嗜酸细胞(EOS)是哮喘慢性炎症中的关键效应细胞.IL-5、IL-3能促进EOS在骨髓的分化、成熟,使机体的EOS产生增多,并促使EOS在支气管肺组织的聚集及活化.哮喘患者外周血、支气管粘膜、支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-5明显升高[1].IL-3对EOS的作用较IL-5弱,它在哮喘发病机理中的作用仍有争议.本文通过对哮喘患者PBMC IL-5 mRNA、IL-3 mRNA表达水平的研究,探讨其在哮喘发病中的作用.
作者：王春霞；王长征；金远林；钱桂生 刊期： 1999年第09期
E-选择素是细胞粘附分子中选择素(Selection)家族的主要成员之一,属人类白细胞分化抗原CD62E,为110 kD的跨膜糖蛋白[1];大多数研究认为,E-选择素只表达在受细胞因子作用后的血管内皮细胞[2],但近来有文献报道,非内皮源性的细胞经细胞因子或脂多糖诱导后也可表达E-选择素[3,4].本研究将观察新生牛脑微血管内皮细胞(BCMSMC)经IL-1β诱导后是否表达E-选择素.
作者：徐江平；芮耀诚；李铁军 刊期： 1999年第09期
目的:探索抗人纤维蛋白单链抗体-链亲合素融合蛋白的应用前景.方法:构建抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5基因与链亲和素基因的重组表达载体pSTE2-8E5,表达的融合蛋白可特异性识别人纤维蛋白,同时有生物素的结合位点.转化JM109后用IPTG诱导表达,ELISA观察融合蛋白的稳定性.结果:抗人纤维蛋白单链抗体-链亲合素融合蛋白稳定性好,可耐受至少2 w,4℃保存、数次反复冻融或一定时间的37℃孵育.它能与大鼠和豚鼠的纤维蛋白结合,而与猪纤维蛋白反应不明显.结论:抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白适用于大鼠或豚鼠血栓病模型,是临床前研究的有用材料.
作者：李文平；许静；隋建华；宋增璇 刊期： 1999年第09期
目的:获得FASL的真核细胞表达,并分析其功能.方法:将编码人FASL(FAS ligand)的全长cDNA插入真核细胞瞬时表达载体PSVL的SV40晚期启动子下游的XbaI位点,构建FASL的真核细胞表达载体PSVL-hFASL,用电击法将PSVL-hFASL转染COS-7细胞,转染后48 h,用Northern-blot法检测FASL的表达.结果:转染后COS-7细胞有FASL的mRNA的表达,在COS-7细胞上表达的重组FASL能诱导FAS阳性的U937细胞发生程序性死亡.结论:在COS-7细胞表面表达的重组FASL分子能用于进一步功能研究和FAS系统拮抗剂的筛选.
作者：罗振革；彭虹；孔祥英；高杰英 刊期： 1999年第09期
目的:建立稳定整合的细胞株,为研究外源基因定位整合机制及其对靶细胞生物特征影响,建立一个生物模型.方法:构建重组病毒载体PLXCD;用Lipofectin将PLXCD转染PA317包装细胞,用G418筛选获得抗性细胞克隆,扩增抗性细胞收集病毒上清;测定病毒上清效价,感染RPMI8866细胞,用G418筛选获得抗性细胞(RVc23-8866细胞);用FACS分析RVc23-8866细胞膜蛋白分子CD23的表达;用细胞原位杂交(FISH)分析细胞染色体基因组的改变.结果:建立了稳定整合的RVc23-8866细胞株.结论:FISH结果表明PLXCD重组体已整合到细胞基因组中;FACS分析表明RVc23-8866细胞膜表面CD23分子的表达量明显降低,并说明了整合入基因组的CD23片段影响了固有CD23基因的表达.
作者：宋辉；晋康新；王卫莉；唐莉；刘芳；徐德胜 刊期： 1999年第09期
目的:探索进一步提高 HIV-1 p24 gag 蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段.方法:通过改造原核表达载体 pBV220和 pET28,构建了一种新的通用型温控原核表达载体 pVV5,将 HIV-1 gag 基因的 1 148～1 857 编码序列,插入到 pVV5b 和 pET28b 的相应位点中,构建了重组表达质粒 pEG1b 和 pEG7b,转化到大肠杆菌中进行表达,产物利用 IMAC 金属螯合层析柱进行纯化,纯化的表达产物用 HIV-1 标准阳性血清进行鉴定.结果:构建的重组表达质粒 pEG1b 和 pEG7b 在相应受体菌中表达重组蛋白的量为41%和28%,表达的外源蛋白经 IMAC 柱一步纯化后纯度超过80%,纯化后的重组蛋白可与 HIV-1 阳性血清发生 ELISA 反应.结论:构建的通用型温控原核表达载体可以高效地表达外源蛋白,在大肠杆菌中高效地表达 HIV-1 p24 可用于制备 HIV-1 感染的诊断试剂.
作者：王宏伟；金宁一；戴炜；李体远；郭志儒；殷震 刊期： 1999年第09期
目的:用聚合酶链反应(PCR)和血清学方法检测HLA-B27,并进行比较.方法:采用PCR技术检测78例可疑为强直性脊椎炎患者样本的HLA-B27基因,并与血清学结果比较.结果:36例具有B27基因者中24例同时作血清学试验,5例血清学难以判定结果,并与PCR结果不一致.42例无B27基因者中21例同时作血清学试验,3例血清学结果为可疑.结论:B27基因检定技术与血清学方法比较,有快速、简便、准确性高等优点.
作者：兰炯采；陈强；郑世荣；石宁；张祖文 刊期： 1999年第09期
目的:探讨ICAM-1相关肽抑制角朊细胞将超抗原TSST-1递呈给T淋巴细胞.方法:应用鼠抗人CD54单克隆抗体筛选噬菌体随机十五肽库,经4轮筛选后,挑取20个克隆进行测序,利用含保守序列的阳性克隆噬菌体对角朊细胞递呈超抗原TSST-1给T细胞进行阻断试验.结果:得到保守序列为ITRSFQSSMEPGPPG,所筛选的阳性噬菌体克隆与野生型噬菌体相比具有明显的阻断效应(P＜0.01).结论:ICAM-1相关小分子肽可望降低超抗原介导的皮肤炎症反应.
作者：张明；杨贵贞 刊期： 1999年第09期
目的:改进经典的集落形成实验,使造血生长因子集落刺激活性的检测方法更加简便易行.方法:在24孔板中培养,采用琼脂半固体培养,根据培养体系中细胞因子的不同适合于多种造血因子集落刺激活性的检测.固定制片后适于多种染色并可长期保存.结果:经实验及应用证实本文介绍的方法能准确地反映造血生长因子的集落刺激活性,方法简便易行.结论:在研究造血及造血生长因子生物学活性时,经典的集落形成实验由于实验方法复杂而受到限制,本法使造血因子集落刺激活性的检测更加方便.
作者：孙凯；金伯泉；张新海；冯琦；朱华峰 刊期： 1999年第09期
经口腔和咽部引起感染有:疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒.本文介绍应用PCR-DNA扩增技术检测124例胃部病变组织的单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒和巨细胞病毒(HCMV).其中炎症56例,本院胃镜室取材,无菌取胃粘膜组织,均浆器均浆后,做DNA扩增.癌症68例,取自本院病理科石蜡包埋标本.取10 μm厚的石蜡组织3～5片经常规脱蜡,水化,消化后取上清置-20℃备用.试剂购自华美生物技术有限公司.美国PE公司480型DNA扩增仪按说明书进行操作.
作者：杜民；乔秀娟 刊期： 1999年第09期
目的:制备不同类型抗重组人血管生长素(Recombinantion Human Angiogenin,rhANG)的单克隆抗体,为进一步研究抗rhANG抗体对ANG的中和作用以及对ANG依赖型肿瘤的抑瘤实验打下基础.方法:利用杂交瘤技术以rhANG免疫Balb/c小鼠,制备二株(C6、C46)能够稳定分泌抗 rhANG抗体的杂交瘤,并对上清进行ELISA、双扩散、免疫印迹等鉴定.结果:该抗体类别C6为IgG1,C46为IgM,并特异地识别rhANG与其它细胞因子及血清蛋白无交叉反应,免疫印迹显示该抗体与分子量14.4 kD rhANG蛋白结合,不与宿主菌体蛋白反应.结论:经多种方法鉴定获得的二株杂交瘤细胞分泌的抗体为rhANG特异抗体.
作者：杨太成；江悦华；冼江；吴锦银；李明 刊期： 1999年第09期
目的:通过优化设计利用大肠杆菌表达人白细胞介素4(IL-4)并提高其表达量.方法:根据原核翻译起始序列的局部二级结构自由能,设计了AUG上下游序列,并在人IL-4基因下游插入部分大肠杆菌LacZ序列以提高mRNA的稳定性.结果:成功地构建了人IL-4的高效表达克隆,命名为pLCM182-hIL4.SDS-PAGE分析显示所表达的重组IL-4蛋白质占细菌总蛋白的30%.目的基因下游没有插入LacZ序列所构建的表达克隆pCZH-hIL4在大肠杆菌中的表达量则占细菌总蛋白的20%左右.结论:所设计的优化表达方法对人IL-4基因的表达是成功的,在细胞因子的工程化表达中,优化设计对基因的表达量至关重要.
作者：黄欣；赵忠良；曹雪涛 刊期： 1999年第09期
目的:为了确定人血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)在肿瘤生长及转移中的作用.方法:利用DNA重组技术表达人VEGF,以其为抗原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得14株稳定分泌抗VEGF单抗的杂交瘤细胞株.结果:ELISA测定所分泌的单抗只与VEGF特异结合,与EGF、FGF、PDGF、TGFα及TNF等均无交叉反应.以豚鼠皮肤血管通透性实验(Miles)、鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验(CAM)及人脐带静脉血管内皮细胞增殖实验(HuVEC)鉴定单抗的中和活性,其中9株具有中和活性.在小鼠自发乳癌肺转移模型中进行的抑瘤试验显示,单抗D11对乳癌原发瘤的抑制率达83.4%,对肺转移的抑制率为71.9%.结论:具有中和活性的VEGF单抗能抑制肿瘤的生长和转移.
作者：杨治华；石瑜琳；冉宇靓；王贵齐；刘军；董志伟 刊期： 1999年第09期
骨髓造血微环境主要由基质细胞和细胞外基质(ECM)构成,基质细胞包括多种细胞成分,如成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等,可分泌多种造血调控因子,调节造血干、祖细胞的增殖分化和自我更新[1].基质细胞可以合成IL-6参与造血调控,已为许多学者证实[2].近来报道显示,LPS和IL-3可以促进基质细胞合成IL-6、IL-8、SCF等,进而促进造血干、祖细胞的增殖分化[2,3].我们拟建立人骨髓基质细胞层,探讨各种条件下IL-6的合成情况 .
作者：缪竞诚；杨吉成；盛伟华；王红卫；李丽娥 刊期： 1999年第09期
目的:探讨枸杞多糖(LBP)对免疫细胞功能的直接作用及其机理.方法:应用淋巴细胞增殖、溶血空斑和Fura-2/AM双波长荧光测定等方法.结果:LBP体外应用对正常小鼠及快速老化模型SAMP8和抗快速老化模型SAMR1脾细胞增殖反应具有直接促增殖作用,明显增加正常小鼠脾抗体形成细胞(PFC)数目,迅速诱导脾细胞和腹腔巨噬细胞内[Ca2+]i的增加,并有一定剂量依赖性关系.结论:枸杞多糖对免疫活性细胞的功能有直接促进作用,这可能与其增加细胞[Ca2+]i有关.
作者：齐春会；张永祥；陈保文；顾国明 刊期： 1999年第09期
目的:研究牛膝多糖对巨噬细胞的激活作用.方法:0.312、0.625、1.250、2.500和5.000 mg/ml牛膝多糖对体外培养的人胸腔巨噬细胞进行诱导培养24 h,用全自动生化分析仪测定胸腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶与酸性磷酸酶活性,用放射免疫分析法测定胸腔巨噬细胞内肿瘤坏死因子-α与白细胞介素-6的含量.结果:牛膝多糖能上调胸腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶活性,并能显著诱导胸腔巨噬细胞表达肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6,而且对肿瘤坏死因子-α的诱导表达具有显著的剂量效应.结论:牛膝多糖可诱导巨噬细胞表达细胞因子,并对巨噬细胞具有激活作用.
作者：吕建新；俞康；金丽琴；袁谦；谢克俭；陆永绥 刊期： 1999年第09期
