目的:研究白血病患者NK细胞表面NKG2D受体及其配体MICA/B的表达,探讨白血病细胞逃逸NK细胞杀伤的机制.方法:采用流式细胞术检测NK细胞表面NKG2D受体和骨髓有核细胞表面MICA/B配体.结果:治疗前组和完全缓解组NKG2D受体的表达均较健康组低(P＜0.05);且完全缓解组低于治疗前组(P＜0.05);治疗前组和完全缓解组MICA/B配体的表达均低于增生性贫血组(P＞0.50);完全缓解组与治疗前组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:白血病患者体内NKG2D-MICA/B介导的NK细胞功能受抑,这可能导致白血病细胞逃逸NK细胞的细胞毒作用;白血病化疗后完全缓解时其体内NKG2D-MICA/B介导的NK细胞功能仍未恢复,且较治疗前更低.
作者：常鑫；马莉；曾小菁；李虹 刊期： 2009年第02期
目的:从细胞免疫和体液免疫的角度证实免疫复合法制作IBD动物模型较之目前引起学者广泛关注的三硝基苯磺酸/乙醇诱导的结肠炎动物模型更符合B淋巴细胞和T淋巴细胞混合作用所致IBD的要求,证实此模型可能是一种更为理想的IBD动物模型,并有利于探讨炎症性肠病的发病机制.方法:SD大鼠168只,雌雄各半,分为①正常对照组42只;②三硝基苯磺酸/乙醇模型组42只;③免疫复合物组42只;④三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型组42只(以上每组雌雄各半).分别于造模后 1、2、3、4、6、9、12周末将大鼠处死(各组每周处死6只,雌雄各半).观察各组外周血CD4+T细胞的变化,结肠组织CD4+T细胞表达,血清中IgG含量.结果:三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型组大鼠外周血CD4+T细胞百分含量均数为(44.808 6±9.183 0)%;结肠组织CD4+T细胞计数均数为179.857 1±35.954 6;血清中IgG含量均数为0.536 0±0.120 5皆明显高于其余各组,具有统计学意义.结论:从免疫机制的视角证实上述联合诱导的结肠炎动物模型是一种较理想的IBD动物模型,可作为研究IBD发病机制及评估药物疗效的有益工具.
作者：谭琰；邹开芳；钱伟；黄珊珊 刊期： 2009年第02期
目的:研究Foxp3在小鼠1型糖尿病模型中的表达情况,并探讨其在1型糖尿病发病机制中的作用.方法:利用链脲佐菌素(STZ)致诱小鼠1型糖尿病模型,半定量RT-PCR检测脾脏Foxp3 mRNA的表达,Western blot法检测脾脏Scurfin蛋白的表达,流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞亚群比例.结果:模型组Foxp3 mRNA及其蛋白产物Scurfin的表达短期内上升,约在7天左右开始下降,到30天左右低于对照组(P＜0.05).7天内,CD4+CD25+Treg细胞亚群比例在模型组与对照组大致相等,而7天后,其比例在模型组逐渐下降(P＜0.05).结论:Foxp3的表达异常,使CD4+CD25+Treg细胞亚群比例下降,以致不能抑制效应性CD4+T细胞的增殖对胰岛的破坏,此机制参与了1型糖尿病的发生.
作者：焦海春；肖建华；崔彦芬；胡杰；何涛君 刊期： 2009年第02期
病毒性心肌炎(VMC)的发病机制未明而且临床缺乏有效的治疗手段,部分心肌炎终演变为扩张型心肌病、心衰直至死亡.信号转导及转录活化因子(Signal transducer and activator of transcription,STAT)蛋白的发现为诱导特异基因表达提供了一个关键分子链接,JAK(the Janus activated kinas)/STAT通路在许多基本的生物过程中居于中心地位,该通路的抗病毒作用在VMC的发生发展中也是此领域研究的热点.本文就STAT蛋白在VMC中的抗病毒作用作一综述.
作者：陈萍；陈瑞珍；陈灏珠 刊期： 2009年第02期
目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能.方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;Protein G亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用.结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56 mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖.结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性.
作者：徐耀瑜；胡玲玲；陈永井；程钢；罗先富；孙杰；刘玉华；王艳茹；陈明心；邱玉华 刊期： 2009年第02期
目的:建立稳定表达分泌型大鼠白细胞介素10(rIL-10)基因的正常大鼠肝细胞系(BRL细胞),为研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础.方法:通过RT-巢式PCR技术从大鼠外周血单核细胞(PBMC)中扩增出rIL-10全长基因,克隆入pcDNA3真核表达载体构建重组表达载体pcDNA3-rIL-10.鉴定正确后,用受体介导的脂质体转染试剂将pcDNA3-rIL-10转染BRL细胞,高浓度G418筛选,RT-PCR及ELISA法证实rIL-10在BRL细胞中的稳定表达.结果:构建的真核表达载体pcDNA3-rIL-10经质粒双酶切及测序鉴定证实载体构建的正确性.RT-PCR及ELISA法检测出经G418筛选的BRL细胞稳定表达IL-10.结论:成功构建分泌型pcDNA3-rIL-10真核表达质粒及筛选出稳定表达分泌型rIL-10的BRL细胞株,为进一步研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础.
作者：黄月红；陈运新；张莉娟；郑伟达；陈治新；王小众 刊期： 2009年第02期
目的:探讨IKKβ及胰岛素信号转导分子在高糖诱导3T3-L1 脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用.方法:采用高糖加胰岛素诱导的胰岛素抵抗细胞模型,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western blot检测IKKβ蛋白,IKKβ Ser181磷酸化,IRS-1蛋白,IRS-1 Ser307磷酸化,PI-3K p85蛋白及GLUT4蛋白的表达.结果:仅高糖加胰岛素模型组,胰岛素刺激的葡萄糖转运减少55%,同时IKKβ Ser181 磷酸化、IRS-1 Ser307磷酸化的表达显著增加,IRS-1蛋白和PI-3K p85蛋白的表达显著减少,而IKKβ蛋白及GLUT4蛋白的表达无明显影响.结论:只有在胰岛素存在的条件下,高糖才可以诱导胰岛素抵抗,其分子机制可能与其激活IKKβ Ser181,使其下游的IRS-1和PI-3K p85蛋白表达减少抑制葡萄糖转运有关,而与IKKβ蛋白及GLUT4蛋白的表达无关.
作者：易屏；陆付耳；陈广；徐丽君；董慧；王开富 刊期： 2009年第02期
目的:将从大容量噬菌体抗体库中筛选得到的人源抗地高辛单链抗体进行分泌表达,并构建Diabody(双体抗体).方法:将抗地高辛的噬菌体抗体转染HB2151菌(无琥珀抑制基因的宿主菌),IPTG诱导,制备抗地高辛的可溶性单链抗体.选取活性较好的克隆进行基因改造,构建Diabody表达载体,并分泌表达,表达Diabody进行Western blot鉴定.结果:经ELISA结合活性测定,得到了结合活性较高的抗地高辛的可溶性单链抗体;基因改造后,经ELISA及Western blot测定证实获得了结合活性较好的抗地高辛Diabody.结论:实验获得了分泌表达活性可靠的人源性抗地高辛抗体,并改造成应用前景较好的Diabody,为临床诊断及治疗洋地黄类药物中毒提供具有实用价值的人源小分子抗体.
作者：乔媛媛；王琰；赵晓航；张国民；陈宇萍 刊期： 2009年第02期
目的:克隆人白细胞介素33(human interleukin-33,hIL-33)基因,构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株,并对纯化的蛋白进行生物活性的初步测定.方法:采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术从人成纤维细胞总RNA中反转录并扩增得到人的成熟肽IL-33基因;采用基因克隆技术,构建PQE30-IL33重组质粒;采用Ni2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白;应用ELISA方法检测纯化蛋白诱导产生的IL-4和IL-5.结果:SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的25%,Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白,纯化后纯度达到95%以上.表达的重组蛋白IL-33促进人外周血单个核细胞产生IL-4和IL-5,浓度分别达到(106±2.6)pg/ml和(1 220±10.4)pg/ml,而未刺激对照组的浓度只有(32.2±2.3)pg/ml和(67.3±2.5)pg/ml.结论:成功构建出hIL-33的原核表达载体,诱导产生蛋白能诱导IL-4和IL-5细胞因子的产生.
作者：姜艳芳；王朝霞；辛桂杰；李玉斌；牛俊奇 刊期： 2009年第02期
目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法.方法:用终浓度分别为3、6、9和12 μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,后利用流式细胞术分析.结果:不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能力不同,ConA浓度为6 μg/ml时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数大,用MTT试验也获得相似结果.对PBMC刺激5天后进行分析相对较好.结论:建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平.
作者：赵和平；孙元；袁远；仇华吉 刊期： 2009年第02期
目的:构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuramidinase,HN)基因的重组腺病毒,为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础.方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切质粒pVHN,将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA,构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组病毒可有效表达HN基因,表达产物分子量约为63 kD,重组病毒滴度为108～1010 PFU/ml.结论:成功构建含HN基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.
作者：陈漉；金宁一；李霄；刘立明；贾鹏；刘妍；高鹏；陆蕴松；李明；迟宝荣 刊期： 2009年第02期
目的:观察猪苓多糖/卡介苗诱导T24膀胱癌细胞产生的细胞外热休克蛋白对J774A.1巨噬细胞TLR、共刺激分子、粘附分子、活化分子表达的影响,探讨猪苓多糖/卡介苗灌注治疗膀胱癌的天然免疫启动机制.方法:(1)ELISA检测猪苓多糖/卡介苗与T24膀胱癌细胞共培养上清中HSP90、HSP70、HSP60、HSP27的表达.(2)流式细胞术检测含HSP共培养上清(eHSP)对小鼠J774A.1巨噬细胞表面分子CD14、TLR2/4、MHCⅠ/Ⅱ;活化分子CD25;共刺激分子CD80、CD86、CD40;粘附分子CD44、CD62L、CD11b、CD18表达的影响.(3)用流式细胞术检测TLR4/MD2抗体复合物阻断J774A.1巨噬细胞表面TLR4后,eHSP对其表面分子MHCⅠ/Ⅱ、CD25、CD80、CD86、CD40、CD44、CD62L、CD11b、CD18的表达.结果:(1)猪苓多糖/卡介苗诱导T24膀胱癌细胞产生的热休克蛋白呈剂量和时间依赖性,猪苓多糖(2 mg/ml)和卡介苗(250 μg/ml)作用48小时时HSP的表达至峰值,其中HSP70呈优势表达;(2)含HSP的共培养上清可上调J774A.1巨噬细胞TLR4、MHCⅠ、CD86、CD40、CD25分子的表达,增强粘附分子CD44、CD62L荧光强度;(3)含HSP的共培养上清作用于用TLR4/MD2阻断后的巨噬细胞,其表面分子CD86、MHCⅠ、CD40、CD25的表达降低.结论:猪苓多糖/卡介苗可诱导T24膀胱癌细胞产生危险信号热休克蛋白,并且热休克蛋白可通过激活小鼠J774A.1巨噬细胞TLR4信号通路,上调其表面分子的表达,启动抗膀胱癌天然免疫应答.
作者：黄羽；曾星；张娴；周丹 刊期： 2009年第02期
目的:观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对树突状细胞(Dendritic cell,DC)抗原提呈功能的影响,并和同源CIK(Cytokine induced killer)细胞共培养,观察DC-CIK和黄芪多糖诱导DC-CIK细胞杀伤A549肺腺癌细胞的活性.方法:提取健康供血者的外周血单个核细胞(PBMC),常规诱导出DC与CIK细胞后,将其共培养,观察黄芪多糖对DC表型变化的影响,定量检测DC-CIK和黄芪多糖诱导DC-CIK细胞培养上清中的IFN-γ和IL-12;并用MTT法测定其体外细胞毒活性.结果:黄芪多糖能提高DC表面分子CD40、CD80、HLA-DR的表达,经黄芪多糖诱导的DC活化的CIK,对A549肺腺癌细胞的杀伤活性高于单纯DC-CIK细胞,差异显著(P＜0.05).结论:黄芪多糖能增强DC的抗原提呈功能,证实黄芪多糖诱导的DC能明显提高CIK对肿瘤细胞的杀伤活性,具有更广阔的应用前景.
作者：张嵩；牟晓燕；王红梅；姜淑娟 刊期： 2009年第02期
目的:探讨LT-β在SLE发病及免疫调节紊乱中的作用.方法:用ELISA法检测血清LT-β水平,PBL RNA斑点杂交测定LT-β基因转录水平;PCR-RLFP法分析LT-β基因多态性.结果:SLE患者血清 LT-β水平比正常显著增高(P＜0.05);活动期比正常增高更显著(P＜0.01).SLE患者基因转录水平比正常对照显著增高(P＜0.05);活动期比正常亦显著增高(P＜0.05); 未发现LT-β基因的XhoⅠ酶切位点具有多态性.结论:提示LT-β是导致SLE发生的主要因子;LT-β参与SLE的免疫调节紊乱.
作者：孙敏 刊期： 2009年第02期
目的:研究尖锐湿疣(Condyloma accuminatum,CA)组织中朗格汉斯细胞(Langerhans cell,LC)数目、形态和功能改变及其分子机制.方法:免疫组化SP法和逆转录RT-PCR法分别检测LC表面标记分子CD1a、粘附分子上皮细胞钙粘素(E-cadherin)及其mRNA表达,透射电镜观察LC的超微结构,并以正常包皮组织作为对照.结果:与正常对照组(21.59±10.48)相比,CA组织中CD1a+LC数目(10.66 ±11.71)减少(P＜0.05),胞体缩小,树突减少.CD1a mRNA表达(0.4066±0.2671)低于正常(0.744 4±0.3667)(P＜0.01);CA组织中E-cadherin染色变淡,平均积分值(2.36±1.41)低于正常对照(7.67±1.64)(P＜0.01),E-cadherin mRNA表达(0.173 7±0.108 3)较正常对照(0.378 6±0.146 0)相比显著降低(P＜0.01);CD1a+细胞数目与E-cadherin表达强度之间存在正相关关系(r=0.940 4,P＜0.05)、CD1a mRNA与E-cadherin mRNA的表达呈正相关(r=0.838 1,P＜0.05);CA组织LC胞质内细胞器稀少,Birbeck颗粒少见.结论:CA组织中存在着LC的缺失和抗原提呈功能异常,可能导致HPV持续性感染,LC的减少可能与E-cadherin表达下降导致LC在表皮内难以滞留有关.
作者：潘永正；王飞；骆丹 刊期： 2009年第02期
反复自然流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)的发病原因除少数为生殖内分泌、染色体及生殖器官解剖学异常外,多因免疫调节异常所致.根据免疫病因分类可将RSA分为母-胎免疫识别低下型、母-胎免疫识别过度型、母-胎免疫紊乱型[1],其中,以封闭抗体(Blocking antibody,BA)缺乏为主要特征的母-胎免疫识别低下型常见.
作者：丁克文；宋燕；刘娟；王洁；刘如天 刊期： 2009年第02期
目的:探讨与狼疮性肾炎相关的新西兰黑鼠(NZB)易感基因染色体位点.方法:通过建立(NZB×NZW)F1×NZW回交小鼠模型,以尿蛋白为狼疮性肾炎表现型,利用微卫星遗传标记进行基于数量性状位点(QTL)分析的全基因组扫描方法,寻找源于NZB的遗传易感基因位点并确定染色体位置.结果:根据QTL分析发现两个与狼疮鼠蛋白尿发生有关的易感基因位点,分别位于NZB小鼠第4号染色体的D4Mit71区域及第17号染色体D17Mit22区域(LOD＞3.3).同时携有两个NZB位点的小鼠尿蛋白阳性率高,而只有一个位点的小鼠其尿蛋白阳性率较NZW纯合鼠也明显增高(P＜0.005).结论:NZB第4号染色体的D4Mit71区域及第17号染色体的D17Mit22区域可能为(NZB×NZW)F1×NZW回交鼠狼疮性肾炎蛋白尿易感位点.两个位点之间具有协同增效作用.
作者：栗霄立；佐楠；王力宁；李艳秋；王禹；刘晓丹；马健飞；冯江敏；张玉侠；李子龙；姜奕 刊期： 2009年第02期
本文引入SBT技术,将以往PCR-SSO检测发现的蒙、汉族儿童过敏性紫癜(Anaphylactoid purpura, AP)之易感基因作以高分辨分型,并与中分辨分型和临床表型对比分析,旨在探讨两种分型技术在临床应用的意义;寻找基因突变位点;发现蒙、汉儿童AP临床表型不同的部分遗传背景.
作者：任少敏；杨光路；刘春枝；张春霞 刊期： 2009年第02期
目的:预致敏的人白细胞抗原特异性抗体(HLA)是抗体介导排斥反应的主要危险因素.本研究对肾移植受者术前进行HLA特异性抗体检测和分析,以评价其致敏状态.方法:1998年至2007年于我院等待肾移植的受者共3 500名.2000年3月前694名受者采用补体依赖微量细胞毒性试验(CDC)进行群体反应性抗体(PRA)检测,之后2 806名受者改为用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测.对致敏受者HLA抗体多样性和特异性,以及致敏相关因素进行分析.结果:CDC方法仅能检出抗HLAⅠ类IgG抗体,而ELISA可检出抗HLAⅠ类和Ⅱ类抗体.CDC方法所检出的病人血清PRA阳性率比ELISA方法检出的阳性率低.而且,ELISA能分别检出抗HLA-A、B、CW、DR和DQ抗原的抗体20种、37种、8种、14种和7种.抗HLA-A2、24、68、23、32;B27、56、57、7;DR7、4、9、13、17、12;CW1、2、6、4、8 等位基因产物的抗体频率较高.这些抗HLA抗体与华南地区人群HLA抗原分布不尽一致.不同性别PRA阳性率存在显著性差异,男性以输血致敏为主,女性以输血、妊娠致敏为主.结论:采用ELISA方法能较为准确地检出抗HLA特异性抗体.避免供受者间常见高频抗体相应的HLA位点的错配和减少输血是减少抗HLA抗体的产生,以提高移植物存活的有效手段.
作者：傅茜；王长希；曾文涛；陈立中 刊期： 2009年第02期
