学术投稿

蛋白酶激活受体-2基因靶向shRNA表达质粒的构建及转染食管癌细胞致沉默效应的研究

陈金梅;邓全军;谢立群;赵建业;刘彩虹;郑艳敏

关键词:食管肿瘤, EC109, 小干扰RNA, 蛋白酶激活受体2, 基因沉默
摘要:目的:构建靶向蛋白酶激活受体-2(PAR-2)基因的shRNA表达质粒,建立PAR-2基因沉默的食管癌EC109稳定细胞株.方法:针对人PAR-2的mRNA序列,设计并体外合成编码shRNA的两条特异性寡核苷酸序列,分别插入pGFP-V-RS质粒中构建2个shRNA表达质粒(PAR-2 shRNA-1、PAR-2 shRNA-2),经过鉴定,然后将表达质粒转染至食管癌细胞EC109中,经嘌呤霉素筛选,获得稳定干扰的细胞株,运用RT-PCR和Western Blot检测PAR-2的表达.结果:PAR-2 shRNA-1转染人食管癌细胞EC109后,PAR-2基因表达在mRNA和蛋白质水平都受到显著抑制,差异有统计学意义(P<0.05).结论:成功构建针对PAR-2基因的shRNA表达质粒,转染食管癌细胞EC109,能有效抑制该细胞株PAR-2基因的表达.
实用医学杂志相关文献
  • 左腋下冬眠瘤1例

    患者女,44岁,发现左腋下肿块1个月余,无明显不适,以左腋下肿块收入院.入院查体:一般情况良好,左腋下可触及6 cm×5 cm肿块,边界清,无压痛,质地软,活动度尚可.行B超提示:左腋下肌层下等回声团(脂肪瘤?).在全麻下行左腋下肿块切除术.切除肿瘤肉眼可见:包膜完整,分叶状,切面实性,灰黄色.病理镜下可见:肿瘤为纤维间质分割,肿瘤细胞为圆形、多边形,胞界清楚,胞质丰富,部分胞质内见嗜酸性颗粒及小脂滴,细胞核小(图1).病理诊断为:(左腋下)冬眠瘤.

    作者:李宇杰;黄小娥;周小栋;朱健勇 刊期: 2013年第03期

  • 中性粒细胞趋化三肽在慢性阻塞性肺疾病中的作用机制

    慢性阻塞性肺疾病(COPD)在研究和治疗上主要的障碍是缺乏一种与疾病的严重程度和评价预后相关的标志物[1].近年发现,胶原蛋白衍生肽N-乙酰-脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸(N-acetylated proline-glycine-proline,NAcPGP)和脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸(proline-glycine-proline,PGP)是中性粒细胞的趋化剂,诱导中性粒细胞在肺部病灶长期浸润,形成慢性炎症,加快COPD的病程进展.本文将目前该领域的研究归纳如下.

    作者:贾晔然 刊期: 2013年第03期

  • 小剂量氯胺酮复合丙泊酚麻醉对电休克抽搐发作的影响

    目的:研究小剂量氯胺酮复合丙泊酚麻醉对电休克(ECT)抽搐发作的影响.方法:60例拟行ECT的抑郁症患者,随机均分为3组:丙泊酚组(P组)、氯胺酮组(K组)和氯胺酮复合丙泊酚组(KP组),分别用丙泊酚1.5 mg/kg、氯胺酮0.8 mg/kg、丙泊酚1.5 mg/kg+ 0.8 mg/kg氯胺酮为ECT的麻醉药物.记录观察ECT期间的抽搐能量指数(seizure energy index,SEI)、抽搐持续时间(seizure duration,SD)及相关不良反应.结果:与P组比较,K和KP组ECT期间SEI和SD明显增大和延长(P<0.05);与K组比较,KP组不良反应的发生率明显降低(P< 0.05).结论:小剂量氯胺酮复合丙泊酚用于ECT麻醉可获得较好的抽搐发作效果,不良反应少,是一种安全有效的麻醉方法.

    作者:陈运良;熊朝晖;王晓斌;秦素兰 刊期: 2013年第03期

  • 尿毒症患者疾病不确定感与自我护理能力的相关性

    目的:调查尿毒症患者的疾病不确定感和自我护理能力,并探讨两者间的关系.方法:采用Mishel疾病不确定感量表(MUIS-A)和自我护理能力测定量表(ESCA),对80例尿毒症患者进行调查.结果:尿毒症患者的疾病不确定感为中等水平,得分为(102.16±5.97)分;自我护理能力处于中等水平,得分为(108.44±18.86)分.疾病不确定感与自我护理能力存在负相关.结论:临床护理工作者应正确评估尿毒症患者的疾病不确定感,给予相应的护理干预,降低疾病不确定感,提高自我护理能力.

    作者:樊少磊;单岩;苗金红;田瑞杰 刊期: 2013年第03期

  • OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪携带污染检出及解决措施

    目的:探讨OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪标本检测时可能存在的携带污染及其处理措施.方法:收集健康正常人混合血清,对31项常用分析项目各测试10次,取其平均值作为对照值.其后对各项目按比色杯内外圈分成两组逐一配对检测,以超过对照值5%或3个标准差为标准筛选出疑似污染项目.后对疑似污染项目进行确认,并制订相应措施避免携带污染.结果:除Ca外的所有项目重复性均较好,Ca的10次检测结果以高低值相间规律出现,经分析后发现低值组检测所使用的比色杯前一次均是检测TP所用,初步认定TP测定对Ca测定有比色杯携带污染,后选用高值组的均值作为Ca的对照值.外圈组14项及内圈组17项测试项目逐一配对进行425项测试,其中有37项次结果超过对照值5%或3个标准差,判定为疑似污染.经过确认实验,认定7项次(1.89%)结果存在试剂针或搅拌棒携带污染.但TP测定并未对Ca测定有试剂针或搅拌棒携带污染,故再次确认存在比色杯携带污染.将TP和Ca分别设在内圈和外圈,并增设纯水清洗程序,有效消除了上述携带污染.结论:OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪携带污染率较低,合理设置项目的比色杯内外国及增设纯水清洗程序可以消除携带污染.

    作者:毛盛尧;高国生;周尧东 刊期: 2013年第03期

  • 加巴喷丁联合He-Ne激光治疗老年带状疱疹疗效观察

    目的:观察加巴喷丁联合He-Ne激光治疗老年带状疱疹的疗效.方法:60例患者随机分为A、B、C3组,A组:口服加巴喷丁胶囊;B组:He-Ne激光仪光束照射皮疹区;C组:除口服加巴喷丁外,联合He-Ne激光照射治疗.3组均口服泛昔洛韦1周抗病毒治疗.观察3组疗效及后遗神经痛的发生.结果:C组总有效率显著优于A、B组(P<0.05);C组结痂和脱痂时间短于A组(P<0.05),脱痂时间短于B组(P<0.05);C组疼痛缓解和消失时间短于B组(P<0.05),疼痛消失时间短于A组(P<0.05);C组后遗神经痛发生率显著低于A、B组(P<0.05).结论:加巴喷丁联合He-Ne激光治疗老年带状疱疹的疗效优于单用加巴喷丁或He-Ne激光治疗,不良反应少,后遗神经痛发生率低;是一种治疗老年带状疱疹安全、有效的方法.

    作者:钟文英;王小波;李炜;李琦;王进 刊期: 2013年第03期

  • Pim-1、RON在贲门癌中的表达及临床意义

    目的:探讨Pim-1、RON在贲门癌组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化方法分别检测18例贲门正常组织、21例贲门肠上皮化生组织、56例贲门癌组织中Pim-1及RON两种蛋白的表达情况,并分析二者与贲门癌临床病理学特征的关系.结果:Pim-1、RON在贲门正常组织、贲门肠上皮化生组织及贲门癌组织中的阳性表达率分别为5.6%、38.1%、78.6%和11.1%、33.3%、66.1%,各组间差异有统计学意义(P<0.05).Pim-1的表达与浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤分化程度、TNM分期无关(P>0.05),RON的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤分化程度无关(P>0.05).二者在贲门癌中的表达无相关性(r=0.085,P>0.05).结论:Pim-1及RON可能参与贲门癌的发生发展,对贲门癌的诊疗及预后判断具有一定的临床价值.

    作者:尚丽丽;张国梁 刊期: 2013年第03期

  • HCV感染的维持性血液透析患者铁负荷与营养不良-炎症反应综合征的关系

    目的:比较抗HCV抗体阳性的维持性血液透析(MHD)患者与非传染病的MHD患者铁负荷的差异,并研究铁负荷对营养不良-炎症反应综合征(MICS)的影响.方法:将53例规律血液净化治疗的MHD患者中抗HCV抗体阳性的24例设为阳性组,传染病检查均为阴性的29例设为阴性组.分别检测患者血清铁蛋白(SF)、血清白蛋白(Alb)、血清前白蛋白(PA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清超敏C反应蛋白(hsCRP)、血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等指标.比较两组患者各指标的差异并分析铁负荷与营养状况、炎症因子、肝功能的相关性.结果:阳性组SF、ALT、AST、hsCRP、IL-6、TNF-α均明显高于阴性组,差异均有统计学意义(P< 0.05);Alb、PA均明显低于阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05).SF与BMI、Alb、PA在0.05水平上显著相关,均呈负相关;SF与ALT、AST、hsCRP、IL-6、TNF-α在0.01水平上显著相关,并均呈正相关.结论:HCV感染的MHD患者存在明显的铁超负荷,铁超负荷与MICS有着密切的联系,铁超负荷可能是MICS一个重要的独立危险因素.

    作者:单保华;赵显国 刊期: 2013年第03期

  • 他克莫司完全抗原的制备与鉴定

    目的:制备他克莫司完全抗原并鉴定.方法:采用碳二亚胺两步法将半抗原他克莫司分别与牛血清白蛋白和血蓝蛋白偶联,制备免疫原FK506-BSA和ELISA包被抗原FK506-KLH,并计算偶联率.采用紫外光谱分析法和动物免疫试验鉴定偶联产物.结果:FK506-BSA的偶联率为10.16∶1;FK506-KLH的偶联率为16.32∶1,成功制备具有免疫原性的他克莫司完全抗原.结论:紫外光谱分析和动物免疫试验证实他克莫司完全抗原合成成功,该抗原可用于他克莫司单克隆抗体的制备和免疫检测试剂盒的开发.

    作者:陈中华;黄彬;李有强;刘健平;曾建明;陈茶 刊期: 2013年第03期

  • Caspase-7在结直肠正常黏膜、腺瘤和癌中的表达变化

    目的:通过检测caspase-7基因在结直肠正常黏膜、腺瘤、癌中的表达变化并分析其与临床病理特征间的关系.方法:采用实时荧光定量PCR技术对52例结直肠腺瘤以及118例配对的结直肠癌和癌旁正常组织中的caspase-7表达进行测定.结果:Caspase-7在结直肠正常黏膜(P=0.001)和癌(P=0.001)中相对于腺瘤低表达.而在结直肠癌中的caspase-7表达明显低于癌旁正常黏膜(P=0.001).临床病理学特征的分析表明低分化(P=0.021)以及有淋巴结转移(P=0.011)的结直肠癌caspase-7的表达水平更低.结论:Caspase-7在腺瘤中高表达,而在癌中低表达,且表达变化与肿瘤分化及有无淋巴结转移相关.这些均表明caspase-7可能参与了结直肠癌的发生、发展.

    作者:沈小钢;郭志义;张伟;王康;胡阳;李平 刊期: 2013年第03期

  • 乙型肝炎病毒耐药突变与HBV-DNA量和HBeAg之间的相关性研究

    目的:探讨乙型肝炎病毒耐药突变与HBV-DNA量和HBeAg之间的相关性.方法:收集131例慢性乙肝患者的血清,采用基因芯片技术检测HBV拉米夫定及阿德福韦酯相关耐药突变位点(包括180、204、181、236位点),采用PCR-荧光探针法检测血清HBV-DNA量,采用化学发光微粒子免疫分析技术对血清HBeAg进行定性检测,分析HBV耐药突变与HBV-DNA量和HBeAg之间的关系.结果:乙肝病毒耐药突变率在不同性别及年龄间无统计学差异(P>0.05),汉族和维族在180位点的突变差异有统计学意义(P<0.05),但在其余3个位点的突变无统计学差异(P>0.05).乙肝病毒的耐药突变率在不同HBV-DNA水平及不同HBeAg状态间的差异有统计学意义(P<0.05).但在HBV-DNA中水平(105 ~ 107 IU/mL)及高水平(≥107 IU/mL)之间HBV突变率无统计学差异(P>0.05).结论:乙肝病毒耐药变异与患者的年龄及性别无关,180位点的突变与患者的族别有关,而其余3个位点的突变与患者的族别无关.乙肝病毒耐药变异与血清HBV-DNA水平及HBeAg状态有关,HBV-DNA水平高者,HBeAg阳性者,其HBV耐药突变率较高.而当HBV-DNA达到中等以上复制水平时,其耐药突变率与HBV-DNA量无关.

    作者:荣海燕;张朝霞 刊期: 2013年第03期

  • 同一生化分析仪不同模块间检测结果的一致性探讨

    目的:分析同一大型生化分析仪不同模块间测定结果的可比性和一致性,探讨误差的实验室可接受程度.方法:分别在经过校准的罗氏Modular PPI和Olympus AU5400全自动生化分析仪上检测专用质控血清和患者血清标本的TP、ALB、TG、TC、ALT、AST、CK、LDH浓度.对罗氏Modula PI与P2两个模块,Olympus AU5400 A1与A2两个模块,分别进行比对.结果:TG在罗氏两模块间检测值差异有显著性(P<0.01),但TG不同医学决定水平的偏倚均小于1/2 CLIA'88 TEa,可接受;其他实验项目在同一仪器各自不同模块间检测结果经样本t检验,差异无统计学意义(P>0.05),线性回归方程(Y=b X+a)、相关系数(r)分析符合线性要求.结论:同一生化分析仪若有两个以上的检测模块,应定期进行校准比对,以实现同一仪器不同模块间检测结果具有较好的可比性和一致性,满足临床需要.

    作者:张恩;王峰;王刚 刊期: 2013年第03期

  • 门诊以腰痛为主诉就诊患者360例临床分析

    腰痛是临床上极其常见的症状,在肾脏内科门诊就诊患者中占较大比例.但腰痛是多种疾病的共同表现,病因复杂,有时多种因素纠缠,病情更复杂而导致诊断困难,因其复杂多变的临床表现而成为诊治的难点.本文拟对在肾脏内科门诊就诊的360例腰痛患者诊治情况做临床分析探讨.1 资料与方法1.1 一般资料 收集2011年3月至2012年3月来我院肾脏内科门诊以腰痛为主诉就诊且临床资料完善的患者360例,年龄16 ~ 77岁,平均(45.6±6.5)岁,其中男230例,女130例;360例病例中病程短的为1.5 h,病程长的是30年.

    作者:范立明;黄远航;童俊容;张虹 刊期: 2013年第03期

  • 晚期三阴性乳腺癌的临床病理特征及预后分析

    目的:分析晚期三阴性乳腺癌的临床特征,探讨影响其预后的因素.方法:收集本院2004年1月至2009年12月间83例晚期三阴性乳腺癌患者的临床资料,回顾性研究其临床特点、生存状况及预后因素.结果:随访至2011年8月15日,死亡42例(50.6%),总生存期(OS)为27.8个月(95% CI 20.3 ~ 35.3).单因素预后分析结果显示,复发年龄、是否绝经、复发转移后是否接受一线化疗及化疗疗效、放疗对患者的OS有显著影响.Cox比例风险模型分析结果显示,复发年龄、是否接受一线化疗以及疗效是影响晚期三阴性乳腺癌预后的独立因素.结论:晚期三阴性乳腺癌短期内即易局部复发和远处转移,可能与其侵袭性较高有关.化疗能够改善晚期三阴性乳腺癌的预后,放疗也是可选择的重要手段.

    作者:刘俊彦;王哲海;郭珺;刘利妍 刊期: 2013年第03期

  • 贫血对老年患者认知功能的影响

    目的:研究贫血与老年患者认知功能障碍的关系.方法:收集我院349例老年贫血患者为贫血组,选择同期我院150例健康体检者为对照组,用简易智能状态量表(M MSE)检测评价2组认知功能,比较2组认知障碍发生率、时间地点定向能力、计算能力、语言能力等和MMSE总分的差别;贫血组患者根据贫血程度分成轻中度和重度贫血组,比较2组认知障碍发生率和MMSE评分的差别.结果:贫血组患者认知功能障碍发生率显著大于对照组(43.84% vs 10.67%,P=0.001);记忆力、注意力、计算力和MMSE评分较对照组明显下降(P<0.05);重度贫血患者认知障碍发生率和MMSE评分显著大于轻中度贫血组(P<0.05).结论:贫血与老年患者认知功能障碍相关,主要表现为计算力、记忆力和注意力下降贫血越严重,认知功能障碍发生率越高.

    作者:陈娜飞;陈铁虎;曲华 刊期: 2013年第03期

  • 严重烧伤合并急性溴鼠灵中毒1例

    患者男,24岁,农民.以面颈部、躯干及右侧上下肢火焰烧伤2h余入院.患者因与家人闹矛盾于2012年1月21日自服0.5%溴鼠灵母液2支(10mL)后将摩托车油箱打破引燃致伤,伤后2h后被送来我院.入院查体:T36.8℃,P 82次/min,R 21次/min,BP110/80 mmHg.急性病容,检查合作;面颈部、右侧胸壁及右上肢、右大腿可见20%烧伤创面,创面肿胀,有大、小不等水疱形成,大部创面表皮脱落,基底红白相间、质韧、渗出不明显、对疼痛刺激反应迟钝;右上肢2%创面基底苍白、皮革样改变、对痛觉刺激无反应;余皮肤无紫绀、黄染、皮疹及出血点,全身淋巴结无肿大,两肺(-)、心(-)、肝脾(-)、神经系统(-).

    作者:李茂清;卢青军;陈宝元 刊期: 2013年第03期

  • 穴位按摩结合有氧运动治疗高血压疗效分析

    我国人群高血压患病率呈逐年升高趋势,血压水平与脑卒中发生危险密切相关,收缩压每升高10 mmHg,脑卒中危险就增加25%,因此控制高血压是预防心脑血管病的主要措施.除药物治疗外,通过非药物治疗手段改善生活方式对高血压的防治十分重要,不仅对高血压患者有益,而且对血压正常高值人群也有好处[1].

    作者:周彬;周迎莉;石鹏;付宇 刊期: 2013年第03期

  • 浸润性导管癌钼靶X线征象:高密度与等密度肿块比较

    目的:比较乳腺浸润性导管癌钼靶X线中肿块高密度组与等密度组浸润性导管癌的钼靶X线征象异同.方法:回顾性分析49例浸润性导管癌的钼靶X线资料并采用t检验或两独立样本秩和检验对出现肿块征象的39例按密度分成高密度组及等密度组进行单因素分析:(1)计算Spearman相关系数,(2)比较两组包括年龄、腺体分型、侧别、象限、肿块形态、边缘、密度、肿块短径、肿块长径、钙化形态、分布、腋下淋巴结改变、乳头改变、皮肤改变、病理淋巴结转移、病理分级差异是否具有统计学意义.结果:(1)肿块密度与腺体组成成分呈中度正相关(r=0.332,P=0.039),肿块边缘呈中度负相关(r=-0.506,P=0.001),淋巴结转移呈中度负相关(r=-0.421,P=0.036).(2)肿块高密度组较肿块等密度组腺体更少(Z=-2.048,P=0.041),边缘更不规则(Z=-2.065,P=0.039),淋巴结转移更常见(Z=-2.235,P=0.025).结论:钼靶X线中浸润性导管癌病例出现肿块为高密度者乳腺腺体成分相对更少,肿块边缘更不规则,更多出现淋巴结病理转移,结合乳腺癌预后指数Cox预测模型,预后指数增高,患者预后差.

    作者:徐莉;张刚;刘园园;刘波;刘岘;岑东芝 刊期: 2013年第03期

  • 心脏瓣膜置换术围术期合并癫痫的治疗体会

    目的:总结5例围术期合并癫痫的心脏瓣膜置换术患者的治疗经验.方法:回顾性分析5例围术期合并癫痫的心脏瓣膜置换术患者的临床资料.结果:术后出现癫痫发作3例,无围术期死亡病例;5例患者头部CT检查中3例发现脑梗死病灶,2例无阳性发现;3例术后出现癫痫发作的患者出院时无神经系统缺陷,随访3个月~2年,无晚期死亡病例.结论:对于术前即有癫痫病史的心脏瓣膜病患者,进行系统检查、制定有效的癫痫发作控制方案,围术期不中断抗癫痫药物的使用,可有助于患者平稳渡过围术期;对于术后新发癫痫患者,尽早进行头部CT检查,可有助于发现可治疗性脑部病变,针对病变制定有效的治疗方案,可取得满意的治疗效果.

    作者:龚启华;向道康;张大国;刘小斌;刘秀伦;李业涛;张文斌;范永峰 刊期: 2013年第03期

  • 二维斑点追踪技术评价不同PTH水平尿毒症患者左室心肌纵向应变及扭转运动

    目的:应用超声二维斑点追踪成像技术(STI)评价不同甲状旁腺激素(PTH)水平尿毒症患者的左室心肌纵向应变及扭转运动.方法:44例左室射血分数正常(LVEF> 50%)的尿毒症患者(尿毒症组)根据PTH水平分为A组(PTH<正常值上限3倍)、B组(PTH>正常值上限3倍),22例健康志愿者作为对照组,对所有研究对象行斑点追踪应变成像分析,在心尖四腔、三腔、二腔长轴切面观获得左心室内、外膜下心肌纵向应变,在左室基底部、心尖部短轴切面观获得内、外膜心肌旋转、扭转角度,并比较3组间各指标变化情况.结果:(1)与对照组相比,尿毒症组左心室心内膜下心肌及整体纵向应变峰值减低,差异有统计学意义(P< 0.05或P<0.01);外膜心肌纵向应变峰值减低仅在B组有统计学差异(P<0.05);与A组比较,B组仅内膜心肌纵向应变峰值减低(P<0.05).(2)与对照组相比,尿毒症组左室整体及内、外膜心肌扭转角度均有减低,除A组膜心肌减低无统计学意义外,余均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与A组比较,B组内膜心肌扭转角度减低,差异有统计学意义(P<0.05),外膜心肌及整体扭转角度虽减低,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:STI技术能准确定量评估LVEF正常的尿毒症患者不同PTH水平心肌损伤变化,PTH水平较高者心肌功能损害较重.

    作者:戢秀勤;林仙方;丁晓明;朱佳 刊期: 2013年第03期

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