增效作用有显著的时间依赖性.两者之间无显著性差异(P＞0.05).

作者：丁学琴；聂广萍；刘贵明；王俊科；盛卓人刊期： 2002年第05期
DNA测序中的一些常见问题和对策

DNA测序在现代分子生物学实验技术中占有重要地位,是进行其他研究的基础和前提. DNA测序方法有酶促双脱氧法和化学法.在DNA测序中存在一些问题,可能降低测序的效能,影响结果的准确性及重复性.本文就测序中常见问题和解决方法作简要论述.

作者：贺光；邱广蓉；孙开来刊期： 2002年第05期
鼻腔止血气囊在鼻出血治疗中的应用

选择90例鼻出血患者应用鼻腔止血气囊治疗,气囊充气后即时止血率达100%, 8 h气囊放气后不再出血者91.1%(82/90),需反复充放气数次不再出血者4.4%(4/90),无效者4.4%(4/90). 应用鼻腔止血气囊治疗鼻出血疗效好、损伤小、患者痛苦少,操作简单,易于掌握.

作者：徐学庆；郑晏；杨怀安；王亚君；赵智；潘子民刊期： 2002年第05期