目的:探讨人参皂苷Rg1对退变人腰椎间盘髓核细胞(HNPCs)生长的调控及其作用机制.方法:培养正常HNPCs,构建HNPCs的氧糖剥夺(OGD)模型模拟退变HNPCs的微环境.光镜观察正常HNPCs和OGD组细胞的形态.分别给予25、50和100 μmol/L人参皂苷Rg1后,用real-time PCR和Western blot法分别检测II型胶原(collagen II)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达,CCK-8法检测细胞活力的变化,real-time PCR法检测增殖蛋白Ki67的转录水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路蛋白的表达.加入Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl后,检测其对Wnt/β-catenin通路蛋白、细胞活性、细胞凋亡及基质合成蛋白表达的影响.结果:正常HNPCs细胞贴壁快,形态呈类圆形,胞质丰富;OGD组细胞贴壁较慢,形态多为长梭形,胞质减少,初步证实了退变HNPCs模型构建成功.与HNPCs组相比,OGD组中collagen II和aggrecan的mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05),人参皂苷Rg1可升高collagen II和aggrecan的表达(P<0.05).与HNPCs组相比,OGD组的细胞活力显著降低(P<0.05),Ki67表达下调(P<0.05),而不同浓度的人参皂苷Rg1可增加细胞活力和上调Ki67的表达(P<0.05).同时,不同浓度的人参皂苷Rg1可减少OGD增加的细胞凋亡和caspase-3活性(均P<0.05).此外,100 μmol/L人参皂苷Rg1可显著减弱OGD触发的Wnt/β-catenin通路的活化(P<0.05).而用Wnt通路激动剂LiCl处理后可明显减弱人参皂苷Rg1对OGD细胞的保护作用(P<0.05),提示该通路参与人参皂苷Rg1对退变HNPCs的保护作用.结论:人参皂苷Rg1可通过抑制Wnt/β-catenin通路促进HNPCs的生长和胞外基质合成.本研究将为退变HNPCs的防治提供新的思路.
作者：鲁花；于露；甄欢欢；刘汝银；岳宗进 刊期： 2018年第04期
目的:探讨皮质酮(CORT)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的抑制作用及与黄嘌呤氧化酶(XO)的关系.方法:用LPS构建小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎症模型.运用不同浓度(0~900 μg/L)的CORT处理巨噬细胞后提取细胞总蛋白,Western blot法检测细胞NL-RP3和caspase-1的蛋白水平;按处理因素分组为:对照组、LPS组、LPS+CORT组和LPS+别嘌呤醇(allopurinol)组,分别于0、0.5、1、1.5和2 h提取细胞成分,运用real-time PCR和Western blot 法检测细胞NLRP3和XO的mR-NA和蛋白水平.结果:高于700 μg/L的CORT可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中NLRP3的表达及caspase-1的活化(P<0.05);与LPS组相比,LPS+CORT在下调LPS诱导的巨噬细胞NLRP3表达的同时抑制XO的表达(P<0.05),LPS+allopurinol组巨噬细胞NLRP3的表达减少(P<0.05).结论:较高浓度的CORT能抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3的表达,而CORT的抑制作用可能与其下调XO的表达水平有关.
作者：吴玲；田泽丹；陈楠；胡薇；周成富；杜权 刊期： 2018年第04期
目的:探讨类抵抗素分子α/炎症区域分子1(RELMα/FIZZ1)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞MO-VAS Ca2+/CaM信号通路的调控及小鼠主动脉内皮细胞(MAEC)管腔形成能力的影响.方法:将离体培养的MAEC分为pGSadeno-HK组、pGSadeno-RELMα/FIZZ1组、pGSadeno-shRNA control 组和pGSadeno-shRNA RELMα/FIZZ1组,MTT法检测细胞活力的变化,基质胶管腔形成实验检测血管生成情况;同时将离体培养的MOVAS细胞分为 pGSadeno-HK 组、pGSadeno-RELMα/FIZZ1组、pGSadeno-shRNA control 组和 pGSadeno-shRNA RELMα/FIZZ1组,MTT法检测MOVAS的细胞活力变化,Fluo-3 AM钙离子荧光探针和流式细胞术检测细胞内的Ca2+浓度,并用real-time PCR和Western blot检测钙调蛋白(CaM)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的mRNA和蛋白表达水平.结果:过表达RELMα/FIZZ1显著提高MAEC的细胞活力,管腔形成数目显著增加(P<0.05);干扰RELMα/FIZZ1的表达显著抑制MAEC的细胞活力和管腔形成(P<0.05).过表达RELMα/FIZZ1显著促进MOVAS的细胞活力,细胞内Ca2+平均荧光强度增强,CaM和MLCK的mRNA和蛋白的表达水平均显著上调(P<0.05);干扰RELMα/FIZZ1的表达显著抑制MOVAS的细胞活力,细胞内Ca2+平均荧光强度降低,CaM和MLCK的mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P<0.05).结论:RELMα/FIZZ1信号通路参与血管管腔的生成,其机制可能是通过细胞内Ca2+浓度变化调节细胞内CaM和MLCK的表达,进而对管腔相应功能产生影响.
作者：储新；李彤；杨永曜 刊期： 2018年第04期
目的:探讨微小RNA(miR)-145过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制.方法:运用Li-pofectamine 2000将miR-145-mimic转染4株宫颈癌细胞系HeLa、CaSki、C33A和SiHa,以NC-mimic为阴性对照,并以real-time PCR检测子宫内膜基质细胞(ESC)和4株宫颈癌细胞中miR-145的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后于不同时点运用MTT法和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力和细胞凋亡率;运用免疫荧光检测组蛋白γH2AX的表达水平;Western blot检测细胞中螺旋酶样转录因子(HLTF)的蛋白表达水平.结果:miR-145在ESC中高表达,而在4株宫颈癌细胞中均呈低表达,转染miR-145-mimic后4株宫项癌细胞中miR-145的表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P<0.05).相同条件下,辐照后miR-145过表达的宫颈癌细胞的活力显著低于NC-mimic组细胞,72 h的细胞凋亡率明显增加(P<0.05).免疫荧光观察结果显示miR-145过表达显著促进电离辐射诱导的γH2AX激活;Western blot结果显示,miR-145过表达显著抑制HLTF的表达,与NC-mim-ic比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:miR-145在正常子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌细胞系中低表达;miR-145过表达可显著抑制宫颈癌细胞的活力,促进电离辐射诱导的细胞凋亡.miR-145过表达增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制可能与下调HLTF表达、抑制DNA损伤修复、促进细胞凋亡有关.
作者：徐杨；赵丽君；王春 刊期： 2018年第04期
目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肺腺癌A549细胞的作用及机制.方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理A549细胞,分别通过MTT实验和划痕愈合实验观察A549细胞的活力和迁移能力,应用qPCR检测CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)的表达;加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regula-ted kinases,MAPK/ERK)通路抑制剂U0126后,应用Western blot 法检测MAPK/ERK信号通路活化相关蛋白ERK及其磷酸化水平,划痕愈合实验检测抑制MAPK/ERK通路对HS-5-CM效果的影响,应用Western blot检测CX3CR1的表达情况.结果:HS-5-CM可以促进A549细胞的活力和迁移能力(P<0.01),同时A549细胞中CX3CR1的表达升高(P<0.05).MAPK/ERK通路抑制剂U0126可以有效抑制HS-5-CM处理后MAPK/ERK通路的激活(P<0.01),抑制HS-5-CM促进A549细胞迁移的能力(P<0.01),同时下调CX3CR1的表达(P<0.05).结论:HS-5细胞介导的微环境可以促进A549细胞的活力和迁移,其机制可能涉及MAPK/ERK信号通路的活化和CX3CR1的表达.
作者：李汪；陈思成；孙艳婷；李具琼；朱颖；张盟浩；陈彬；施琼 刊期： 2018年第04期
目的:观察人参二醇组皂苷(PDS)对免疫介导型再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路蛋白激酶及脾脏调节性T细胞的诱导作用,探讨其治疗再障的作用机制.方法:用[60Co]-γ射线5.0 Gy全身照射BALB/c小鼠,后经尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液,制备免疫介导型再障小鼠模型.60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,PDS低、中、高剂量组,环孢素组.不同浓度药物灌胃治疗14 d测定各组小鼠外周血象,观察骨髓病理切片,Western blot 法及免疫组织化学法测定骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平,流式细胞术检测脾脏调节性T细胞比例.结果:再障小鼠外周血全血细胞减少,骨髓呈抑制状态;PDS治疗能够显著升高再障小鼠外周血象,增加脾脏调节性T细胞比例,呈剂量依赖性(P<0.05).PDS中、高剂量组显著上调骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(P<0.05).结论:PDS能有效促进造血,上调再障模型小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路多种蛋白激酶的表达,可能是PDS促进骨髓造血功能恢复的作用机制之一.另外,PDS对再障模型小鼠的免疫功能有一定的调节作用.
作者：张爱萍；高瑞兰；尹利明；罗梅宏；成志；夏乐敏；郑智茵 刊期： 2018年第04期
目的:研究右美托咪定对失血性休克/复苏(HS/R)大鼠急性肾损伤的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:生理盐水对照组(NS组)、右美托咪定组(D组)、HS/R组和HS/R+D组.容量复苏后6h处死动物,采集血和肾组织标本.检测各组血清中肌酐和尿素氮的浓度;检测各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量和白细胞介素1β(IL-1β)含量;Western blot法检测肾组织血红素加氧酶1(HO-1)和核因子κB(NF-κB)的表达;HE染色观察肾组织病理学改变.结果:与NS组比较,HS/R组MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05);与HS/R组比较,HS/R+D组MDA含量降低, SOD活性升高(P<0.05).与NS组比较,HS/R组TNF-α和IL-1β含量升高(P<0.05);与HS/R组比较,HS/R+D组TNF-α和IL-1β含量降低(P<0.05).与NS组比较,HS/R组肾组织NF-κB表达升高;与HS组比较,HS/R+D组肾组织NF-κB表达降低(P<0.05).与NS组比较,HS/R组肾组织HO-1表达升高;与HS/R组比较,HS/R+D组HO-1表达进一步升高(P<0.05).肾组织病理学检查可见,右美托咪定治疗可明显减轻肾细胞变性、坏死及炎性细胞浸润程度.结论:右美托咪定可减轻HS/R大鼠急性肾损伤,其作用机制可能与上调HO-1表达及抑制NF-κB表达有关.
作者：姜远旭；夏明珠；黄强；戴中亮；李亚丽；张中军 刊期： 2018年第04期
目的:研究长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(MIAT)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及细胞系中的表达情况及其对 NSCLC 细胞功能的影响.方法:利用 Gene Expression Omnibus(GEO)数据库提取GSE19804和GSE30219数据集的生物信息学资料和临床预后资料,分析MIAT在NSCLC组织和正常肺组织中的表达差异,以及MIAT表达水平与NSCLC患者生存期的关系;用qPCR检测25对NSCLC肿瘤组织和其癌旁组织,以及NSCLC细胞系A549、NCI-H266和NCI-H1299及人正常支气管上皮细胞系HBE中MIAT的表达情况;将MIAT siRNA(si-MIAT)和对照序列(si-NC)分别转染NSCLC细胞系A549,采用流式细胞术、CCK-8实验和细胞集落形成实验检测2组细胞的增殖情况,并且用qPCR和Western blot实验检测2组细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)的表达情况.结果:GSE19804数据集分析显示MIAT在NSCLC组织中的表达高于正常肺组织(P<0.05),GSE30219数据集分析显示MIAT高表达患者的生存期显著短于低表达患者(P<0.01).此外,与癌旁正常组织和HBE 细胞相比较,NSCLC 组织和细胞系中MIAT的表达水平升高(P <0.05);si-MIAT组A549细胞中MIAT表达水平明显低于si-NC组(P<0.01),且细胞活力和细胞集落数均低于si-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);同时,相较于si-NC组,si-MIAT组cyclin D1的表达受到明显抑制(P<0.05),而CDKN1A的表达明显升高(P<0.05).结论:NSCLC组织及细胞系中MIAT呈高表达,沉默MIAT 表达可明显抑制NSCLC恶性增殖的表型.MIAT可作为NSCLC靶向治疗的潜在靶标.
作者：裴振；霍小蕾；田向阳；张毅强；贾建桃；韩玲娜 刊期： 2018年第04期
目的:观察益气化瘀化痰方(YHHD)对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的作用及其可能机制.方法:48只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO模型组、替米沙坦组及YHHD低、中、高剂量组,每组8只.除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型.各药物干预组以相应浓度的药物灌胃,模型组及假手术组以等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续用药12周后采集标本并处死大鼠,检测大鼠血清胱抑素C(Cys-C)和尿酸(UA)的水平,PAS染色观察肾组织形态学改变,Masson染色计算肾间质胶原纤维沉积率,real-time PCR检测肾组织Krüppel样因子15(KLF15)、高迁移率族盒蛋白1(HMGB1)、核因子κB(NF-κB)及其抑制蛋白IκB、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、纤维连接蛋白(FN)、I 型胶原(Col I)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的mRNA表达水平,Western blot检测KLF15、HMGB1和NF-κB的蛋白表达,免疫组化检测MCP-1的蛋白表达.结果:与假手术组相比,模型组的胶原纤维沉积率及Cys-C水平显著升高(P<0.05),KLF15的mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05),HMGB1、NF-κB、IκB、MCP-1、IL-1β、TNF-α、FN、Col I和ColⅣ的mRNA及HMGB1、NF-κB和MCP-1的蛋白表达显著上调(P<0.05);与模型组相比,YHHD中、高剂量组及替米沙坦组的胶原纤维沉积率显著降低(P<0.05),且HMGB1和NF-κB的蛋白表达以及IL-1β和TNF-α的mRNA表达显著下调(P<0.05);YHHD高剂量组及替米沙坦组KLF15的蛋白表达显著上调(P<0.05),MCP-1的蛋白表达及FN的mRNA表达显著下调(P<0.05);YHHD高剂量组KLF15的mRNA表达显著上调(P<0.05),MCP-1、Col I和Col Ⅳ的mRNA表达明显下调(P<0.05);YHHD各剂量组及替米沙坦组NF-κB和IκB的mRNA表达及Cys-C水平明显降低(P<0.05).各组间UA水平的差异无统计学显著性.结论:益气化瘀化痰方对肾间质纤维化的抑制作用呈剂量依赖性,高剂量组作用明显;其机制可能与上调KLF15表达、抑制肾组织HMGB1和NF-κB及其下游炎症相关因子的表达有关.
作者：张永越；曹文富；田晟；吴庆 刊期： 2018年第04期
目的:探讨舒洛地特(sulodexide,SDX)对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞(human dermal micro-vascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影响及其分子机制.方法:对HDMECs进行分组培养:常氧对照组在常氧状态下培养;低氧对照组于1% O2、5% CO2、37 ℃条件孵箱培养24 h;处理组用不同浓度(0.25、0.5和1 LSU/mL)舒洛地特作用于HDMECs低氧培养24 h.CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;caspase-3活性检测试剂盒测定细胞内caspase-3活性;Western blot和real-time PCR检测促凋亡因子P53、Bax和caspase-3及凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白及mRNA表达.结果:低氧状态下舒洛地特可提高HDMECs生长活力,降低其凋亡率,抑制促凋亡因子P53、Bax和caspase-3的表达以及caspase-3的活性,提高抑凋亡因子Bcl-2的表达.结论:舒洛地特可以抑制低氧状态下人真皮微血管内皮细胞的凋亡,其分子机制与抑制线粒体凋亡通路有关.
作者：桂福强；罗鸿；刘洪；朱桦；张矛；赵渝 刊期： 2018年第04期
目的:研究克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞EA.hy926生长及分泌活性的影响,探讨克拉屈滨通过抑制内皮细胞活力发挥抗肿瘤的作用机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度(0.4~1 μmol/L)克拉屈滨对内皮细胞活力的影响;用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot 检测细胞凋亡和周期相关蛋白的表达水平;用ELISA法检测上清液肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平;Gries法检测上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量.结果:克拉屈滨作用48 h对细胞活力有明显的抑制作用,其半数抑制浓度约为3.644 μmol/L,随药物浓度升高和作用时间的延长而抑制作用增强.克拉屈滨作用48 h后,细胞周期被明显阻滞在S期, 0.4 μmol/L时S期细胞约43.74%,1 μmol/L时S期细胞约77.23%.克拉屈滨处理后,各组内皮细胞的凋亡率没有显著差异.克拉屈滨处理后,caspase-3与Bax蛋白水平无明显差异;p21水平随着药物浓度增加而增高,而p53水平随着药物浓度增加而降低(P<0.05).克拉屈滨处理后,上清液中TGF-β1和TNF-α水平升高,VEGF含量减少(P<0.05).克拉屈滨处理后,上清液中NO 含量减少(P <0.05).结论:克拉屈滨能明显抑制内皮细胞EA.hy926的活力,其主要机制与细胞周期阻滞有关.同时克拉屈滨能促进内皮细胞EA.hy926分泌TNF-α和TGF-β1,抑制其分泌VEGF和NO.
作者：陈丽璇；张红；王小华；段锋祺；周兆；刘革修 刊期： 2018年第04期
目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制.方法:分别用qPCR 和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的mRNA和蛋白表达水平.采用脂质体转染法将PGRN-siRNA转染A549细胞,采用qPCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平.结果:PGRN在A549细胞中的mRNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P<0.05);转染PGRN-siRNA后A549细胞中PGRN的mRNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P<0.05).沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cy-clin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P<0.05).结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力, PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用.
作者：孙艳婷；陈思成；李汪；李具琼；朱颖；施琼 刊期： 2018年第04期
目的:探讨下调X盒结合蛋白1(XBP1)表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响.方法:qPCR检测脑胶质瘤组织中XBP1的mRNA表达.将干扰XBP1表达的小干扰RNA(XBP1-siRNA组)转染人脑胶质瘤U251细胞,同时设置正常对照(control)组(细胞无特殊处理)和阴性对照(NC-siRNA)组(转染不具有任何干扰作用的siRNA),转染48 h后,用qPCR检测3组细胞中XBP1的mRNA表达;Western blot 检测XBP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期素D1(cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:XBP1在脑胶质瘤中的表达显著高于瘤旁组织(P<0.05);转染XBP1-siRNA后,细胞中XBP1的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05);NC-siRNA组细胞活力、细胞周期变化、细胞凋亡率及PCNA、Bcl-2、Bax、cyclin D1、PI3K和p-Akt的蛋白水平与control组比较差异无统计学显著性;XBP1-siRNA组细胞活力、S期细胞及PCNA、Bcl-2、cyclin D1、PI3K和p-Akt蛋白水平均显著低于control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Bax蛋白表达均显著高于control 组(P<0.05).结论:下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达可降低肿瘤细胞的活力,阻滞细胞于G1期,并促进细胞的凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关.
作者：周林裕；谢万福；代永庆；包志军；胡骁；包春燕 刊期： 2018年第04期
目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的mRNA(P3 mRNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用.方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 mRNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 mRNA与miR-483-5p表达水平之间的关系.(2)将IGF2基因P3 mRNA的5'端非翻译区(5'UTR)克隆入pGL3启动子载体,构建P3 mRNA 5'UTR野生型(pGL3-P3-5'UTR-WT)及P3 mRNA 5'UTR突变型(pGL3-P3-5'UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染HeLa、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性.(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control 转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 mRNA表达水平的变化.(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 mRNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 mRNA稳定性影响.(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响.结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 mRNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P<0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 mRNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P<0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 mRNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关.(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3 mRNA 5'UTR的同源位点互补结合可促进P3 mRNA的表达.(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 mRNA表达水平的增高.(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 mRNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 mRNA稳定性.(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力.结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 mRNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生.
作者：马彦；朱翠萍；胡建军；李悅行；王敏；汤绍辉 刊期： 2018年第04期
目的:探讨微小RNA-126-5p(microRNA-126-5p)在阿霉素诱导的小鼠损伤心肌中的表达及在心肌细胞损伤中的作用.方法:采用BALB/c小鼠腹腔注射阿霉素的方法制备小鼠急、慢性阿霉素心肌损伤模型,苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠心肌形态学改变,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定小鼠血清中的LDH活性,应用Power-Lab 数据采集分析系统检测小鼠心肌损伤情况.采用real-time PCR法检测阿霉素刺激大鼠心肌细胞株H9c2后microRNA-126-5p的表达情况;转染microRNA-126-5p模拟物或抑制物,检测microRNA-126-5p模拟物及抑制物对阿霉素刺激后H9c2细胞microRNA-12-5p表达水平、LDH释放及caspase-3活化情况的影响.结果:在小鼠急、慢性阿霉素心肌损伤模型中,HE染色发现小鼠心肌纤维排列紊乱,肌原纤维溶解,局部有炎症细胞浸润;血清LDH释放增多(P<0.05);左心室等容舒张期压力下降大速率(-dp/dtmax)及左心室等容收缩期压力上升大速率(+dp/dtmax)下降;real-time PCR检测发现小鼠心肌中microRNA-126-5p的表达显著上调.阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤中也伴有microRNA-126-5p表达明显上调;进一步采用microRNA-126-5p模拟物与抑制物转染H9c2细胞,发现与单纯阿霉素处理组相比,microRNA-126-5p模拟物组LDH的释放增加,caspase-3活性升高,而microRNA-126-5p抑制物组结果则与之相反.结论:阿霉素可诱导小鼠心肌细胞microRNA-126-5p的表达明显升高,进而降低心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡,发挥促心肌损伤作用.
作者：唐玉婷；刘艳娟；童中艺；李媛彬；吕青兰；孙慧；刘炫佑；刘梅冬；蒋碧梅；肖献忠 刊期： 2018年第04期
目的:探讨2型糖尿病前期患者循环血清中微小RNA(miR)-103b的表达变化与临床意义,并分析其靶基因生物信息学功能.方法:收集糖尿病前期患者(n=48)、糖尿病无并发症患者(n=47)及正常健康人群(n=50)的血清标本,用real-time PCR检测各血清样本中miR-103b的表达水平,并比较3组miR-103b表达水平的差异与临床病理特征之间的相关性,运用受试者工作特征(ROC)曲线评估诊断效率及特异性.利用生物信息学技术,对hsa-miR-103b的特征、进化保守性、靶基因功能以及GO信号通路等进行深入分析.结果:Real-time PCR结果显示,与健康人群相比,循环血清中miR-103b在糖尿病前期及糖尿病无并发症患者的表达显著降低(P<0.05).ROC曲线分析结果显示,糖尿病前期患者血清中miR-103b的ROC曲线下面积(AUC)达到0.877,提示miR-103b是糖尿病前期具有较高灵敏性和特异性的临床诊断标志物.生物信息学分析结果表明,hsa-miR-103b定位于人染色体5q34,并在10个物种间具有高度的保守性.靶基因预测共获得53个潜在的功能性靶向基因.进一步应用DAVID数据库和GO数据库进行靶基因功能富集分类,结果显示miR-103b靶基因功能主要涉及蛋白质氨基酸的磷酸化、RNA聚合酶II启动子转录调控和DNA依赖的转录调节,参与细胞周期、细胞生长增殖和细胞凋亡,调节功能蛋白结合并与PIP3结合激活下游信号通路.这些功能因子主要富集于MAPK、Wnt、胰岛素和Ras等信号通路,少量因子参与调节细胞周期和脂肪酸代谢等生理过程.结论:2型糖尿病前期患者血清中低水平miR-103b可能是潜在的2型糖尿病早期超前诊断标志物和治疗靶点.
作者：罗宇霖；方丹；刘钰熙；贺朝晖；吴剑波；罗茂 刊期： 2018年第04期
目的:观察黄芪甲苷(AS-IV)通过调控蛋白激酶D1(PKD1)-组蛋白脱乙酰酶5(HDAC5)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路促心肌梗死大鼠血管新生的作用并分析其可能的作用机制.方法:采用经典的左冠状动脉前降支结扎术复制心肌梗死模型后,将大鼠分成模型组、AS-IV治疗组和AS-IV+CID755673(PKD1阻断剂)组,另设假手术对照组和二甲基亚砜(DMSO)对照组,均采用尾静脉注射的给药方式.4周后处死大鼠,应用HE染色和Masson染色分析左心室心肌组织病理学变化;应用RT-PCR分析心肌组织中PKD1、HDAC5和VEGF mRNA的表达;免疫组化及Western blot法分析心肌组织中PKD1、VEGF及HDAC5蛋白的表达.结果:组织病理学分析表明,假手术组和DMSO组大鼠心肌组织形态正常,而模型组大鼠心肌组织形态紊乱,心肌细胞坏死和纤维化明显;AS-IV治疗后,心肌组织形态改善明显,且新生的血管数量明显增多;AS-IV+CID755673处理后大鼠心肌组织形态再次趋向紊乱,坏死细胞增多,部分血管闭合.模型组心肌组织中PKD1、HDAC5和VEGF的mRNA和蛋白表达明显低于假手术组和DMSO组(P<0.05),而AS-IV组显著高于模型组(P<0.01),AS-IV+CID755673组明显低于AS-IV组(P<0.05).结论:AS-IV可部分通过调控PKD1-HDAC5-VEGF信号通路发挥促大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用.
作者：付卫云；刘暖；王延柯；赵威；李星；杨雷；毛秉豫 刊期： 2018年第04期
目的:探讨微小RNA(miR)-381-3p对抑郁症大鼠海马区神经元损伤的影响及可能的调控机制.方法:通过皮质酮(CORT)皮下注射制备大鼠抑郁症模型并予以氟西汀治疗,通过测定大鼠体重、旷场试验和生化指标判定氟西汀的治疗效果,检测海马区miR-381-3p、脑源性神经营养因子(BNDF)、Bcl-2和Bax的表达.新生大鼠海马神经元预转染miR-381-3p inhibitor后,用CORT培养细胞,评估细胞存活率,检测细胞中miR-381-3p、BNDF、Bcl-2和Bax的表达.利用萤光素酶报告基因法验证miR-381-3p对BNDF的靶向调控作用.结果:与抑郁症模型大鼠相比,氟西汀治疗可增加大鼠的体重,增加跨场水平活动次数,提高去甲肾上腺素含量,抑制海马区miR-381-3p表达,并促进海马区BNDF的表达.沉默miR-381-3p可逆转CORT的效应,提高海马神经元的存活率,促进BD-NF和Bcl-2的表达,抑制Bax的表达.miR-381-3p靶向调控BNDF表达.结论:沉默miR-381-3p可减轻大鼠海马神经元CORT损伤,其机制可能与上调BNDF表达有关.
作者：雷娜；张学平；王创 刊期： 2018年第04期
目的:研究R848联合聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]对树突状细胞(DC)成熟的影响及DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用.方法:分离人外周血单个核细胞,诱导其成为DC,用A549细胞裂解物即肿瘤细胞裂解物(TCL)作为抗原,R848(Toll样受体7/8激动剂)联合Poly(I:C)(Toll样受体3激动剂)作用于DC,流式细胞术分析DC表面共刺激分子;将抗原刺激活化后的DC与T淋巴细胞混合培养7 d,收集培养上清液和CTL,检测上清液中白细胞介素12(IL-12)p70、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;CTL与肺腺癌A549细胞共培养16 h,观察其杀伤效果.结果:DC-R848+Poly(I:C)组DC表面CD83和CD80的表达较DC-TCL组显著提高(P<0.01);同时可明显刺激DC分泌IL-12 p70(P<0.01);此外,DC-R848+Poly (I:C)组较DC-TCL组对肺腺癌A549细胞杀伤效果亦显著提高(P<0.01);DC-R848+Poly(I:C)组IFN-γ和TNF-α的分泌水平较DC-TCL组均显著提高(P<0.01).结论:R848联合Poly(I:C)作用于DC可显著促进其成熟、活化,并增强其抗原呈递作用及CTL对肺腺癌细胞的特异性杀伤作用.
作者：黄雪；王策；陈尚；杨晓菲；郑媛媛；王京波；李富荣 刊期： 2018年第04期
目的:观察肝癌高表达抗原MAGEC2的改造表位是否有HLA-A2限制性抗肿瘤能力.方法:通过NetCTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分选取MAGEC2的HLA-A2限制性表位;替换MAGEC2抗原锚定位点氨基酸获得改造肽;结合力实验检测候选表位与T2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验和胞内因子染色检测候选表位肽诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌干扰素γ(IFN-γ)的能力,体外细胞毒实验检测诱导CTL的能力.结果:P248、P248-1Y、P356、P356-1Y、P356-2L和P356-1Y2L具有较好的结合力,且P248-1Y和P356-1Y2L等改造肽与HLA-A2的结合力高于原肽.胞内因子染色和ELISPOT实验结果显示,表位肽P248、P248-1Y、P356和P356-1Y2L诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力,且P248-1Y和P356-1Y2L诱导特异性T细胞免疫分泌的IFN-γ略高于原肽(P<0.05).细胞毒实验结果显示表位肽P248、P248-1Y、P356和P356-1Y2L对HepG2细胞均有一定的杀伤作用,且P248-1Y和P356-1Y2L特异性CTLs对HepG2细胞杀伤率高于原肽特异性CTLs(P<0.05).结论:MAGEC2抗原改造表位P248-1Y和P356-1Y2L分别与天然表位P248和P356相比有更高的HLA-A2分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且改造肽抗肿瘤免疫效应强于天然表位.P248-1Y和P356-1Y2L是优秀的MAGEC2抗原的HLA-A2限制性CTL候选表位,可以成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位.
作者：贺晓静；贺洁 刊期： 2018年第04期
目的:观察糖肾方对糖尿病(DM)肝损伤的作用及其对肝组织沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)表达的影响.方法:采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为DM模型组及糖肾方低、中、高剂量组,另设正常对照组.糖肾方给药12周后检测空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;放射免疫法检测血清胰岛素(FINS)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA技术检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1(IL-1)含量;羟胺法和TBA法分别测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;Western blot技术测定SIRT1和PGC-1α蛋白的表达;HE染色和Masson染色法检测肝组织病理变化.结果:与正常对照组相比,DM模型组血清FBG、TG、ALT、AST、FINS、HOMA-IR、TNF-α和IL-1均明显升高(P<0.01);肝组织MDA含量升高,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达降低(P<0.01);病理结果显示肝细胞呈明显脂肪变,局灶性坏死伴炎细胞浸润,门管区和小叶间可见胶原纤维增生.与DM模型组比较,糖肾方各治疗组FBG、TG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST均明显降低(P<0.05);肝脏组织损伤、炎症和纤维化程度明显改善;肝组织MDA水平降低,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05).结论:糖肾方可能通过促进SIRT1和PGC-1α蛋白表达来改善胰岛素抵抗和氧化应激,从而减轻糖尿病肝损伤.
作者：杜月光；陈伟燕；姜雪尔；潘晶；柴可夫 刊期： 2018年第04期
目的:探讨脱氢表雄酮对高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,以及全反式维甲酸(ATRA)在这一过程中的作用.方法:细胞实验:将培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)分为正常对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+DHEA组、ox-LDL+DHEA+ATRA组和DHEA组.各组细胞均加入相应药物作用24 h,采用RT-PCR和细胞酶联免疫吸附法检测各组细胞ICAM-1 mRNA及蛋白的表达情况.动物实验:将大耳白兔分为正常对照组、高脂组、高脂+DHEA组、高脂+DHEA+ATRA组和DHEA组.各组白兔均用相应饲料喂饲10周后处死动物,采用RT-PCR和免疫组织化学等方法检测各组白兔主动脉ICAM-1的mRNA及蛋白的表达情况.结果:细胞实验:ox-LDL 组 ICAM-1的表达明显高于正常对照组(P <0.05);与ox-LDL组相比,ox-LDL+DHEA组ICAM-1的表达明显降低(P<0.05);DHEA组与正常对照组ICAM-1的表达无显著差异(P>0.05); ox-LDL+DHEA+ATRA组与ox-LDL+DHEA组ICAM-1的表达无显著差异(P>0.05).动物实验:高脂组主动脉ICAM-1的表达明显高于正常对照组(P<0.05);与高脂组相比,高脂+DHEA组ICAM-1的表达明显降低(P<0.05);DHEA组与正常对照组ICAM-1的表达无显著差异(P>0.05);高脂+DHEA+ATRA组与高脂+DHEA组ICAM-1的表达无显著差异(P>0.05).结论:DHEA能够抑制高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一,而全反式维甲酸对DHEA的这一作用并无明显增强作用.
作者：周颖；赵敏；李桃；张辉；肖芳 刊期： 2018年第04期
目的:探讨催产素(oxytocin)对新生大鼠缺氧缺血性损伤后海马CA1区神经元的作用及机制.方法:采用氧糖剥夺(OGD)制备体外缺氧缺血模型,取8只7~10日龄新生大鼠的急性分离脑片(6~8片/只)随机分为4组,即对照组、OGD 20 min组、OGD 40 min组和OGD+oxytocin组,进行TO-PRO-3染色实验观察催产素对神经元的作用.另取20只新生大鼠脑片随机分为4组,分别是OGD组、OGD+oxytocin组、OGD+dVOT(催产素受体阻断剂)+oxytocin组和OGD+bicuculline(GABAA受体阻断剂)+oxytocin组,用全细胞膜片钳记录不同药物作用下海马神经元缺氧去极化的出现时间.结果:TO-PRO-3染色结果显示海马CA1区神经元死亡数量随着氧糖剥夺时间延长而增加,催产素能显著减少OGD所致的死亡神经元数目(P<0.05).全细胞膜片钳记录结果显示,催产素可使缺氧去极化时间显著延长;dVOT及bicuculline可以消除这种效应.结论:催产素能减轻新生大鼠海马CA1区神经元缺氧缺血性损伤,其机制可能是通过结合催产素受体,增强抑制性神经传递,从而产生神经保护作用.
作者：谢常宁；吴俭；王欣萌；彭斯聪；吴静；肖凌慧；柳涛 刊期： 2018年第04期
目的:探讨微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因.方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,qPCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin 表达情况.生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染NCM460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因.结果:在NCM460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达.生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因.在NCM460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的mRNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的mRNA和蛋白水平.萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因.结论:在NCM460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达.ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达.
作者：李超；刘敏；刘志华 刊期： 2018年第04期
目的:探讨去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)减轻脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对内皮细胞损伤的作用.方法:用100 mg/L LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞HUVEC-12损伤,用不同浓度NE处理后,使用real-time PCR及Western blot法检测各组内皮细胞血管内皮型钙黏素(VE-cadherin)表达的变化,ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10的浓度,活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测细胞内的ROS水平.结果:LPS可显著抑制内皮细胞中VE-cadherin mRNA 和蛋白的表达水平,同时伴有TNF-α、IL-1β和IL-2升高及IL-10下降,ROS含量明显增加;不同浓度的NE呈剂量依赖性地上调VE-cadherin的mRNA和蛋白表达,减轻细胞内的氧化应激水平,并部分逆转TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10的变化.结论:不同浓度NE能明显逆转LPS造成的内皮细胞损伤,其机制可能与上调VE-cadherin、减轻细胞的氧化应激及炎性介质水平有关.
作者：胡静；龙燕琼；岳阳；刘作良 刊期： 2018年第04期
环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类存在于多种生物体内通过共价键结合的闭合环状非编码RNA.circRNAs 性质稳定,不易被核酸酶水解,广泛存在于不同器官组织中并呈现出时空特异性和组织特异性[1] .近年来,随着现代生物信息学技术的发展,circRNAs 的生成机制及生物学特性已为越来越多的学者所熟知,但其对靶基因表达的调控作用还不甚明朗.
作者：刘燕芳；逯丹；徐安定 刊期： 2018年第04期
2017 年世界肾脏病日报告显示,目前中国慢性肾脏病患者超过1 亿,接受透析的患者人数近40万,透析年治疗费用约10 万,政府医保和患者都面临着巨大的经济负担.肾脏疾病病因复杂,大多数发病机制尚不完全清楚,目前治疗也多依赖于经验性、对症性治疗.
作者：李婷婷；王淑君；杨陈；吴洪銮；李志航；刘华锋；刘伟敬 刊期： 2018年第04期
目的:采用连续喂养高脂饮食(high-fat diet,HFD)结合单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)的方法建立小鼠2型糖尿病心肌病模型.方法:将40只5~6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分成2组(每组各20只):对照(control)组,持续以普通饲料喂养;HFD+STZ组,持续以HFD喂养,并于造模第5周注射STZ(100 mg/kg).于造模实验开始(第0周)、第5周、第6周、第11周和第16周,测量体重和血糖,并于第11周和第16周分别对control组和HFD+STZ组小鼠进行心功能检测、胰岛素水平检测、组织学观察和心肌细胞凋亡分析.结果:造模过程中HFD+STZ组小鼠各时期的体重均大于control组(P<0.05),注射完STZ后小鼠体重略有下降,但仍高于control组.注射STZ 1周后,HFD+STZ组小鼠空腹血糖值均持续高于13.89 mmol/L.在造模第11周和16周时,HFD+STZ组小鼠胰岛素水平与control组相比均有降低(P<0.05).心功能检测、组织学观察和心肌细胞凋亡分析显示,造模第11周时,HFD+STZ组小鼠的超声、心肌细胞面积和凋亡率等指标与control组相比变化不明显;造模第16周,HFD+STZ组小鼠出现心室功能障碍,心肌细胞肥大,心肌细胞的面积和心肌细胞凋亡率明显大于control组(P<0.05).结论:采用连续喂养HFD结合单次注射STZ可成功建立小鼠2型糖尿病心肌病模型.
作者：王金鑫；段鹏；朱庆磊 刊期： 2018年第04期
