一种新的黄色荧光蛋白-人钠,钾三磷酸腺苷转移酶α亚单位重组载体的构建和表达

金润铭；Lagercrantz Henrick；Aperia Anita

关键词：钠, 钾三磷酸腺苷转移黄色荧光蛋白 Ankyrin G

摘要：钠,钾三磷酸腺苷转移酶(Na,K-ATP酶)是一种可见于所有真核细胞中的膜蛋白,其主要功能是维持钠钾离子的跨膜梯度并介导钠依赖的葡萄糖、氨基酸等营养物质的转运以及调节细胞容量、胞浆pH值和钙离子的水平,其多功能性质还反映在可能通过Ankyrin或其他物质传导细胞信号.Na,K-ATP酶由α与β二个亚单位组成,其中α亚单位在该酶的催化活性方面起主要作用.为了更直观地研究Na,K-ATP酶的功能特性,一个3.4kb的人钠,钾三磷酸腺苷转移酶α1亚单位基因被亚克隆到一个增强的黄色荧光蛋白载体(pEYFP-C1)上,新构建的重组表达载体(pEYFP-C1-hNKA α1)能在HEK293和LLC-PK细胞中良好的表达.免疫细胞化学及激光共焦显微镜检查显示该重组载体产生的融合蛋白能精确地定位在细胞膜上并可与AnkyrinG结合,免疫印迹检查证实这种新的融合蛋白的分子量为142kD,与预计结果一致,而且转染后造成的额外Na,K-ATP酶的表达会引起Ankyrin的表达增强.初步研究结果显示该重组表达载体可广泛应用子Na,K-ATP酶的功能研究,由于活体荧光蛋白的直观性,该载体更适合于Na,K-ATP酶的信号传导研究.

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