目的探讨HBV作为基因治疗载体的可能性并检验其联合表达反义RNA和显性阴性突变体抗HBV的作用.方法在表达完整HBV颗粒的质粒上,经基因修饰后联合表达S区反义RNA和核心-p蛋白的融合蛋白,整合于具有HBV复制的2.2.15细胞,形成细胞克隆,ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBV DNA,PCR检测上清液中重组HBV颗粒.HBV全基因经删除包装信号ε区后,插入到G418抗性pCI-neo载体,转染HepG2细胞系,用G418筛选形成细胞克隆,检测表达HBsAg及HBcAg较多者作为HBV包装细胞系,进一步转染表达复制缺损型HBV的质粒,经两种抗生素同时筛选,PCR方法观察上清液中的病毒.结果2.2.15-pMEP4组、2.2.15-CP组、2.2.15-SAS组和2.2.15-CPAS组,对HBsAg平均抑制率分别为2.74%±3.83%、40.08%±2.05%(t=35.5,P＜0.01)、66.54%±4.45%(t=42.3,P＜0.01)和73.68%±5.07%(t=51.9,P＜0.01);对HBeAg平均抑制率分别为4.46%±4.25%、52.86%±1.32%(t=36.2,P＜0.01)、26.36%±1.69%(t=22.3,P＜0.01)和59.28%±2.10%(t=39.0,P＜0.01);对HBV复制的抑制率分别为0、82.0%、59.9%和96.6%.在各治疗组培养上清液中均能检测出重组HBV颗粒.证明包装细胞系具有HBsAg和HBcAg表达,pMEP-CPAS质粒转染G418抗性包装细胞系,在细胞培养上清液中检出重组HBV,未检出野生型HBV.结论在同一载体上联合表达S区反义RNA及核心蛋白与部分P蛋白的融合蛋白,具有较单一机制更强的抗HBV作用;经修饰后的HBV基因组在野生型HBV辅助下,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒.包装细胞系能为复制缺损型HBV提供包装,但效率较低.
作者：孙殿兴；胡大荣；邬光惠；胡学玲；李娟；范公忍 刊期： 2002年第04期
目的探讨靶向反义硫代寡脱氧核苷酸(asODN)在乙型肝炎(HBV)病毒转基因小鼠体内抗病毒疗效. 方法设计合成针对HBV pre-C/C基因的反义硫代寡脱氧核苷酸:5′-CATGCCCCAAAGCCAC-3′,并以半乳糖-多聚赖氨酸(Gal15-PLL)作肝靶向载体.将12只血清HBsAg, HBV DNA阳性的转基因小鼠等分为Gal15-PLL-asODN治疗组及生理盐水对照组.靶向反义硫代寡脱氧核苷酸以每天每克体重15μg剂量,尾静脉注射给药,共12d;对照组用同样体积生理盐水同样方法给药. 结果注射Gal15-PLL-asODN 6d后,血清HBsAg已有下降(P＜0.05);12d时显著下降(P＜0.01), 且血清HBV DNA转阴率为66.7%(4/6), 肝组织免疫组织化学HBsAg、HBcAg 阳性肝细胞数较对照组明显下降(P＜0.05);而生理盐水对照组无明显变化. 结论靶向反义硫代寡脱氧核苷酸在转基因小鼠体内能抑制HBV复制与抗原表达.
作者：钟森；郑素军；陈枫；温守明；王升启；张建军；邓存良 刊期： 2002年第04期
目的探讨庚型肝炎病毒(HGV)感染在重型肝炎发病中的作用. 方法采用RT-PCR及EIA法检测重型肝炎患者血清HGV RNA及抗-HGV阳性情况,并与临床肝功能、病死率进行比较. 结果各临床类型重型肝炎HGV感染率差异无显著性(χ2=2.54, P＞0.05),HGV感染病例ALT升高较低,间接胆红素(SBil)较高、A/G比值较低,病死率显著低于HGV(-)病例(χ2=4.68,0.01＜P＜0.05),单纯HGV感染少见. 结论庚型肝炎病毒感染不加重肝衰竭.
作者：熊良仕；梁润琴；崔素芬；周京国；邢燕 刊期： 2002年第04期
目的探讨乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系,为乙型肝炎的诊治、预防提供科学依据. 方法用实时荧光定量聚合酶链反应和ELISA检测HBV DNA和抗原抗体,统计分析不同抗原抗体模式的HBV DNA量. 结果在HBsAg和HBeAg阳性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml者占87.3%,其中＞107/ml者占66.7%;在HBsAg阳性,抗-HBe阳性模式中,HBV DNA拷贝数＜103/ml者占74.5%,＞107/ml者占8.3%;在HBsAg阳性,抗-HBc阳性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml者占48.0%,＞107/ml者占29.1%.HBeAg阳性模式HBV 载量显著高于HBeAg阴性模式(P＜0.01).抗-HBe阴性模式HBV载量显著高于抗-HBe阳性模式(P＜0.01).在HBsAg阴性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml占7.9%,1例拷贝数高达1.59×109/ml. 结论 HBeAg阳性模式HBV 载量显著高于HBeAg阴性模式,抗-HBe 阴性模式病毒载量显著高于抗-HBe阳性模式,HBeAg阳性模式中的少数人HBV载量很低,HBeAg阴性模式中少数人HBV载量很高,HBsAg阴性模式中少数人存在病毒复制,因此,对于一具体患者来说,根据抗原抗体模式,难以准确地判断病毒复制程度及其传染性的强弱.
作者：杨旭；罗红雨；张永红；钱焕英；曾晓波；黄力 刊期： 2002年第04期
目的建立乙型肝炎病毒(HBV)环化裸DNA转染原代大鼠肝细胞瞬时表达模型,为进一步研究肝细胞与HBV之间的互动关系奠定基础. 方法采用原代大鼠肝细胞(PRH)作为靶细胞,电转环化HBV DNA,于转染后1～10d各时点分别以Southern杂交和斑点杂交分析HBV DNA的复制中间体与复制形式,以IMX系统检测HBsAg、HBeAg,以western免疫印迹、免疫斑点印迹和免疫细胞化学法检测HBcAg,用RT-PCR检测HBV S/X mRNA,并采用电镜观察有无Dane颗粒合成.以单纯电击PRH为对照组. 结果 HBV环化裸DNA在PRH中的复制为游离型,可见rcDNA、cccDNA和ssDNA等复制中间体;表达的蛋白质产物、HBsAg于转染后各时点PRH裂解液中均可检测到(P/N值4.83～85.69,阳性≥2.1),峰值于1～3d,转染后1～10d平均P/N值为18.239±27.459;PRH培养上清液中未检测到HBsAg;HBeAg于PRH培养上清液和细胞裂解液中均呈阴性(P/N值＜2.1);HBcAg于转染后1～3d时点内检测到低度表达;HBV S mRNA为阳性,而X mRNA为阴性;电镜未观察到Dane颗粒. 结论 HBV环化裸DNA转染原代大鼠肝细胞瞬时表达模型稳定性、可重复性均良好.
作者：姚云清；张定凤；罗云；张大志；黄爱龙；王波；周卫平；任红；郭树华 刊期： 2002年第04期
目的探讨苦参素治疗慢性乙型肝炎的疗效,寻找治疗慢性乙型肝炎的有效方法. 方法采用多中心的开放、对照研究,治疗分4组,分别为苦参素、苦参素联合单磷酸阿糖腺苷、干扰素α1b及葡萄糖组,共治疗慢性乙型肝炎患者196例,观察ALT、AST 及病毒标志物的变化. 结果治疗结束时,苦参素组、苦参素与单磷酸阿糖腺苷联合治疗组及干扰素组的HBV DNA、HBeAg阴转率、抗-HBe的阳转率及ALT的复常率均较葡萄糖组高,4组HBV DNA的阴转率分别为42.3%、55.8%、40.7%和2.1%(P＜0.01),HBeAg阴转率分别为36.5%、39.5%、38.9%和10.6%(P＜0.05);抗-HBe的阳转率分别为25%、30.2%、25.9%和6.4%(P＜0.05).ALT的复常率分别为36.5%、41.9%、27.8%和8.5%(P＜0.05).随访12个月,HBV DNA和HBeAg的阴转率及抗-HBe的阳转率在苦参素组、联合治疗组和干扰素组差异无显著性(P＞0.05).总有效率分别为40.8%、60.8%和43.1%. 结论苦参素或苦参素联合单磷酸阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎有较好的HBV DNA及HBeAg阴转率和抗-HBe的阳转率,其远期抗病毒疗效与干扰素相似.
作者：于岩岩；王勤环；朱理珉；张清波；徐道振；郭雁宾；王兆荃；郭树华；周霞秋；张玲霞 刊期： 2002年第04期
随着人类基因组计划的完成,生命科学已经进入了后基因组时代,研究重心也从揭示生命的所有遗传信息转移到在整体水平上对功能的研究,这就是近几年国际上兴起的蛋白质组学(proteomics).蛋白质组从诞生之日起就受到各国学者及学术团体的重视,并应用到生命科学的各个领域, 在肝病研究方面已有作者进行了探索.
作者：耿长新；王吉耀 刊期： 2002年第04期
在HCV感染宿主过程中,病毒必须首先结合到靶细胞表面,经受体的介导进入细胞,然后才能复制,引起相关的病理变化;因此如何终止丙型肝炎的慢性化进展,特别是阻断HCV的感染过程是关键的问题[1].阻断HCV感染首先涉及到宿主细胞表面的HCV受体或辅助受体,相关的研究刚开始.现在初步研究结果证实:丙型肝炎病毒的包膜蛋白E1和E2可能是和靶细胞结合的配体,导致病毒进入宿主细胞.由于HCV基因的变异主要反映在病毒包膜E2蛋白,所以E2蛋白的高变区(HVR)决定了HCV的感染性[2].近年来发现丙型肝炎患者体内HCV RNA可以在血浆脂蛋白中检出[3],初步证实肝细胞膜上的低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDL-R)可以识别、结合和内化与低密度脂蛋白/极低密度脂蛋白结合的HCV,从而确定LDL-R为HCV受体[4, 5].此外Pileri等[6]报道病毒E2包膜蛋白可与CD81分子EC2(extro-cellular domain 2)区发生特异性结合,并与HCV进入细胞有直接关系,因而认为CD81可能也是HCV受体.我国是丙型肝炎高发区,目前国内鲜见上述受体和丙型肝炎关系的研究报道,下面就这两种受体的研究现状及其意义做一综述.
作者：刘明旭；王福生 刊期： 2002年第04期
我国的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者约有30%～50%是通过母婴传播形成的.接种乙型肝炎(乙肝)疫苗是预防慢性HBV感染及相关肝细胞肝癌的有效手段[1],但现行的免疫措施用于阻断HBV母婴传播时,仍有免疫失败发生.研究接种乙肝疫苗免疫失败的相关因素及机制进而制定相应对策是根除HBV流行的关键.
作者：王建设；朱启鎔 刊期： 2002年第04期
目的探讨阿司匹林对人肝癌生长的影响及是否能诱导其凋亡. 方法用3H-TdR掺入、形态学观察、DNA末端原位标记法(Tunel)和流式细胞术等方法研究阿司匹林对人肝癌细胞株SMMC-7721生长及诱导凋亡的作用;建立人肝癌裸鼠原位移植瘤模型,观察阿司匹林对肝癌移植瘤生长的影响. 结果阿司匹林能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长,当其浓度在1×10-1～1×10-7mol/L时,肝癌细胞3H-TdR掺入与浓度增加呈显著负相关(r＝-0.918,P＜0.01).经1×10-3mol/L阿司匹林作用后可见较多肝癌细胞呈典型的细胞凋亡形态学变化,凋亡指数为(8.90±1.32)%,对照组为 (0.50±0.35)%,两组比较,差异有显著性,流式细胞术也检测到其G1期前有一典型的亚二倍体凋亡峰,凋亡率为 12.79%.阿司匹林能显著抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤生长,抑瘤率为71.62%,实验中裸鼠存活率为100%,未见消化道出血、溃疡等不良反应. 结论阿司匹林能显著抑制人肝癌生长并能诱导其凋亡.
作者：汤丽平；唐承薇；王春晖 刊期： 2002年第04期
目的研究3种化疗药物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,探讨端粒酶与ERK在肝癌细胞凋亡过程中的调节作用及相互之间的关系. 方法用MTT法、流式细胞术检测法、端粒重复序列扩增法(TRAP法)、生物发光分析法及western blot检测法. 结果 3种化疗药物使肝癌细胞增殖受抑并诱发凋亡(细胞凋亡率分别为21.12%、28.83%、12.30%)的同时,端粒酶活性也有不同程度减低(抑制率分别为:0.28%±0.08%,0.25%±0.16%,0.24%±0.11%);处于活化状态的磷酸化ERK1/2蛋白表达水平下降. 结论 ERK通路可能是化疗药物下调端粒酶活性,进而促进细胞凋亡的机制之一.
作者：李登举；张瑶珍；曹文静；黄伟；刘文励 刊期： 2002年第04期
基因芯片技术是20世纪90年代末兴起的一项前沿生物技术.它是指将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地高密度地排列固定于玻片、硅片等固相载体上,然后与待测的标记样品的基因按碱基配对原理进行杂交,通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描,再经计算机软件处理,从而获取大量生命信息.
作者：林菊生 刊期： 2002年第04期
寻求一种切实可行的抗病毒方法有效地治疗慢性乙肝炎是当前病界的重要任务之一，为此我们对单磷酸阿糖腺苷（Ara-Amp）联合胸腺状与拉米夫定序贯治疗慢性乙型肝炎进行了研究.
作者：刘庄；谢雯；徐道振 刊期： 2002年第04期
我们用随机对照临床试验研究拉米夫定对乙型肝炎肝硬化的疗效现报道如下.
作者：林向飞；林秀英；韩清锡；王剑虹 刊期： 2002年第04期
我们应用体外肝星状细胞(HSC)培养技术,研究了丹参有效成分提取物——丹参单体IH764-3对HSC增殖与凋亡的影响,旨在探讨其抗肝纤维化机制.
作者：赵东强；姜慧卿；修贺明；张晓岚；姚希贤 刊期： 2002年第04期
组合型生物人工肝目前被认为是更接近自然肝脏、功能全面的人工肝支持手段[1].
作者：段钟平；韩大康；刘青；赵秀英；薛毅珑；黄春；赵春惠；汪俊韬 刊期： 2002年第04期
第3代诊断丙型肝炎病毒(HCV)感染免疫酶分析法(EIA)诊断试剂盒中增加了来自HCV非结构蛋白NS5抗原,但其敏感性和特异性均较低.
作者：窦晓光；李智伟；王兆荃；Yuri Khudyakov；Howard Fields 刊期： 2002年第04期
肝窦内皮细胞(sinusoid endothelial cell,SEC)不仅作为抗原提呈细胞参加移植肝免疫排斥反应,其损伤后还可导致供肝微循环紊乱,并终引起原发性移植肝无功能(primary graft non-function,PGF)的发生.我们从免疫组织化学和细胞超微结构等方面对心跳停搏供肝(non-heart-beating donor,NHBD)热缺血中SEC的表现进行研究.
作者：邵堂雷；李宏为；杨卫平；张明钧；陈皓；蔡伟耀 刊期： 2002年第04期
通过不同病因诱导的肝纤维化模型,从蛋白、核酸两个方面观察基质金属蛋白酶Ⅱ(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)表达状况,综合分析在不同病因作用下,MMP-2表达变化规律,探讨其在肝纤维化演进过程中的作用.
作者：陈平圣；翟为溶；周筱梅；张锦生；张月娥；凌玉琴 刊期： 2002年第04期
我们利用在大肠杆菌中表达的重组E2蛋白进行抗体检测并分析其临床意义.
作者：张申英；张欣欣；刘晶；卢敏；汪垣 刊期： 2002年第04期
目前用于病毒性肝炎诊断的实验室检验方法主要有病毒抗原、抗体的血清学试验和以PCR为主的病毒核酸测定试验.
作者：郑怀竞 刊期： 2002年第04期
基因芯片(gene chip),即DNA 芯片(DNA chip)代表的微阵列(microar-ray)技术,是集成了成千上万的网络状密集排列的基因探针,能够在同一时间内杂交分析大量的基因,迅速读取生命相关的基因信息的一种高通量分析技术.这种技术在基因诊断、基因表达、基因组研究、发现新基因及各种病原体的研究中具有广泛的应用前景.在肝脏疾病的研究中也具有十分重要的意义.
作者：成军 刊期： 2002年第04期
国外一直将肝性脑病列为急、慢性肝衰竭的必备条件.尽管部分学者提出将凝血酶原活动度(PTA)在40%以下的非脑病型肝功能不全者列为肝衰竭前期,但大多数学者仍同意只有出现脑病者才可诊断肝衰竭.目前认为,急性肝衰竭(AHF)与肝硬化所致肝性脑病在病理学上及肝性脑病形式均不一样,前者脑水肿更为突出[1].暴发性肝衰竭(FHF)既可发生于急性肝炎,亦可发生于慢性肝炎.现将有关重症肝炎/肝衰竭脑病包括肝性脑病和脑水肿防治研究进展综述如下.
作者：王宇明 刊期： 2002年第04期
目的对比肝癌细胞中p53、p16和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达强度的时段特征.方法按年周期3个时段采集肝癌组织标本,每1个时段20例,均为肝细胞型肝癌及Edmondson-Steinet分级控制在Ⅱ～Ⅲ级内,用免疫组织化学S-P法进行p53、p16和Cyclin D1蛋白表达实验,表达强度按等级数据用秩和检验方法进行时段对比.结果p16表达出现时段差异有显著性(H=10.334,P＜0.05),即4～7月份为表达高峰期.结论肝细胞癌变及其生长的基因调控的时间生物学机制,p16可能起到重要作用.
作者：余万霰；张永虹；蔡勇；周晓军 刊期： 2002年第04期
目的观察重组人肝细胞生成素(rhHPO)和肝部分切除迅速诱导瞬时早期反应基因表达情况.方法利用表达性差异显示分析技术和序列分析研究2/3肝部分切除后1h及原代培养大鼠肝细胞体系的选择性基因表达.结果揭示EST库中的大部分为瞬时早期反应基因,发现一种可能与肝再生调控相关的新基因PC3,North-ern杂交证实2/3肝部分切除可迅速诱导PC3基因的表达,其表达高峰为术后1～2 h.HPO在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅速诱导瞬时早期反应基因(c-fos、LRF-1和PC3等)表达.结论HPO和肝部分切除可迅速诱导瞬时早期反应基因表达,PC3基因是一种与肝再生调控密切相关的早期反应基因.
作者：王阁；张晓荣；胡辂；王军；冷恩仁；房殿春；杨晓明；张咏；贺福初 刊期： 2002年第04期
目的探讨HBsAg与结核杆菌热休克蛋白70(Mt.HSP70)融合表达质粒在真核细胞中的表达.方法用真核表达质粒pCI-neo作为载体构建HBsAg及其与Mt HSP70的融合表达质粒(pCI-S,pCI-S-HSP70);用脂质体介导的转染法将重组质粒转染HepG2细胞,48 h后,采用RT-PCR、免疫细胞化学和ELISA检测重组质粒在HepG2细胞中的表达.结果质粒pCI-S和pCI-S-HSP70转染的HepG2细胞总RNA用RT-PCR可检测到目的基因mRNA的表达:pCI-S和pCI-S-HSP70转染的HepG2细胞用免疫细胞化学检测,结果显示在胞浆及核周有大量的阳性颗粒;ELISA检测pCI-S转染的细胞培养上清液HBsAg为阳性,而pCI-S-HSP70转染的细胞培养上清液HBsAg为阴性;在细胞裂解液中,二者转染的细胞均为阳性.结论HBsAg与Mt.HSP70的融合表达质粒可在HepG2细胞中表达,但表达的融合蛋白不分泌出细胞外.
作者：梁增伟；兰英华；任红；李用国；蔡大川 刊期： 2002年第04期
我们从基因库中筛选出乙型肝炎病毒(HBV)高度保守序列片段,通过分子克隆操作,用芯片点样仪点到特制的玻片上,制成乙型肝炎基因诊断芯片,检测了99例乙型肝炎肝硬化患者肝组织标本,同时用免疫组织化学法、原位分子杂交法检测乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和HBV DNA.
作者：赵伟；刘伟；刘全俊；张林；周镇先；刘新珏 刊期： 2002年第04期
上海瑞金医院传染病科自1999年以来对数十例不明原因的肝功能损害患者做肝活检,其中1例经肝活检发现了早期血色病.
作者：龚启明；邓琳；周霞秋；肖家诚；朱延波 刊期： 2002年第04期
目的探讨一氧化氮(NO)在肝硬化睾丸功能障碍发生中的作用. 方法采用胆管结扎(BDL)复制肝硬化模型,应用硝酸酶还原法测定大鼠血清和睾丸组织匀浆的NO浓度,应用放射免疫分析法测定血清睾酮浓度,同时检测大鼠附睾精子密度和精子活率. 结果肝硬化(HC)组大鼠血清和睾丸组织匀浆NO水平分别为(4.165±1.162)μmol/L和(1.305±0.087)μmol/g,假手术(SO)组大鼠血清和睾丸组织匀浆NO水平分别为(0.535±0.237)μmol/L和(0.720±0.063)μmol/g,HC组显著高于SO组.HC组血清睾酮水平[(0.049±0.020)μg/L]、附睾精子活率(16.46%±4.84%)及精子密度[(86.89±33.17)×106个/ml]均显著低于SO组[分别为(2.680±0.403)μg/L、62.45%±9.21%和(299.43±53.85)×106个/ml],而持续给予小剂量NOS抑制剂L-NAME(HC-NAME组)(0.5mg@kg-1@d-1)达一周,HC-NAME组大鼠血清及睾丸组织NO水平分别为(1.975±0.406)μmol/L和(0.950±0.057)μmol/g,较HC组显著降低.同时HC-NAME组血清睾酮水平、附睾精子活率和精子密度较HC组均显著增高,分别为(0.993±0.179)μg/L、33.85%±4.93%和(188.94±38.34)×106个/ml. 结论 NO在肝硬化大鼠睾丸功能障碍发生中起重要作用,小剂量应用NOS抑制剂L-NAME,肝硬化大鼠NOS持续抑制引起的睾丸功能障碍得到不同程度改善,表明在治疗肝硬化睾丸功能障碍患者时体内给予NOS抑制剂的可能性.
作者：倪东升；王天才 刊期： 2002年第04期
目的研究维甲酸核内受体β(RARβ)转染血小板衍生生长因子(PDGF)激活的HSC后给予相应配体全反式维甲酸(ATRA)对细胞增殖、表型的影响. 方法质粒pCMV-script-RARβ转染经PDGF激活的大鼠HSC,western blot鉴定转染成功后,MTT法、BrdU掺入检测细胞生长情况,免疫细胞化学法检测α-SMA、肌间线蛋白的表达,western blot检测RARβ蛋白表达. 结果受体转染后再给予相应配体可使PDGF激活后HSC的RARβ受体表达升高至少维持144h,并使其增殖减慢,α-SMA、肌间线蛋白表达减弱,较空载组、PDGF组、未给予配体组、无关配体组差别均有显著性意义.结论 RARβ受体基因转染并给予ATRA可使激活的HSC增殖减慢、表型逆转.
作者：李华；张锦生；黄光存；张农；陈琦；张秀荣 刊期： 2002年第04期
