诱导特异性免疫耐受是多发性硬化治疗学的一个重要研究方向.实验性自身免疫性脑脊髓炎是研究多发性硬化常用的动物模型,在此介绍我们使用同源脊髓匀浆诱导昆明鼠耐受实验性自身免疫性脑脊髓炎的一些实验工作结果及体会.
作者：鲍健；胡学强 刊期： 2005年第03期
目的:探讨九代清源口服液单用及联合拉米夫定在治疗慢性乙型肝炎(CHB)、清除HBV中的作用.方法:选取108例CHB病人,随机分为3组,分别为九代清源口服液治疗组(简称九代组)、拉米夫定治疗组(简称拉米夫定组)和九代清源口服液联合拉米夫定治疗组(简称联合组),每组各36例病人.分别于治疗前、治疗后3、6、9、12个月及随访期第3、6、12个月进行实验室ALT、HBV-M和HBV-DNA检查.结果:治疗12个月和随访12个月时,联合组ALT复常例数、HBV-DNA转阴例数、HBeAg转阴例数、HBeAg/抗HBe血清转换率和总有效率分别为:94.4%、86.1%、55.6%、52.8%、75.0%和83.3%、72.2%、47.2%、47.2%、72.2%,明显优于九代组和拉米夫定组(均P＜0.05或P＜0.01).九代组和拉米夫定组比较,疗效相似,各期各指标均无显著性差异(P＞0.05).结论:九代清源口服液单用和联用均有一定的抗HBV作用,与拉米夫定联合治疗CHB病人,疗效大大提高,取得了较好的近期及远期疗效.
作者：李琳；李求是 刊期： 2005年第03期
目的:应用流式细胞术检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)CD58+细胞百分率,并探讨其与乙型肝炎的关系.方法:采用直接免疫荧光法常规提取PBMC,应用流式细胞仪分别检测43例HBV感染者及11例正常对照的PBMC CD58+细胞百分率,同时检测血清ALT、AST水平.结果:乙型肝炎各组患者PBMC CD58+细胞百分率较正常对照组明显增高(P＜0.05);乙型肝炎患者PBMC CD58+细胞百分率与血清ALT、AST呈显著正相关.结论:乙型肝炎患者PBMC CD58+细胞百分率与疾病严重程度及肝细胞损伤严重程度有关.
作者：谢明；纪玉强；王香玲；孟照俊；李洁；袁育康 刊期： 2005年第03期
转接蛋白(Adaptor)通常被定义为具有蛋白-蛋白或蛋白-脂质相互作用结构域,而不具备酶活性的分子,这些结构域通常指Src同源结构域2(SH2)、Src同源结构域3(SH3)和PH(Pleckstrin Homology)等.但许多酶也可被认为是转接蛋白分子,因为它们除具有酶活性外,也含有蛋白或脂质的结合域,如Src家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)中的LYN既具有酶活性,也具有一个SH2和SH3结构域.此外,某些辅助受体,如配对的免疫球蛋白样受体B(PIRB)和CD19,也含有胞浆蛋白-蛋白相互作用域,因此也能被认为是转接蛋白.本文仅对几个新近发现的经典定义的转接蛋白分子做一概述.
作者：王秀丽；李大金 刊期： 2005年第03期
目的:观察FasL基因转染对大鼠肥大细胞凋亡的影响.方法:RT-PCR法扩增大鼠FasL穿膜区和胞外区cDNA,成功构建pcDNA3.1/FasL真核表达质粒,瞬时转染RBL-2H3,RT-PCR、免疫印迹法鉴定FasL在RBL-2H3上的表达,Annexin V流式细胞检测pcDNA3.1/FasL转染RBL-2H3后细胞的凋亡情况.结果:获得FasL穿膜区和胞外区cDNA,构建pcDNA3.1/FasL真核表达质粒,瞬时转染RBL-2H3后在细胞膜和上清均有FasL的存在,瞬时转染RBL-2H3后48小时,细胞发生凋亡.结论:肥大细胞可以通过Fas-FasL途径凋亡,为FasL基因应用于过敏性疾病的治疗提供依据.
作者：修清玉；杨丹榕；韩焕兴；石昭泉；陆慧琦；周琳 刊期： 2005年第03期
目的:克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应.方法:运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GST-sOX40L,Western blot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响.结果:构建了GST-sOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性:促进T细胞生长、增殖以及IL-2的分泌.结论:成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础.
作者：施勤；陈永井；孙建军；马泓冰；姜智；毛一香；张学光 刊期： 2005年第03期
目的:构建多特异性内参照模板,用于Fas、FasL、GB、P、TIA-1和β-actin的竞争性PCR定量.方法:体外合成DNA单链,PCR扩增后,得到2个片段.片段1长145 bp,含有Fas、FasL、GB、P、TIA-1和β-actin的5′引物序列;片段2长147 bp,含有相同基因的3′引物序列.将片段1、2分别克隆在载体PKF3上.结果:克隆载体经酶切鉴定及DNA序列测定,证实为本实验所设计的多特异性内参照模板,以此为模板,用不同的引物进行PCR扩增,即可得到相应的竞争内参照.应用多特异性内参照模板对移植肾急性排斥患者外周血淋巴细胞中TIA-1进行定量,结果显示,底物量在一定范围内,靶序列和竞争性内参照模板的扩增效率基本一致,尤其是在指数期.这一结果同样适用于Fas、FasL、GB、P和β-actin的定量.结论:本实验构建的多特异性内参照模板可用于6种基因的竞争性PCR检测,为进一步研究打下了基础.
作者：张万君；梅长林；叶朝阳；赵学智；孙田美；孙为民 刊期： 2005年第03期
近年来由于结核病在全球公共卫生政策中被严重忽视,加上移民的大量增加,HIV与结核杆菌伴发感染以及多重耐药菌株产生等因素,导致全球结核病疫情再度严峻,结核病的防治工作面临新的挑战[1].我国在全世界22个结核病大国中位居第二,每年死于结核病的人数高居各类传染病之首,因此研发新型有效抗结核病疫苗的工作迫在眉睫.我们构建了结核分支杆菌热休克蛋白(HSP)65的真核表达质粒pcHSP65[2],研究它在真核细胞-HeLa细胞中的表达情况,为进一步研究结核病DNA疫苗奠定基础.
作者：居巍；刘君炎；佘应龙；曹飞 刊期： 2005年第03期
目的:观察国际流行株HIV-1env与IFNα-2b基因共表达的颗粒化抗原疫苗与质粒DNA核酸疫苗免疫程序优化的效果.方法:将重组质粒pJ16env/IFNα-2b经脂质体介导转染RK细胞,并在痘苗病毒中共表达HIV-1env与IFNα-2b基因,以间接免疫荧光与斑点酶联免疫法鉴定其表达产物.以表达产物与质粒DNA联合免疫鼠脾淋巴细胞,检测淋巴细胞转化率、细胞毒性T细胞杀伤活性、CD4+、CD8+细胞计数与体液免疫水平.结果:pJ16env/IFNα-2b基因表达的颗粒化抗原疫苗具有良好的免疫原性,3vJ16env/IFNα-2b+pJ16env/IFNα-2b联合免疫效果优于vJ16env/IFNα-2b单独免疫.结论:pJ16env/IFNα-2b基因表达的颗粒化抗原疫苗能诱导机体产生细胞免疫与体液免疫.
作者：王继群；王洪军；吴益民；周德伟；魏安明；王立强；张志强；殷震 刊期： 2005年第03期
目的:制备TRAIL及其5种受体的特异性基因探针.方法:以PHA刺激人外周血淋巴细胞(PBL)增殖,从而诱导TRAIL及其受体的mRNA转录水平提高,然后用RT-PCR方法扩增出TRAIL及其5种受体的DNA基因片段,并采用基因测序法确证所得基因片段序列的正确性.结果:获得了TRAIL及其5种受体的DNA基因片段.结论:所用方法正确,为研究TRAIL及其受体调控细胞凋亡的机制提供了有价值的工具.
作者：季军捷；王华菁；黑振宇；彭玲；王皓；李晓冬；时玉舫；郭亚军 刊期： 2005年第03期
干扰素α家族至少有15个亚型,彼此之间有78%～98%的同源性[1],尤其是IFN-α1和IFN-α2亚型之间的差异更小.以不同亚型的干扰素制备的多克隆抗体与抗原之间有很多的交叉反应.本文利用自行设计的亲和层析组合柱从复杂的多克隆抗体中除去与其他干扰素有交叉反应的抗体,得到针对IFN-α2b的特异性抗体.这种纯化IFN-α2b多克隆抗体的方法非常简便快捷.
作者：滕利荣；孟庆繁；潘锋；李睿；王智勇；付玉芹；刘兰英 刊期： 2005年第03期
目的:从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础.方法:以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1 Library)经三轮筛选后,阳性菌质粒PCR确定其中含有单链抗体基因的克隆,通过细胞ELISA及FCM筛选特异性的单链抗体噬菌体,通过ABI3730全自动荧光测序仪测序,并通过GeneBank比对进行同源性分析,IPTG诱导可溶性单链抗体表达,并检测其与肝癌细胞株结合的特异性.结果:获得了2个特异性较高的阳性噬菌体单个克隆.经DNA测序后, 在Genebank中与人的免疫球蛋白库进行比对,并用IMGT/V-Quest软件进行分析,确定为2个插入序列不同的单链抗体片段.经细胞ELISA证明其阳性克隆菌培养上清可与肝癌细胞株特异性结合.获得的序列成功登陆Genebank,序列号为AY686498-AY686499.结论:从人源噬菌体抗体库中筛选到与肝癌细胞系HepG2特异性结合的具有功能活性的单链抗体,为进一步寻找肝癌细胞表面特异性抗原及靶向研究奠定了基础.
作者：余冰；倪明；雷萍；李文涵；朱慧芬；张悦；唐珍洁；程欣；沈关心 刊期： 2005年第03期
目的:揭示EF对老年大鼠淋巴细胞凋亡相关信号分子及通路的调节机制.方法:利用基因芯片技术,并比较老年大鼠、青年大鼠、EF干预后的淋巴细胞基因表达.结果:老年大鼠与青年大鼠比较,促进细胞凋亡作用的基因表达显著上调,具有抗凋亡作用的基因表达显著下调;具有抗增殖作用的基因表达显著上调,具有促进细胞增殖作用的基因表达显著下调;参与淋巴细胞活化增殖及免疫反应等基本信号通路的组成元件中,多个重要信号分子的表达显著下调.EF组抗淋巴细胞凋亡的几个上游因子如CD28、TGFβ及c-Jun、c-Fos、c-Myc等癌基因显著上调;促细胞凋亡基因Caspase1、Caspase2、Caspase3、Caspase6、CalpainⅡ、Cathepsin S、Dnase γ、PKCdelta等表达显著下调;Cathepsin B、Mtal、NF-kappa B、Notch等抗凋亡基因表达显著上调.显著上调促细胞增殖基因PCNA、A-raf、CyclinG-associated kinase等的转录,显著下调抗增殖的Rb等基因的转录.显著上调免疫细胞效应及功能的基本调节因子CD2、CD3、CD5、TCR、IL-2、IL-2R(CD25)、CD28、CTLA4的表达.结论:EF能上调老年大鼠淋巴细胞抗凋亡基因表达的同时,下调抗增殖基因的表达;上调促增殖基因表达的同时,下调抗增殖基因的表达,重塑基因表达良性平衡;还协同调节TCR/CD3、CD28、CTLA4、TGFβ、IL-2R等介导的信号转导通路,发挥抗凋亡效应.
作者：沈自尹；黄建华 刊期： 2005年第03期
目的:探讨不同ABO血型的各型肝病患者体液和细胞免疫指标改变状况.方法:应用免疫扩散和APAAP桥联酶标等方法,检测健康对照组(NC)500例、乙肝标志物阳性的各型肝炎562例,分别测定体液及细胞免疫功能.结果:各肝病组与NC组相比,体液免疫指标改变明显,自ASC至PHC,IgE递增显著,IgD、IgG次之,PHC组C3、CIC明显升高,E-RFC明显降低.AB血型的肝病IgG、IgE、C3、CIC明显升高,E-RFC显著降低,AB血型的LC和PHC患者CD4+、CD4+/CD8+明显降低,与其他各血型组和NC组相比,有显著性差异(P＜0.05).结论:在HBV感染者中,AB血型者易于发生LC和PHC,这一血型的肝病患者易出现体液免疫亢进和细胞免疫功能不足.
作者：程书权；梁平 刊期： 2005年第03期
目的:探讨血管内皮生长因子受体在膀胱癌中的表达及与临床病理因素的相关性.方法:免疫组化法采用链霉菌抗生物素-过氧化物酶连接法(SP法)对50例膀胱癌标本,20例正常膀胱组织标本中血管内皮生长因子受体的表达进行检测.结果:血管内皮生长因子受体在大多数膀胱癌组织中表达(74%),而且其表达水平与病理分期及组织分级呈正相关.在正常膀胱组织中无1例表达(0%).结论:膀胱癌组织中血管内皮生长因子受体阳性表达,提示其在膀胱癌的血管生成中起着重要作用.
作者：李志；刘禄成；郭航 刊期： 2005年第03期
气道炎症的主要病理改变是细胞浸润、黏膜水肿、黏液分泌增多.研究发现嗜酸细胞(EOS)起重要作用[1],Eotaxin是嗜酸细胞的选择趋化剂[2],近年已成为研究热点,我们根据国外新近方法采用气管滴注葡聚糖诱导豚鼠肺损伤[3],检测其Eotaxin的表达,分析Eotaxin在气道炎症中的作用.
作者：刘新；韦星呈；张苏；崔毅；王丹；徐明昕；贾宁 刊期： 2005年第03期
目的:制备小鼠抗人Lipocalin型前列腺素D合成酶的单克隆抗体,探讨Lipocalin型前列腺素D合成酶在精子表面的定位与分布.方法:用毕氏酵母表达的Lipocalin型前列腺素D合成酶作抗原免疫BALB/c小鼠,制备杂交瘤,产生单克隆抗体,ELISA与Western blot分析鉴定其特异性,免疫组织化学法探讨Lipocalin型前列腺素D合成酶在人精子表面的分布与定位.结果:获得了1株抗人Lipocalin型前列腺素D合成酶的单克隆抗体,其效价为1∶1 000,抗体亲和力为2×108 mol/L,小鼠IgG亚型为IgG1,Western blot结果显示该抗体能特异性识别Lipocalin型前列腺素D合成酶,组化结果显示Lipocalin型前列腺素D合成酶定位于人精子表面.结论:成功制备了1株鼠抗人Lipocalin型前列腺素D合成酶的单克隆抗体,精子的表面有Lipocalin型前列腺素D合成酶的分布.
作者：陈德宇；朱国华；黄宇烽；周开亚 刊期： 2005年第03期
褪黑激素(Melatonin,MLT)是主要由松果体分泌的一种吲哚类神经激素,由美国皮肤病学家Lerner于1958年从肉牛松果体中首次分离出来,并鉴定其化学结构为N-乙酰-5-甲氧基色氨酸[1,2].MLT是光信息与生殖系统协调关系中的重要激素信号,在调控动物繁殖季节变化中有重要作用,MLT对生殖系统功能的影响,因动物种类、生理状况、不同季节而表现出促进或抑制作用或无作用的多重性,在短日照繁殖动物可表现出促进作用[3-5],在长日照繁殖动物表现出抑制作用[6-8].
作者：何兰花；田允波；薛立群；黄得纯；刘玉清 刊期： 2005年第03期
目的:检测越南中部京族HLA-DQA1等位基因的多态性.方法:应用PCR-SSP方法对105名健康,无血缘关系的越南中部京族儿童、青年进行HLA-DQA1分型.结果:检出10个HLA-DQA1等位基因,频率高为DQA10104(21.3%)和低为DQA10601(1.5%).结论:结果表明越南中部京族人的HLA-DQA1等位基因分布与中国各民族的HLA-DQA1等位基因分布有差异.
作者：陈亭平；王琳琳；林伟雄；陈剑峰；谢湘芝 刊期： 2005年第03期
目的:借助基因芯片研究肾移植受者外周血淋巴细胞免疫相关基因在急性排斥反应中的作用.方法:8例肾移植术后发生急性排斥反应患者,于手术和肾穿刺当日收集外周血作为对照血样和实验血样.用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞,并采用一步法提取总RNA,逆转录合成cDNA探针,荧光染料标记后,采用免疫相关基因芯片进行芯片杂交,扫描后筛选出差异表达基因.结果:急性排斥发生时外周血淋巴细胞免疫相关基因差异表达49条,其中上调25条,下调24条.结论:从基因水平上,外周血淋巴细胞在肾移植急性排斥的免疫应答中涉及不同环节,免疫抑制剂在这些环节上对基因的表达存在不同程度的影响.
作者：郭义峰；谭建明 刊期： 2005年第03期
目的:探讨IL-10在混合皮肤移植中角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用.方法:利用已经建立的MELC体外模拟系统,检测在引入和未引入自体角朊细胞的实验系统上清中IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的浓度,并用IL-10基因敲除小鼠实验观察IL-10在诱导抑制中的作用.结果:在未引入自体角朊细胞的MELC体系中,表现的是典型的Th1相关的细胞因子动力学曲线,在加入自体角朊细胞后,则出现了细胞因子由Th1和Th2转换的动力学曲线,且IL-10起着关键的作用,在以IL-10基因knockout小鼠的角朊细胞去替代实验体系中的政党小鼠角朊细胞时,对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制率虽有所下降,但无显著差异而以IL-10基因knockout小鼠的淋巴细胞替代实验体系中的正常小鼠的淋巴细胞时,对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制作用被 显著缓解,表时对抑制起关键调节作用的时自体淋巴细胞来源的IL-10,而非自体角朊细胞分泌的IL-10.结论:在混合皮肤移植中,自体角朊细胞是通过激活Th2细胞,后者分泌大量的IL-10和IL-4等细胞因子来抑制Th1细胞增殖,从而抑制Th1亚群所介导的细胞免疫及移植物排斥来诱导局部免疫耐受的.
作者：曹颖平；陈卫闽；罗心绮；王梅华；郑泽铣；周光炎 刊期： 2005年第03期
目的:检测CD94分子在T细胞表达的水平,同时探讨在异基因造血干细胞移植(HSCT)中发生移植物抗宿主病(GVHD)患者CD94分子在T细胞表达的意义.方法:HSCT治疗高危白血病和遗传性溶血性贫血成功植入的儿童患者,其中同胞脐血移植(UCBT)10例,非血缘相关UCBT 1例,异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT )5例,在移植前后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD94的表达,并与正常外周血水平比较.结果:CD94主要表达于CD3+CD8+T 细胞,正常情况下外周血和脐血T细胞表达率低于10%,其中CD4+细胞几乎不表达,低于2%.但在UCBT或allo-PBSCT后CD94在CD4+T细胞和CD8+T细胞均明显增高.3例UCBT无GVHD,其余均发生了Ⅰ-Ⅳ0急性GVHD.急性GVHD发生时CD4+CD94+和CD8+CD94+T细胞表达明显升高.结论:异基因造血干细胞移植后发生GVHD时,T细胞高表达CD94,可能是在同种抗原的刺激下机体自我保护的结果.
作者：陈纯；段连宁；方建培；黄绍良；魏菁 刊期： 2005年第03期
