学术投稿

甲1型流感病毒新分离株HA 基因的序列分析

王希良;严冰;段佩若;张励力;韩洪彦

关键词:甲1型流感病毒, 血凝素, 基因分析
摘要:目的 研究新分离的H1N1亚型流感病毒株的HA1基因序列。方法 甲型流感病毒通过鸡胚增殖后提取RNA、逆转录合成cDNA,经PCR扩增和产物纯化构建重组质粒,用双脱氧链终止法进行核苷酸序列测定并进行基因特性分析。结果 新分离到的3株流感病毒株(H1N1)HA1区基因长度为981 bp,编码327个氨基酸;与A/桂防/10/94和A/Bayern/07/95(H1N1)标准株比较其同源性分别为92.8%和91.3%,丢失了第130位氨基酸和304位糖基化位点;新分离的3株甲型流感病毒株(H1N1)HA1区氨基酸同源性高达98%;A/桂防/10/94和A/Bayern /07/95(H1N1)毒株HN1氨基酸的同源性高达96%。结论 新分离到的3株H1N1毒株HA编码氨基酸不同于A/Bayern/07/95(H1N1)和A/桂防/10/94(H1N1)标准株,它们可能为新的甲型流感病毒变异株。
免疫学杂志相关文献
  • 甲1型流感病毒新分离株HA 基因的序列分析

    目的 研究新分离的H1N1亚型流感病毒株的HA1基因序列。方法 甲型流感病毒通过鸡胚增殖后提取RNA、逆转录合成cDNA,经PCR扩增和产物纯化构建重组质粒,用双脱氧链终止法进行核苷酸序列测定并进行基因特性分析。结果 新分离到的3株流感病毒株(H1N1)HA1区基因长度为981 bp,编码327个氨基酸;与A/桂防/10/94和A/Bayern/07/95(H1N1)标准株比较其同源性分别为92.8%和91.3%,丢失了第130位氨基酸和304位糖基化位点;新分离的3株甲型流感病毒株(H1N1)HA1区氨基酸同源性高达98%;A/桂防/10/94和A/Bayern /07/95(H1N1)毒株HN1氨基酸的同源性高达96%。结论 新分离到的3株H1N1毒株HA编码氨基酸不同于A/Bayern/07/95(H1N1)和A/桂防/10/94(H1N1)标准株,它们可能为新的甲型流感病毒变异株。

    作者:王希良;严冰;段佩若;张励力;韩洪彦 刊期: 2001年第02期

  • 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中IL-18表达水平

    目的 探讨白细胞介素18(IL-18)在乙型肝炎病毒感染中的作用。方法 应用流式细胞免疫学方法,对30例慢性乙型肝炎活动期、缓解期,15例HBS Ag阳性无症状携带者,10例正常对照外周血单个核细胞(PBMC)IL-18的表达进行检测。结果 无症状携带者表达低,慢性乙型肝炎缓解期低于正常对照(P<0.01),活动期与正常对照无显著差异(P=0.25)。活动期IL-18的表达与肝组织炎症活动度有关 (P<0.01),与血清ALT水平呈正相关(r=0.63,P<0.01)。结论 IL-18与慢性乙型肝炎病情的活动相关,与肝组织炎症程度相关。

    作者:文维群;章廉;胡章勇;张明霞;肖红;钱毅 刊期: 2001年第02期

  • 脂多糖模式识别受体的研究进展

    G-细菌的脂多糖(LPS)是重要的病原体相关模式分子。PAMPs均可被动物作为外来分子进行识别。LPS能激发机体细胞因子IL-1、TNF-α等活性分子的合成,对感染具有十分重要的作用。LPS是通过什么受体怎样将信号传入免疫细胞并启动免疫反应的,人们一直都不十分清楚。近年来,一种名为Toll蛋白的发现,使人们对机体识别LPS机制的认识向前跨进了一大步。本文试对该模式识别受体的研究进展做一综述。

    作者:顾长国;李磊 刊期: 2001年第02期

  • 甲胎蛋白生物半衰期与肝癌复发转移的关系

    目的 阐明甲胎蛋白生物半衰期(AFP T1/2)与原发性肝癌(PHC)治疗后复发与转移的关系。方法 用单克隆双抗体夹心两步法测定AFP含量;按T1/2=0.3 dT/log(AFP1/AFP2)分别计算介入和射频治疗PHC患者AFP T1/2。结果 当AFP T1/2>1.5 d时预测PHC患者治疗后复发转移的敏感性、特异性及总符合率(准确度)分别为87.5%、89.3%、88.5%。介入组为82.35%、83.3%、82.75%;射频组为93.3%、93.75%、93.5%。60例患者在200 d内未发生复发转移的患者与发生复发转移或死亡患者之间的AFP T1/2差异非常显著(P<0.001)。结论 AFP T1/2是预测PHC患者发生转移复发的早期预测指标,它不仅为其后续治疗的监测提供了可靠参数,而且也是评价疗效的良好指标。

    作者:刘树林;齐为民;李斌;张丽君 刊期: 2001年第02期

  • 人衰变加速因子在酵母细胞表面的呈现

    目的 为获得能在酵母表面正确折叠的人衰变加速因子。方法 通过PCR技术从DAF- pBluescript M13-(Amp+)质粒扩增出全长的DAF cDNA,酶切后克隆到酵母表面呈现载体pYD1,构建DAF-pYD1重组质粒,转化酵母细胞,流式细胞仪检测所呈现的DAF。结果 通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有DAF分子的表达,并且此表面呈现的DAF与针对DAF不同表位的3株单抗均能结合。结论 酵母表面呈现的DAF保持了天然DAF分子的构象,为进一步构建DAF的突变体库奠定了基础。

    作者:郭波;谢佩蓉;邹强;郑萍 刊期: 2001年第02期

  • 自身免疫性甲状腺病CTLA-4基因外显子1 A/G49多态性研究

    目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4( CTLA- 4)基因外显子1的49位点A/G多态性与自身免疫性甲状腺病(AITDs)的相关性。方法 采用多聚酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析122例自身免疫甲状腺病患者,其中Graves’病(GD)87例,桥本甲状腺炎(HT)35例,84例健康对照的CTLA-4基因外显子1的49位点基因型。采用ELISA技术检测AITDs患者甲状腺功能,间接免疫荧光法检测甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺抗过氧化物酶抗体(TPO Ab)。结果 AITDs患者CTLA-4/G49等位基因频率显著高于对照组(P<0.000 1,其中GD组P<0.000 1,HT组P<0.01);GD、HT组按性别分层分析后发现 CTLA-4/G49等位基因在不同性别的分布均无显著性差异。结论 CTLA-4基因外显子1G49等位基因与AITDs显著相关;GD、HT患者A/G49等位基因的分布与性别无关。

    作者:王娈;王斐;马瑞欣;于宏伟 刊期: 2001年第02期

  • 尿白介素-8检测在狼疮性肾炎病情判断中的价值

    目的 探讨尿白介素-8(IL-8)检测在狼疮性肾炎(LN)病情判断中的价值。方法 应用ELISA双抗体夹心法检测38例LN患者尿IL-8水平。结果 ①LN患者肾功正常组和肾功不全代偿期组尿IL-8水平显著高于健康人(P<0.001),且肾功不全代偿期组尿IL-8水平显著高于肾功能正常组(P<0.01),高尿IL-8水平患者伴较高的血沉值和较低的补体C3值。②出现白细胞尿的LN患者尿IL-8水平显著高于其它患者(P<0.05)。③环磷酰胺静脉冲击加强的松治疗4周后,LN患者尿IL-8水平显著降低(P<0.01)。结论 尿IL-8水平的变化可能有助于判断狼疮活动和肾损害程度。LN患者非感染性白细胞尿的出现可能与尿IL-8水平增高有关。环磷酰胺和强的松可能通过抑制免疫细胞和肾固有细胞产生IL-8而取得疗效。

    作者:范兴忠;李新东;潘宝安;李世荣;徐新伟 刊期: 2001年第02期

  • 胰岛素促进犬在体心肌细胞葡萄糖转运子4基因表达

    目的 探索胰岛素促进心肌细胞葡萄糖摄取增加的机制。方法 采用Northern法分析心肌GLUT4 mRNA和免疫法分析心肌GLUT4多肽。结果 胰岛素刺激心肌GLUT4 mRNA和GLUT4多肽表达增加1~1.2倍。同时伴随心肌葡萄糖摄取增多。结论 胰岛素能刺激GLUT4 mRNA和GLUT4多肽表达,使GLUT4数增加,进而促进心肌葡萄糖摄取增多,胰岛素刺激心肌细胞GLUT4表达,可能是心肌增加葡萄糖摄取的重要分子学机制之一。

    作者:殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;王咏梅;武瑞美;孔宪涛 刊期: 2001年第02期

  • 热化疗对荷瘤小鼠淋巴细胞转化指数及IL-2活性的影响

    热化疗作为一种肿瘤治疗的新方法,其有效性已得到公认[1],人们普遍认为它的作用是广泛的。热化疗除了直接杀伤肿瘤细胞以及增强局部化疗药效外[2],还可以刺激免疫系统的功能,增加CD3+ T、CD4+T细胞的数量,提高CD4+/CD8+的比值[3,4],但是其对T细胞功能状态有无改善尚不清楚。本实验的目的旨在研究热化疗后T细胞功能的变化,进一步探讨热化疗的机制以及它与单独热疗、化疗相比的优越性,以促进其在临床的应用和推广。1 材料与方法1.1 动物 BALB/C纯系小白鼠50只(华西医科大学钩端螺旋体病研究室提供),8周龄,雌雄各半,体质量雄鼠:22~24 g,雌鼠21~23 g。分笼标准饲料喂养,自由饮水、摄食。

    作者:张平;王升志;戴萍;魏大鹏;赵宗容;蔡美英 刊期: 2001年第02期

  • 人CD154基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析

    目的 构建人CD154基因真核细胞表达载体。方法 采用RT-PCR方法,从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中扩增得到820 bp的人CD154 cDNA片段,再用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,限制性内切酶酶切分析重组质粒和DNA序列分析。结果 人CD154 cDNA已经正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中。结论 本研究为探讨CD154分子与淋巴细胞活化的关系及其信号传导机制,为进一步用于抗移植排斥反应的研究,或对由于CD154遗传缺陷所致的免疫缺陷病的基因治疗奠定了基础。

    作者:张春艳;宁波;李树浓;张志方;冯炼强 刊期: 2001年第02期

  • 《免疫学杂志》欢迎订阅 欢迎投稿

    《免疫学杂志》是由中国免疫学会和第三军医大学主办的、向国内外公开发行的国家级学术刊物。自1985年创刊以来,先后被确定为国家中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊并被美国化学文摘(CA)收录。  其主要栏目有免疫学进展、基础免疫学、临床免疫学、免疫学技术与方法、综述与讲座、短篇报道、简迅等,适合各级医务人员、医学生、免疫学工作者和相关学科的人员阅读。欢迎订阅,欢迎投稿。  《免疫学杂志》为双月刊,国际流行大16开本,全铜版纸精美印刷,每期80页。邮发代号:78-32。每期定价:12元,全年定价:72元。欢迎广大读者前往当地邮局订阅。若错过邮局收订时间或需补订以往各期的订户,可直接与本刊编辑部联系。联系地址:重庆市高滩岩《免疫学杂志》编辑部;邮编:400038,电话:(023)68752237 联系人:陈菁华,朱健利。

    作者: 刊期: 2001年第02期

  • 甲基对氧磷人工抗原的合成及鉴定

    目的 合成甲基对氧磷(M1600)人工抗原。方法 用醋酸-锌粉盐酸还原对氧磷,制备氨基甲基对氧磷,重氮化法使氨基甲基对氧磷与牛血清白蛋白(BSA)及中国鲎血蓝蛋白(TTH)偶合,合成人工抗原M1600-BSA、M1600-TTH。结果 M1600-BSA免疫新西兰兔10周后,双向琼脂扩散试验和间接ELISA检测,证明得到了高价且具有较好特异性的多抗血清。结论 成功地合成了甲基对氧磷人工抗原,为其免疫分析方法的建立提供了条件。

    作者:张卫国;马兆扬 刊期: 2001年第02期

  • HDAg和bcl-2、bax在丁型肝炎病人肝组织中的表达及相关性

    目的 探讨bcl-2、bax在丁型肝炎发病机理中的作用。方法 采用免疫组化双标记染色和连续切片技术,检测77例丁型肝炎病人肝组织HDAg、bcl-2和bax表达,以67例乙型肝炎作对照。结果 HDAg以肝细胞核表达为主,bcl-2以肝细胞浆及核膜表达为主,bax以肝细胞浆表达为主,胞核也可呈阳性表达。bax和HDAg表达及分布有相关性,在各临床类型肝炎中的表达强度有显著性差异(P<0.01)。结论 HDV感染可诱导肝细胞表达bax,增强bax 促细胞凋亡作用,bcl-2/bax途径介导的细胞凋亡在丁型肝炎发病机理中可能有一定作用。

    作者:顾小红;李奇芬;王宇明 刊期: 2001年第02期

  • 新型芋螺毒素SO3抗血清的研制

    芋螺毒素是从海洋软体动物——芋螺的毒液中提取出来的小分子肽类毒素[1],它通常由10~30个氨基酸组成,并具有“低分子量、高亲合力、高度专一”等特点,现已广泛应用于神经科学、肽化学、分子生物学等学科的研究中,有的已应用于镇痛药的临床研究中。SO3是从线纹芋螺中提取的具有镇痛作用的新基因[2],目前已进入临床前研究。我们通过化学合成法及折叠得到SO3正确折叠产物,为药代动力学测定需要,开展了SO3抗体的制备研究。由于SO3高度亲水且分子量小,直接免疫于动物极难产生抗体。为此,我们用50%的戊二醛使SO3分别与BSA(牛血清白蛋白)和OVA(卵清白蛋白)交联在一起[3],然后用人工抗原SO3-BSA免疫家兔,经过49 d后,获得了效价为1∶2万的抗SO3抗体。

    作者:于芳;戴秋云;刘凤云;周艳荣;黄培堂 刊期: 2001年第02期

  • Th细胞在幽门螺杆菌疫苗诱导肠粘膜免疫中的调节作用

    幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,并且与胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的发生发展密切相关[1]。采用疫苗预防、治疗Hp感染,已成为近年来的研究热点[1]。本研究采用Hp全菌超声上清和佐剂大肠杆菌不耐热肠毒素口服免疫BALB/c小鼠,从分子水平分析肠粘膜免疫主要诱导部位派伊尔小结(PP)的Th1、Th2细胞在粘膜免疫应答中的调节作用,为Hp口服疫苗研制提供免疫学依据。

    作者:于长青;邹全明;王缚鲲;张卫军 刊期: 2001年第02期

  • MAGE-1基因在人食管癌中的表达及基因克隆

    目的 研究MAGE-1基因在人食管癌中的表达,分析MAGE-1抗原能否作为食管癌的治疗性候选疫苗。方法 采用RT-PCR方法检测了MAGE-1基因在30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达;并从食管癌组织中扩增了MAGE-1 cDNA全长序列,经酶切后与pET-30a(+)质粒载体连接,经初步酶切鉴定后,进行DNA序列分析,获得克隆基因的核苷酸序列。结果 MAGE-1基因在食管癌组织中的表达率为43%(13/30),在30例相应癌旁正常组织中未见表达;成功地克隆了MAGE-1 cDNA全长序列。结论 由于MAGE-1基因在食管癌中高频率表达以及MAGE-1抗原具有HLA-I类分子限制性CTL识别表位,因此,MAGE-1抗原可以作为食管癌免疫治疗的候选疫苗。

    作者:彭良平;王贵齐;冉宇靓;刘海燕;孙立新;遇珑;杨治华 刊期: 2001年第02期

  • 超抗原SEA对外周血T细胞的活化作用

    目的 研究超抗原SEA对外周血T淋巴细胞的活化作用。方法 用SEA刺激人外周血T淋巴细胞,观察细胞的DNA合成、形态、IL-2的产生、细胞表型以及凋亡情况。结果 SEA对T淋巴细胞的促增殖作用在浓度为100 ng/mL强,在第2、3d达高峰;首次或多次刺激不改变T淋巴细胞的CD4+CD8+表型;首次刺激24h内未见明显凋亡;但再次刺激24 h内即有明显凋亡;加入rhIL-2 2 d凋亡现象消失。结论 超抗原SEA对T淋巴细胞的促增殖作用与其浓度、作用时间有关,并且SEA首次或多次刺激对CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞起同等的活化作用。

    作者:许桂莲;朱锡华;杨劲 刊期: 2001年第02期

  • ConA增强MΦ吞噬功能、杀瘤效应及产生效应分子的研究

    目的 了解ConA在体内对小鼠腹腔MΦ吞噬功能、细胞毒作用及产生NO、TNF-α、IL-1的影响。方法 分别测MΦ吞噬鸡红细胞的能力,以S180为靶细胞测MΦ依赖的细胞毒作用。以griess试剂、L929细胞MTT检测法、胸腺细胞增殖法测MΦ产生NO、TNF-α、IL-1的水平。结果 ConA活化的腹腔MΦ吞噬鸡红细胞的能力以及对S180细胞的细胞毒作用显著强于PBS对照组(P<0.01),并产生较高水平的NO、TNF-α、IL-1。结论 ConA能活化MΦ产生NO等效应分子,发挥对MΦ的免疫调节作用。

    作者:高立芬;刘君炎;汤红明;屈雪菊;蒋正明 刊期: 2001年第02期

  • 大肠杆菌表达人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位跨膜区成份

    目的 重组表达人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位跨膜区成份。方法 采用DNA重组技术将尿素酶B亚单位3'端732 bp基因片段克隆至pET11C载体上,转化宿主菌BL21(DE3) E.coli,IPTG诱导,SDS-PAGE及Western-blot分析表达情况。结果 成功构建了含UreB 0.7 kb片段的重组质粒pET-UreB0.7,并表达了具有免疫反应性的分子量约28 000 u的重组蛋白,表达率为19.8%。结论 重组的尿素酶B亚单位跨膜区成份为研究其相关生物学特性奠定了重要基础,亦可作为Hp疫苗的成分用于Hp感染的预防和治疗。

    作者:毛旭虎;鲁东水;郭红;吴超;王缚鲲;邹全明 刊期: 2001年第02期

  • 类风湿关节炎患者血清sTNF-R、TNF-α的变化

    目的 为探讨类风湿关节炎(RA)与可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNF-R)、TNF-α、TNF-α/sTNF-R比值的关系。方法 应用双抗体夹心ELISA法检测了活动期RA(28例),稳定期RA(12例)及健康人(30例)血清中sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ、TNF-α的水平。结果 活动期RA患者血清sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ、TNF-α水平明显高于健康人及稳定期RA组, P均<0.01。稳定期RA患者血清sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ、TNF-α水平亦明显高于健康人,P<0.01。在RA患者中,血清sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ水平与ESR、CRP、Ritchie index呈显著正相关,与类风湿因子(RF)水平无相关性。RA患者治疗3个月后sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ及TNF-α/ sTNF R比值显著下降。结论 RA患者血清sTNF-RⅠ、sTNFR-Ⅱ水平显著增高,且与疾病活动度呈正相关。测定血清sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ、TNF-α/sTNF-R水平可作为RA诊断,监测疾病活动、治疗及判断预后的一项有意义的实验室指标。

    作者:李萍;刘显红;赵丽娟 刊期: 2001年第02期

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主管:第三军医大学

主办:第三军医大学,中国免疫学会