目的:明确佐剂中卡介苗含量对成功建立C57BL/6小鼠胶原性关节炎(Collagen in-dueed arthritis,CIA)模型的影响,为开展类风湿关节炎(RA)的有关动物实验研究提供参考.方法:四个模型组以鸡Ⅱ型胶原(TypeⅡcollagen,CⅡ)与含不同浓度高毒卡介苗的完全弗氏佐剂(Completed Freund's adjuvant,CFA)免疫C57BL/6小鼠诱导CIA,以关节炎指数为评价造模成功率,并对免疫成功模型进行一般状态观察、关节炎指数评分、脾脏指数计算、组织病理学和关节影像学检查.另设正常对照组.结果:四模型组小鼠踝关节分别于加强免疫后d4、d3、d3、d2天开始出现红肿,d14肿胀厚度达到高峰,小鼠死亡率分别为0％、5％、6％、80％,小鼠的CIA发生率分别为15％、60％、55％、死亡率高无数据;关节炎指数、脾脏指数均显著高于正常对照组(P＜0.01);病理学结果显示:造模成功小鼠患病关节表现出周围炎性细胞浸润、滑膜增生、软骨和骨骼破坏等较为典型的变化;足爪X线摄片显示:关节间隙变窄,关节面不光滑,周围软组织影增厚;关节强直、畸形;正常对照组小鼠则无上述表现.结论:含2.5 mg/ml高毒卡介苗的完全弗氏佐剂,与鸡Ⅱ型胶原充分乳化,可成功诱导C57BL/6小鼠关节炎模型,免疫模型在临床发病特点、组织病理学改变等方面,较充分模拟了人类RA的病变特征,可适用于开展RA防治药物或其机制的实验研究模型.
作者：封桂英；宋鸿儒；郭明；赵婷；郭亚春；邢恩鸿 刊期： 2014年第03期
目的:探讨复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)缓解期女性阴道局部IL-4、IL-12、IFN-γ的水平.方法:采集缓解期RVVC女性卵泡期(RVVC缓卵泡期组)、黄体期(RVVC缓黄体期组)阴道灌洗液,以黄体期健康女性为正常对照(正常组),采用酶联免疫法(ELISA法)检测阴道局部IL-4、IL-12、IFN-γ水平.结果:IL-12和IFN-γ的水平在缓解期RVVC黄体期组均高于正常组(P＜0.05),缓解期RVVC卵泡期组和正常组间相比无明显差异(P＞0.05),缓解期RVVC卵泡期组和黄体期组间相比无明显差异(P＞0.05);IL-4和IFN-γ/IL-4比值在三组间比较无差异(P＞0.05).结论:RVVC患者存在一定的阴道局部免疫功能失调,以黄体期表现明显,故推测在此期进行巩固治疗可以提高临床疗效.
作者：阮丽君；朱玲 刊期： 2014年第03期
目的:探讨Sema 4D基因在原发免疫性血小板减少症的表达及与T辅助细胞因子关系.方法:分别采用实时定量聚合酶链反应和微量样本多指标流式蛋白定量技术(CBA)分别检测外周血单核细胞Sema 4D mRNA水平和Th 1/Th2细胞因子水平,分析Sema4D mRNA水平和Th细胞因子水平的相关性分析.结果:(1)ITP患者外周血单核细胞Sema4D mRNA水平显著高于健康对照志愿者(P＜0.01),外周血清Th1细胞因子IL-2和IFN-γ水平显著低于健康对照受试者(P＜0.05或P＜0.01),Th2细胞因子IL-4、IL-6和IL-10水平显著高于健康对照受试者(P＜0.01);(2)Th1细胞因子IL-2水平与Sema 4DmRNA水平负相关(P＜0.01),Th2细胞因子IL-4、IL-6和IL-10水平与Sema 4D mRNA水平呈正相关(P＜0.01).结论:Sema4D mRNA在原发免疫性血小板减少症患者中呈高表达,并且分别与Th1和Th2细胞因子水平呈负相关和正相关.
作者：薛乾富；肖悦 刊期： 2014年第03期
目的:探讨Tfh细胞在原发性干燥综合征中的致病作用;方法:应用免疫组织化学方法检测Tfh细胞的标记物CXCR5、IL-21在30例原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达,22例口腔外科黏液腺囊肿、下唇外伤等非白身免疫性疾病患者唇腺组织中的表达,采用TUNEL法检测所有患者唇腺组织中细胞凋亡情况;结果:①原发性干燥综合征组患者唇腺组织中CXCR5,IL-21的表达增高;②IL-21、CXCR5的表达与组织中细胞凋亡数呈正相关.结论:①Tfh细胞可能与原发性干燥综合征的发病机制有关;②Tfh细胞可能与细胞凋亡的发生有关.
作者：雷玲彦；郭惠芳；张明峰；高丽霞；马丽艳；孙超；靳洪涛 刊期： 2014年第03期
目的:研究吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4及PPARγ表达变化规律及其意义.方法:取57只5周龄180 ～ 200 g的清洁级雄性Sprague Dawley (SD)大鼠,随机分为正常对照组(A组,n=9)和造模组(n=48).造模组给予腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ,50 mg/kg)诱导大鼠成糖尿病模型(其中3只造模未成功).将造模成功的40只大鼠随机分为:吡格列酮5 mg/(kg·d)(B组,n=9),吡格列酮10 mg/(kg·d)组(C组,n=9),吡格列酮5 mg/(kg·d)+TLR4特异性抑制剂Eritoran 5 mg/(kg·d)(D组,n=9),吡格列酮10 mg/(kg·d)+TLR4特异性抑制剂Eritoran 5 mg/(kg·d)(E组,n=9),未干预组(F组,n=9),于第8周末,取肾组织予以HE染色,HE染色后用光镜观察肾组织形态学改变,采用Real-time PCR检测肾组织中TLR4和PPARγ的mRNA表达水平.结果:与A组相比,B、C、D、E组糖尿病大鼠肾组织TLR4的表达明显增加,PPARγ表达明显减弱,比较存在差异(P＜0.05);与F组相比,B、C、D、E组大鼠肾组织TLR4的表达亦减弱,PPARγ表达增加,比较存在差异(P＜0.05);C组与B组比较,糖尿病大鼠肾组织TLR4的表达减弱,PPARγ表达稍增强,前后比较无差异(P＞0.05);E组与D组比较,肾组织TLR4的表达均明显减弱,PPARγ表达均明显增强,但无统计学差异(P＞0.05);Pearson相关性分析提示糖尿病大鼠肾组织TLR4与PPARγ表达呈负相关,相关系数为-0.962(P＜0.05).结论:吡格列酮对糖尿病肾病具有保护作用,部分作用机制可能是通过抑制TLR4的表达,促进PPARγ表达,抑制炎症反应而实现的.
作者：余益本；吴移谋；文格波 刊期： 2014年第03期
目的:探讨凝血因子Ⅴ基因突变(FVLeiden)和凝血酶原G20210A基因突变(FIIG20210A)与中国人群肺血栓栓塞症的关系.方法:选取45例经过核素肺灌注显像和(或)螺旋CT肺动脉造影(CTPA)确诊的肺血栓栓塞症患者为实验组,85例正常健康人群为对照组.对实验组和对照组分别进行凝血因子Ⅴ基因突变和凝血酶原G20210A基因突变检测.结果:FVL和凝血酶原G20210A基因杂合子及纯合子突变在PTE患者组及对照组中基因型频率均为0,提示病例组及对照组上述基因型变异频率及突变等位基因频率均为0.结论:凝血因子Ⅴ基因G1691A突变和凝血因子G20210A基因突变可能与中国人群肺血栓栓塞症无关.
作者：张佳；赵凤芹；赵建军；赵永娟 刊期： 2014年第03期
目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体在痛风性关节炎(GA)患者发病机制中的作用.方法:用RT-PCR法检测44例急性痛风性关节炎(AGA)患者、52例非急性痛风性关节炎(NAGA)患者和50名健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)、半胱天冬酶-1(CASP1)的mRNA表达水平,用Westernblot法检测AGA、NAGA患者和健康体检者PBMCs中NLRP3、PYCARD、CASP1、NF-κB (p105/p50)蛋白表达水平,用ELISA法检测AGA、NAGA患者和健康体检者血清IL-1β、IL-2、IL4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1表达水平.结果:NAGA组患者NLRP3的mRNA表达显著低于健康对照组与AGA组(P＜0.01),AGA、NAGA组患者PYCARD的mRNA表达均显著高于健康对照组(P＜0.01叭),AGA组患者CASP1的mRNA表达显著高于健康对照组与NAGA组(P ＜0.01); AGA、NAGA组患者NLRP3、CASP1蛋白表达均显著低于健康对照组(P＜0.05),AGA、NAGA组患者PYCARD、NF-κB (p105/p50)蛋白表达均显著高于健康对照组(P＜0.05);AGA、NAGA组患者血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1表达均显著高于健康对照组(P＜0.01),NAGA组患者IL-1β、IL-6表达均显著高于AGA组(P＜0.01).结论:NLRP3炎性体各基因mRNA、蛋白表达及与其相关联的致炎与抗炎性因子在GA患者中表达异常,提示NLRP3炎性体在GA患者的炎症反应中发挥重要的作用.
作者：党万太；周京国；谢文光；蔡燕；郭晓兰；赵明才；邱亚 刊期： 2014年第03期
抗病毒细胞因子(Antiviral cytokines)是一类由机体细胞分泌的,具有联系机体固有免疫和特异性免疫应答,抑制或捕杀体内病毒,抗病毒感染的小分子蛋白[1,2].抗病毒细胞因子可分两大类:一类是能够直接诱生抗病毒蛋白的细胞因子,主要有IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-λ(IL-28/29)、TNF-α[3-6];另一类是能通过激活免疫细胞,如NK细胞、巨噬细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)等介导抗病毒免疫应答,主要有IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-27等[7-12].
作者：于甜；胡小鹏；祝小红；宋勋；李晨阳；曾勇；李燕；苏庆宁；李世和 刊期： 2014年第03期
IL-2是早发现的细胞因子之一,又称T细胞生长因子(T cell growth factor,TCGF),对T细胞的增殖、发育和分化具有重要作用.有研究报道IL-2不仅可以促进T细胞的生长发育,还可促进其凋亡[1,2].IL-2还是细胞毒性T淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)和B淋巴细胞重要的生长和激活因子.对于该分子的研究可以追溯到1976年,当时人们发现淋巴细胞培养上清中有一种可以支持T淋巴细胞长期生长的物质,直到1981年才证明这是一个糖基化的大小为15.5 kD的蛋白质,并于1981年成功克隆其cDNA,即IL-2[3].目前发现IL-2的空间结构由4个反向平行的α螺旋核心和小β片段组成,其与细胞膜上的IL-2R特异性结合后发挥多种生物学功能[4].
作者：许佳 刊期： 2014年第03期
慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)是一类严重影响人类健康的疾病,且随着发病率逐年升高,其已成为21世纪人类面临的全球性重大公共健康问题.继发性甲状旁腺功能亢进(Secondary hyperparathyroidism,SHPT)是CKD患者常见并发症之一,其特征是甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)水平升高,临床主要表现为钙磷代谢紊乱.研究发现在CKD3-4期患者中,PTH增高是该类患者心血管事件(Cardiovascular disease,CVD)的独立危险因素[1].在长期透析患者中,持续的PTH升高不仅增加CVD的发病率而且增加死亡率[2].目前,常规的给予钙剂、活性维生素D、磷结合剂口服等治疗效果欠佳.
作者：赵玉 刊期： 2014年第03期
血小板输血是现代成分输血的重要组成部分.随着临床输血事业的发展,血小板的使用日益广泛.但随着血小板的大量使用,血小板输注无效(Platelet transfusion refractory,PTR)成为困扰临床医生的常见问题.同种免疫性抗体的产生是导致血小板输注无效的重要原因.为血小板输注无效患者选择佳匹配血小板进行输注,减少输注无效症的发生,提高血小板输注疗效,成为目前医学界研究的热点之一.近年来,针对上述课题,国内外医学研究人员做了大量的研究并取得可喜的成果.本文对同种免疫性抗体致血小板输注无效输血策略的国内外研究进展作一综述,为各地区输血实验室建立血小板输注无效的血小板输注操作规范、标准及输血策略提供参考.
作者：伍伟健 刊期： 2014年第03期
单核细胞(monocyte,Mo)是重要的固有免疫细胞,在免疫应答中参与吞噬病原微生物、呈递抗原、调控T细胞分化等过程,其功能的多样性提示循环中可能存在具有执行不同功能的单核细胞亚群.随着多色染色技术和流式细胞分选技术的迅猛发展,越来越多的研究发现单核细胞在人、鼠及其他哺乳动物中均存在异质性,许多疾病的发生发展也与单核细胞亚群的比例和功能变化明显相关.目前人类单核细胞主要分为三个亚群,分别是CD14++CD16-Mo、CD14++CD16+ Mo和CD14+ CD16++Mo三个亚群.相较于CD16-Mo,CD16+ Mo具有更强的分泌促炎因子的能力,与某些感染和炎症性疾病密切相关,因此也称为炎症性Mo.炎症性Mo亚群表型的比例失衡与某些感染和自身免疫病的关系日渐受到关注.本文拟就炎症性Mo亚群在自身免疫性疾病中的研究进展和相关问题作一介绍.
作者：赵蓉；彭桉平；陈曲波 刊期： 2014年第03期
目的:建立鼠胚子宫内电击转染技术体系(In utero electroporation,IUE),探究该技术在研究神经元发育包括树突棘形成及神经纤维归巢(轴突投射)中应用的可行性.方法:构建带pCAG启动子表达绿色荧光蛋白(Green fluorescentprotein,GFP)的质粒,并将该质粒利用子宫内电击转染技术转染到孕期15.5 d(E15.5)鼠胚大脑皮质的新生神经元中.待小鼠出生后(P0)及第28 d(P28)用4％多聚甲醛活体灌注固定,振荡切片机切片,免疫荧光组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察拍照.结果:在出生后P28小鼠被转染一侧的大脑皮质内有大量被GFP标记的细胞,呈现典型的神经元形态特征,从胞体发出大量树突,树突表面有大量大小不等、形态不一的小棘,被标记神经元的轴突通过胼胝体投射到对侧海马和大脑皮质.结论:子宫内电击转染技术能成功转染大脑皮质神经元,由CAG启动的GFP表达载体能够在被转染的神经元中长时程高效表达GFP,并标记被转染神经元的所有细胞结构包括树突、轴突及树突棘,该技术可用于研究各种不同基因在小棘发育及神经纤维归巢中的作用.
作者：段明慧；卢习；张伟；李玲玲；陈树林；赵善廷 刊期： 2014年第03期
目的:本研究旨在利用细菌表面展示技术结合流式细胞术建立一种快速直观的抗原表位的新方法.方法:本研究以传染性法氏囊病毒结构蛋白VP2作为目标蛋白,对该方法的可行性进行检测.将VP2基因分为连续不重叠的5个基因片段(V1～V5).将各段基因分别克隆至细菌展示载体pAPEx中,转化大肠杆菌DH5 α,利用IPTG诱导使蛋白片段锚定表达于大肠杆菌细胞间质侧的内膜上,利用溶菌酶破除细菌外膜(原生质球制备),使蛋白片段暴露于原生质球表面.将该原生质球先后与传染性法氏囊病毒多克隆抗体和FITC标记的兔抗鸡抗体进行孵育,利用流式细胞仪(Flow cytometer,FC)检测原生质球的荧光信号强度.结果:FC结果显示,除V2片段外其余片段均有很强的荧光信号,其荧光强度为V3强,V1、V4、V5其次.该结果说明V1、V3、V4、V5段存在抗原表位,V2段中无表位.为验证FC结果,本研究利用传统方法对各基因片段进行表达、纯化及Western blot鉴定,结果显示V3与多抗的结合能力强,V2段无阳性反应,与FC结果相符.此外,本研究利用抗原表位分析软件对各蛋白片段潜在抗原表位进行预测,其结果与FC结果相一致.结论:本研究利用FC对抗原表位筛选过程进行实时监测,通过荧光信号强弱即可判断抗原表位是否存在及强弱,与传统抗原表位筛选方法相比,节省了时间提高了效率.利用该方法可以快速地筛选出优势表位,对于流行病病原的基础研究及疫苗的研制具有重要意义.
作者：郭茉；徐黎明；周兵；尹杰超；任桂萍；李德山 刊期： 2014年第03期
目的:阐明恒河猴胃肠道相关淋巴组织中CCL25、CCR9、CCL20和CCR6转录产物的分布和丰度.方法:建立CCL25、CCR9 、CCL20和CCR6转录水平的Taqman探针实时定量PCR检测方法.提取胃肠道相关淋巴组织和非胃肠道相关淋巴组织的总细胞RNA,检测CCL25、CCR9、CCL20和CCR6的mRNA的存在和表达水平.结果:(1)在恒河猴的所有检测组织中CCL25、CCR9、CCL20和CCR6的mRNA均有表达.在胃肠道相关淋巴组织中,CCL25和CCR9的mRNA表达主要在小肠而不是大肠,而CCL20和CCR6的mRNA则表达在胃肠道所有节段中.在非胃肠道相关淋巴组织中,CCL25和CCR9的mR-NA在胸腺中的表达水平高;而CCR6mRNA在脾脏和腹股沟淋巴结中含量丰富.(2)相关分析结果显示CCL25与CCR9mRNA的表达具有显著的相关性(P=0.002 0,r2=0.480 2),CCR9与CCR6 mRNA的表达也具有相关性(P =0.003 9,r2=0.436 4).结论:与人相似,CCL25、CCR9、CCL20和CCR6 mRNA在恒河猴的胃肠道相关淋巴组织中高度且有区别地表达,表明恒河猴适宜用于与这些分子相关的黏膜免疫及人类疾病研究.
作者：王越；杨贵波 刊期： 2014年第03期
目的:探讨多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢局部和单卵泡中抗苗勒管素(Anti-Mullerianhormone,AMH)表达和胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)之问的相关性.方法:孕激素联合促绒毛膜性腺激素(Humanchorionic gonadotropin,HCG)法制作PCOS大鼠模型,根据胰岛素抵抗稳态模型(Homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)值筛选实验对象.将其分为:PCOS无IR组,PCOS合并IR组和对照组.采用免疫组织化学法对不同组大鼠的卵巢组织局部和单卵泡进行胰岛素受体(Insulin receptor,Ir)和AMH表达强度计算阳性单位行半定量分析.结果:对照组、PCOS无IR和PCOS合并IR组三组相比,血清空腹胰岛素(Fasting insulin,Fins)均有显著性差异(P＜0.05);三组间卵巢局部AMH表达呈递增型阶梯样分布(P＜0.05);而Ir表达无统计学差异(P＞0.05);卵巢局部AMH和Ir表达的相关性分析显示二者无明显相关性(r=0.000,P＞0.05);在单卵泡的表达中,三组的AMH及Ir表达强度均无统计学差异(P＞0.05);相关性分析显示AMH与Ir表达强度无明显相关性(r=0.011,P＞0.05).结论:PCOS卵巢局部AMH的高表达与高胰岛素血症的发生具有相关性,二者的相互作用可能与PCOS的高雄激素特征有关.
作者：钟兴明；孙秀红；韦相才；苗竹林；张迪；桑丽英 刊期： 2014年第03期
目的:研究主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子不同的肿瘤细胞在与其MHC分子匹配/非匹配小鼠中的移植瘤成瘤情况,探索MHC分子在肿瘤发生中的作用.方法:1×104、3 ×104、5×104个小鼠结肠癌细胞CT26(H2d)分别接种BALB/c(H2d)和C57 BL/6(H2b)小鼠,每个剂量对应设置皮下组和静脉组,对C57BL/6小鼠增加5×106、8×106和1×107数量组别;同样将1×105、5×105、1 ×106个小鼠黑色素瘤细胞B16F10(H2b)分别经皮下或静脉接种到两种小鼠体内,以相同接种量和接种方式下的不同小鼠间形成对比,14 d后观察各组成瘤情况.结果:在BALB/c小鼠成瘤实验中,CT26细胞数为1×104时静脉和皮下组均不成瘤,3×104时静脉组部分成瘤,皮下组不成瘤;5 ×104时两个组全部成瘤;注射1×105B16F10细胞时两组均不成瘤,5×105时静脉组全部成瘤,皮下组部分成瘤,1×106时两组全部成瘤.在C57BL/6小鼠实验中,皮下注射CT26细胞数＜5×106时不成瘤,6×106和8×106部分成瘤,1×107时皮下组全部成瘤,静脉组中CT26细胞达5×106也无肿瘤形成,大于此数量细胞注射时小鼠会因为肺栓塞死亡;对B16F10细胞,1×105时静脉和皮下组即可全部成瘤.结论:当肿瘤细胞与小鼠MHC Ⅰ表型相匹配,移植瘤成瘤所需细胞数远小于MHC Ⅰ表型不相匹配所需细胞数,说明MHC分子对肿瘤发生存在影响,此种差异为研究MHC与肿瘤的关系提供了线索,同时也提供了CT26、B16F10细胞株成瘤实验的精确数据.
作者：郭涛；罗诗樵；戴珏；殷永芳；许继凡 刊期： 2014年第03期
目的:探讨靶向△Np73的小干扰RNA表达质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231对其增殖和凋亡活性的影响.方法:构建△Np73小干扰表达质粒,脂质体法转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;荧光显微镜下观察转染细胞绿色荧光蛋白表达,计算转染效率;实时荧光定量PCR检测细胞转染质粒后△Np73和TAp73 mRNA的表达;共转染pcDNA3-HA/DNp73α表达质粒与△Np73小干扰质粒,Western blot检测细胞转染后△Np73和TAp73表达;CCK-8法检测转染质粒后细胞生长抑制率;caspase 3活性分光光度法检测转染质粒并应用阿霉素处理后细胞的凋亡水平.结果:成功构建并转染△Np73小干扰表达质粒,转染效率达60％.△Np73小干扰质粒转染细胞能有效抑制内源性△Np73 mRNA和外源性△Np73蛋白表达,对TAp73无显著抑制作用.经△Np73质粒干扰的细胞增殖活性显著下降,与空白对照组相比差异显著,阿霉素诱导△Np73质粒转染细胞凋亡水平增加,与阴性对照组相比有显著差异.结论:△Np73小干扰RNA表达质粒能显著降低MDA-MB-231细胞中△Np73 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞生长增殖,增强其被阿霉素诱导的凋亡水平,表明靶向沉默△Np73可能为未来人乳腺癌的治疗提供了一个新的策略.
作者：卢颖；王阳；段思；王爽；朱辰杰；李淑华；张佩 刊期： 2014年第03期
目的:为了观察藜芦酸在LPS刺激的RAW264.7细胞中对一氧化氮(NO)及前炎性因子等表达的抑制作用.方法:采用Griess试剂对RAW264.7细胞培养上清中的NO进行检测;用ELISA法对IL-6、IL-1β及TNF-α等前炎性因子进行分析;并通过Western blot法对诱导型NO合酶(iNOS)、STAT-1及NF-κB的表达进行检测.结果:藜芦酸能显著抑制由LPS刺激的RAW264.7细胞中的NO产生及iNOS的表达,并呈剂量依赖的特点;且还检测到藜芦酸能抑制IL-6的产生,此外,藜芦酸还能抑制STAT-3及NF-κB的磷酸化.结论:本研究揭示了藜芦酸可以中和炎症疾病中产生的过量的NO.
作者：李艳红；高志玲；马金姝 刊期： 2014年第03期
目的:探讨S100-B对Jurkat细胞核分泌炎症因子Interferon-γ(IFN-γ)的影响及相关信号分子改变.方法:S100-B作用于植物血凝集素(PHA)预刺激的Jurkat细胞,Western blot检测S100-B诱导Jurkat细胞NF-κB与p38MAPK磷酸化水平的变化;ELISA检测S100-B诱导Jurkat细胞分泌IFN-γ.结果:S100-B作用24 h后,Jurkat细胞表达NF-κB增多,上清中检测到IFN-γ达201 pg/ml,明显高于阴性对照组(123 pg/ml).S100-B可引起p38MAPK磷酸化,p38MAPK阻滞剂明显抑制S100-B诱导的IFN-γ表达.结论:S100-B促进PHA预刺激的Jurkat细胞表达NF-κB,促进Jurkat细胞分泌IFN-γ,其机制与激活p38MAPK途径有关.
作者：彭伟；陈燕；游捷 刊期： 2014年第03期
目的:研究MRL小鼠IL-10R1对B淋巴细胞功能的影响.方法:分别将克隆有MRL小鼠和C57BL/6小鼠IL-10R1基因的载体转染至Ba/F3细胞稳定表达,经IL-10刺激后,用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测CD16/32和LECAM-1的表达情况.结果:随着IL-10的浓度增加,表达MRL IL-10R1的B细胞的增殖能力递增,而表达C57BL/6 IL-10R1的B细胞递减;接受IL-10刺激后表达MRL IL-10R1的B细胞CD16/32表达水平较表达C57BL/6 IL-10R1的B细胞低,LE-CAM-1表达水平前者却较后者高.结论:MRL小鼠IL-10R1丧失了对B细胞活化、增殖及趋向性迁移的抑制作用,这可能与系统性红斑狼疮的发生及发展有关.
作者：刁骋；韦星呈；刘新；曾艳；王岚；杨芳莉；严丹丹；贺思敏 刊期： 2014年第03期
目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb) mDRA-6对EC109细胞自噬和凋亡诱导作用.方法:M TT法检测mDRA-6细胞毒性;MDC染色和Hoechst 33258染色,观察mDRA-6诱导细胞自噬、凋亡形态学变化;流式细胞术定量分析mDRA-6诱导细胞自噬率和凋亡率.结果:mDRA-6具有细胞毒性,0.024～25 mg/L mDRA-6作用细胞呈时间剂量依赖性,各组间差异具有统计学意义(P＜0.01),10 h的IC50值为0.78 mg/L;经mDRA-6处理EC109细胞出现核固缩、染色质边缘化和形成凋亡小体等;同时细胞浆中出现自噬体;流式细胞术测定结果显示,2.0 mg/L mDRA-6作用细胞10 h,细胞自噬率和凋亡率分别为19.44％和54.88％.结论:mDRA-6可引起EC109细胞自噬和凋亡;mDRA-6通过诱导EC109细胞自噬和凋亡抑制细胞生长.
作者：贾彩云；赵粤萍；刘广超；马远方 刊期： 2014年第03期
目的:通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠骨密度以及血清BALP、TRACP、MMP-2、TGF-β1的变化,研究强骨康疏胶囊治疗去卵巢骨质疏松症模型大鼠的作用机制.方法:采用40只6月龄SD大鼠,随机分为空白对照组、模型对照组、雌激素组、中高组以及中低组.采用去除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型.各组大鼠灌胃1月后,心脏取血法采得血液并分离血清,并取右侧股骨行骨密度检测,通过测量大鼠股骨骨密度以及检测血清BALP、TRACP、MMP-2、TGF-β1含量来评定造模是否成功以及强骨康疏胶囊对骨质疏松症模型大鼠细胞因子的影响.结果:中高组能明显提高骨质疏松症模型大鼠骨密度(P＜0.05);与模型对照组相比,中高组能显著增加反映骨形成的血清学指标BALP的含量(P＜0.001),降低反映骨吸收水平的血清TRACP水平(P＜0.05)以及反映骨转换的血清MMP-2含量(P＜0.05),还能刺激骨TGF-β1的分泌(P＜0.05).结论:强骨康疏胶囊能提高去卵巢骨质疏松模型大鼠的骨密度;对骨质疏松症大鼠的骨代谢有正向调节作用.强骨康疏胶囊对去卵巢骨质疏松症模型大鼠细胞因子的调节作用可能是其治疗原发性骨质疏松症的作用机制之一.
作者：刘冬梅；袁林；苏林冲；冯佳；代玉芳；向导；向阳 刊期： 2014年第03期
目的:研究云芝糖肽(PSP)对荷瘤小鼠脾脏TLR4信号通路的调控作用,探讨PSP在体内的免疫调节及信号转导机制.方法:建立艾氏腹水癌(EAC)实体型荷瘤小鼠模型,随机分为2组:生理盐水组(NS组)、云芝糖肽组(PSP组),灌胃给药30 d后,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测两组小鼠脾脏中TLR4通路相关基因的表达水平,采用免疫印迹法(Western blot)检测信号通路相关蛋白的表达情况.结果:与NS组相比,PSP组荷瘤小鼠脾脏TLR4信号通路中的TLR4、I-RAK4、TRAF6、TAK1、IKKα、NF-κB、JNK、ERK、P38、AP-1基因的相对表达量均明显提高(P＜0.05),通路中的相关蛋白TLR4、TRAF6、NF-κB和AP-1均明显上调.结论:云芝糖肽在体内对荷瘤小鼠的免疫调节作用可能是通过TLR4信号通路来实现的.
作者：董冰；马子芳；余爽；鲍依稀 刊期： 2014年第03期
目的:通过基因沉默RhoC联合雷帕霉素阻断mTOR通路对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究,证明二者联合能显著抑制肝癌侵袭、迁移,寻找治疗肝癌的新分子靶点.方法:RhoC-siRNA质粒转染BEL7402细胞,荧光显微镜检测转染效率;Western blot方法鉴定RhoC的基因沉默效果.实验分为6组:空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组、阴性对照Scramble-siRNA+ Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA+ Rapa组.采用半定量RT-PCR法检测侵袭相关因子MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、P27RF-Rho以及凋亡相关因子Survivin表达;免疫细胞化学法检测MMP2、MMP9的表达;采用划痕实验,细胞黏附实验,Transwell小室检测细胞的侵袭转移.结果:Scramble-siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、p27RF-Rho、Survivin和空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组比较表达降低(P＜0.05),RhoC-siRNA联合Rapa组的表达显著降低(P＜0.01);Scramble-siRNA+ Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组抑制肝癌细胞侵袭和迁移(P＜0.05),而RhoC-siRNA联合Rapa组显著抑制肝癌细胞的侵袭迁移(P＜0.01).结论:RhoC-siRNA联合雷帕霉素能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭,是治疗肝癌的良好分子靶点.
作者：郑鹏远；谢淑丽；张若岩；吕国悦；王广义 刊期： 2014年第03期
目的:对实验室已构建的新型免疫毒素IAB-TAT-BH3在肝癌靶向治疗中的作用进行初步评价.方法:首先通过免疫组化技术对人肝癌组织芯片中CA125的表达进行检测,同时利用RT-PCR、Westernblot和流式细胞术从RNA和蛋白水平对肝癌细胞中CA125的表达进行系统分析;然后通过Western blot和流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测免疫毒素IAB-TAT-BH3与肝癌细胞株SMMC-7721的结合能力,后采用MTT法检测其对于SMMC-7721的靶向杀伤作用.结果:CA125在人类肝癌组织芯片和肝癌细胞株SMMC-7721中呈现高表达;免疫毒素IAB-TAT-BH3对于SMMC-7721具有良好的结合能力,且与两种对照免疫毒素相比,具有更强的细胞杀伤作用,IC50值约0.3 μmol/L.结论:膜蛋白CA125是潜在的肝癌分子靶标,靶向CA125的新型免疫毒素IAB-TAT-BH3在体外对肝癌细胞具有一定的特异性杀伤作用,在肝癌靶向治疗上具有潜在的应用前景.
作者：范鸣；滕云飞；虞丽平；任华；何苗壮；钱旻；杜冰 刊期： 2014年第03期
目的:探讨黄芩素联合阿维A酸对人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-12的凋亡诱导作用及对caspases的影响.方法:以体外培养的SCL-12细胞为研究对象,采用酶联免疫分析法(ELISA)检测凋亡的诱导情况;吖啶橙染色证实凋亡的发生;流式细胞仪检测细胞周期;Western印迹分析caspase-8,caspase-9和caspase-3表达.结果:黄芩素、阿维A酸单独及联合应用均能不同程度的诱导SCL-12细胞凋亡及阻滞细胞周期的进程,将细胞阻滞于G1期;活化caspase-8,caspase-9和caspase-3;其中黄芩素联合阿维A酸作用为显著,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论:黄芩素、阿维A酸单独及联合应用均能诱导SCL-12细胞凋亡,两种药物的联合应用对SCL-12细胞具有协同效应,这一效应可能是通过外源性死亡受体途径和内源性线粒体途径共同介导执行.
作者：刘梅；曲乐；尹新江；朱红；金光玉；陈洪铎；何春涤 刊期： 2014年第03期
目的:探讨体外诱导培养的γδT细胞对人肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用.方法:分离人外周血淋巴细胞,用anti-human TCRγ/δ、IL-2等诱导γδT细胞,培养5天时在实验组γδT细胞中加入肿瘤抗原HSP70,再培养1天后,用流式细胞仪检测γδT细胞表型,然后分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养,用MTT法检测其对SMMC-7721的杀伤活性.结果:培养6d的γδT细胞表达率62.10％,与肿瘤抗原HSP70共同培养的γδT细胞表达率为71.10％,这两组γδT细胞与肝癌细胞SMMC-7721按50:1培养24h后,杀伤活性分别达到(82.68 ±8.68)％和(90.99±3.09)％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:用anti-human TCRγδ、IL-2诱导培养的γδT细胞对肝癌细胞SMMC-7721有显著的杀伤作用,加入肿瘤抗原HSP70培养后的γδT细胞具有更强的杀伤活性.
作者：夏莉；于鸿；刘玉侠 刊期： 2014年第03期
免疫学技术的应用早可以追溯到我国北宋时期,人们尝试采用人痘苗接种的方式预防天花.随着生物学技术的发展,免疫学技术早已脱离了经验时期转入到现代免疫学时期,与疾病的诊断、预防和治疗密切相关,成为生命科学研究中为重要的实验技术涉及到生物学研究的各个方面,与实际应用联系紧密.免疫学作为生命科学发展的前沿学科,以其研究的深度和应用的广度成为沟通生物学基础和临床研究的重要桥梁[1].
作者：杜冰；任华；祁灵；江文正；钱旻 刊期： 2014年第03期
