目的:利用mdr1+的人白血病和乳腺癌多药耐药(MDR)细胞系K562/A02和MCF-7/ADR研究咯萘啶(pyronaridine,PND)对MDR的逆转作用及其机制.方法:采用MTT法、荧光分光光度法、荧光显微镜法、流式细胞仪法和RT-PCR法分别测定PND单独或与阿霉素(DOX)合用,对肿瘤细胞的生长抑制、诱导凋亡、细胞内药物浓度、mdr1基因表达的影响.结果:PND对敏感及耐药细胞均具有生长抑制作用,半数抑制剂量(IC50)根据不同细胞在5.10-18.66μmol/L之间;低毒剂量PND显著增强DOX对耐药细胞的细胞毒和诱导凋亡作用,且增加DOX在耐药细胞内的蓄积及减少罗丹明(Rh123)的外排.RT-PCR结果显示,PND对mdr1基因无下调作用.结论:PND可作为第三代P-糖蛋白(P-gp)抑制剂,通过下调P-gp药物外排泵功能而产生强大的逆转MDR效应.
作者：齐静；杨纯正；王彩云；王树滨；杨铭；王金宏 刊期： 2002年第06期
目的:研究5-羟色胺(5-HT)对去甲肾上腺素(NE)诱导的大鼠肥厚心肌L-型钙电流(ICa)的影响.方法:大鼠腹腔注射NE建立心肌肥厚模型;酶解分离单个心室肌细胞;全细胞膜片箝记录ICa.结果:(1)腹腔注射NE第15天,大鼠左心室与体重比增加31.8%.(2)肥厚心肌细胞ICa与正常心肌细胞相比,明显增加0 mV时分别为4.5 pA/pF±0.5 pA/pF和3.5 pA/pF±0.3 pA/pF(P＜0.01).(3)5-HT可显著增加肥厚和正常心肌细胞ICa,并使大激活电流从0 mV降低至-10 mV;此外,5-HT增加ICa作用在肥厚心肌细胞更为显著.(4)稳态激活和失活实验发现,5-HT对稳态激活曲线无显著影响,而影响稳态失活曲线,使半失活电压从-39.5 mV±1.8mV升高至-27.8 mV±1.7 mV(P＜0.05),而不改变钙通道电压依赖性(斜率因子k无显著变化).结论:5-HT通过改变L-型钙通道稳态失活特征而显著增加ICa,此作用在肥厚心肌细胞更显著,提示在肥厚心肌5-HT更易于诱导心律失常发生.
作者：招明高；梅其炳；张延凤；熊晓云；卢宝华；邢斌；赵德化 刊期： 2002年第06期
目的:改良E-screen实验,提高其筛选具有雌激素样作用物质的准确性.方法:构建雌激素受体反义RNA表达质粒pCASER,以脂质体转染MCF-7细胞,G418筛选阳性克隆.PCR检测雌激素受体的DNA是否整和于MCF-7细胞的基因组DNA中,Westernblot检测雌激素受体的表达;MTT法检测细胞的增殖.结果:筛选出一株雌激素受体反义RNA表达克隆(MTASER).17β-雌二醇,金雀异黄素,Dro-loxifen,Miyabenol C和Kobophenol A在一定浓度均可促进MCF-7细胞增殖,且对MCF-7的促增殖作用大于对MTASER的促增殖作用;表皮生长因子对两株细胞的促增殖作用的差别无显著意义.结论:改良的E-screen实验筛选具有雌激素样作用物质的准确性高于通常的E-screen实验.
作者：田春艳；胡昌奇；徐光；宋后燕 刊期： 2002年第06期
目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2 α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的32P放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、[KG*2]cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1478对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为25.9 μmol/L,抑制作用接近于已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3),稍小于5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB).AG1478对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP和酪蛋白均呈竞争性抑制作用,是一种双底物抑制剂.结论:AG1478不仅是高效特异的表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且也是一种新型有效的蛋白激酶CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便的筛选和开发有效CK2抑制剂的分子靶点.
作者：刘新光；梁念慈 刊期： 2002年第06期
目的:比较氟他胺及其活性代谢产物2-羟基氟他胺对原代培养大鼠肝细胞毒性及对CYPlA2 mRNA的影响.方法:分离大鼠肝细胞,原代培养4 h,台酚蓝拒染法检测肝细胞活力.氟他胺和2-羟基氟他胺在培养液中浓度分别为10、20和50mg/L.肝细胞毒性检测包括台酚蓝拒染法,乳酸脱氢酶(LDH)释放量,谷丙转氨酶(AST)和谷草转氨酶(ALT)释放百分比,谷胱甘肽(GSH)含量.同时采用Northern blot方法进一步研究两药对CYPlA2 mRNA的影响.结果:药物作用8 h后,氟他胺三个剂量组和2-羟基氟他胺50mg/L组出现肝细胞损伤,表现为ALT和AST释放百分比增加,GSH含量下降.氟他胺三个剂量组使CYPlA2 mRNA水平分别升高2,5和7.5倍,而2-羟基氟他胺仅在50mg/L时使CYPlA2mRNA水平升高3.5倍.结论:氟他胺对原代培养大鼠肝细胞的毒性大于其活性代谢物2-羟基氟他胺,且明显增加CYPlA2 mRNA水平.
作者：王海学；马小超；邓巧琳；李端 刊期： 2002年第06期
目的:观察重组葡激酶(r-SaK)对中国实验小型猪冠状动脉血栓、心肌缺血、心肌梗塞的影响.方法:直接电刺激中国实验小型猪冠状动脉造成动脉内膜损伤,逐渐形成冠脉内血栓.运用冠状动脉病理切片、显微成像、多媒体图象分析、心外膜电图、心肌组织化学染色、血清生化酶学检查、血液流变学等多种试验手段,研究了r-SaK静脉给药对冠脉血栓的溶栓作用.结果:r-SaK对冠脉血栓有显著的溶栓作用,与对照组比较,r-SaK两个剂量组均能明显缩小冠脉血栓横切面积(P＜0.01),减轻心肌缺血程度和范围(P＜0.01),缩小梗塞区(P＜0.01),降低CPK活性和血液粘度(P＜0.05),抑制血小板粘附、血小板聚集及纤维蛋白原的形成(P＜0.05).结论:r-SaK对冠状动脉血栓具有明显的溶栓作用,并可对抗心肌缺血、心肌梗塞等病理反应.
作者：刘建勋；尚晓泓；傅建华；李欣志；王刚 刊期： 2002年第06期
目的:研究肾脏特异性表达CYP4A1与血压变化的关系.方法:将含有开放阅读框的CYP4A1 cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建4Al/pcDNA3.1和反义4Al/pcDNA3.1重组体,舌下静脉注射转染SD雄性大鼠,经尾动脉测量收缩压.用Western blot及Northern blot分析转染对照pcDNA3 1质粒及正、反义CYP4A1重组体后,CYP4A1在大鼠的脑、心、肺、肝、肾组织表达水乎.结果:转染正义、反义CYP4A1两周后,大鼠的血压与对照组相比分别增加1.8 kPa±0.3 kPa(13.2 mmHg±2.5mmHg)和减少了1.7 kPa±0.3 kPa(13.0 mmHg±2.2mmHg).Western blot及Northern blot结果均显示CYP4A1可选择性地在肾脏表达,而在脑、心、肺、肝几乎无表达,且在给予反义CYP4A1的大鼠肾脏中CYP4A1蛋白表达几乎被完全阻断.结论:在正常的SD大鼠肾脏中,转染正、反义CYP4A1可引起血压升高和降低,说明肾脏花生四烯酸CYP羟化酶参与高血压的形成及维持正常血压的稳定.
作者：张帆；钱家庆；汪道文 刊期： 2002年第06期
目的:研究去甲肾上腺素引起大鼠C6神经胶质瘤细胞中钙离子浓度([Ca2+]i)增加的机理.方法:以荧光染料fura-2为指示剂,采用双波长荧光比值成像的方法测定细胞中钙离子浓度.结果:通过激活细胞上的α1肾上腺素能受体,去甲肾上腺素剂量依赖地使C6细胞中钙离子浓度增加.这种反应不依赖细胞外钙,且不受百日咳毒素(PTX)处理的影响.将细胞与磷酯酶C(PLC)抑制剂U73122或内质网Ca2+-ATP酶抑制剂thapsigargin预孵育,去甲肾上腺素引起的胞内钙反应则消失;蛋白激酶C激动剂佛波醇酯(PMA)预处理细胞可以使去甲肾上腺素引起的胞内钙离子浓度升高幅度降低,而佛波醇酯的效应能够被蛋白激酶C抑制剂Ro31-8220或GF-109203X完全阻断.但是,改变胞内蛋白激酶A活性的药物对去甲肾上腺素的作用没有影响.结论:通过激活胞内的磷酯酶C,去甲肾上腺素使C6细胞的胞内钙库释放钙离子.去甲肾上腺素引起的细胞内钙离子浓度增加受蛋白激酶C的负性调节.
作者：韩建中；林文；娄淑杰；陈宜张 刊期： 2002年第06期
目的:研究丙丁酚抑制体外氧化低密度脂蛋白诱导的单核细胞对内皮细胞的粘附机制.方法:采用酶联免疫法检测丙丁酚对内皮细胞粘附分子、细胞间粘附分子l(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)、P-选择素和E-选择素表达的影响,对比分析丙丁酚和上述粘附分子单克隆抗体抑制氧化低密度脂蛋白诱导的单核细胞对内皮细胞的粘附作用.结果:丙丁酚呈浓度依赖性抑制氧化低密度脂蛋白诱导的单核细胞对内皮细胞的粘附,丙丁酚浓度从10 μmol/L增加到80μmol/L,单核细胞对内皮细胞的粘附从16.7%降低至7.0%(P＜0.01),同时ICAM-1和P-选择素表达分别被抑制75%和72%(P＜0.01),可是对VCAM-1和E-选择素表达无明显作用.单独使用ICAM-1和P-选择素单克隆抗体只能微弱抑制单核细胞对内皮细胞的粘附,两者合用则可显著抑制,粘附指数为11.3%(P＜0.01),但仍然高于丙丁酚保护的粘附指数9.3%.结论:丙丁酚通过多途径抑制氧化低密度脂蛋白诱导的单核细胞对内皮细胞的粘附,其中包括抑制ICAM-1和P-选择素的表达.
作者：刘革修；欧大明；李立新；陈临溪；黄红林；廖端芳；唐朝枢 刊期： 2002年第06期
目的:探究野生云芝多糖水溶性新组分CVPS-B对大鼠脾细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因表达的影响.方法:以β-actin为内标准物,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CVPS-B分别对正常情况下以及脂多糖(LPS)诱导下大鼠脾细胞MCP-1基因表达的影响,并对RT-PCR产物进行测序,以证实其特异性.结果:(1)正常情况下大鼠脾细胞MCP-1 mRNA的表达(MCP-1/β-actin的比值)生理盐水对照组为1.4±0.3;CVPS-B三个剂量组(10、30和50mg@kg-1@d-1,ip,连续4 d)分别为:1.6±0.4、1.7±0.5和1.5±0.4,后三组与对照组无显著差异(P＞0.05);(2)大鼠腹腔给药LPS(10μg@kg-1)可使脾细胞MCP-1 mRNA的表达增加114%.(3)CVPS-B 4个剂量组(5、10、30和50mg@kg-1@d-1,ip,连续4 d)可使LPS(10 μg@kg-1,ip)诱导的脾细胞MCP-1 mRNA的表达分别减低5l%,70%,84%和99%(n=6).结论:CVPS-B可预防性抑制LPS对大鼠脾细胞MCP-1基因表达的诱导作用,且呈剂量依赖性,但对正常情况下大鼠脾细胞MCP-1 mRNA的表达则无明显影响.
作者：宋烈昌；陈海生；娄宁；宋畅；曾钧；傅庭焕 刊期： 2002年第06期
目的:研究中国汉族人群中CYP3API基因型的分布特征及其与CYP3A活性的相关性.方法:以口服7.5 mg咪哒唑仑后1小时血浆中1'-羟化咪哒唑仑与咪哒唑仑的比值作为CYP3A活性的衡量指标,测定191名中国汉族健康受试者的CYP3A活性,并利用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对已知CYP3A活性受试者的DNA进行CYP3AP1基因分型.结果:CYP3AP1不同基因型个体的CYP3A活性存在显著差异(P＜0.05).A-44等位基因纯合子个体的CYP3A活性低于 A-44G杂合子,而G-44等位基因纯合子个体的CYP3A活性高.结论:CYP3AP1基因型与体内CYP3A活性的增加存在相关性.
作者：朱冰；陈国林；陈小平；何楠；刘昭前；蒋长虹；王丹；周宏灏 刊期： 2002年第06期
目的:研究六肽FRCRSFa对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换的作用及其特异性.方法:用膜片箝全细胞记录法测定Na+/Ca2+交换电流(INaCa2+)及其它离子通道电流.结果:六肽FRCRSFa对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换呈剂量依赖性抑制,内向和外向INa+/Ca2+的IC50分别是2μmol/L和4 μmol/L.FRCRSFa 5 μmol/L对L型钙电流,门控钠电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用.结论:FRCRSFa是一个对Na+/Ca2+交换选择性较高的抑制剂,对研究心肌细胞Na+/Ca2+交换具有较高价值.
作者：韩清华；武冬梅；吕吉元；吴博威 刊期： 2002年第06期
目的:研究来氟米特在中国健康志愿者的药代动力学.方法:18名健康志愿者随机分为三组,分别单剂量口服来氟米特(20,40,60mg);6名健康志愿者多剂量口服来氟米特20 mg/d,连续30 d.高效液相色谱法检测来氟米特活性代谢物(A77126).结果:A771726的血药浓度变化符合一级吸收的一房室模型.单剂量口服来氟米特(20,40,60mg)的主要药动学参数为:T1/2,ke(h):211±18,170±24,252±26;Tmax(h):13±12,13±4,9±5;Cmax(mg/L):2.0±0.5,5.2±0.6,6.7±1.5;AUC(mg@h@L-1):647±137,1344±191,2555±907.口服来氟米特20 mg@d-1,连续30 d,血药浓度达到稳态水平.平均谷浓度为32.01-39.72 mg/L.Cmax,Tmax和AUC0-24分别为(41.5±2.4)mg/L,(307±75)h和(22099±1234)mg@h@L-1.结论:本品口服吸收快,消除慢.口服20 mg@d-1,连续30 d,血药浓度达到稳态水平.在所试剂量范围内,A771726的血药浓度变化符合一级吸收的一房室模型.
作者：李俊；姚宏伟；金涌；张运芳；李常玉；李元海；徐叔云 刊期： 2002年第06期
目的:研究泥鳅多糖对小鼠脾细胞免疫应答的影响.方法:分别给正常小鼠、刀豆蛋白(ConA)或左旋咪唑免疫增强小鼠、环磷酰胺免疫抑制小鼠腹腔注射提取的泥鳅多糖,连续给药7 d.用3H-胸苷掺入法测定T淋巴细胞的增殖.用51Cr同位素标记法测定细胞毒T淋巴细胞的细胞毒性和大然杀伤细胞的活性.结果:泥鳅多糖5或10 mg@kg-1@d-1可以提高T淋巴细胞的增殖,并增强细胞毒T淋巴细胞的细胞毒性和天然杀伤细胞的活性,还能增强ConA解除环磷酰胺对T淋巴细胞增殖抑制的能力,抑制率从环磷酰胺对照组的51.4%分别降低到18.2%和35.1%.而且,给予小鼠10或20 mg@kg-1@d-1的泥鳅多糖,可以恢复环磷酰胺所致的天然杀伤细胞活性降低.结论:泥鳅多糖能增强小鼠脾细胞中T细胞、细胞毒T淋巴细胞和天然杀伤细胞的活性.
作者：钦传光；黄开勋；徐辉碧 刊期： 2002年第06期
