学术投稿

重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP的构建与鉴定

赵红;王苏平;张拥波;王得新

关键词:脑血管障碍, 腺病毒载体, Olig1, 基因重组
摘要:目的:转录因子Olig1调控了少突胶质前体细胞的分化和成熟,并参与了脱髓鞘损伤后的修复,是治疗脱髓鞘疾病的候选基因,在缺血性脑血管病的治疗中具有极大的应用价值.本实验旨在构建携带Olig1基因的重组腺病毒载体.方法:pDC315-Olig1为模板,聚合酶链反应扩增酶切Olig1片段,连接到带有eGFP标记基因的载体质粒pDC315-eGFP上,构建穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP,经PCR,酶切及测序鉴定后,利用AdMax包装系统,通过脂质体2000的介导与骨架质粒pBHGIox_E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组后产生复制缺陷型重组腺病毒栽体Ad5-Olig1-eGFP,应用PCR对毒种进行鉴定,传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒.以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.结果:经聚合酶链反应,酶切鉴定和测序分析,得到大小700 bp(Olig1)目的片段,证实正确构建重组穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP和重组腺病毒Ad5-Olig1-eGFP,测得重组腺病毒颗粒数为2.3×1011v.P./mL.结论:成功构建携带Olig1的重组腺病毒栽体Ad5-Olig1-eGFP,为缺血性脑血管病的基因治疗提供基因栽体并奠定实验基础.
实用医学杂志相关文献
  • 胰岛素生长因子Ⅰ、Ⅱ及其结合蛋白3在胎儿生长受限中的作用

    目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ(IGF-Ⅰ、Ⅱ)及其结合蛋白3(IGFBP-3)与胎儿生长受限(fetalgrowth restricton,FGR)之间的关系,为临床诊断及治疗提供新的思路及实验依据.方法:选取2007年6月至2010年12月在广州医学院附属广州市第一人民产科住院的临床诊断的中期FGR孕妇共30例,抽取同期引产的健康孕妇30例作为对照组1;分娩时再抽取30例健康分娩孕妇作为对照组2:分别测定FGR孕妇组在孕中期及分娩时与两个对照组的母血、羊水及脐血中的IGF-Ⅰ、Ⅱ及IGFBP-3的浓度并对比它们的差异.结果:FGR组的IGF-Ⅰ、Ⅱ水平在孕中期及分娩时均下降,而IGFBP-3水平却升高.结论:IGF-Ⅰ、Ⅱ及IGFBP-3可能与FGR的发生发展密切相关,IGF-Ⅰ、Ⅱ的降低及IGFBP-3的升高可能是导致胎儿生长受限的重要原因之一.

    作者:郭颖;张玉洁;康佳丽 刊期: 2012年第04期

  • 长时间单肺通气对兔两侧肺灌洗液中TNF-α、IL-8的影响

    目的:通过兔单肺通气模型,观察长时间单肺通气后肺灌洗液中TNF-α、IL-8浓度的变化.方法:选择新西兰大白兔35只,分为对照组(C组)、双肺通气组(TLV组)和单肺通气组(OLV组),每组5只兔.TLV组和OLV组按通气时间1、3、5 h分为3亚组,随后恢复双肺通气30min.对照组只行实验操作而不通气.观察通气时的心率(HR)、平均血压(MAP)、血气分析值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-8浓度.结果:与通气开始相比,OLV组在通气5hHR增高、MAP降低(P<0.01),pH、PaO2、SaO2在单肺通气后降低,PaCO2在OLV5h后升高(P<0.01);TLV组HR、MAP、pH、PaCO2在各观察时点无统计学差异(P>0.05).OLV组左右肺的TNF-α和IL-8值在通气5 h增高(P<0.01);TLV组的左肺的TNF-α和IL-8值在通气5 h增高(P<0.01);OLV组通气5 h左肺TNF-α、IL-8值与TLV组左肺比较有显著差异(P<0.01).结论:单肺通气时肺损伤程度与单肺通气时间成正比,单肺通气肺损伤比双肺通气肺损伤严重.

    作者:蓝岚;古妙宁;叶靖;岑燕遗;陈少娟 刊期: 2012年第04期

  • 鼻咽癌中TRPC1的表达及其临床意义

    目的:研究TRPC1蛋白在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义.方法:收集鼻咽癌组织213例,鼻咽慢性炎症组织24例.应用免疫组化技术(Envision二步法)检测鼻咽癌和鼻咽慢性炎症组织中TRPC1蛋白的表达.采用SPSS 13.0软件对实验数据进行分析.结果:TRPC1蛋白在鼻咽癌组和时照组织表达率分别为78.87%、40.74%,两者差异具有统计学意义(P<0.001);NPC组织中,TRPC1蛋白的表达与患者的年龄、性别、病理类型、EBV-IgG状态、颅底侵犯、远处转移无关,而与T分期、N分期、临床分期相关(P<0.05).结论:TRPC1蛋白在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用,TRPC1高表达可能参与和促进鼻咽癌的增殖和迁移

    作者:陈元平;阮健;陈锦章;谢剑明;李理;郑大勇;罗荣城 刊期: 2012年第04期

  • 外侧小切口髋关节前入路初次人工全髋关节置换术疗效分析

    目的:比较外侧小切口髋关节前入路与后外侧入路在初次人工全髋关节置换术中的效果及优缺点.方法:选取2009年3月至2011年3月在我院初次单侧人工全髋置换40例.随机分为外侧小切口髋关节前入路组(A组)和后外侧入路组(B组),每组20例.比较两组切口长度,手术时问,术中出血量、术后引流量,下床行走时间及术前、术后髋关节Harris评分.结果:A组切口长度,手术时间,术中出血量、术后引流量,下床行走时间,术后早期(1个月)髋关节Harris评分均优于B组(P<0.05),差异有明显统计学意义.术后晚期(6个月)Harris评分无明显差异(P>0.05).结论:外侧小切口髋关节前入路在初次人工全髋关节置换术中组织损伤小,出血少,术后恢复快,是初次人工全髋关节置换术较好的入路方式.

    作者:谢忠志;梁斌;尹东;韦敏克;陈峰;王贤;曾佳兴 刊期: 2012年第04期

  • 甲状腺全切除治疗原发性甲状腺功能亢进症合并甲状腺癌24例

    目的:探讨甲状腺全切除治疗原发性甲状腺功能亢进症(原发性甲亢)合并甲状腺癌的可行性与安全性.方法:回顾分析24例原发性甲状腺功能亢进症合并甲状腺癌的临床诊断与治疗的资料.结果:24例患者术前明确诊断为原发性甲亢,超声检查均发现有结节(3-13mm),所有病例均行甲状腺全切除术,术后病理证实乳头状癌87.5%(21/24),滤泡状癌12.5%(3/24),微小癌87.5%(21/24),双叶癌45.8%(11/24).术后无永久性喉返神经损伤及永久性低钙的并发症.91.7%(22/24)病例获随访(5个月-6年),均无甲亢及甲状腺癌复发的表现.结论:甲状腺全切除治疗原发性甲亢合并甲状腺癌是安全可靠的,兼顾了原发性甲亢及甲状腺癌的治疗,并发症发生率未明显增加.

    作者:苏磊;桑剑锋;姚永忠;王雪晨 刊期: 2012年第04期

  • 治疗性ERCP术后胰腺炎危险因素的Logistic回归分析

    目的:探讨治疗性ERCP术后胰腺炎(PEP)的相关危险因素,为临床预防提供依据.方法:采用病例对照研究方法,调查PEP组和对照组的胰腺炎病史,术中操作时间等20项研究因素,并行单因素及多因素Logistic回归分析.结果:多因素Logistic回归分析显示,长时间操作和高血压增加PEP的发病风险率OR值分别为13.645,6.191,鼻胆管引流,胆道支架能有效降低PEP发生,OR值分别为0.022,0.037.结论:合理减少操作时间,积极控制血压,并及时对胆道行鼻胆管或胆道支架引流,能有效干预治疗性ERCP术后胰腺炎的发生.

    作者:陈小微;洪万东;吴小丽;黄庆科;朱启槐 刊期: 2012年第04期

  • 胸腰椎巨大结核性脓肿9例分析

    目的:探讨前路病灶清除、植骨及内固定术治疗胸腰椎结核伴发多节段,多部位巨大脓肿患者的安全及疗效性.方法:2009年1月至2010年1月手术治疗9例伴发多节段,多部位巨大脓肿胸腰椎结核患者,病变累及2个椎体8例,3个及以上者1例,累及胸椎5例,腰椎3例,胸腰椎者1例.单纯椎旁脓肿7例,合并盆腔脓肿2例,距椎体远距离(5.11±3.14)cm.Cobb角5~450°,平均(28.3 ±13.47)°.VAS评分6±1.22;ODI指数45.5±13.90,术前均采用口服异烟肼(H)、利福平(R)、乙胺丁醇(E)、比嗪酰胺(Z)四联方案(HBZE)抗结核治疗后行前路病灶清除取自体髂骨植骨内固定术,内固定方式包括前路金属接骨板系统及前路钉棒系统,术后继续HRZE抗结核治疗12个月.佩戴胸腰椎支具3个月.结果术中出血量400~1400mL,平均900 mL.术后无神经功能障碍加重,2例脑脊液漏,1例行修补,1例未行,均顺利愈合,2例术后切口出现窦道Ⅱ期愈合,其余均I期愈合,9例均获随访,随访时间8~12个月,平均10个月,脊柱后凸Cobb角恢复至5~15°,平均(10.25±3.28)°.脓肿完全吸收时间平均为3个月,ASIA功能评定A、B、C级0例,D级2例,E级7例,VAS降至0.56±0.53;ODI指数降至术后3.78±2.64;植骨全部融合,融合时间5~14个月,平均8.5个月.随访期间内固定无松动及断裂.末次随访时所有患者均获临床治愈.结论:在正规抗结核药物治疗基础上,单纯前路病灶清除植骨内固定辅助胸腰椎支具固定及外科综合治疗可有效治愈多发巨大脓肿胸腰椎结核,疗效满意.

    作者:陈明;赵劲民;李兵;彭小忠;苏伟;沙轲;武振国 刊期: 2012年第04期

  • 水通道蛋白1和血管内皮生长因子在子痫前期胎盘中的表达与意义

    目的:研究水通道蛋白1(AQP1)和血管内皮生长因子(VEGF)在子痫前期胎盘中的表达及关系.方法:应用免疫组织化学SP法分别检测20例正常足月妊娠、20例子痫前期轻度组、20例子痫前期重度组孕妇的胎盘、胎膜组织中AQP1和VEGF的表述.结果:免疫组化显示AQP1和VEGF在3组胎盘、胎膜中均有表达,AQP1在子痫前期组胎盘上的表达较正常妊娠组上调,VEGF在子痫前期组胎盘上的表达强度弱于正常妊娠组.胎盘中AQP1和VEGF的表达不呈相关性(P>0.05).而羊膜上的AQP1和VEGF的表达强度呈相关性(P<0.05).结论:胎盘上AQP1的表达上调与VEGF的表达下降,可能参与子痫前期的发生和发展.

    作者:陈利琼;朱雪洁;朱雪琼;安慧敏;戴洁;池银归 刊期: 2012年第04期

  • 轻度认知障碍患者血清Tau蛋白及β淀粉样蛋白水平检测的意义

    目的:研究轻度认知障碍(MCI)患者血清中Tau蛋白和β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、磷酸化Tau(P-tau)的含量.方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测36例MCI患者,30例老年性痴呆(AD)患者,36例健康者血清中Tau蛋白和β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42):磷酸化Tau(P-tau)水平.结果:MCI组血清中Tau蛋白浓度与对照组、AD组比较有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).MCI组患者血清中的Aβ1-42与对照组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).对照组患者血清中的Aβ1-42的浓度与AD组比较,差异无统计学意义(P>0.05).磷酸化Tau(P-tau)蛋白的浓度与对照组、AD组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:MCI患者血清中Tau蛋白、Aβ1-42、及磷酸化Tau(P-tau)浓度异常情况,与疾病的严重程度相关.

    作者:吴婧琳;孟庆慧;侯文霞 刊期: 2012年第04期

  • 先天性黄斑缺损伴缺损区巨大囊肿1例

    患者男,16岁.无意间发现右眼视力差1年,于2009年11月5日来我院就诊.眼科检查:右眼视力指数/30cm,左眼0.15~1.25DS=5.0.非接触式眼压计测眼压,双眼均为12 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),右眼眼位正,无眼球震颤,眼前节正常,屈光间质清晰,视盘边界清,颜色及大小正常,黄斑部呈边界清楚的圆形缺损,面积约8PD,缺损区表面光滑完整,视网膜血管走行其上,缺损区内及其边缘有色素增殖及不规则聚集.

    作者:杨先凤;郑会 刊期: 2012年第04期

  • 加味苓桂术甘汤联合短期极低热量饮食治疗脾虚痰湿型高脂血症合并脂肪肝的临床研究

    目的:观察加味芩桂术甘汤联合短期极低热量饮食治疗脾虚痰湿型高脂血症合并脂肪肝的临床疗效.方法:115例高脂血症合并脂肪肝患者随机分为两组,治疗组65例,用加味苓桂术甘汤联合短期极低热量饮食治疗.对照组50例,用洛伐他汀治疗,两组疗程均为3个月.观察两组患者治疗前后临床疗效、血脂、转氨酶、体质指数(BMI)、血液流变学变化.结果:两组治疗后治疗组总有效率89.23%,对照组总有效率80.00%.治疗组临床疗效明显优于对照组(P<0.05);两组治疗后TC、TG、LDL、ALT、AST较治疗前明显下降(P<0.05),且治疗组治疗后TC、TG、LDL、ALT、AST、BMI较对照组下降显著(P<0.05);两组治疗前后全血粘度高切、全血粘度低切、还原粘度高切、红细胞聚集指数及纤维蛋白原均有改善(P<0.05),且治疗组全血粘度高切、红细胞聚集指数、纤维蛋白原较时照组明显好转(两组治疗后相比,P<0.05).结论:加味苓桂术甘汤联合短期极低热量治疗脾虚痰湿型高脂血症合并脂肪肝疗效明确.

    作者:柯斌;师林;张俊杰;孟君;陈丁生;秦鉴 刊期: 2012年第04期

  • 用ELISA法检测单肺通气不同时间后大鼠血管内皮生长因子及可溶性E选择素的水平

    目的:探讨不同时间单肺通气后大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及可溶性E选择素(sE选择素)表达的变化.方法:将30只SD大鼠随机分成5组各6只,对照组行双肺通气,01组、02组、03组、04组分别为将气管切开后将导管插入右侧主支气管行右侧肺单肺通气1/2、1、2.4 h,听诊确定左侧肺萎陷.实验结束后检测肺组织中TNF-α和IL-8含量;用ELISA法检测血浆中sE-选择素、肺组织和血浆中VEGF的表达;电镜观察肺组织超微结构变化.结果:肺组织中TNF-α和IL-8含量随着单肺通气时间延长而逐步升高;SE-选择素在大鼠单肺通气1、2、4 h血浆中的表达较正常组显著升高(P<0.05);VEGF在大鼠单肺通气4 h组肺组织中的表达较正常组显著降低(P<0.05),而在该组血浆中的表达较正常组显著升高(P<0.05);实验组电镜下细胞的超微结构改变,板层小体排空,线粒体损伤等改变.结论:长时间单肺通气可以导致急性肺损伤(ALI),sE-选择素及VEGF在大鼠ALI形成过程中起着一定的作用.

    作者:杨建;潘灵辉;林飞;钱卫;黄宇;杜学柯 刊期: 2012年第04期

  • 虹膜拉钩辅助外伤性玻璃体视网膜手术的临床观察

    目的:评价虹膜拉钩辅助玻璃体视网膜手术的应用价值.方法:回顾性分析云南省第二人民医院眼科2008年1月至2010年1月间采用虹膜拉钩辅助下进行玻璃体视网膜手术治疗的28例(28眼)外伤导致小瞳孔的外伤性视网膜脱离病例,分析手术效果、术中术后并发症的发生情况.结果:在虹膜拉钩辅助下,术中视野明显改善,术后23眼(82.1%)手术获得视网膜解剖复位,2眼术中发生短暂虹膜出血,1眼术后一过性前房积血,所有眼术后出现葡萄膜炎反应和不同程度的瞳孔缘锯齿形缺损,未观察到严重并发症出现.结论:虹膜拉钩辅助下进行玻璃体视网膜手术对治疗伴随有小瞳孔的外伤性视网膜脱离有一定的实用性,可改善手术视野,便于处理周边视网膜病变和基底部玻璃体.

    作者:吴敏;肖丽波;郭玉敏 刊期: 2012年第04期

  • 城镇职工体质指数及其与慢性病的关系

    目的:了解德州市城镇职工身体质量指数(BMI)分布情况,探讨BMI与高血压、糖尿病、心脑血管病等慢性病的关系.方法:利用德州市城镇职工体检的资料,采用统计学方法分析不同人群BMI的差异,探讨BMI与常见慢性病发病率的关联性.结果:影响城镇职工BMI的因素有性别、年龄、单位性质等,男性超重和肥胖的发病率高于女性.从年龄分布看,55~64岁年龄组超重和肥胖的发病率高.不同单位性质人员的超重和肥胖的发病率具有显著差异.多因素Logistic回归分析结果表明,超重和肥胖与高血压、冠心病、脑血管病、糖尿病、高脂血症、脂肪肝、高尿酸血症呈正相关;男性和高年龄组超重和肥胖率高于女性和低年龄组,机关和事业单位工作人员超重和肥胖率高于企业和个体从业人员.结论:不同人群的BMI分布具有差异,男性、55~64岁年龄组人群和机关事业单位职工BMI超标率较高,BMI与高血压、冠心病、糖尿病、高脂血症、脂肪肝、高尿酸血症患病率呈正相关,需要引起更多的重视与关注.

    作者:吴继卫;张明霞 刊期: 2012年第04期

  • 透视触发法与常规延时法在肝脏MR动态增强扫描双动脉期中的对比研究

    目的:比较透视触发法与常规延时法在肝脏磁共振动态增强扫描中的应用.探讨透视触发技术在肝脏磁共振动态增强扫描双动脉期中的应用价值.方法:将207例患者分成两组.A组93例,接受透视触发法行磁共振动态增强检查;B组114例,接受常规延时法行磁共振动态增强检查.比较、分析两组病例获得佳肝双动脉期增强图像的成功率.结果:A组获得佳肝双动脉期图像80例(86.0%),B组获得佳肝双动脉期图像72例(63.2%).比较两组获得佳肝脏双动脉期图像的成功率,差异有统计学意义(χ2=13.723,P<0.001).结论:采用透视触发技术能较准确地控制扫描延时时间,提高了获得佳肝脏双动脉期增强图像的成功率,在临床上应用具有明显的优势.

    作者:朱华勇;朱卫萍;米玉成;丁建荣 刊期: 2012年第04期

  • 以带蒂筋膜瓣为膜引导骨再生屏障膜包裹接种自体骨髓间充质干细胞的非细胞型组织工程促进骨缺损修复的研究

    目的:研究带蒂筋膜瓣为膜引导骨再生(MGBR)屏障膜的可行性及其在促进超临界骨缺损(ECSD)修复方面的实验疗效.方法:50只大白兔,尺骨造ECSD模型,A组单纯植入化骨(NTEB)(对照组),B组制备带蒂筋膜瓣包裹NTEB(实验组),术后对实验动物行一般情况观察、修复区X射线检查、大体观察和组织学检查、骨形态计量分析及生物力学测定分析.结果:各检查结果均显示B组优于A组.结论:以带蒂筋膜瓣为屏障膜具有MGBR作用,其包裹NTEB应用MGBR技术对促进ECSD修复疗效显著.

    作者:胡振顺;杨新明;王耀一;孟宪勇;张瑛;阴彦林 刊期: 2012年第04期

  • 人源肝细胞系CL-1、HepFMMU、HepG2、C3A生物学特性与功能的比较

    目的:比较体外培养的四种人源肝细胞系CL-1、HepFMMU、HepG2、C3A生物学与功能特性的异同,初步评价其应用于生物人工肝的可行性,为其在组织工程学研究和临床医学中的应用奠定基础.方法:4种肝细胞在接种密度相同的条件下培养7 d,观察4种细胞形态特征和功能状态,检测培养液中白蛋白、尿素及安定代谢量.结果:4种肝细胞系均具有较快的生长速度,功能学比较C3A具有良好的白蛋白合成和安定代谢功能;CL-1具有良好的尿素合成功能.结论:4种肝细胞具有良好的增殖能力,C3A具有良好的白蛋白合成及安定代谢能力,但其尿素合成能力较差,需进一步改进;CL-1具有较好的尿素合成能力,但其安定代谢和白蛋白合成功能较差;HepFMMU功能较差,不适宜用于生物人工肝.

    作者:吴青松;李治国;刘广波;高毅 刊期: 2012年第04期

  • 股骨远端C型骨折锁定钢板内固定术后不愈合的原因及治疗体会

    目的:探讨股骨远端C型骨折锁定钢板内固定术后不愈合的原因及治疗方法.方法:自2005年1月至2011年5月我院收治股骨远端C型骨折锁定钢板内固定术后骨折不愈合21例,对骨折不愈合的原因进行分析.3例骨折未完全复位,行切开复位重新内固定并植骨;8例内固定螺钉拔出,行重新内固定并植骨;7例单纯骨缺损,行单纯植骨;2例显性感染,行清创冲洗并外固定;1例隐性感染,行清创冲洗抗感染治疗.结果:随访12-21个月,21例患者骨折均愈合,平均愈合时间为13个月,感染患者骨折愈合时间长.骨折愈合后膝关节功能优良率达71.4%,感染患者膝关节功能差.结论:股骨远端C型骨折锁定钢板内固定术后不愈合的原因包括组织创伤严重、手术操作不当、感染、术后功能锻炼不当或负重活动过旱.针对骨折不愈合的不同原因采用不同的治疗方法,能取得较好的治疗效果.充分植骨对于治疗骨折不愈合起着非常重要的作用.

    作者:朱新炜;李云恺;左金良;高浩源;邱思强 刊期: 2012年第04期

  • 选择性断流术和联合断流术治疗门脉高压症的临床评价

    目的:探讨选择性断流术和联合断流术对门静脉高压症的治疗作用.方法:对2005年9月至2009年1月间53例选择性断流术治疗门静脉高压症病例(研究组)进行回顾性分析,并与此前59例行联合断流术病例(对照组)的临床资料进行比较.结果:断流术前两组间自由门静脉压力(FPP)无差异(P>0.05),断流术后研究组FPP为(25.2±3.9)cmH2O低于对照组的(31.7±4.6)cmH2O(P0.05).结论:选择性断流术合理地保留了机体的自发性分流,可减少门静脉系统血栓和门静脉高压性胃病的发生率.

    作者:龙涤;闭永浩;方富义;覃小雄;钟贤君 刊期: 2012年第04期

  • Stathmin特异性siRNA表达质粒抑制stathmin的表达

    目的:构建微管解聚蛋白stathmin基因的特异性siRNA质粒表达栽体,以便研究stathmin在鼻咽癌中的生物学作用.方法:合成stathmin特异性DNA片段,退火形成的双链DNA片段克隆于质粒表达载体pGenesil-1.3;载体经扩增后,进行酶切和测序鉴定;采用QIAGEN公司脂质体(effectene transfection reagent)将鉴定后的重组质粒转入鼻咽癌CNE2细胞:RT-PCR与Western blot检测stathmin基因表达.结果:酶切和测序分析表明,插入siRNA质粒表达栽体中的DNA片段,其碱基序列和插入方向正确.表达分析证实特异性siRNA质粒表达载体能有效抑制鼻咽癌CNE2细胞中stathmin的表达.结论:构建的siRNA质粒表达栽体对stathmin的表达有很好的抑制作用.

    作者:向秋;王建红;熊伟明;田晶;蒋伟;肖胜军;何晓松;雷迅 刊期: 2012年第04期

实用医学杂志

实用医学杂志

主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所