目的:研究HBsAg冲击的慢性乙肝患者单核细胞来源的树突状细胞(DCs)的功能状况及体外对HBV特异性CTL的诱导作用,初步探讨诱导特异性抗HBV细胞免疫的途径.方法:分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以GM-CSF+IL-4+TNF-α培养诱导DCs,加入HBsAg冲击以诱导HBV特异性DCs. 采用FCM测定细胞表面免疫分子CD1a、CD83、CD86、CD80、CD40以及HLA-DR的表达水平,ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-6、IL-12的分泌含量,MTT法测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,LDH法检测DC诱导的患者外周血T细胞对HepG2 2.2.15(转染HBV DNA)、HepG2肝癌细胞株及K562白血病细胞株的细胞毒作用.结果:HBsAg冲击的DC其表达CD1a、CD83、CD86、CD80、CD40、HLA-DR表面分子明显高于对照组(P＜0.01,P＜0.05),分泌IL-12的水平也高于对照组(P＜0.01),而分泌IL-6的水平则较对照组显著降低(P＜0.01);HBsAg冲击的 DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力明显增强(P＜0.05),并可有效地诱导自体CTL对转HBV基因的HepG2 2.2.15细胞高效特异性杀伤作用(P＜0.01).结论:慢性乙型肝炎患者单核细胞来源的DCs经HBsAg抗原冲击后,生物学活性增强,并且能有效地诱导对HBV特异性反应的CTL.
作者：汪晓莺；孙晓雷；汤伟；孙伟红；苏丽；张学光 刊期： 2003年第12期
目的:探讨眼前房内注射牛视网膜可溶性抗原(S抗原)在诱导眼免疫耐受中的作用.方法:自新鲜牛眼球中提取S抗原,注入Wistar大鼠眼前房内.1周后,皮内注射牛S抗原与弗氏完全佐剂乳化混合物.观察大鼠实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)发作时间、临床表现及组织病理学改变;并以ELISA方法检测脾细胞培养上清液中的细胞因子.结果:前房预处理组(group A)EAU的发生率明显低于阳性对照组(group B),所有具有阳性体征者均有组织病理学改变.前房预处理组动物脾细胞培养上清液中的IL-4浓度明显高于阳性对照组;而IFN-γ水平明显低于阳性对照组.结论:前房内注射牛S抗原可以诱导大鼠眼免疫耐受,在很大程度上抑制EAU的发生和发展.
作者：郭涛；张凤蕴；赵育莹；高淑英；王强；王丽群；唐建民；李殿俊 刊期： 2003年第12期
目的:为了确定P200蛋白质抗原的性质.方法:收集了12例抗P200类天疱疮血清,对6例隐性营养不良性大疱性表皮松解症(RDEB)皮肤切片进行了间接免疫荧光研究.结果:发现所有12例抗P200类天疱疮血清与5例RDEB皮肤基底膜带(BMZ)反应,而获得性大疱表皮松解症(EBA)血清对这些皮肤为阴性.另外,在1例RDEB,EBA血清既与BMZ反应又与Ⅶ型胶原沉积部位的胞浆反应,而抗P200类天疱疮血清无此反应.结论:这些结果提示200 kD抗原不是Ⅶ型胶原成份,而是一种特异的自身抗原.
作者：刘元林；桥本隆 刊期： 2003年第12期
目的:探讨抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对膀胱癌生长的抑制作用.方法:应用双功能抗体作用荷瘤鼠模型,观察抑瘤作用;应用免疫组化技术检测体内生长肿瘤中微血管密度.结果:双功能抗体对体内生长的肿瘤有明显的抑制作用,经双功能抗体治疗的瘤体中微血管密度明显低于对照组.结论:双功能抗体可以抑制肿瘤血管生成,有望为膀胱癌的治疗提供新的方法.
作者：任明；刘禄成；范海涛；朱德淳；李然伟；李香云 刊期： 2003年第12期
细胞因子是机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的多肽类因子,调节多种细胞的生理功能,在机体的免疫应答、炎症反应、造血功能及生殖过程等各个方面都有作用.正常情况下,细胞因子表达和分泌受机体严格调控,在病理状态下,细胞因子会出现异常表达.
作者：刘芳；罗颂平；欧汝强 刊期： 2003年第12期
细胞凋亡(Apoptosis)是机体的一种主动、程序化生理过程,受体内多种因素调节,凋亡过程的紊乱与肿瘤的发生发展密切相关.有研究者认为,病毒基因产物对凋亡有两方面的作用,一部分可抑制细胞凋亡,而另一些病毒基因产物则能诱导细胞凋亡[1-3].诱导细胞凋亡的病毒中,鸡贫血病毒(Chicken Anemia Virus, CAV)就是一种典型的具有特征性的代表,它的VP3基因被称为凋亡素基因(Apoptin),可独立诱导鸡成红细胞和成淋巴细胞发生凋亡,并具有诱导人肿瘤细胞或转化细胞等非正常细胞凋亡的作用[4].本文即对Apoptin的结构、功能及其抗肿瘤作用特点做一综述.
作者：薛立娟；崔立波；王维忠 刊期： 2003年第12期
目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗.将该质粒转染Hela细胞,观察其体外表达情况.以50 μg DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答;隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠,观察攻击后存活情况.结果:制备了直径为80～100 nm的Chitosan-DNA复合物颗粒,体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平.该疫苗滴鼻3次免疫后,不仅诱生了高水平的IgG,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体,第6周抗体P/N值分别达3.5和3.2.特异性细胞免疫应答研究发现,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用,并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组.CVB3攻击后,可保护33.3%小鼠长期存活,而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8.5和10.8天.病理学研究显示:Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润.结论:Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应,具有一定的抗CVB感染的免疫保护力.
作者：徐薇；沈燕；王立新；许从峰；储以微；熊思东 刊期： 2003年第12期
目的:探讨白细胞介素1(IL-1)对主动脉平滑肌细胞株(A7r5细胞)Ⅰ型IP3受体蛋白过度表达的影响.方法:通过对主动脉平滑肌细胞培养,应用蛋白杂交技术、核酸杂交技术分别检测在IL-1β作用后,主动脉平滑肌细胞中Ⅰ型三磷酸肌醇(IP3)受体蛋白和Ⅰ型IP3受体mRNA的表达及Ⅰ型IP3受体mRNA半衰期的测定,同时研究IL-1β对Ⅰ型IP3受体基因启动子的作用.结果:IL-1β能增强主动脉平滑肌细胞内的Ⅰ型IP3受体蛋白的表达,两者呈剂量依赖关系;IL-1β也能使Ⅰ型IP3受体mRNA水平增高;通过对Ⅰ型IP3受体mRNA半衰期的测定明确IL-1β对Ⅰ型IP3受体mRNA影响不是抑制mRNA的降解,而是诱导其表达增加.IL-1β作用4小时时,装有Ⅰ型IP3受体启动子的质粒上的报告基因表达增加,而8小时时,报告基因的表达即降至IL-1β作用前的水平.结论:IL-1可能作用于Ⅰ型IP3受体mRNA的基因启动子,使Ⅰ型IP3受体mRNA合成增加,导致Ⅰ型IP3受体蛋白表达增加,由此构成了主动脉平滑肌细胞内储备Ca2+释放,引起动脉平滑肌细胞收缩、舒张功能异常的病理生理基础.
作者：王静艳；吕飒；刘沛 刊期： 2003年第12期
目的:颗粒酶B(Granzyme B,GraB)对核内物质具亲和力,体外除去核膜的细胞核中可观察到大量GraB聚积,观察GraB是否直接作用于基因组DNA.方法:通过抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA,构建GraB原核表达载体,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物.表达产物经亲和层析纯化后,观察其对基因组DNA的功能.结果:表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中,具有良好的抗原性和特异性,特异性底物检测有活性,且具有直接作用于部分断裂的基因组DNA,使其发生进一步裂解的活性.结论:GraB直接作用于部分断裂的基因组DNA,这可能是GraB诱导细胞凋亡新的作用途径.
作者：李先茂；曾位森；张亚历 刊期： 2003年第12期
目的:比较异种HSP70及固相抗体法体外扩增人γδT细胞.方法:分别用固相抗体法、HSP70BCG及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白70-肽复合物(HSP70 m-肽复合物)体外扩增人PBMCs的γδT细胞,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布,RT-PCR检测各亚型基因的取用.MTT检测γδT细胞的细胞毒作用.结果:培养14天后,抗体法扩增的PMBCs总数增加30～40倍,γδT细胞的比率由3.2%提高到86.7%;HSP70BCG组PBMCs总数增加7～8倍,γδT细胞的比率由3.2%提高到71.32%;HSP70 m-肽复合物组PBMCs总数增加4～5倍,γδT细胞的比率由3.2%提高到27.26%.抗体及HSP70BCG扩增的γδT细胞以表达Vγ9/Vδ2亚型为主,且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用,对Daudi具较高的杀伤活性.结论:抗体及HSP70BCG均能扩增出高纯度的γδT细胞,且具有完整的受体库,扩增的γδT细胞具细胞毒活性.
作者：高诗娟；施广霞；张素梅；钱振超；何维 刊期： 2003年第12期
目的:培育杀伤效应更强的肿瘤杀伤细胞.方法:IL-6+CD3AK细胞是用人外周血单个核细胞加rIL-6、rIL-2、CD3单抗制备的;靶细胞用MGC-803胃癌细胞株.效应细胞分5组,每一组又按效靶比例分4组,到培养第24小时和48小时检测各组癌细胞的死亡情况.用四唑盐(MTT)比色法、台盼蓝排斥法检测死亡的癌细胞;并用各种显微镜观察肿瘤杀伤细胞杀伤靶细胞的形态变化.结果:显示rIL-6+CD3AK细胞组杀伤癌细胞效应比其他组强(P<0.05);随效靶比例的增加和作用时间的延长,杀伤效应出现增强趋势.在光镜下观察到肿瘤杀伤细胞围绕癌细胞形成玫瑰花结样结构,在扫描电镜下观察到肿瘤杀伤细胞和靶细胞的微绒毛呈犬牙交错状结合,随着时间的延长,靶细胞表面的微绒毛逐渐变短消失,核膜表面出现众多孔洞,以至靶细胞碎裂死亡.结论:IL-6+CD3AK细胞对胃癌细胞的杀伤力强于LAK(只加rIL-2)细胞.
作者：黄太琴；金京子；孙抒；金昌范；李日镛 刊期： 2003年第12期
目的:采用两阶段EB病毒血清学筛查方法,进行人群鼻咽癌的筛查.方法:用ELISA检测血清EB病毒抗体,首先以EBNA1 IgA作为人群鼻咽癌的初筛指标,第二阶段的检查是在EBNA1 IgA阳性人群中再进一步检测EBNA1 IgG和Zta IgG两种抗体.结果:EBNA1 IgA的灵敏度和特异度分别为91.9%和91.4%,均高于EBNA1 IgG和Zta IgG;第二阶段检查可以将鼻咽癌筛查的特异度提高到96.5%,同时可将人群划分高、中、低三个不同危险层次,其中高危险人群仅占0.39%.结论:实行两阶段筛查法,使鼻咽癌筛查既能达到良好的灵敏度,又能提高检测的特异性,同时还可以将筛查人群划分不同的危险层次.
作者：程伟民；季明芳；李晓玲；杨金兰；宗永生 刊期： 2003年第12期
目的:应用rhIL-18在体外培养系统(Coculture system in vitro,CCs)中诱导快速肿瘤杀伤效应,并对这种快速杀伤效应的影响因素进行了探讨.方法:采用Stem SepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突状细胞(DCs),流式细胞仪分析细胞表型,125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性.结果:rhIL-18在CCs中能够诱导快速肿瘤杀伤效应,这种杀伤效应与rhIL-18含量呈剂量依赖关系,DCs和T细胞的存在与否对这种杀伤效应无明显影响,同时这种快速杀伤效应无抗原特异性、不受MHC的限制.结论:在体外培养系统中只要有rhIL-18和NK细胞的存在,即能产生对肿瘤细胞的快速杀伤效应,即这种快速杀伤效应细胞为NK细胞.
作者：方艳秋；谭岩；刘立华；宋燕；张雪松；段秀梅；姜艳芳 刊期： 2003年第12期
类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)是一种累及全身多关节的自身免疫性炎症性疾病,其病理特征之一为炎性滑膜浸润大量CD4+ T细胞,滑膜细胞增生及血管翳形成,其机理仍未阐明.有学者认为RA的发病与细胞凋亡过程异常有关,并有多种细胞参与,包括滑膜细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、软骨细胞等[1].本实验应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术,探讨细胞凋亡在RA发病机制中的作用.
作者：张浩；董书魁；李雪丽；王清娟 刊期： 2003年第12期
目的:探讨肝硬化门脉高(PTH)的血流动力学变化及其与血中AT-Ⅱ的关系.方法:48例肝硬化PTH患者(代偿期18例、失代偿期30例)及32例正常人作为研究对象,应用双功能多普勒测定门、脾静脉血流量(PVBF&SVBF),同步测定血中AT-Ⅱ的水平,并分析PVBF&SVBF与AT-Ⅱ的相关性.结果:门脉系统高血流动力学改变存在于肝硬化PTH发病的始终,代偿期显著下降的AT-Ⅱ与门脉高血流动力学变化无相关性,失代偿期显著升高的AT-Ⅱ与门脉高血流动力变化呈正相关.结论:此研究对临床诊治有指导意义.
作者：刘苓；周力；邱秉胜；谭庆华；黄宇 刊期： 2003年第12期
目的:观察急性不完全脊髓损伤患者血清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,探讨继发性脊髓损伤的可能机制.方法:收集28例急性不完全脊髓损伤患者、8例单纯脊柱压缩骨折患者及正常对照的血清,ELISA方法检测其中MCP-1的水平,并分析其入院时的MRI资料.结果:与健康对照相比,急性不完全脊髓损伤患者血清中MCP-1的浓度明显增高(P＜0.01);且水平与脊髓受压程度及脊髓损伤的病理类型有相关性(P＜0.05).结论:MCP-1可能参与脊髓损伤部位的继发性炎症反应,其血清浓度与诊断、预后有一定关系.
作者：马永刚；刘世清；刘敏 刊期： 2003年第12期
目的:探讨HLA-DQB1启动子区域基因多态性是否与原因不明习惯性流产发病存在关联.方法:采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交方法,对32例原因不明习惯性流产患者和53例正常妇女,分析DQB1启动子区域基因多态性.结果:发现DQB1启动子等位基因频率在两组中无统计学上差异,而QBP6.2-DQB1*0604/0605单元型在患者组中的表达频率是12.5%,在对照组中频率是2.83%,两者相比差异显著(RR=4.9,P＜0.05).此外,还发现了6种中国人新的QBP-DQB1的单元型.结论:DQB1启动子与原因不明习惯性流产不存在直接关联,但与DQB1组成的单元型可能是导致该病易感性的因素.
作者：汪希鹏；林其德；陆佩华；马政文；黄立东 刊期： 2003年第12期
目的:建立利用人造血干/祖细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的方法,为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台.方法:MACS方法分离人脐带CD34+细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上,IMDM液体培养基含20%人AB血清并加入FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合,于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞利用流式细胞仪对细胞表型进行检测,并进行细胞形态学分析.结果:2周后,CD4+CD8+非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0.3%～13.3%,4～5周CD4+CD8+T淋巴细胞达到高峰占16.6%～26.5%,且CD3+CD4+CD8+和CD3+CD4-CD8+T淋巴细胞逐渐增多,6周后达26.5%～64.9%和11.6%～38.9%.培养成熟的T淋巴细胞经PHA+IL-2刺激后瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在.结论:利用人脐血CD34+在体外人胎儿胸腺基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下,可诱导分化出T淋巴细胞,并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应.
作者：姚志娟；乌仁娜；毕东杰；楼晓；黄云中；冯凯；陈虎 刊期： 2003年第12期
