学术投稿

真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B的构建及在293T细胞中的表达

陈松建;徐锡金;霍霞;张宝;梁晓;陈刚建

关键词:脊髓损伤, 血小板衍化生长因子B, 真核表达
摘要:目的:构建人基因血小板衍化生长因子B(PDGF-B)真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B,并在293T细胞中进行瞬间表达.方法:采用PCR方法从购自美国典型培养物保藏中心含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达载体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定正确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF-B蛋白,并可分泌到细胞外.结论:成功构建了PDGF-B真核表达载体,为进一步利用PDGF-B对脊髓损伤进行基因治疗奠定基础.
实用医学杂志相关文献
  • 脱细胞骨软骨支架的制备及形态学观察

    目的:探讨脱细胞骨软骨支架制备的可行性,为关节软骨组织工程提供新的支架材料.方法:3月龄雄性新西兰大白兔,取膝关节髌股关节面的股骨侧,切取4 mm×4 mm×3 mm大小(长×宽×深)骨软骨块,用去垢剂-酶法对骨软骨组织块进行脱细胞脱钙处理,冻干机冻干,制备脱细胞骨软骨支架,并对其进行形态学观察.结果:脱细胞骨软骨支架呈半透明状,弹性良好,组织学评价提示细胞成分已完全祛去,保留了纤维支架.结论:去垢剂-酶法可以祛去骨软骨块中的细胞成分,成为带有空隙的支架材料.

    作者:刘建华;王国海;徐栋梁 刊期: 2008年第22期

  • 局限于全程输尿管的移行细胞癌1例

    患者男,70岁.因间歇性肉眼血尿10个月收入院.查体:腹平坦,未见腹壁静脉曲张,腹软,未扪及包块,肝脾肋下未及,全腹无压痛,肾区无叩痛,肠鸣音正常.CT报告:右输尿管占位性病变并右肾积水.膀胱镜检查:见右输尿管壁内段明显隆起,管口有1 cm新生物坠出,菜花状,余未见异常.

    作者:孔繁山;范勇;高保华;蔡伟力;丁志波 刊期: 2008年第22期

  • 穴位注射联用TDP辅助治疗咳喘病175例

    近年来由于空气污染越来越严重,咳喘病症的发病率也越来越高,如不及时治疗将会影响呼吸系统功能.我们采用中西医结合的方法,将穴位注射与TDP应用于咳喘病症的治疗,提高了治疗效果,现报告如下.

    作者:徐辉燕 刊期: 2008年第22期

  • 老年直肠癌围手术期的治疗体会

    目的:探讨老年直肠癌患者围手术期诊治.方法:对1998年1月至2007年12月10年间广东省陆丰县人民医院收治的103例老年直肠癌患者进行回顾性分析.结果:老年直肠癌手术患者手术前并存病多达67.O%,术后并发症达43.7%,病死率高达5.8%.结论:及时、适当、有效地治疗老年直肠癌手术患者围手术期并存病和术后并发症是提高疗效、降低围手术期病死率的关键.

    作者:余永东;姚学清;林锋 刊期: 2008年第22期

  • 以动眼神经麻痹为首发症状的鼻咽癌2例

    病例1,男,36岁,因左眼半固定只能向外移动4个月余,于1994年4月到我院门诊诊治.1994年1月,患者无明显诱因而出现左眼处于半固定状态,只能向外移动,同时同侧上睑下垂,瞳孔散大,对光及节反射消失,在外院眼科多次就诊无效.患者1个月前出现左侧头痛、左耳闷胀,听力下降,在外院耳鼻咽喉科就诊,并行鼻咽部活检2次,均未见癌细胞.病程中无鼻塞及涕中带血史,无头昏、咽痛及声嘶等.患者近来左侧头痛,左眼只能向外移动,左耳闷胀加重而来我院门诊就诊.

    作者:曹光明;沙亚盘 刊期: 2008年第22期

  • 肿瘤患者外周血淋巴细胞绝对值的变化及意义

    目的:了解肿瘤患者的免疫状态,探讨T细胞亚群、NK细胞、B细胞绝对数值与肿瘤的相关性.方法:采用流式细胞术检测296例肿瘤患者外周血淋巴细胞(T、Th、Ts、NK、B细胞)绝对数值,其中肺癌80例,鼻咽癌48例,肝癌45例,乳腺癌39例,结肠癌36例,食管癌27例,胃癌21例,并与48例正常对照比较.结果:与正常对照组比较,肿瘤患者外周血T细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞绝对数值均减低(P<0.05),B细胞绝对数值差异无显著性(P>0.05);各数值在不同肿瘤之间差异无显著性(P>0.05).结论:肿瘤患者细胞免疫功能普遍低下,T细胞亚群、NK细胞、B细胞绝对数值可作为肿瘤患者免疫功能的监测指标.

    作者:李志阳;王金龙;杨波 刊期: 2008年第22期

  • 丹参注射液治疗维持性血透患者急性心血管并发症的疗效观察与护理

    近年来由于透析技术的不断发展,尿毒症患者的5年生存率已提高到50%~70%,但心血管并发症的发生率并未减少.国内外的研究证明,心血管并发症仍是慢性透析患者死亡的首要原因[1].特别是透析过程中出现的各种急性并发症需要及时处理.我院自2003年1月至2007年3月应用丹参注射液治疗透析时的心血管并发症,并取得了良好的效果.现总结如下.

    作者:叶美素;温利平;杨筱敏;郑育 刊期: 2008年第22期

  • 宫颈鳞状上皮癌变过程中水通道蛋白4的表达及其意义

    目的:研究水通道蛋白4(AQP4)在宫颈鳞状上皮癌变过程中的表达特点及其意义.方法:采用免疫组化EliVision法检测AQP4在20例宫颈正常鳞状上皮、28例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ+Ⅱ级、12例CINⅢ级和33例浸润性癌组织中的表达,分析AQP4表达与肿瘤临床病理因素的关系.结果:在宫颈正常鳞状上皮、CINⅠ~Ⅲ级、浸润性癌组织实质细胞中AQP4的表达逐渐增强,其在浸润性癌与正常组织中的表达差异存在显著性(P<0.05),肿瘤组织伴淋巴结转移者AQP4表达明显高于未转移者(P<0.05).结论:AQP4的过表达在宫颈鳞癌发生及发展过程中发挥一定作用,通过增加肿瘤细胞对水的通透性,促进肿瘤的侵袭和转移.

    作者:刘明;孙颖;韩水平;赵文宝;郑彩霞;高亚 刊期: 2008年第22期

  • 地塞米松、强的松序贯疗法治疗成人肾病综合征疗效分析

    目的:探讨地塞米松、强的松序贯疗法治疗成人肾病综合征的疗效.方法:88例肾病综合征患者随机分成地塞米松、强的松序贯疗法组(治疗组)38例和口服强的松标准疗法组(对照组)50例,观察疗效及有关指标.结果:水肿消退时间和尿蛋白转阴时间治疗组比对照组分别短12.7 d、17.6 d.差异有统计学意义.治疗组治疗效果与对照组比较差异无统计学意义,但达到缓解所需平均时间,治疗组比对照组短19.7 d,差异有统计学意义;不同治疗方案副作用及并发症发生率差异无统计学意义.结论:地塞米松、强的松序贯疗法能快速诱导缓解,缩短尿蛋白的转阴时间,有一定推广使用价值.

    作者:陈义杰;林林辉;黄小涛;肖韩 刊期: 2008年第22期

  • 肝硬化患者外周血单个核细胞中白蛋白mRNA的表达与病变进展的关系

    目的:研究肝硬化患者外周血单个核细胞中白蛋白mRNA表达与病变进展的关系.方法:采用实时荧光定量PCR检测肝硬化患者血清中HBV DNA含量.采用逆转录巢式PCR分别检测代偿性肝硬化、失代偿性肝硬化和健康人外周血单个核细胞中白蛋白mRNA的表达.结果:37例肝硬化患者中21例为代偿期,16例为失代偿期.代偿期肝硬化患者血清HBV DNA阳性率为67%(14/21),HBV DNA含量为(4.3±2.1)×10<'6> copies/mL;外周血单个核细胞白蛋白mRNA阳性率为14%(3/21).失代偿期肝硬化患者血清HBV DNA阳性率为88%(14/16),HBVDNA含量为(5.1±3.4)×10<'7> copies/mL;外周血单个核细胞白蛋白mRNA阳性率为56%(9/16).20例健康人外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA阳性率为5%(1/20).肝硬化代偿期和失代偿期患者外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA阳性率差异有显著性(P<0.01).结论:HBV DNA与肝硬化患者肝脏病变进程密切相关,外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA表达与肝脏损害相关,二者可作为肝硬化病情进展的评价指标.

    作者:许鸣;张智;张珍;李泽泳;李亚红;付延玉 刊期: 2008年第22期

  • 单cage植骨融合内固定术治疗下腰痛

    目的:总结钉棒系统、单cage植骨内固定术治疗复杂下腰椎疾病的临床经验和效果.方法:从2006年3月至2008年1月,时4例腰椎滑脱、2例腰椎间盘突出症术后复发、4例椎管狭窄患者采用腰椎管减压、钉棒系统内固定加椎阃单cage植骨融合手术.结果:术后平均随访8个月,比较手术前后临床症状和x线片植骨融合程度,7例症状完全消失,2例症状明显改善,其中1仍然有下肢麻木感,优良率为90%.9例患者术后6个月后椎间骨性融合.结论:后路钉棒系统固定加椎间单cage植骨融合治疗下腰痛效果良好.

    作者:赵春明;张文捷;蔡斌;朱礼贤;朱伟 刊期: 2008年第22期

  • Meta分析在宫颈癌循证医学中的应用

    宫颈癌是全球女性中仅次于乳腺癌的常见的妇科恶性肿瘤之一,在一些发展中国家其发病率居首位.宫颈癌的流行病学研究及合理有效的诊治显得尤为重要.近20年来,循证医学及Meta分析得到了迅速的推广和应用[1].以其严谨的理念与方法,解决了人们面时眼花缭乱,甚至自相矛盾的医学信息的困惑.

    作者:贺红英;李力 刊期: 2008年第22期

  • 皮下瘀血与血管走向的相关性研究

    目的:探讨静脉穿刺后皮下瘀血的延伸方向与血管走向的关系.方法:抽取112例因静脉穿刺导致皮下瘀血的患者,分为皮下组织正常组48例,皮下组织疏松组64例.在患者瘀血中心用十字划分法,横血管方向为横径,顺血管方向为竖径.比较两组的横径和竖径.若横径<竖径,视为皮下淤血的延伸方向与血管走向一致.结果:两组皮下瘀血横、竖径差异无显著性意义(Fisher确切概率法,P=0.459 3).两组中的横、竖径比较,差异有显著性意义(t检验,P<0.001).结论:皮下瘀血的发展延伸的方向与血管走向一致.

    作者:邱敏智;庾少清;邝惠冰;冯秀玲 刊期: 2008年第22期

  • 16层CT冠状动脉造影用于心肌桥-壁冠状动脉诊断的临床观察

    目的:探讨16层CT血管造影(CTA)对心肌桥-壁冠状动脉(MB-MCA)的诊断价值.方法:对114例患者行冠状动脉CTA检查,所有数据传至工作站进行重组和后处理,记录MB-MCA位置,测量心肌桥(MB)厚度、壁冠状动脉(MCA)长度、心肌包绕情况以及MCA两端成角情况,计算MCA狭窄率,分析MB厚度、MCA长度、狭窄率间相关性.结果:114例患者中诊断33例、36处MB-MCA,位于左冠状前降支25例,MCA平均长度为(20.0±12.3)mm,MB平均厚度为(2.1±0.7)mm,MCA平均狭窄率为(19.7±12.1)%,MCA长度、狭窄率、MB厚度间没相关性.结论:冠状动脉CTA可以准确显示MB-MCA,并可测量其长度,厚度,并评价MB-MCA冠脉的形态.

    作者:梁坚豪;陈燕萍;赵继泉;朱新进;曾惠良 刊期: 2008年第22期

  • 真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B的构建及在293T细胞中的表达

    目的:构建人基因血小板衍化生长因子B(PDGF-B)真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B,并在293T细胞中进行瞬间表达.方法:采用PCR方法从购自美国典型培养物保藏中心含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达载体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定正确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF-B蛋白,并可分泌到细胞外.结论:成功构建了PDGF-B真核表达载体,为进一步利用PDGF-B对脊髓损伤进行基因治疗奠定基础.

    作者:陈松建;徐锡金;霍霞;张宝;梁晓;陈刚建 刊期: 2008年第22期

  • 七氟醚吸入麻醉在宫腔镜手术中的应用

    目的:观察单纯七氟醚麻醉用于宫腔镜手术时循环呼吸的影响.方法:60例为宫腔镜手术的患者,均以诱导浓度为6%~8%七氟醚和5 L/min氧流量,快诱导麻醉,连续观察心率(HR)、血压(BP)、平均动脉压(MAP)、血氧饱和度(SpO2)、呼吸频率(RR)、潮气量(MV)等指标,记录麻醉前、术中、术毕即刻各项监测数据.结果:患者术中SBP、MAP均下降,较麻醉前差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而DBP、SpO2、MV、RR均无明显变化.结论:七氟醚作为一新型吸入麻醉药,对呼吸和循环的影响较小,诱导和苏醒过程迅速、平稳.

    作者:郭学文;李平安 刊期: 2008年第22期

  • 高颈段椎管内肿瘤的术后观察与护理

    目的:探讨高颈段椎管内肿瘤的术后护理,特别是术后早期高压氧治疗过程中的护理.方法:对11例高颈段椎管内肿瘤的术后患者,进行科学性、规范性的专科护理,特别是对高压氧治疗过程中的护理进行观察、分析、总结,并不断完善.结果:11例患者术后恢复顺利,临床治疗效果满意,未出现护理并发症.结论:科学、规范的专科护理工作是高颈段椎管内肿瘤患者术后脊髓功能尽可能恢复及大限度地减少术后并发症的重要保证.

    作者:谢菊香;刘杰;蒋海蓉 刊期: 2008年第22期

  • Res配型在致敏受者肾移植中的应用

    目的:探讨致敏受者经HLA-氨基酸残基配型(Res配型)后行肾移植的效果.方法:对13例移植前群体反应性抗体水平较高的患者按照美国UCLA组织配型中心所确定的中国汉族人Res配型标准进行供、受者筛选,以常规方法进行肾移植,术前未行血浆置换.结果:13例患者,无一例发生超急排斥反应;9例术后5 d内移植肾功能恢复正常;3例术后1个月内各出现1次移植肾急性排斥反应(发生率23%),1例经甲基强的松龙,2例经OKT3治疗后逆转;1例发生急性肾小管坏死,经血液透析过渡后,于术后3周肾功能逐渐正常.按Res配型原则,供、受者0、1、2和3个位点错配分别为1例(8%)、3例(23%)、7例(54%)和2例(15%),明显高于传统HLA六抗原配型结果.结论:Res配型可以显著提高供受者相配率,对缩短等肾时间,减少移植肾的排斥反应,提高移植肾的存活率具有重要意义.

    作者:孙建国;杜鹏;罗永康;黄启福;段斌 刊期: 2008年第22期

  • 凋亡相关基因Fas和FasL在糖尿病大鼠下颌下腺内的表达

    目的:观察糖尿病大鼠下颌下腺内凋亡相关基因Fas和FasL的表达变化.方法:SD雄性大鼠随机分为4周、12周模型组及对照组.用链脲佐菌素复制出糖尿病动物模型,分别于第4、12周后测体重和血糖,并取下颌下腺组织,应用免疫组织化学方法检测Fas及FasL表达变化,计算机图像分析系统测平均光密度值(MOD).结果:大鼠下颌下腺内有Fas及FasL表达,分布于颗粒曲管、纹状管及小叶间导管上皮细胞胞质及部分细胞核内.对照组呈Fas及FasL弱阳性,4周模型组多呈中等阳性,部分呈强阳性:12周模型组大多呈强阳性.与对照组比较,4周、12周模型组各级导管上皮细胞内Fas及FasL MOD值均增高(P<0.01).结论:大鼠下颌下腺内Fas及FasL表达随糖尿病病程延长而增强,可能在糖尿病时下颌下腺组织凋亡中起重要作用.

    作者:伍雪芳;吴学平;贾雪梅;金晓梅;彭彦霄 刊期: 2008年第22期

  • 双腔支气管定位技巧及围手术期低氧血症的原因分析与预防

    目的:通过对120例双腔支气管插管麻醉患者的回顾性分析,介绍一种快速的双腔支气管插管定位方法及围术期低氧血症的应时处理方法.方法:120例需双腔支气管插管单肺通气下行胸科手术的患者,在插管及放置手术位后、术中,使用常用3种方法判断双腔管位置,无法明确低氧血症原因的使用纤支镜检查.结果:诱导插管一次成功者68例;卧位后,需要重新对肺者78例,围术期SpO<,2><92%者22例.结论:本法定位步骤简单、快速,减少肺隔离时的重复动作,从而大大减少了对肺时间和气管的摩擦损伤.

    作者:何卓文;谭花;黄敏贞;田丰;张坤全 刊期: 2008年第22期

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