Carbohydrate antigen 125(CA125)是1981年Bast等人用卵巢浆液性囊腺癌细胞系免疫纯种小鼠，获得的抗分子量20～100万道尔顿的单克隆抗体。后被作为卵巢癌的肿瘤标志应用于临床，本文用免疫放射定量分析各种临床确诊的妇科疾病及健康人血清样品中CA125含量，旨在观察该肿瘤标志在卵巢癌发病过程中的变化及应用价值。研究结果显示：卵巢癌组CA125含量明显高于其它组(P＜0．01)。阳性率为87．1％(27／31)。非卵巢妇科恶性肿瘤包括宫颈原位癌、子宫内膜癌、阴道癌等CA125也显著高于卵巢良性疾病及正常组(P均＜0．01)。但升高幅度明显低于卵巢癌组(P＜0．01)。卵巢良性疾病及非妇科恶性肿瘤与对照组无显著差异(P＞0．05)。显示出CA125表达的器官特异性和敏感性。16例卵巢癌手术前后CA125含量变化非常显著(P＜0．01)，93．5％的患者在术后1～2 w血清CA125迅速下降或恢复正常。随访6例卵巢癌患者，其中5例在一年内CA125含量波动在1～47U／ml，临床各项检查基本正常。1例在一年后复发伴直肠转移，血清125升高至480 U／ml。提示CA125与病情变化密切相关，有较高的监测价值。观察结果还显示，CA125在良性卵巢疾病中为低表达。阳性率仅9．6％(6／62)，可作为鉴别妇科良恶性包块的手段之一。该试剂盒诊断卵巢癌的特异性和敏感性为84．3％及87．3％，阳性、阴性预示值为61．4％和95．6％，诊断效率73．5％，与国内外报道相近。目前多数学者认为CA125的早期诊断尚不令人满意，但对评价手术化疗效果、监测病情复发具有重要参考价值。Burg等提出用CA125半衰期(T 1／2=dt／2logCA1／CA2)作为预后和复发的指标，CA1为治疗前CA125值，CA2为术后首次＜35 U／ml的CA125值，dt为两者间隔天数。T1／2值越小，表明CA125下降快，术后残余灶小或化疗敏感者，预后越好。另有研究发现CA125含量与卵巢癌的病理分型及病期有关，本资料未发现有明显关系。31例卵巢癌中16例初检时，无论是囊腺癌还是鳞状细胞癌，CA125均＞500 U／ml。是否与单抗识别表位差异和多数患者处于晚期有关需进一步研究。
作者： 刊期： 2000年第09期
探讨正常人外周血淋巴细胞端粒酶活性表达情况。方法：采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附(PCR-EIISA)法测定正常人淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激前后端粒酶的活性水平及重组人白细胞介素12(rhIL-12)对端粒酶活性的影响。结果：正常人外周血静息淋巴细胞有低水平的端粒酶活性表达，但经PHA刺激后活性明显升高，没有发现rhIL-12对端粒酶活性的影响。结论：正常人外周血淋巴细胞可表达端粒酶活性，其与淋巴细胞功能的关系尚待进一步研究。
作者：黄燕；范学工；唐发清；易红 刊期： 2000年第09期
文献报道，细胞毒T细胞抗原4(CTLA4)是一种T细胞活化的重要负调节因子，编码这一蛋白的基因有一定的多态性，并可影响到某些自身免疫病的发病[1]。本文通过对CTLA4基因变异分析，探讨该基因在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)发病中的意义。1 材料与方法1.1 实验对象中全部RA病例来自我院和解放军总医院风湿科1996．7～1998．12门诊或住院患者，共63例(RA)，均符合1987年美国抗风湿联盟(ACR)的诊断标准。另选择60名健康献血员作为对照组。所有受试对象均抽取静脉血2ml。1.2 实验方法1.2.1 酚/氯仿/异戊醇法提纯外周血基因组DNA。1.2.2 CTLA4基因第一外显子+49位等位基因的检测采用PCR-RFLP分析方法[1]。PCR产物阳性条带为162bp。将产物以内切酶BbvI在37℃水浴2h。酶切后显示88bp和74bp2条带型者定为G(Ala)，仍显示162bp者定为A(Ihr)。内切酶BbvI和纯合子、杂合子阳性对照标本由德国JohannnWolfgang Goethe大学Badenhoop教授赠送。1.2.3 用组特异性引物扩增DRB1基因第2外显子，筛选DR4阳性标本[2]。1.3 分别计算RA组和对照组CTLA4等位基因A与G、表现型A与G及纯合子、杂合子频率。2个样本率的比较用χ2检验。2 结果2.1 CTLA4等位基因A与G、表现型A和G以及杂合子AG、纯合子AA与GG的频率在RA组和正常对照组之间无显著差异(P＞0．05)。2.2 杂合子AG及纯合子AA在DR4+RA组频率分别显著高于和低于DR4+正常对照组(χ2分别为5．84和5．46，P＜0．05)；表现型G在DR4+RA组显著高于DR4+正常对照组(χ2=5．84，P＜0．05)。纯合子GG、表现型A在DR4+RA组和DR4+正常对照组无显著差异。各等位基因频率在DR4-RA组和DR4-正常对照组间也无显著差异。
作者：闵伟琪；牛跃文 刊期： 2000年第09期
白介素6(IL-6)是一种多功能的细胞因子，除涉及感染、炎症等急性期反应外，对T、B细胞的发育、骨髓造血细胞增殖均有很重要的作用[1]。自多发性骨髓瘤患者血浆IL-6水平增高被发现后，又发现IL-6血浆水平增高还见于弥散性血管内凝血(DIC)，并且与DIC的严重程度、治疗反应和DIC是否伴有脏器损伤有关。IL-8属于α型趋化因子，在其多种生物特性中，有一种趋化中性粒细胞的功能。在整合素参与下，作用于血小板和内皮细胞，使CD16和CD18的表达和IL-6一样卷入凝血和血栓形成的过程。近又证实单核细胞表面可表达白介素6受体(IL-6R)，单核细胞也可能受到IL-8的趋化作用。单核细胞是血液细胞中重要的组织因子(TF)来源的细胞，TF在DIC和其他血栓形成病变中的作用是不容置疑的[2]。本文就IL-6和IL-8对外周血单核细胞体外培养中TF表达的影响，研究IL-6、IL-8与单核细胞、TF在血栓形成中的相互关系。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 外周血单核细胞(PBMC) 取自10名正常健康志愿者外周血。1.1.2 试剂 rhIL-6、hIL-6 MoAb和rhIL-8、IL-8 Mo-Ab购自STAGO公司。TF ELISA检测试剂盒购自Immunotech公司。Ficoll液、Hypague液购于Sigma公司。RPMI1640培养液、NCS购于Sigma公司。1.2 方法1.2.1 外周血单核细胞分离 采用密度梯度离心法。1.2.2 外周血单核细胞原代培养 将2×105ml-1的外周血单核细胞悬浮于20％的NCS RPMI1640培养液中，以5％CO2 37℃培养24h。将PBMC培养液用水平离心机以3 000 r/min，离心10 min，取上清液待测。1.2.3 上清液TF抗原含量检测 以ELISA方法测定外周血单核细胞培养(加或不加rhII-6、hIL-6 MoAb和rhIL-8、IL-8 MoAb)上清液中的TF抗原含量。
作者：胡翊群；丁磊；夏文权；王也飞；余文红；王鸿利 刊期： 2000年第09期
自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是机体免疫功能紊乱所引起的溶血性贫血，主要由于体内存在自身抗体而诱发。近年有研究发现AIHA病人的T细胞激活有异常[1,2]，但有关资料甚少。本文利用RT-PCR和基因扫描(Genescan)等方法分析T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族基因互补决定区3(CDR3)的长度，从而了解2例AIHA病人TCR Vβ各亚家族T细胞的分布和克隆性特点。1 材料与方法1.1 标本 经溶血性贫血有关检查等确诊的AIHA和Evans综合征各1例，正常人10例，T细胞株Molt-4和Jurkat作为对照。外周血单个核细胞分离、RNA提取及cDNA合成均按常规方法进行。1.2 反转录-多聚酶链反应(RT-PCR) 据Vβ24个亚家族基因设计相应的24个Vβ特异性上游引物，并在Cβ区设一Cβ下游引物[3]。每一标本分别以一Vβ(1～24)与Cβ引物共进行24次PCR检测。PCR操作按已报道方法进行[4,5]。1.3 基因扫描分析(T细胞克隆性分析)1.3.1 标记PCR产物(runoff reaction) 采用一荧光素标记引物Cβ-Fam(位于Cβ内侧)进行不对称半巢式PCR扩增，将首次PCR产物标上荧光素(fam)。总反应体积为10μl，其中包括2μl首次PCR产物，0．1μmol/L Cβ-Fam，3 mmol／L MgCl2，0．2 mmol/LdNTP,0．25U Taq聚合酶，PCR操作按已报道方法进行[4,5]。1.3.2 基因扫描(Genescan)分析 由于Vβ和Cβ引物是固定的，故Vβ/Cβ所扩增的PCR产物的大小决定于Vβ区和Dβ区之间以及Dβ区和Jβ区之间重排时的连接片段N区，即VβNDβNJβ(CDR3)，不同的T细胞克隆的PCR产物长度和浓度不同，通过PCR产物的状况，便可了解体内T细胞克隆存在的情况。经荧光素(fam)标记的产物通过自动序列分析仪(373A DNA序列仪，ABI，PE公司)中的分析软件672即基因扫描分析，通过电泳过程中所收集的不同位置和高度的峰表示产物的大小和含量；峰的形态提示产物的均一性即克隆性，当PCR产物中所含的DNA扩增片段大小一致时，在电泳过程中，其迁移率完全相同，故在同一时间点通过扫描探头，所显示的结果为一单峰图象，即提示为PCR产物来自于CDR3长度完全相同的T细胞，即单克隆的细胞；而一主峰和少数小峰图象提示产物主要来自同一克隆即为寡克隆性；而多峰图象提示多克隆性。有关操作步骤按使用指南进行。取标记的PCR产物1μl，加入2．5 μl甲酰胺，0．5μl标准品[ABI，GENESCAN,500-TAMRA，其中含有不同大小的用荧光素Tamra标记的DNA片段作为产物大小的参照物]及0．5μl加样缓冲液(葡聚糖兰50mg／ml，EDTA25mmol／L)，于94℃，4 min变性后于6％聚丙酰胺凝胶，373ADNA序列分析仪中电泳及分析结果[4,5]。2 结果2.1 RT-PCR扩增结果 正常人T细胞包含几乎全部的Vβ亚家族T细胞；Molt-4仅表达Vβ2、Jurkat仅表达Vβ8的T细胞[4,5]，AHA病人的T细胞中仅存在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ13、Vβ16和Vβ24等6个亚家族的T细胞；而Evans综合征病人的T细胞中则存在Vβ3、Vβ13和Vβ16等3个亚家族T细胞。2.2 基因扫描分析结果 正常人所有PCR产物均呈多峰图象，提示为多克隆性[5]；T细胞株的产物则为单克隆性；而所检测的2例病人中的Vβ3PCR产物均呈寡克隆性，Vβ16的PCR产物均呈双克隆性，其它的产物均提示为多克隆性(图1)。
作者：李扬秋；陈少华；杨力建；许敏华；郁志；曾慧兰；卢育洪；朱平 刊期： 2000年第09期
研究抗小鼠胸腺基质细胞(MTSC)Pf18-3单抗识别分子的表达特性。方法：采用流式细胞(FACS)和激光扫描共焦显微镜(CLSM)分析TSC单抗Pf18-3染色特征。结果：FACS分析发现Pf18-3单抗识别分子可表达于胸腺、胎肝和骨髓等不同来源的基质细胞系和腹腔巨噬细胞表面。新鲜分离的胸腺细胞Pf18-3识别分子表达阴性，但ConA活化可诱导并上调其表达，随活化时间延长表达增高，且主要表达于CD4+CD8+和CD4+CD8-两细胞亚群。CLSM分析可见：荧光沿胸腺细胞边缘呈环状分布，活化后荧光明显增厚向胞浆延伸，胞核不着色。结论：Pf18-3单抗识别分子共表达于胸腺基质细胞及活化的胸腺细胞，并与CD4+CD8+和CD4+CD8-亚群胸腺细胞活化密切相关。
作者：陈慰峰；何其华；肖士云 刊期： 2000年第09期
目的：研究丙型肝炎病毒(HCV)感染外周血单个核细胞(PBMC)的情况及其对T淋巴细胞亚群的影响。方法：运用非同位素原位杂交(NISH)法和链酶亲和素-生物素(SABC)法分别检测20例慢性丙型肝炎患者PBMC中的HCV-RNA和非结构(Nonstructural，NS)蛋白NS5抗原，同时用SABC法检测其T淋巴细胞亚群。结果：8例(40．0％)患者的PBMC中HCV-RNA呈阳性，其中6例(30．0％)患者的PBMC中NS5抗原同时呈阳性。HCV-RNA和NS5抗原均呈散在颗粒状或弥漫分布，主要位于胞浆中，NS5抗原还出现于胞膜上。HCV-RNA和NS5阳性细胞的比例均很低，分别为0．1％～2．0％和0．1％～3．0％。HCV-RNA阳性组和阴性组的CD4+T细胞的比例均低于正常对照组，CD8+T细胞比例高于正常组，CD4+/CD8+比值下降；而HCV-RNA阳性组的CD4+T细胞比例则又低于阴性组，CD8+T细胞比例高于阴性组，CD4+/CD8+比值出现倒置(P值均小于0．01)。结论：HCV可以感染慢性丙型肝炎患者的PBMC并在其中复制；HCV感染PBMC后引起CD4+T细胞比例减少，CD8+T细胞比例增加，导致CD4+/CD8+比值下降甚至倒置，从而成为HCV感染慢性化的重要原因之一。
作者：高勇；贺永文；曾令兰 刊期： 2000年第09期
目的：克隆表达人成纤维细胞生长因子受体。方法：采用RT-PCR法。结果：在钓取人cDNA的过程中，意外地钓取到2个与FGFR1细胞外段同源的cDNA片段，经克隆和DNA序列分析发现它们是FGFR1细胞外源的cDNA片段。结论：虽然对这2个cDNA片段的功能尚不明确，但这种抓住新现象并进行探究的意识对科研很重要。
作者：郭京丽；吴秀丽；王丽颖；杨贵贞 刊期： 2000年第09期
目的：研究白介素-1受体相关激酶-2(IRAK-2)反义寡核苷酸对白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)诱导前列腺环素(PGI2)合成的不同影响。方法：白介素-1受体相关激酶-2反义寡核苷酸导入脐静脉内皮细胞以阻断白介素-1受体相关激酶-2的表达，用白介素-1及肿瘤坏死因子刺激细胞后，用竞争ELISA方法检测PGI2的合成。结果：白介素-1受体相关激酶-2反义寡核苷酸可显著降低白介素-1诱导的PGI2合成，此效应强度存在时间和浓度依赖性，但白介素-1受体相关激酶-2反义寡核苷酸对肿瘤坏死因子诱导的PGI2合成无影响。结论：白介素-1受体相关激酶-2反义寡核苷酸对IL-1和TNF诱导PGI2合成有不同影响。白介素-1受体相关激酶-2在IL-1诱导的PGI2合成中起重要作用。
作者：李亦蕾；郭甫坤；吴曙光 刊期： 2000年第09期
目的：构建和表达抗TNF-α人-鼠嵌合抗体。方法：将抗TNF-α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人k链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中，分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人-鼠嵌合抗体真核表达载体，转染真核细胞，通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹检测TNF-α的活性。用L929细胞检测嵌合抗体体外中和TNF-α的活性。结果：ELISA鉴定结果表明该嵌合抗体与TNF-α特异性结合；PF-PCR结果显示转染后细胞系有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录；免疫印迹结果证实有人IgG蛋白的表达；体外中和实验证明此嵌合抗体能中和TNF-α对L929细胞的毒性。结论：构建的真核表达载体获得了功能性表达。
作者：周丽君；陈晓穗；王欲晓；朱迎春；张海荣；谢帮铁；王琰 刊期： 2000年第09期
目的：采用前列腺抗原(PSA)单抗标记胶体金的方法，测定PSA抗原。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，金标免疫层析方法(CSLIA)测定。结果：将金标方法与ELISA方法进行比较灵敏度、特异性，其两者无显著性差异。金标方法可在室温放置1年以上。结论：金标免疫层析法测定前列腺抗原，是一种快速、简便、灵敏的筛选前列腺癌患者的诊断方法。
作者：郭兰英；万卷芳 刊期： 2000年第09期
目的：建立一种简便、快速、准确检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的胶体金免疫层析法。方法：应用cTnI免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合筛选，获得分泌高效价抗cTnI抗体细胞株6株。其中3F10作为金标抗体，3A7作为生物素化抗体，链霉亲合素结合于硝酸纤维素膜，制成免疫层析测试条，依据测试条上出现肉眼可见的红色线条判定结果。结果：检测灵敏度可达0．4 ng/ml。测定30例急性心肌梗塞(AMI)患者血清cTnI,并与国外同类产品比较，两者符合率为93．6％。结论：该方法快速检测cTnI特异性强，灵敏度高，简便，有广泛应用价值。
作者：李志梁；陆青；姜朝新；焦宝明 刊期： 2000年第09期
在酶联免疫吸附试验（ELISA）中固定半抗原通常采用与蛋白分子相偶联或共价结合到固相载体上。
作者：曹利民 刊期： 2000年第09期
T淋巴细胞亚群(TL-CFU)可反映细胞免疫系统中有T增殖和分化能力的祖细胞或受体细胞的活体水平，是评价细胞免疫缺陷的一个敏感指标。国内外文献均报道过SLE病人TL-CFU水平低下[1,2]。采用以青风藤、青蒿、红藤、鸡血藤为主的中药加用少量激素治疗并观察TL-CFU水平变化尚罕见报道。本研究从TL-CFU数目变化角度进行探讨，旨在探讨中药对SLE的免疫功能调节作用。1 材料与方法1.1 资料 1994年5月～1996年7月湖南医科大学附二院狼疮门诊及住院病人45例，男性6例、女性39例。年龄16～35岁，平均30．38岁，病程3～8年，平均5．28年。ARA标准：1982年ABA诊断标准、活动期诊断标准：chbick法[3]。患者分组：活动期20例，非活动期25例。患者均未服用免疫抑制剂，为避免药物影响，采血前至少停服强的松16 h以上，这样对指标影响甚微[4]。正常对照组22人，男性11人，女性11人；年龄19～45岁，平均为28．45岁，身体健康，均为本院工作人员及自愿献血员。1.2 实验试剂与方法1.2.1 实验试剂 淋巴细胞分离液，上海试剂二厂；新生小牛血清，杭州四季青生物材料研究所，PHA为广州医药工业研究所产品。1.2.2 实验方法 采用单克隆抗体法，见文献[1]。1.3 治疗方法 中药+强的松组依病情给予5～60mg/日强的松，另服用青风藤、青蒿、红藤、鸡血藤等中药汤剂，1剂/日，疗程3个月。强的松组依病情给予5～60mg/日强的松服用，疗程3个月。
作者：施欣红；沈好波 刊期： 2000年第09期
目的：研究白桦三萜类物质(TBP)体内抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：利用小鼠体内移植瘤模型，测定TBP对小鼠黑色素瘤B16、肉瘤S180、Lewis肺癌和艾氏腹水癌等肿瘤的抑瘤率。采用放射性掺入法检测ConA诱导的脾细胞增殖反应；放射性释放法检测巨噬细胞细胞毒活性；中性红释放法检测TNF和NK细胞活性。结果：TBP对各瘤株的抑瘤率均达到30％以上，对黑色素瘤B16的效果好，抑瘤率为51．4％。TBP对ConA诱导的增殖反应和NK细胞活性无明显影响，但可促进巨噬细胞和脾细胞分泌TNF，增加巨噬细胞的细胞毒活性。结论：TBP具有良好的抗肿瘤作用，增强机体的非特异性免疫功能是其抗肿瘤机制之一。
作者：李薇；李岩；金雄杰 刊期： 2000年第09期
目的：探讨生长激素(GH)对T淋巴细胞功能的影响。方法：构建GH cDNA表达质粒PcDNA-GH cDNA，然后将其转染入T淋巴细胞系-Jurkat细胞中，观察过度表达的内源GH和加入外源基因重组人GH对T淋巴细胞功能的影响。结果：过量表达的内源GH使Jurkat细胞表达IL-2R和分泌IL-2、IFN-γ分别增加1．40倍、1．60倍和1．98倍，而在培养液中加入抗GH血清后，GH的这种作用消失。另外，外源GH对Jurkat细胞的功能也有促进作用。结论：生长激素可作为自分泌和旁分泌因子调节T淋巴细胞功能。
作者：邓洁英；史轶蘩；SHI Yi-Fan 刊期： 2000年第09期
为了开展禽类重组IFN-α类生物治疗制剂的研究。方法：根据原始红鸡IFN-A类基因设计了引物对，采用PCR法克隆了我国地方标准品种丝羽乌骨鸡的IFN-α基因，并进行了序列分析；构建了鸡IFN-α基因系统进化树。结果：丝羽乌骨鸡的IFN-α基因(TSIFNA5)与红色原鸡类鸡的IFN-α基因相比，ORF长度都为582个核苷酸、编码193个氨基酸，相互间同源性在97．4％～99．0％。结论：基因进化系统树揭示了TSIFNA5是鸡干扰素的一分支。
作者：汪明；杨琪；刘津；吴志光；郭玉璞；夏春 刊期： 2000年第09期
研究了经Cop-I治疗后的多发性硬化(MS)患者外周血淋巴细胞(PBMC)对Cop-I及碱性髓鞘蛋白(MBP)免疫的反应性。方法：用半有限稀释微量培养技术分析经Cop-I治疗的MS患者的PBMC对Cop-I和MBP诱导的特异性T细胞株的反应频率。用ELISA方法检测T细胞株分泌的细胞因子类型。用免疫荧光检测了特异性Cop-I细胞株的表型。结果：15位经Cop-I治疗后的MS患者PBMC中的Cop-I／MBP特异性T细胞克隆反应频率高达84．0％，而在9位非MS患者对照组中，其T细胞对Cop-I／MBP反应的频率仅为5．4％。用ELISA方法检测发现体外Cop-I／MBP诱导的特异性T细胞株株分泌IL-5和IL-13，为Th2类型的细胞因子。所有的细胞株均表现为CD3阳性，大部分高表达CD8细胞并发现有CD3／CD56双阳性的NKT细胞。结论：上述结果提示多肽疫苗Cop-I能诱导MS患者特异性免疫反应，以诱导CD8阳性T细胞和NKT为特点，并以正向调节Th2类型为主的免疫活性细胞。
作者： 刊期： 2000年第09期
目的：为研究CD40分子在人树突状细胞(DC)抗多发性骨髓瘤(MM)中的作用及其机制。方法：采用CD40配体(CD40L)转基因细胞及抗CD40的激发型单克隆抗体在体外激发DC，并通过DC细胞计数、形态学和细胞表型分析、IL-12定量检测、DC对MM抗原的摄取及混合淋巴细胞反应等手段对其进行研究。结果：CD40分子配基化可促进DC的体外增殖和分化，使DC增加分泌IL-12,并下调DC摄取抗原的能力，促进DC的成熟，同时赋予DC激发自体CD8+细胞增殖的作用，使后者对MM细胞产生特异性的杀伤作用。结论：CD40分子激发不仅有利于DC的增殖、分化和增强激发T细胞增殖，而且Th细胞表达的CD40L是DC获得直接激发抗MM抗原特异性CD8+T细胞的关键分子。
作者：王月丹；谢玮；邱玉华；顾宗江；张学光 刊期： 2000年第09期
