学术投稿

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157:H7

贺连华;扈庆华;石晓路;郑琳琳;李庆阁;张佳峰;庄志雄;刘小立;张顺祥;王冰;吴平芳;刘涛

关键词:大肠杆菌O157:H7, 改良分子信标, 实时PCR
摘要:目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157:H7的快速方法. 方法根据GenBank公布O157:H7的rfbE保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5'端,建立改良分子信标实时PCR检测O157:H7的反应体系,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测. 结果共检测11种细菌,只有大肠杆菌O157:H7有荧光信号,其余10种全无荧光信号,且与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为64fg,菌液灵敏度为59cfu/ml或2cfu/PCR反应体系.应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157:H7均出现特异的荧光信号,无干扰.对89份食品样品进行检测,5份O157:H7实时PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2h.5份阳性样本,经传统方法培养,有3份检出大肠杆菌O157:H7. 结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于大肠杆菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.
中国热带医学杂志相关文献
  • 2004年温州鹿城区碘缺乏病调查

    温州市鹿城区地处浙江省东南沿海,是温州市的政治、经济、文化中心,全区常住人口65.14万,暂住人口68.86万.1996年起全区开展以全民食盐加碘为主的综合性消除碘缺乏病措施,8年来儿童碘营养状况得到了显著改善.2000年经浙江省评估达到了消除碘缺乏病的阶段性目标.为了解目前碘缺乏病在鹿城区的流行情况,现将2004年碘缺乏病监测结果分析如下.

    作者:徐仪;谢海斌 刊期: 2006年第05期

  • 一起金黄色葡萄球菌引起的食物中毒调查

    目的调查某学校发生以呕吐为主要症状的集体食物中毒的发病原因和传染源. 方法采用流行病学调查方法和对病人呕吐物、肛拭、可疑食物进行实验室检查,糕点加工场员工的肛拭、咽拭等样本按食品卫生微生物学检验和变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则附录A方法进行检验. 结果金黄色葡萄球菌检出率为呕吐物88%、肛拭80%、墨西哥面包100%,从业人员1人检出此菌. 结论这是一起从业人员感染金黄色葡萄球菌再污染墨西哥面包而引起的细菌性食物中毒.

    作者:徐灼均 刊期: 2006年第05期

  • 糖尿病足缺血性溃疡的病原菌耐药性分析及控制策略

    目的探讨糖尿病足缺血性溃疡的病原菌分布,耐药情况及控制策略. 方法采用回顾性方法对完整的糖尿病足缺血性溃疡资料72例进行分析. 结果 72例细菌培养共检出细菌90株,其中革兰阴性杆菌(G-杆菌)57株,占63.3%,革兰阳性球菌(G+球菌)23株,占25.6%,酵母样真菌10株,占11.1%.大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌是常见致病菌.绝大多数G-杆菌对氨苄西林完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦、第三代头孢含酶抑制剂及碳青霉烯类抗生素耐药性较低,铜绿假单胞菌耐药情况严峻.G+球菌对青霉素、氨苄西林/舒巴坦、苯唑西林、头孢唑林的耐药率均达到100%,对万古霉素的耐药率低.肠球菌对多数抗生素耐药,已发现1株耐万古霉素的粪肠球菌. 结论糖尿病足溃疡以G-杆菌感染居多,耐药情况严峻,强调应重视细菌培养及抗生素敏感试验,合理使用抗生素,降低耐药率.

    作者:杨毅华;黄俊珊;詹巧玲;林超;辜红妮 刊期: 2006年第05期

  • 海南省人体重要寄生虫病现状调查

    目的了解和分析海南省人体寄生虫感染的现状和流行特征,评估十多年来的防治效果,为制定全省人体重要寄生虫病防治策略提供科学依据. 方法根据《全国人体重要寄生虫病现状调查实施细则》进行. 结果整群随机抽样全省5个市、县15个点7 924人,调查发现人群肠道蠕虫感染率为59.40%,其中土源性线虫感染率为56.22%,查见肠道蠕虫16种,其中线虫11种,绦虫2种,吸虫3种, 感染率较高的虫种是钩虫、鞭虫和蛔虫,其感染率分别为33.18%、31.35%和14.29%;多虫感染较严重,感染度以轻度感染为主,感染年龄以5~9岁和10~14岁两组为高;汉、黎、苗、回各民族感染率分率别为48.27%、 64.14%、 76.36%、 58.96% ;女性和农村居民感染率明显高于男性和城镇居民. 结论海南省人群土源性线虫感染率和感染度总体呈下降趋势,但儿童蛲虫感染率略有所上升,中部地区钩虫感染率仍然居高不下,是今后防治工作的重点.

    作者:胡锡敏;王善青;林绍雄;黄捷敏;李善文;童重锦;曾文;刘姚若;陈冬燕 刊期: 2006年第05期

  • Mb与CK-MB及cTnI联合检测在AMI早期诊断中的应用

    目的对肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)单项定量检测及联合检测进行比较,为急性心肌梗死(AMI)的早期诊断和预后评估提供更准确合理的检测指标. 方法对239例临床征象高度可疑的AMI患者在入院后24h内检测cTnI、Mb和CK-MB,比较它们对AMI诊断的敏感性和特异性,并进行组合. 结果在入院后24h内cTnI、Mb、CK-MB对AMI的敏感性分别为96.8%、100%和76.6%,特异性分别为100%、89.4%和97.6%.AMI患者死亡率随着cTnI水平的升高而显著增加.cTnI、Mb、CK-MB联合检测,对AMI的敏感性为100%,特异性为88.2%,阳性预期值为100%,阴性预期值为84.2%. 结论 cTnI、Mb和CK-MB联合检测,结果其敏感性提高到100%,阳性预期值达100%,其综合特异性也可达88.2%,同时对预后、再梗死发生及疗效有很好的观察效果.

    作者:郑志昂;李毓阳;谢志杰 刊期: 2006年第05期

  • 瑞芬太尼或芬太尼复合异丙酚麻醉与镇痛效果的比较

    目的分析瑞芬太尼异丙酚复合液用于麻醉与镇痛的效果并与芬太尼比较. 方法 80例要求终止妊娠的早孕妇女,随机分成瑞芬太尼(R组,n=36),芬太尼(F组,n=44),两组分别按0.5~1μg/kg静注瑞芬太尼或芬太尼,复合2.0~2.5mg/kg异丙酚.观察两组镇痛效果,异丙酚总用量、起效时间、苏醒时间、留院观察时间,不良反应发生率及呼吸循环变化. 结果两组起效时间、HR、SpO2、MAP变化差异无显著性;术中F组异丙酚追加量及总用量较R组多(P《0.05);苏醒时间、留观时间也显著长于R组(P 《0.01).R组镇痛效果较F组满意(P《0.05),不良反应如头晕、乏力发生率较F组低,但恶心呕吐发生率及对呼吸功能的影响两组相似. 结论瑞芬太尼复合异丙酚用于门诊无痛人流术与芬太尼药效、安全性相似,但镇痛效果较满意、苏醒快、留观时间短,特别适用于门诊手术.

    作者:吴多志;Lee Tat Leang;梁敏;孙蒙;周德华 刊期: 2006年第05期

  • 亚马逊利什曼原虫无鞭毛体的体外培养及其抗原性分析

    目的建立亚马逊利什曼原虫无鞭毛体体外培养方法,并用间接免疫荧光法分析其抗原特异性. 方法小鼠皮损组织处获得的无鞭毛体(Al)、由前鞭毛体转化来的无鞭毛体(Ap)、J774.G8巨噬细胞来源的无鞭毛体(Aj)置于改良后的Schneider's Drosophila培养基,pH 4.6、33℃条件下培养,取培养物光镜下观察并用间接免疫荧光法分析. 结果三种不同来源无鞭毛体体外培养物光镜检查形态相似,均与纯培养获得的无鞭毛体一样.与无鞭毛体特异性蛋白P-8和P-4特异性单克隆抗体进行间接免疫荧光分析显示,三种不同来源的无鞭毛体均出现阳性,且浓度与部位相似.而前鞭毛体与抗P-8 单克隆抗体(mAb)染色呈弱阳性反应,与抗P-4单克隆抗体呈阴性反应.相反,GP-46/M-2 McAb与前鞭毛体染色呈强阳性反应,与无鞭毛体仅呈弱阳性反应. 结论在33℃条件下,用改良的Schneider's Drosophila培养基进行无鞭毛体体外培养获得成功.用阶段特异性单克隆抗体,进行间接免疫荧光分析法可鉴定亚马逊利什曼原虫的无鞭毛体.

    作者:王华民;Soong Lynn 刊期: 2006年第05期

  • 胰岛素样生长因子在人胎盘绒毛滋养层细胞的基因表达

    目的探讨胰岛素样生长因子系统(IGFs)在体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用. 方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测58例体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞中IGF-ImRNA、IGF-IImRNA、IGF-IRmRNA、IGF-IIRmRNA、IGFBP-1mRNA、IGFBP-2mRNA、IGFBP-3mRNA、IGFBP-4mRNA、IGFBP-5mRNA、IGFBP-6mRNA等10种胰岛素样生长因子的基因表达. 结果 58例体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞均有IGF-ImRNA、IGF-IImRNA的基因表达;56例存在IGF-IRmRNA、IGF-IImRNA、IGFBP-3mRNA的基因表达;2例同时检测出上述10种基因. 结论 IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入、增殖分化、胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌或旁分泌方式发挥重要的调节作用.

    作者:黄维加;肖桂初;肖晓友;莫凡;朱国都;朱新建 刊期: 2006年第05期

  • 深圳市环境非结核分枝杆菌的初步调查

    目的了解深圳市非结核分枝杆菌主要分布情况. 方法采集深圳市的几家大的市属医院和各区人民医院的处理前后污水以及医院候诊室、病房、输液室的空调过滤网灰尘,另外采集各区有代表性的居民生活区明沟污水和各区农贸市场的污水(特别是肉类、禽类、鱼类摊挡的污水),进行非结核分枝杆菌培养. 结果各样本培养的阳性率,医院污水处理前为87.5%、处理后为37.5%、医院空调为6.3%、农贸市场污水为54.5%、居民区生活污水为70.3%、沐浴场海水为25%、生态区海水为0、沙滩沙为0、宾馆喷泉为12.5%、生活区水景池水为0、居民游泳池水为0、山泉水、井水为0. 结论环境非结核分枝杆菌在医院污水、居民区明沟污水、农贸菜场污水存在较多,应引起重视,以便采取有效措施,保护人群的身体健康.

    作者:罗道泉;杨应周;林世平;谭卫国;梅国华;张爱根 刊期: 2006年第05期

  • 溶组织阿米巴的流行、诊断和治疗

    在近的几十年间,由于先进的技术,溶组织阿米巴与和迪斯帕内阿米巴得已区分使阿米巴的病原学重新定义.随着对阿米巴的认识深入,在阿米巴病的流行病学,诊断,治疗和控制方面也取得了更多的知识.

    作者:李丽;张再兴;周升 刊期: 2006年第05期

  • 蜂胶软胶囊的毒理学实验研究

    目的对蜂胶软胶囊的食用安全性进行毒理学实验评价. 方法采用急性毒性试验、遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验)和30d喂养试验进行检测评价. 结果雌雄小鼠经口LD50均大于20.0g/kg体重, Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性.30d喂养试验未见试验大鼠的生长发育、血液学、生化、脏体比及组织病理学有异常变化. 结论蜂胶软胶囊急性毒性分级属无毒级、无遗传毒性,初步估计大无损害作用剂量大于3.33g/kg体重,相当于人体推荐摄入量的100倍.

    作者:郑定仙;赵毓梅;黄业宇;林卫华 刊期: 2006年第05期

  • 两种方法治疗牙冠周炎的疗效比较

    目的观察碘甘油明胶海绵治疗下颌急性智牙冠周炎的临床效果. 方法选择门诊160例下颌智牙冠周炎患者,随机分为两组,每组80例,治疗组在智牙龈袋内置入碘甘油明胶海绵,对照组给予碘甘油. 结果两组有效率分别为91.25%和68.75%,两组比较差异有统计学意义(P《0.01). 结论碘甘油明胶海绵治疗下颌急性智牙冠周炎效果显著,值得临床推广应用.

    作者:黄勇 刊期: 2006年第05期

  • 深圳市结核病控制项目卫生经济学评价

    目的研究结核病控制项目中的资金投入与产生的社会、经济效益的关系,为财政、卫生部门的卫生资源投入与使用提供科学依据. 方法收集1993~2004年深圳市结核病控制项目资金的投入与结核病人诊断、治疗、管理等有关资料,采用成本-效果、成本-效用、成本-效益分析方法进行结核病控制项目卫生经济学评价. 结果 1993~2004年总治愈率达95.1%,每治愈1例活动性肺结核病人投入的费用为2 857元;直接挽回DALY206 912年,间接挽回DALY89 982年;DOTS方案与传统方法比较治疗涂阳病人节省费用5 029.6万元,控制传染源减少传染而节约费用5 464.3万元,挽回GDP损失769 712.6万元,避免因病造成的个人损失累计447 757.6万元;户籍、暂住涂阳患病率年均递降分别为8.7%、5.3%;原发性耐药率由1999年35.6%下降至2004年的16.6%;获得性耐药率由1999年32.7%下降至2004年的29.5%. 结论深圳市结核病控制项目减轻肺结核患者的经济负担,避免大量的经济损失,取得了显著的社会效益和经济效益.

    作者:吴清芳;徐继建;谭卫国;张玉华;许丽;罗育希;林光明 刊期: 2006年第05期

  • 儿童注意缺陷多动障碍综合治疗的疗效观察

    注意缺陷多动障碍(ADHD)亦称儿童多动综合征,简称多动症,是一种临床十分常见的儿童发育行为问题. 临床特点是智能正常或接近正常的小儿,表现出与年龄不相称的注意力不易集中、注意短暂、不分场合的过度活动、情绪易冲动和学习困难的一组症候群.

    作者:戴宪国;刘志华 刊期: 2006年第05期

  • 一宗伤寒流行疫情的调查

    目的分析一宗伤寒疫情的发生、流行原因和疫情控制效果,为人口密集地区的肠道传染病疫情的控制积累经验. 方法采用流行病学调查方法,对相关的饮水和饮食卫生进行分析,核实诊断,并进行病例对照研究,探讨流行原因及特点及评价控制措施的效果. 结果共发生28例伤寒确诊病例,波及11间工厂,造成本次流行的主要原因为外出进餐、饮用生水等. 结论饮食卫生管理不到位是造成疫情发生的主要因素.采取隔离治疗现症病人、严格进行消毒和对接触者及重点人群预防服药、加强饮食和饮水卫生监督管理等综合措施能及时有效控制伤寒的流行.

    作者:张起文;林琳;刘渠;张茂棠;董建;叶伟雄;陈嘉慧;王文玲 刊期: 2006年第05期

  • 脑卒中早期综合康复治疗的疗效观察

    目的观察脑卒中患者早期综合康复治疗与预后的关系. 方法 126例脑卒中患者按顺序随机分为综合康复组66例与对照组60例.综合康复组采用药物治疗、Bobath疗法、运动再学习等进行肢体功能训练、中频电疗、针灸治疗等综合治疗,对照组采用药物治疗.于治疗前和治疗5周后分别采用神经功能缺损程度评分标准评定疗效. 结果综合康复组神经功能缺损积分明显少于对照组(P《0.01).综合康复组和对照组的有效率分别为93.9%和76.7%(χ2=7.658,P《0.01).差异有显著性意义. 结论脑卒中患者早期综合康复治疗,能降低其神经功能缺损积分,提高疗效.

    作者:李惠华;梁珍;彭明霞;李仁义 刊期: 2006年第05期

  • 颅脑损伤并发医院下呼吸道感染的危险因素分析

    目的探讨重型颅脑损伤患者并发医院下呼吸道感染(NP)的危险因素. 方法对68例重型颅脑损伤住院患者进行回顾性调查,统计学处理分析. 结果重型颅脑损伤并发医院下呼吸道感染率55.9%(38/68),气管切开组NP发生率73.7%(28/68)(P<0.001),昏迷时间对照,并发NP组明显延长,平均分别为27.39及4.04d(P<0.001). 结论用logistic回归分析表明,昏迷时间、气管切开分别为重型颅脑损伤并发NP的独立危险因素.

    作者:周信永;马煜 刊期: 2006年第05期

  • 乳腺癌P53蛋白表达及其血清抗体检测分析

    目的探讨乳腺癌患者P53蛋白及抗体表达情况. 方法采用免疫PCR方法检测血清抗P53蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织P53蛋白表达. 结果乳腺癌患者血清抗P53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗P53蛋白抗体均为阴性(P《0.01).P53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗P53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于P53蛋白阴性表达组,血清P53抗体测定与P53蛋白表达密切相关(P《0.01). 结论检测血清抗P53蛋白抗体是检测组织P53蛋白理想的替代工具,可作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.

    作者:范火亮 刊期: 2006年第05期

  • 健康体检者总蛋白、白蛋白、球蛋白浓度及A/G分析

    目的了解深圳市健康人员血清中总蛋白(TP)浓度、白蛋白(ALB)浓度、球蛋白(GLB)浓度以及白蛋白与球蛋白比值(A/G)情况. 方法对477例20~70岁健康人群血清中TP浓度、ALB浓度、GLB浓度以及白蛋白与球蛋白比值(A/G)检测结果进行分析. 结果 TP血清浓度升高为47.6%(213/447);GLB血清浓度升高为73.4%(328/447);ALB血清浓度升高为0.004%(2/447),A/G下降为55.0%(246/447). 结论 TP血清浓度、GLB血清浓度随着生活水平提高而增高,A/G却下降了,应重新确定其正常参考值范围.

    作者:罗俊生;黄龙;郑定容;赖玉华 刊期: 2006年第05期

  • 1993~2004年深圳市龙岗区病残儿医学鉴定情况分析

    目的探讨婴幼儿出生缺陷发生原因,为优生优育制订有效预防措施. 方法根据国家人口计生委《病残儿医学鉴定管理办法》及《病残儿医学鉴定诊断标准及其父母再生育指导原则》,对龙岗区辖区范围内1993~2004年间上报的102例病残儿资料进行审查和分析. 结果智力低下病残儿共41例,占40.2%;神经及精神类疾病较其他系统疾病多,共62例,占62.8%;遗传性疾病有17例,占16.6%,其余为非遗传性疾病.智力低下原因不明者占31.7%,产程窒息者占21.9%. 结论要提高出生人口素质,避免出生缺陷患儿,必须普及优生优育知识,开展孕前筛查、加强围产期保健监护及合理治疗.

    作者:蔡敏 刊期: 2006年第05期

中国热带医学杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会;海南疾病预防控制中心