目的:检测抗小鼠CD4+T淋巴细胞活化后表面白细胞介素10受体I(IL-10R1)表达变化,为进一步研究白细胞介素10(IL-10)相关免疫疾病的发病机制及进展提供有力支持.方法:取C57BL/6小鼠脾细胞,溶血后采用尼龙毛去除B淋巴细胞后,流式细胞仪无菌分选CD4+T淋巴细胞,利用anti-CD3和anti-CD28多克隆抗体刺激分选后细胞,分别在第0、12、24、48和72小时流式细胞术检测IL-10R1表达情况.结果:0小时时小鼠CD4+T淋巴细胞不表达IL-10R1,随着刺激时间的延长IL-10R1表达增加,24小时时达到高,随后表达水平开始下降,72小时时表达情况与0小时基本相同.结论:CD4+T淋巴细胞活化后IL-10R1表达短暂,以24小时时表达高.
作者：刁骋；杨芳莉；韦星呈；曾艳；严丹丹 刊期： 2011年第12期
目的:探讨经IL-4/IL-10诱导的树突状细胞(DC)对类风湿性关节炎的作用.方法:用Percoll分层离心法从脾脏细胞分离得到DC后,用IL-4或IL-10或IL-4+IL-10进行诱导.用未经诱导和诱导过的DC对类风湿性关节炎大鼠模型进行干扰.SD鼠设为CIA模型组,DC对照组与DC试验组.用ELISA法检测细胞因子与抗体水平,用MTT法检测细胞增殖情况,对鼠爪关节行病理学检测.结果:DC对照组的临床症状评分,病理改变评分,细胞增殖能力,血清中抗胶原抗体及细胞因子水平与CIA模型组的差异无统计学意义.试验组中,注射IL-10-DC能改善CIA鼠的滑膜炎症情况;在初次免疫后第5天注射IL-4-DC能减轻CIA鼠的滑膜炎程度;注射IL-4+IL-10-DC无明显的保护作用.结论:适时注射IL-4或IL-10诱导的DC,对实验性类风湿性关节炎具有保护作用.
作者：聂瑛洁；周晓泉；袁军；安宇；肖林生 刊期： 2011年第12期
目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)能否激活类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)表达基质金属蛋白酶-13(MMP-13).方法:HMGB1与RASF共孵育后,采用流式细胞术、实时RT-PCR、ELISA分别检测细胞周期和MMP-13的基因表达量以及蛋白表达水平.结果:1 μg/ml HMGB1刺激滑膜成纤维细胞3小时,MMP-13 mRNA的表达明显增加;HMGB1刺激滑膜成纤维细胞48小时后MMP-13蛋白分泌增高,并且滑膜成纤维细胞增殖周期速度加快.结论:HMGB1可以激活滑膜成纤维细胞,使其增殖周期速度加快,MMP-13表达增加,提示HMGB1通过作用于滑膜成纤维细胞表达MMP-13加强关节结构破坏.
作者：贺雯；戴生明；秦阳华；沈茜 刊期： 2011年第12期
单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytohenes)简称单增李斯特菌(LM),是一种革兰氏阳性兼性厌氧、胞内寄生菌,对环境耐受性强,可在较高的盐浓度(可高达40%NaCl)以及宽泛的pH(pH3～12)和温度范围(0～45℃)内生长,并可形成夹膜,因而LM广泛存在于自然界的不同环境中(土壤、水源、植物及动物体内等),易污染各种食品(肉、奶、海产品及蔬菜等),属条件致病性人畜共患病原菌[1].
作者：周云；潘蕾；郝春秋；贾战生 刊期： 2011年第12期
1 TNF-α裂解酶的发现TNF-α前体(TM-TNF-α)需要加工去除氨端76个氨基酸残基,才能成为游离型TNF-α(S-TNF-α),进入循环系统.80年代末,人们认为这一加工过程依赖于丝氨酸蛋白水解酶;到了90年代,人们知道参与TNF-α加工过程的酶是一种或几种基质金属蛋白酶,但是还不了解该酶的结构.1997年,Black等[1]发现了一种新的特异性催化TNF-α前体裂解的金属蛋白酶,命名为TNF-α转化酶(TACE),并测定了其氨基酸序列.同年,Moss等[2]克隆了TACE的基因.
作者：孙震；喻明霞 刊期： 2011年第12期
流行性脑膜炎是细菌性脑脊髓膜炎中唯一能造成流行的疾病,可引起相当高的病死率和致残率.流脑从病原体的发现至今已超过100年,呈世界范围分布,全世界每年流脑病例可达30万到35万,是世界范围的一个严重公共健康问题.流脑由脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)引起.据Nm荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)的化学结构,已确定13个血清群,其中A、B、C、W135、Y群Nm引起约95%的病例[1].
作者：张营营 刊期： 2011年第12期
目的:研究乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征,分析乙肝疫苗有应答者和无应答者TCR Vβ基因单克隆改变的差异性.方法:采用多引物PCR技术扩增80例乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因22个家族的CDR3区基因片段,对PCR产物分别应用琼脂糖凝胶电泳和基因扫描两种方法检测.结果:80例乙肝疫苗接种者中有58例产生抗体,有22例未产生抗体.TCR Vβ基因单克隆改变主要集中在Vβ2、Vβ8、Vβ9、Vβ11和Vβ17五个家族上,乙肝疫苗无应答组这五个Vβ基因单克隆改变频率明显低于乙肝疫苗有应答组(P＜0.01或P＜0.05).结论:CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化改变是影响机体对乙肝疫苗免疫应答效果的重要因素之一.
作者：宋玉国；熊英；宋宇；毕胜利 刊期： 2011年第12期
目的:构建稳定表达人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-inducing ligand,sAPRIL)的CHO细胞株.方法:利用RT-PCR方法克隆出sAPRIL基因,构建表达该基因的慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染HEK-293T细胞,以包装病毒颗粒.将病毒上清感染CHO细胞,获得稳定表达sAPRIL的细胞株.利用RT-PCR、Western blot及FACS等方法鉴定其表达.结果:成功克隆出人sAPRIL基因,RT-PCR、Western blot及FACS结果显示成功构建了稳定表达sAPRIL的CHO细胞株.结论:结论:成功获得了稳定表达sAPRIL的细胞株,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
作者：张琳；赵青；张伟 刊期： 2011年第12期
目的:研究减毒活菌卡介苗(BCG)干预对哮喘小鼠呼吸道炎症、气管肺泡盥洗液(BALF)中细胞因子及肺组织信号转导和转录激活因子-6(STAT6)蛋白表达的影响.方法:将昆明小鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组、BCG治疗组3组,每组小鼠都为10只.正常对照组以生理盐水致敏激发,以卵清白蛋白(OVA)致敏激发建立小鼠哮喘模型,BCG治疗组于OVA致敏前及后5天分别以BCG皮内注射干预,所有小鼠在后一次抗原激发后24小时收集BALF,计数BALF中的白细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数目,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理形态学改变,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中IL-4、IFN-γ水平,以免疫组织化学法观察各组小鼠肺组织STAT6表达.结果:小鼠肺组织HE切片显示哮喘组有大量炎症细胞浸润.哮喘组、BCG治疗组小鼠肺组织STAT6蛋白表达和BALF中的白细胞总数、EOS计数、IL-4水平均较正常对照组升高(P＜0.05);而与哮喘组比较,BCG治疗组肺组织STAT6蛋白表达和BALF中的白细胞总数、EOS计数、IL-4水平均降低(P＜0.05).与正常对照组比较,哮喘组BALF中的IFN-γ水平显著下降(P＜0.01),而BCG治疗组BALF中的IFN-γ水平增加(P＜0.05).结论:BCG能抑制哮喘小鼠气道炎症、减少哮喘小鼠Th2型细胞因子IL-4的生成、提高Th1细胞因子IFN-γ的水平,其干预机制可能与BCG抑制哮喘小鼠肺组织STAT6蛋白的表达有关.
作者：陈敏；吴斌；靳妮娜 刊期： 2011年第12期
目的:构建pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达HPV58E6E7基因的B16细胞系.方法:采用PCR方法扩增出HPV58E6E7融合基因的全长序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,构建重组真核表达质粒pIRES-neo-HPV58E6E7.利用阳离子脂质体介导法将其转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出稳定转染的阳性克隆.利用Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证HPV58E6E7融合基因在稳定转染的B16细胞株中的表达.结果:经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析,pIRES-neo-HPV58E6E7重组质粒构建正确,转染B16细胞株后,经过Western blot、流式细胞术和免疫荧光等检测显示B16细胞株能够稳定、高效表达HPV58E6E7融合基因,表明B16-HPV58E6E7稳定转染细胞系构建成功.结论:成功构建了pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,建立了可以高效、稳定表达HPV58E6E7融合基因的B16细胞系.该稳定转染细胞系的建立为进一步研究HPV58治疗性基因疫苗的功能提供了良好的靶细胞,为其在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础.
作者：王鹤；于继云；李力 刊期： 2011年第12期
目的:预测及鉴定尤文肉瘤EWS-FLI1融合蛋白的B淋巴细胞表位.方法:采用综合法预测EWS-FLI1蛋白的二级结构及B淋巴细胞表位,运用标准Fmoc方案合成预测的表位肽,HPLC和MS进行表位肽的纯度分析及分子量鉴定,ELISA法检测表位肽的抗原性,并测定表位肽特异性免疫血清效价,Western blot鉴定免疫血清与EWS-FLI1蛋白亲合力.结果:通过综合法预测得到3个高分值的B淋巴细胞表位,HPLC分析合成的表位肽纯度>85%,MS鉴定表位肽的分子量无误,ELISA法检测证实3个B淋巴细胞表位肽均可获得强的抗原抗体反应,其中表位肽P2的抗原性强,在1∶40时A450=2.46,达到高,1∶10 240稀释后抗原抗体反应仍呈阳性;用这3个B淋巴细胞表位肽免疫新西兰兔也能获得理想的抗体效价,其中表位肽P2获得的抗体效价高,1∶512 000稀释时A450=1.11;Western blot鉴定表位肽P1、P2免疫血清能够结合EWS-FLI1蛋白.结论:尤文肉瘤EWS-FLI1蛋白的B淋巴细胞表位肽P1、P2具有潜在的抗原性和免疫原性.
作者：黄路；罗嘉全；刘会文；张战民；廖翔；邓高荣；曹凯；安洪；舒勇；韩智敏 刊期： 2011年第12期
目的:探讨不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)处理,体外原代培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的变化.方法:采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24小时,体外培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2分子表达的变化规律及其量-效关系.结果:不同浓度(50、100、1 000、2 000 μg/L)DON处理人食管上皮细胞24小时后,DON各处理组食管上皮细胞TAP-1蛋白的Western blot半定量检测结果分别为0.47±0.22、0.28±0.16、0.24±0.18和0.21±0.19,统计分析表明DON 100、1 000、2 000 μg/L处理组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).相关分析表明,在0～2000 μg/L浓度范围内,随DON处理浓度增高,食管上皮细胞TAP-1蛋白的表达量逐渐降低(r=-0.595,n=4,P<0.01).RT-PCR结果发现,经不同浓度DON处理食管上皮细胞TAP-1mRNA的相对表达量虽然呈现先升高后降低的趋势,但与对照组相比无统计学差异.DON各处理组LMP-2蛋白的Western blot半定量检测结果分别为2.25±1.03、3.31±1.35、1.90±1.19和2.12±0.22均高于空白对照组(0.91±0.21),其中100 μg/L处理组相对表达量高,差异有统计学意义(P<0.05).RT-PCR结果,DON 100 μg/L处理组的LMP-2 mRNA的相对表达量高为2.23±0.56,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).其余处理组差异无统计学意义.结论:DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞的TAP-1蛋白的表达,但对TAP-1的mRNA未见显著影响.DON(100 μg/L)可以促进食管上皮细胞LMP-2蛋白和mRNA表达,其余各浓度未见明显影响.
作者：李月红；孙巍；严霞；王娟；王俊灵；姚志刚；张祥宏 刊期： 2011年第12期
目的:研究中国劲酒对皮质酮致肾阳虚模型的大鼠下丘脑-垂体-肾上腺 (Hypothalamic-pituitary–adrenal,HPA)轴及免疫功能的影响.方法:取健康清洁级雄性SD大鼠45只,按随机数字表法分为空白对照组、模型组和中国劲酒组,每组15只,通过皮下注射外源性皮质酮(10 mg/kg体重)连续14天抑制HPA轴,制备肾阳虚模型.皮质酮注射前5天,以50 ml/kg体重灌胃中国劲酒(相当于中国劲酒日推荐服用剂量的30倍),连续19天.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血浆皮质酮(Corticosterone,CORT)含量;采用放射性免疫法测定血浆中促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic hormore,ACTH)含量,采用实时定量-聚合酶链反应法(Real-time PCR)测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin releasing hormone,CRH)mRNA表达水平;取胸腺称重,淋巴细胞凋亡及增殖率分别采用流式细胞仪法和改良四氮唑盐(XTT)法.结果:在外源性皮质酮作用下,肾阳虚模型大鼠较空白对照组HPA轴和免疫功能受到明显抑制,中国劲酒灌胃后可显著提高大鼠下丘脑CRH mRNA水平、血浆ACTH含量,与肾阳虚模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05);血浆CORT水平有升高倾向;同时在免疫调节方面,中国劲酒可明显增加皮质酮模型大鼠胸腺重量和降低脾脏淋巴细胞凋亡率,与肾阳虚模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01);中国劲酒有促进淋巴细胞增殖的趋势.结论:中国劲酒能改善肾阳虚模型大鼠HPA轴功能;也具有改善肾阳虚模型大鼠免疫功能的作用.
作者：刘源才；杨跃军；冯声宝；陆世广；单义民；夏世金；黄建华；沈自尹 刊期： 2011年第12期
类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性破坏性关节病变为特征的全身性自身免疫病.以对称性小关节受累为主,亦有相当比例的患者出现关节外系统受累,以关节滑膜和软骨为主要损伤靶点,并持续处于慢性炎症状态,有反复活动性,并终造成关节破坏及渐进性功能障碍,致残率高,早期发病隐匿.目前对本病的早期诊断有一定困难,不利于早期治疗.近年来,有大量研究表明细胞因子(Cytokine,CK)的失衡在本病发病中占重要地位.随着对本病发病机制认识的不断深入以及细胞分子水平研究的进展,逐渐认识到白细胞介素家族(Interleukin family,IL)相关因子的表达与RA发病明显相关,可作为RA早期诊断及评价其活动性和预后的主要指标.
作者：王红权；陈龙全 刊期： 2011年第12期
目的:分析CD4+Foxp3+调节性T细胞(CD4+Foxp3+Treg)在恶性血液病患者外周血的比例变化,探讨CD4+Foxp3+Treg参与恶性血液病发病的可能机制.方法:用流式细胞仪检测急性白血病、淋巴瘤患者及健康对照外周血CD4+Foxp3+Treg细胞的比例;然后用小鼠的淋巴瘤细胞EL-4和红白血病瘤细胞FBL3的培养上清液与C57BL/6小鼠脾细胞共同培养72小时,RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达.结果:恶性血液病患者外周血CD4+Foxp3+Treg数量显著高于正常对照(14.9±2.92)%、(5.68±1.21)%,P＜0.001.小鼠EL-4和FBL3细胞上清液均能够使小鼠脾细胞Foxp3 mRNA表达水平明显增高.结论:恶性血液病患者CD4+Foxp3+Treg比例增高可能导致抗肿瘤免疫功能低下,此外肿瘤细胞分泌的可溶性物质使Foxp3表达增高,增强了CD4+Foxp3+Treg细胞的抑制功能,使肿瘤易于生长和转移.
作者：张帆；程育胜；姚红；王艳红 刊期： 2011年第12期
作为一门研究机体识别自己与异己机制及其应用的学科,免疫学起源于实践,发展于实验,提升于理念.因此,现代免疫学既是一门实验科学,也是一门理论科学.它不仅涉及先进的实验设备、独到的实验方法,也具有抽象的术语、深奥的理论,在分子层面更是涉及抗原、抗体、补体、MHC、细胞因子等各种免疫分子及其相互作用.如何深入浅出、生动形象地讲解纷繁复杂的免疫分子及其相互作用,激发学生的学习兴趣,提高教学效果,是免疫学课堂教学中值得研究的一个重要课题.近年来,我们将一些生物信息学手段有机融合在免疫学课堂教学中,实现了免疫分子及其相互作用的动态交互操作与展示,取得了不错的教学效果.现将我们的方法与经验总结分享如下.
作者：黄健；王先龙；游自立 刊期： 2011年第12期
目的:观察脑出血患者脑脊液中IL-1β、TNF-α和CRP含量的变化探讨其临床意义.方法:本实验以25例腹股沟疝和大隐静脉曲张患者作为25例脑出血患者对照组,取脑脊液;将24只家兔随机分为两组(每组12只),一组为脑出血模型组,另一组为假手术对照组.分别于实验性脑出血后6、12、24、48、72、96小时等各时间点取各组脑脊液,采用ELISA法测定IL-1β、TNF-α和CRP的含量.结果:脑出血患者急性期与恢复期脑脊液中IL-1β和TNF-α的水平明显高于对照组,(P＜0.01);而CRP无明显变化;不同时间点兔脑出血模型实验组脑脊液中IL-1β和TNF-α的水平明显高于假手术组(P＜0.01);而CRP也无明显变化.结论:脑出血后IL-1β和TNF-α在脑脊液中持续时间较长,且含量显著增高,可作为出血性脑损伤指导治疗、判断预后的检测指标.
作者：安利峰；胜利；吴昇祥；殷祎隆；米友军；慈彩虹；雒岭 刊期： 2011年第12期
目的:检测家兔皮肤移植经rhIL-10作用后,血清中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化,探讨CC、IL-8/CXCL8趋化因子在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用.方法:皮肤移植家兔分6组:①rhIL-10低剂量,②rhIL-10高剂量,③CsA低剂量,④CsA高剂量,⑤rhIL-10+CsA低剂量联合和⑥生理盐水组;每只家兔均于术前1天开始肌注给药,连续注射10天;各组分别于术前1天、术后1、4、7、14、21、28天取外周血,分离血清,以ELISA法检测移植家兔血清CC、IL-8/CXCL8趋化因子水平.结果:(1)术后各组IL-8水平均升高,术后4天、7天⑥组IL-8水平高于各组(P<0.05).(2)术后各组MCP-1水平明显升高,术后1天、4天,⑥组MCP-1水高于各组(P<0.05),术后7天⑥组MCP-1水平高于①组、⑤组(P<0.05);术后7天、14天CsA抑制组高于联合组(P<0.05).(3)术后各组MIP-1α明显升高,术后4天⑥组MIP-1α水平高于①、③、⑤组,术后7天⑥组MIP-1α水平高于各组(P<0.05);(4)术后各组MIP-1β水平升高,但同时间段组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:CC、IL-8/CXCL8趋化因子在皮肤移植后明显升高,表明在急性排斥反应中发挥了重要作用,随排斥反应加重而进一步增高,皮片排斥后下降,可作为观察和诊断移植排斥的合适标志物.
作者：李佳；孙万邦；吕岩岩；戴小波；张磊；王胜香；罗军敏 刊期： 2011年第12期
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能.方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株.大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应.结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖.结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段.
作者：苗平；钱柳；赵蓉；余奇文；张继英；陈雪华；陆梅生；张冬青 刊期： 2011年第12期
