目的:研究慢性酒精摄取和戒断后大鼠伏核内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达和磷酸化的变化.方法:给大鼠饮用含低浓度乙醇的水溶液(6%,v/v)1个月.采用免疫组织化学的方法检测大鼠伏核内CREB和p CREB蛋白表达.结果:给大鼠长期饮酒显著降低伏核组织内p-CREB蛋白含量(-75%).撤除酒精24 h、72 h后伏核内p-CREB蛋白含量仍较低,与对照组比分别降低35%和28%;戒断7 d后恢复到正常水平.但慢性酒精摄取和戒断不改变伏核内CREB蛋白含量.单独应用纳洛酮对大鼠伏核组织内CREB和p CREB含量亦无影响.然而,当纳洛酮与酒精同时应用时,能拮抗酒精摄取大鼠伏核内p-CREB含量的下降(142%).结论:长期酒精摄取降低伏核组织内CREB磷酸化,此作用可被纳洛酮翻转,这可能是酒精依赖形成的分子机制之一.
作者：李菁；李跃华；袁孝如 刊期： 2003年第09期
AIM: FTY720 is a new synthetic immunosuppressive agent which has a unique mechanism of action and induces long-term graft acceptance in rat and dog allotransplantation as prophylactic administration. The present study investigated whether FTY720 was able to rescue ongoing acute rejection of solid organ transplants in a mouse heterotopic cardiac transplantation model. METHODS: BALB/c hearts were heterotopically grafted in C57BL/6 mice. FTY720, at the doses of 0.5, 1, and 5 mg@kg-1.d-1 or vehicle was administered to recipients once daily by oral gavage from d 3 to d 7 after transplantation. Histological changes of grafts, and the lymphocyte number in the peripheral blood and the peripheral lymph nodes were determined on d 5 after transplantation. RESULTS: FTY720 prolonged the median graft survival time dose-dependently and significantly. Histological evaluation revealed less lymphocytic infiltration in cardiac allografts treated with FTY720. Moreover, FTY720 remarkably lowered the number of peripheral blood lymphocytes but significantly increased the lymphocyte number in the mesenteric lymph nodes and the peripheral lymph nodes. CONCLUSION: FTY720 used orally as rescue therapy significantly extended allograft survival in mouse heterotopic cardiac transplantation.
作者：王铭辉；Vitaliy MILEKHIN；张华；黄洪铮 刊期： 2003年第09期
目的:验证mRNA二级结构保守性在反义药物设计中的作用,获得靶向HER-2 mRNA的优于已报道阳性药物的序列.方法:RNAstructure用于模拟HER-2 mRNA二级结构,设计21个反义硫代寡脱氧核苷酸(S-ODN).用SK-BR-3乳腺癌细胞评价S-ODN体外活性,SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析,RT-PCR检测S-ODN对HER-2表达的影响.结果:11个靶向模拟二级结构完全保守局域(LM)的S-ODN中,有9个获得低于或相似于HA4的IC50值.且其IC50值显著低于靶向部分保守与非保守LM的AS-ODN(P＜0.05).靶二级结构单元膨胀环的碱基数,靶结构自由能在Q SAR方程中有统计意义.多元回归R=0.967,P=0.005).结论:针对模拟靶mRNA二级结构中高度保守LM部位进行反义药物设计可提高阳性率,并获得优于阳性对照的S-ODN.
作者：杨栓平；宋三泰；汤仲明；宋海峰 刊期： 2003年第09期
目的:研究氧化低密度脂蛋白诱导的U937泡沫细胞中蛋白质组的差异表达.方法:泡沫细胞模型由人类单核细胞系白血病U937细胞经氧化低密度脂蛋白诱导而成.将对照U937细胞与U937泡沫细胞的蛋白提取物分别进行双向凝胶电泳(2-DE)分离.凝胶经银染后,于PDquest 2-DE图像分析软件中进行图像处理.利用ExPASy蛋白质组学网站中U937细胞的蛋白表达谱信息,对所得的U937泡沫细胞2-DE图谱作进一步鉴定.结果:通过对2-DE蛋白图谱的分析,共150点与参考胶相匹配(匹配率:75%).与U937细胞图谱相比,泡沫细胞中有37个蛋白点表达量有显著性变化(P＜0.05).与对照U937细胞相比,在U937泡沫细胞中28个蛋白点表达量上调,9个点表达量下调.其中,8个U937细胞中表达的蛋白点,在U937泡沫细胞中未检测到;而11个在泡沫细胞中表达的蛋白点,未在对照U937细胞中表达.结论:本研究首次建立经氧化低密度脂蛋白诱导的U937泡沫细胞的蛋白差异表达谱,从而提供了对动脉粥样硬化病理过程中巨噬源性泡沫细胞功能性分析研究的新思路.
作者：于雁灵；杨鹏远；樊惠芝；黄珍玉；芮耀诚；杨(艹凡)原 刊期： 2003年第09期
目的:分析胍丁胺对伯氏疟原虫K173株及伯氏疟原虫抗氯喹株的杀虫作用.方法:用Peters四天抑制实验分析了胍丁胺对伯氏疟原虫K173株及其抗氯喹株的杀虫作用.结果:每日口服胍丁胺(12.5-200 mg/kg)能显著抑制伯氏疟原虫K173株及其抗氯喹株的生长,IC50分别为139 mg/kg和126 mg/kg.每日三次皮下注射胍丁胺(5-40 mg/kg)比口服显示了更强的抗疟作用,IC50约为30 mg/kg.亚精胺拮抗胍丁胺对这两种疟原虫株的抗疟作用.胍丁胺不能逆转抗氯喹株伯氏疟原虫对氯喹的抗药性.皮下注射二氟甲基鸟氨酸(10-50mg/kg,daily)也能抑制疟原虫的生长,且此作用被亚精胺拮抗.结论:胍丁胺有抗疟作用,机制与抑制多胺尤其是亚精胺合成有关.
作者：苏瑞斌；魏晓莉；刘茵；李锦 刊期： 2003年第09期
目的:研究腺苷三磷酸(ATP)对兔离体窦房结起搏细胞动作电位的作用,分析相关受体.方法:利用细胞内微电极技术记录兔离体窦房结细胞跨膜电位.结果:ATP 0.1-3.0mmol/L浓度依赖性减慢窦房结自发搏动速率16%-43%,降低舒张期除极速率33%-67%,增大动作电位幅值6%-9%,加快大除极速率30%-76%,APD50和APD90分别缩短7%-12%和6.3%-9%.等浓度ATP、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷(Ado)的效应相比时,各组间无显著性差异.尿苷三磷酸(UTP)和α,β-meATP对动作电位各参数均无影响.P1受体拮抗剂氨茶碱(0.1 mmol/L)显著拮抗ATP和Ado的作用(P＜0.05),且拮抗程度相同.P2受体拮抗剂反应兰2(0.05mmol/L)不影响ATP的作用(P＞0.05).结论:兔窦房结不存在功能性P2X1和P2Y2受体.ATP对兔窦房结的作用主要通过其降解产物Ado,由P1受体介导而发挥.
作者：任雷鸣；李军霞；师晨霞；赵丁 刊期： 2003年第09期
目的:研究Aβ25-35 引起乙酰胆碱酯酶高表达细胞株SC42凋亡与乙酰胆碱酯酶活性的关系.方法:用Aβ25-35处理后,倒置相差显微镜观察细胞形态;噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;核酸电泳观察DNA;分光光度测定乙酰胆碱酯酶活力.结果:Aβ25-35 1 μmol/L处理24-48小时后,细胞活力显著下降,细胞形态也发生明显的变化,DNA出现梯形条带,而乙酰胆碱酯酶的活力则显著上升,在48小时达到了正常水平的1.7倍.用不同浓度乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲预处理后,明显抑制Aβ25-35损伤48小时引起的乙酰胆碱酯酶活力升,而对细胞活力下降没有明显的改善作用.结论:在SC42细胞中,Aβ25-35能引起SC42细胞凋亡同时升高乙酰胆碱酯酶活性,并证明细胞凋亡与乙酰胆碱酯酶的水解活性无直接关系.
作者：章海燕；Stephen BRIMIJOIN；唐希灿 刊期： 2003年第09期
目的:在同一实验系统中研究蛋白酶抑制剂对人类肥大细胞类胰蛋白酶和类糜蛋白酶催化活性的调节作用.方法:应用高盐提取、肝素凝胶亲和层析和S-200凝胶过滤层析的方法纯化人肺类胰蛋白酶和人皮肤类糜蛋白酶.蛋白酶抑制剂对类胰蛋白酶和类糜蛋白酶催化活性的调节作用则由酶-底物反应实验来测定.结果:纯化后的类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的比活分别为2.1U/mg蛋白质和4.9 U/mg蛋白质.两种纯化产物在SDS PAGE上均显示为单一条带.非内源性蛋白酶抑制剂N-(1-羟基2萘基)-L-精氨酰-L脯氨酰胺-盐酸、亮肽素、antipain、苯甲脒、鱼精蛋白可抑制90%的类胰蛋白酶催化活性,而大豆胰蛋白酶抑制剂、Z异亮氨酸谷氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸C02甲基、抑凝乳蛋白酶素则抑制类糜蛋白酶催化活性的95%.内源性蛋白酶抑制剂α1-抗胰蛋白酶和分泌性白细胞蛋白酶抑制剂抑制90%以上的类糜蛋白酶催化活性,但乳铁蛋白却表现出具有增加类糜蛋白酶催化活性的作用.这三种内源性蛋白酶抑制剂均表现出较弱的抑制类胰蛋白酶的作用.结论:本实验所采用的蛋白酶抑制剂具有相对好的类胰蛋白酶或类糜蛋白酶选择性,表明它们可被应用于抑制剂药物的开发过程中.
作者：何韶衡；陈谱；陈韩秋 刊期： 2003年第09期
目的:研究P-糖蛋白(P-gp)是否限制尼莫地平(NMD)从血液循环进入脑内.方法:当原代培养的鼠脑微血管内皮细胞(BCEC)长至互相连接成片时,加入含有NMD 10 mg/L的Hanks'液37℃温孵,记录细胞摄取NMD的时间过程.将含有NMD和各种不同受试药物的Hanks'液分别加入到不同培养孔中,检测90 min时细胞对NMD的摄取量.在细胞摄取NMD 90 min后,分别加入红霉素,克拉霉素和环孢素A以检测P-糖蛋白抑制剂对原代培养的脑微血管内皮细胞外排NMD的影响.结果:细胞对NMD的摄取呈时间依赖性,P-gp抑制剂或代谢抑制剂的加入会增加稳态时NMD在细胞内的浓度.P-gp抑制剂的加入也使NMD的外排受到了抑制.结论:P-gp限制NMD进入脑内,P-gp抑制剂的加入可增加NMD的进入.
作者：张力；刘晓东；谢林；王广基 刊期： 2003年第09期
目的:检测卡介苗(BCG)胞壁蛋白对人β-防御素-1(hBD-1)基因表达的影响,并初步分析该基因5′-端旁侧区中的BCG作用元件.方法:经Sephadex G-150层析柱分离得到BCG细胞壁蛋白组份.用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交分析法检测hBD-1 mRNA在肺腺上皮细胞的表达.一系列逐渐缩短的hBD-1基因5′-端序列被连接入无启动子的pCAT Basic质粒,构建了CAT报告质粒.ELISA法检测报告基因表达.结果:热灭活的BCG全菌(50 mg/L)及分子量在18-30 kDa的胞壁蛋白组份(3 mg/L)刺激SPC-A-1细胞8 h后,hBD-1 mRNA表达明显增强.hBD-1基因-314到+54区域具有BCG诱导的转录活性,其中含有转录因子C/EBPβ、AP-1、CP2结合位点.结论:BCG胞壁蛋白组份(18-30 kDa)能够增强SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA表达,其基因上游序列(-314/+54)含有C/EBPβ、AP-1、CP2结合位点,与BCG的诱导作用有关.
作者：祝秉东；冯云；黄宁；吴琦；王伯瑶 刊期： 2003年第09期
目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性.方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平.蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达.四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力.结果:转染人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶的NIH3T3细胞中G抗原的表达及其与人天然抗体(IgG和IgM)的结合能力都显著下降.其抗人血清介导的细胞裂解反应能力有效提高.结论:人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶能够相互协同抑制Gal抗原表位表达和相关异种排斥反应.
作者：闫景莲；余路阳；郭礼和 刊期： 2003年第09期
目的:考察党参总生物碱对神经生长因子诱导大鼠嗜铬神经瘤PC12细胞分化的影响.方法:用党参总生物碱在有或无神经生长因子(NGF)存在条件下培养PC12细胞,分析PC12细胞突起的延伸及相关蛋白激酶.结果:党参总生物碱自身不能诱导PC12细胞延伸突起,但在很低浓度NGF(2 μg/L)存在下,党参总生物碱能明显地诱导PC12细胞延伸出大量突起,增强有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)的磷酸化,而且这种增强作用能被有丝分裂原激活的蛋白激酶激酶特异抑制剂PD98059抑制.结论:党参总生物碱通过放大有丝分裂原激活的蛋白激酶依赖的信号通路的某个上游步骤而增强NGF诱导PC12细胞延伸大量突起.
作者：刘建辉；包永明；宋继君；安利佳 刊期： 2003年第09期
目的:研究青蒿素(Art)对结状神经节神经元动作电位(AP)的影响,以明确其抗心律失常和麻醉作用的机制.方法:选择新生和成年SD大鼠制备分离神经元和结状神经节-迷走神经切片标本.全细胞膜片箝方法记录AP,切片标本测量感觉传入纤维的传导速率(CV).并以氯胺酮为参照评价Art对AP和CV的作用.结果:Art的作用如下:1)AP除极过程减慢,静息膜电位(RMP)不变,AP幅度和除极速度明显降低(P＜0.01).2)动作电位复极化中点(APD50)持续时间延长(P＜0.01).3)AP复极过程减慢,复极速度降低,AP超极化程度减弱.4)AP的内向和外向电流明显减小. 5)Art不影响CV.6)对AP的影响呈剂量依赖性,并与氯胺酮的作用相似.结论:Art抑制AP的除极和复极过程,此作用可能至少与其阻断Na+和K+通道的作用有关.
作者：乔国芬；杨宝峰；李文汉；李柏岩 刊期： 2003年第09期
目的:研究肌肉电脉冲转移人α2干扰素基因的表达和抗肿瘤作用.方法:先将pcD2/hIFN-α2注射到雌性BALB/c小鼠或荷瘤雌性BALB/c裸鼠的股四头肌内,然后在注射部位给予电脉冲刺激.以hIFN-α2 ELISA试剂盒研究佳的电脉冲转移参数和转移效率;应用裸鼠移植HL-60瘤模型研究肌肉电脉冲转移人α干扰素基因的抗肿瘤作用.结果:当电脉冲参数为:电压200 V/cm,波宽40 ms,脉冲次数6次和频率1 Hz时,可获得高的基因表达.此时,电脉冲组的IFN-α2水平(160 μg/L±31μg/L)是直接注射组IFN-α2(3.6μg/L±1.6 μg/L)水平的45倍(P＜0.01).肌肉电脉冲转移100μg或200 μg pcD2/hIFNα2明显抑制HL-60荷瘤裸鼠肿瘤细胞的生长和延长荷瘤裸鼠的生存时间.结论:肌肉电脉冲介导的基因转移是一种有效的基因转移方法,采用此方法转移pcD2/hIFN-α2可有效治疗白血病.
作者：张国华；谭小凡；沈冬；赵淑媛；时彦一；金彩科；孙惟谷；郭艳红；陈光慧；汤健 刊期： 2003年第09期
目的:在全基因组范围研究雷公藤内酯醇对Jurkat细胞基因表达的调节作用,筛选雷公藤内酯醇作用的靶分子.方法:将对数生长期的Jurkat细胞分为正常对照及雷公藤内酯醇处理组,后者同时加入10μg/L的雷公藤内酯醇并在37℃温育2 h.从两组细胞中分别分离总RNA,并以此为模板逆转录成荧光标记的cDNA探针.将上述探针分别与含13872个人类基因/Est的DNA芯片进行杂交.所获DNA芯片进行杂交影像经DNA芯片数据分析软件GeneSpring进行分析,得到基因表达图谱.结果:雷公藤内酯醇显著抑制117个基因/Est在Jurkat细胞中的表达.在雷公藤内酯醇调节的转录产物中30%为Est或未知功能基因,13%为转录因子,9%为信号转导途径的调节分子,9%为DNA结合蛋白.十分引人注目的是MAPK5和PI-3K的表达被下调了100倍以上.除此之外,雷公藤内酯醇还能抑制参与脂类转移及代谢的基因的表达.结论:高密度DNA芯片技术是一种有效的药物作用靶分子的筛选手段.雷公藤内酯醇有可能通过其对MAPK和PI-3K的抑制作用发挥免疫抑制和抗肿瘤作用.
作者：杜泽英；李晓玉；李援朝；王顺友 刊期： 2003年第09期
目的:研究白介素-10(IL-10)对实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠的基因治疗作用.方法:将IL-10质粒DNA注射入由猪甲状腺球蛋白(pTg)诱发的自身免疫性甲状腺炎小鼠甲状腺内,pTg免疫后28天,进行甲状腺IL-10 mRNA表达和组织学等检查.结果:IL-10质粒DNA注射后1周或2周甲状腺均有IL-10 mRNA表达;转染IL-10质粒DNA的COS-7细胞48小时有显著IL-10 mRNA表达,同时转染后48、72小时细胞培养液中IL-10浓度显著增高;治疗组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润指数(1.1±0.4)明显低于对照组(2.2±0.5)(P＜0.01);治疗组小鼠血清IFN-γ水平明显低于对照组(P＜0.01).结论:甲状腺直接注射编码IL-10质粒DNA能显著抑制自身免疫性甲状腺炎淋巴细胞对甲状腺的浸润,缓解病情的发展.
作者：章振林；林波；余路阳；沈水仙；朱丽华；王卫平；郭礼和 刊期： 2003年第09期
目的:用表达人μ受体的Sf9昆虫细胞(Sf9-μ细胞)研究二氢埃托啡、芬太尼、海洛因和哌替啶对μ受体亲和力与依赖性.方法:竞争结合实验检测受体亲和力;放免法测定cAMP;热板法测痛;纳洛酮催促跳跃评价身体依赖性.结果:Sf9-μ细胞经上述药物孵育后,纳洛酮引起cAMP超射.以结合实验中Ki值与cAMP超射实验中的EC50值之比作为药物在Sf9-μ细胞的依赖性指数.以镇痛ED50与戒断反应中累积剂量的ED50之比作为小鼠身体依赖性指数.上述药物的两种依赖性指数之间以及受体亲和力与镇痛活性之间有较好的相关性.结论:Sf9-μ细胞可用来评价阿片类药物的受体亲和力及依赖潜能.
作者：刘忠华；和友；金文桥；陈新建；张鸿萍；申庆祥；池志强 刊期： 2003年第09期
The main objective of this paper is to review the chemical and genetic methods used in authentication of ginseng, especially the recent advances in microsatellite genotyping and its application to the authentication of other traditional Chinese medicines (TCM). The standardization and modernization of TCM hinge on the authentication of their botanical identities. Analysis of well-characterized marker compounds is now the most popular method for identifying the herbal materials and quality control of TCM, eg, ginsenoside profiling for authentication of Panax species. However, in many herbal species the chemical composition of the plant changes with the external environment and processing conditions, which lowers the reliability of these authentication methods. In the light of the advances in molecular biotechnology in the past few decades, genetic tools are now considered to provide more standardized and reliable methods for authentication of herbal materials at the DNA level. These genetic tools include random amplified polymorphic DNA (RAPD), DNA fingerprinting using multi-loci probes, restriction fragment length polymorphism (RFLP), amplified fragment length polymorphism (AFLP), and microsatellite marker technology. The practicality of these methods varies in terms of their sensitivity, reliability, reproducibility, and running cost. Using ginseng as an example, we reviewed the advantages and limitations of these molecular techniques in TCM authentication. We have developed a set of microsatellite markers from American ginseng that are able to differentiate Panax ginseng and Panax quinquetolius with the resolution down to farm level, ie, confirmation of its botanical identity and origin. Compared with other molecular techniques, microsatellite marker technology is more robust, accurate, reproducible, reliable, and sensitive. This is essential for large-scale TCM authentication centers.
作者：C C HON；Y C CHOW；F Y ZENG；F C C LEUNG 刊期： 2003年第09期
