目的：探讨VEGF-C和Syk在乳腺癌中的表达与淋巴结转移的关系。方法：应用免疫组织化学方法，检测40例乳腺浸润性导管癌、10例乳腺纤维腺瘤、10例正常乳腺组织Syk和VEGF-C的表达，分析其与淋巴结转移的关系。结果：VEGF-C在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为0％（0/10），30．0％（3/10），77．5％（31/40）；Syk在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为100％（10/10），100％（10/10），37．5％（15/40）。 VEGF-C表达与肿瘤直径、组织学分级无显著相关（P＞0．05；P＞0．05），与淋巴结转移呈显著相关（P＜0．05）；Syk表达与肿瘤直径、组织学分级无显著相关（P＞0．05；P＞0．05），与淋巴结转移呈显著相关（P＜0．05）；Syk与VEGF-C间差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：Syk和VEGF-C参与了乳腺癌的淋巴道浸润、转移，可能是判断预后的重要指标。
作者：张喜凤；赵红兵 刊期： 2014年第05期
目的：探讨小儿激素敏感型肾病综合征（ SSNS）治疗前与恢复期Th2细胞相关细胞因子IL-4、IL-5和Treg T细胞相关细胞因子TGF-β、IL-10水平的变化。方法：纳入36例SSNS患儿在治疗前和缓解期以及匹配的18例健康体检儿童，采用ELISA方法检测其血清IL-4、IL-5、TGF-β和IL-10水平，分析其水平变化与各临床指标的相关性。结果：SSNS患儿治疗前血清IL-4、IL-5显著高于缓解期以及健康对照组（P＜0．01），肾病治疗前的血清TGF-β显著低于缓解期以及健康对照组（P＜0．01），而各组之间的血清IL-10水平差异无统计学意义（P＞0．05）；SSNS治疗前的血清IL-4水平与血清白蛋白水平负相关（R2＝-0．694，P＝0．000）；与血清胆固醇呈正相关（R2＝0．658，P＝0．000）；血清TGF-β表达水平与血白蛋白呈正相关（R2＝0．838，P＝0．000），与血清胆固醇呈负相关（R2＝-0．722，P＝0．000）。结论：肾病综合征患儿血清IL-4、IL-5升高以及TGF-β水平降低与SSNS发病有关。
作者：周发为；游文忠；覃仕锋；唐生尧 刊期： 2014年第05期
目的：探讨小干扰RNA长期作用HBV转基因小鼠对抑制乙肝病毒复制的评价。方法：siRNA表达载体经尾静脉注射转染HBV转基因小鼠，设立特异性siRNA组（pSilencer5．1/C2、pSilencer4．1/C2、pSilencer3．1/C2）、PBS对照组和阴性质粒对照组（ n＝10）。在注射后第6天、21天、1个月、3个月、6个月和9个月的不同时间经其内眦静脉采血，采用化学发光法定量检测小鼠血清中HBsAg水平，实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA水平。结果：siRNA长期作用机体可使转基因小鼠血清HBsAg 和HBV-DNA水平显著降低，特异性siRNA组与PBS对照组相比，差异有显著统计学意义（P＜0．05）。而阴性质粒对照组与PBS组比较差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论：基于载体的特异性siRNA长期作用HBV转基因小鼠可抑制HBV的复制和表达，该抑制作用是特异性的。
作者：张卫云；孙朝晖；任广立；石玉玲；李薇；张蓉；唐荣芝 刊期： 2014年第05期
目的：观察染料木素（ genistein）对人非小细胞型肺癌（ non small cell lung cancer ，NSCLC） A549/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法：培养A549及A549/DDP细胞株，以A549细胞为对照。①MTT法测定A549及A549/DDP细胞对顺铂的IC50值、耐药倍数及细胞增殖抑制率；②测定0、1．25、2．5、5．0、10、20、40、60、80μg/ml染料木素作用48 h对A549/DDP细胞增殖的抑制率及IC50值；③用6．25、12．5、25μg/ml染料木素处理A549/DDP细胞24 h后，经流式细胞计量仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果：①A549及A549/DDP细胞对顺铂的IC50值分别为33．6μmol/L和76．9μmol/L，耐药倍数为2．3；细胞增殖抑制率随顺铂浓度增加而逐渐加大；②染料木素对A549/DDP细胞生长的影响，随染料木素浓度增加表现为先促增殖后抑制的作用，其对A549及A549/DDP细胞的IC50值分别为85．1μg/ml和80．2μg/ml；③6．25、12．5、25μg/ml染料木素作用于A549/DDP细胞24 h后，随染料木素浓度的增加，停留于G2/M期的细胞数逐渐增多（P＜0．05），同时A549/DDP细胞出现凋亡。结论：染料木素可抑制A549/DDP细胞的生长，将细胞阻滞于G2/M期，并诱导细胞凋亡。
作者：任彦；陆红玲；宋永祥；李大玉；徐刚 刊期： 2014年第05期
目的：基于Keap1-Nrf2-ARE通路探讨强直性脊柱炎（ AS）患者心功能降低的机制。方法：随机选取140例AS患者作为研究组，并抽取60例健康人作为正常对照组；采用多普勒超声心动图（ UCG）检测两组心功能参数[ E峰、A峰、E/A比值、左心房舒张期内径（ LADd）、左心室舒张末期内径（ LVDd）、左心室短轴缩短率（ FS）、左心室射血分数（ EF）、每搏输出量（ SV）]；采用ELISA法检测两组血清中通路蛋白[ Keap1样ECH相关蛋白l（ Keap1）、核因子NF-E2相关因子（Nrf2）]、氧化应激指标[丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、活性氮（RNS）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（ CAT）、总抗氧化能力（ TAOC）]和细胞因子（ IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10）含量；采用魏氏法检测炎性指标血沉（ ESR）；采用日立7060型全自动生化分析仪检测C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白。结果：（1）与正常对照组相比，AS活动期心功能参数（E 峰、EF、E/A 值）、抗氧化指标（SOD、CAT、TAOC）、细胞因子（IL-4、IL-10）值均显著降低（P＜0．01或 P ＜0．05）；心功能参数A峰、通路蛋白（Keap1、Nrf2值）、氧化指标（ROS、RNS、MDA）、细胞因子（IL-1β、TNF-α）、炎性指标（ESR、CRP）值显著升高（P＜0．01或P＜0．05）。（2）与正常对照组相比，AS稳定期心功能参数[E峰、E/A值]、抗氧化指标（SOD、CAT、TAOC）、细胞因子（IL-4、IL-10）值均显著降低（P＜0．01或P＜0．05）；心功能参数 A峰、氧化指标（ROS、RNS、MDA）、细胞因子（TNF-α）、炎性指标（ESR、CRP）值显著升高（P＜0．01或P＜0．05）。（3）与AS稳定期相比，AS活动期心功能参数（E峰、EF、E/A值）、抗氧化指标（SOD、TAOC）、细胞因子（IL-10）值均显著降低（P＜0．01或P＜0．05）；通路蛋白（Keap1、Nrf2）、氧化指标（ROS、RNS、MDA）、细胞因子（IL-1β、TNF-α）和炎性指标（ESR、CRP）、AS临床评价指标（VAS、BASDAI、BASFI、BASMI、BAS-G）值显著升高（P＜0．01或P＜0．05）。（4）与AS患者Keap1、Nrf2正常组比较，Keap1、Nrf2异常组心功能参数A峰显著升高，E峰、E/A值显著降低（ P＜0．05或P＜0．01）。（5）相关性分析显示，心功能参数 E峰与抗氧化指标（ SOD、CAT、TAOC）、细胞因子（ IL-4、IL-10）呈正相关，与通路蛋白（ Keap1、Nrf2）、氧化指标（ ROS、RNS、MDA）、细胞因子（ IL-1β、TNF-α）、炎性指标（ ESR、CRP）、AS临床评价指标（ VAS、BASDAI、BASFI、BASMI、BAS-G）、免疫球蛋白G（IgG）、病程呈负相关；心功能参数 A 峰与通路蛋白（Keap1、Nrf2）、氧化指标（ ROS、RNS、MDA）、细胞因子（ IL-1β、TNF-α）、AS临床评价指标、心悸症状呈正相关，与通路蛋白 Keap1、抗氧化指标（SOD、CAT、TAOC）、细胞因子（IL-4、IL-10）呈负相关；心功能参数E/A比值与抗氧化指标（SOD、CAT、TAOC）、细胞因子（IL-4、IL-10）呈正相关，与氧化指标（ROS、RNS、MDA）、细胞因子（TNF-α）、AS临床评价指标、病程呈负相关；心功能参数EF与病程呈负相关；心功能参数FS与通路蛋白Keap1呈负相关（P＜0．05）。结论：33．56％的AS患者存在心功能降低，表现为心功能参数E峰、E/A值显著降低，A峰显著升高；心功能参数E峰、E/A值均与抗氧化指标、抑炎细胞因子呈正相关，与通路蛋白Keap1、Nrf2、氧化指标、致炎细胞因子、炎症指标呈负相关；而心功能参数A峰与通路蛋白Keap1、Nrf2、氧化指标、致炎细胞因子呈正相关，与抗氧化指标、抑炎细胞因子呈负相关。 Keap1、Nrf2表达上升， Keap1-Nrf2-ARE信号通路活化后，机体抗氧化能力下降，促使细胞因子失衡、炎症指标升高，导致免疫复合物异常沉积增多，在引起AS发病的同时出现心功能降低。
作者：齐亚军；刘健；郑力；万磊；曹云祥；孙玥；王芳 刊期： 2014年第05期
目的：探讨骨髓间充质干细胞抑制Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖的免疫调节相关机制。方法：分离、培养并鉴定大鼠的骨髓间充质干细胞，采用MTT法观察其对Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖能力的影响，采用流式细胞仪分析骨髓间充质干细胞对Ⅰ型糖尿病大鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞比例、细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：B组和C组的吸光度值明显低于A组，数据之间比较差异均有统计学意义（P＜0．05），C组吸光度值明显低于B组，数据之间比较差异有统计学意义（ P＜0．05）；B组和C组的CD4＋CD25＋调节性T细胞比例均明显高于A组，数据比较差异均有统计学意义（ P＜0．05）， C组CD4＋CD25＋调节性T细胞比例明显高于B组，数据比较差异有统计学意义（ P＜0．05）；B组和C组的细胞凋亡水平明显高于A组，数据比较差异有统计学意义（P＜0．05），C组细胞凋亡水平明显高于B组，数据比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：骨髓间充质干细胞可以显著抑制Ⅰ型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖，其机制可能通过调节CD4＋CD25＋调节性T细胞比例，促进细胞凋亡，继而影响T淋巴细胞的免疫功能，发挥其抑制能力。
作者：郑贵星；李翊泉；魏小平；吴颉；黄俊 刊期： 2014年第05期
1白三烯的生物合成白三烯（ Leukotrienes ， LTs ）是20世纪70年代才发现的一种脂质介质，是一类强效致炎脂质因子，而LTB4是其中一个非常重要的体内炎症调节因子［1］。目前LTs合成机制已基本明确，系嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞或巨噬细胞等炎症细胞对各种生物信号包括致敏组织抗原激发的反应产物，这些炎症细胞膜、核膜脂质双分子层在磷脂酶A2作用下产生花生四烯酸（Arachidonic acid， AA）， AA通过环氧化酶（Cyclooxygenase，COX）和5-脂氧酶（5-lipoxygenase ，5-LO）代谢途径分别参与前列腺素（ PGI 2、PGE 2）、血栓素（ TXA 2）和LTs的生物合成。 AA通过5-、12-、15-脂氧化酶代谢为氧化二十碳烯酸（5-HPETE）后，经脱水酶迅速转换为不稳定的环氧化物LTA4，经水解酶或谷胱苷肽-5-转移酶的作用转换为二羟酸LTB4。
作者：吴丽梦；叶剑芳；谢文慧；李红英；詹雪琴；林春平；杨树龙 刊期： 2014年第05期
对“自我”和“非我”的区分是免疫系统抵抗病原侵入和维持机体处于平衡状态的先决条件。1989年，美国耶鲁大学免疫学家Janeway 在冷泉港会议上提出了细菌、病毒、真菌等外来微生物存在与机体完全不同的独特结构成分，即病原体相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns ， PAMPs），而机体内的天然免疫系统细胞上存在可识别PAMP的模式识别受体（ Pattern-recognition receptors ， PRRs ）这一假说［1］。1996年Hoffmann等［2，3］通过对含Toll基因突变的果蝇研究证实了这一假说。
作者：陶志云；施祖灏；朱春红；宋卫涛；宋迟；秦爱建 刊期： 2014年第05期
胎盘是妊娠期间存在的特有器官，不仅能够实现母体和胎儿间物质交换，还可以通过胎盘屏障抵抗各种侵入胚胎的病原微生物。 Hofbauer细胞是胎盘巨噬细胞，位于绒毛间质内，能够捕获和提呈抗原信息，参与母胎免疫反应；其表面表达人膜联蛋白Ⅴ（ Human AnnexinⅤ， hAⅤ）等多种受体。 hAⅤ是钙离子依赖的磷脂结合蛋白家族成员，参与细胞内、外多种代谢过程，如细胞信号转导、分化、细胞膜运输、胞吞、胞吐作用等。本文围绕胎盘Hofbauer 细胞及其hAⅤ研究进展进行综述，现将结果报道如下。
作者：王健；周娜 刊期： 2014年第05期
中性粒细胞是人体内主要的固有免疫细胞之一，感染及炎症发生时，在趋化因子作用下第一时间募集到疾病发生位点。细菌、真菌及病毒等病原微生物感染过程中，中性粒细胞通过吞噬杀伤和分泌抗菌物质发挥其固有免疫作用。近年来研究发现，中性粒细胞可以分泌多种细胞因子发挥免疫调节作用，中性粒细胞的免疫调节功能越来越受到重视。NETs是新发现的中性粒细胞抗感染机制，能够网络病原菌限制其散播范围，提高局部抗菌物质浓度消除病原菌。中性粒细胞是人体内重要的炎症介导细胞，其具有在炎症发生过程中趋化、游出、释放炎症介质及蛋白酶类的生物学特性，可以引起广泛的组织损伤。 NETs在发挥胞外抗菌作用的同时，限制各种抗菌性颗粒蛋白的扩散能够减少中性粒细胞引起的组织损伤，但同时NETs的形成及清除障碍会加重某些自身免疫性疾病的严重程度。此外，中性粒细胞分泌的细胞因子、机体抗中性粒细胞胞浆抗体的产生在自身免疫病发病机制中也有重要作用。本文旨在着重对中性粒细胞在感染及炎症中的免疫功能、NETs的功能和形成机制以及中性粒细胞在某些常见自身免疫病发病中的作用进行简单综述。
作者：刘义庆；卢冰如(综述)；张炳昌；赵跃然(审校) 刊期： 2014年第05期
生发中心（ Germinal center ， GC ）是次级淋巴组织（如淋巴结、脾、扁桃体、Peyer 斑）淋巴滤泡中的特殊结构。在GC内B细胞经历克隆增殖、体细胞高频突变、抗体类别转换、抗体亲和力成熟等过程，终分化为长寿命记忆性B细胞和浆细胞。
作者：赵敏；张俊美；李静 刊期： 2014年第05期
系统血液生物学有关理论认为血液系统是由分系统和子系统组成。各分系统和子系统生物功能有不同分功，但它们之间还有协作调控关系。红细胞血红蛋白参与氧和CO2呼吸功能调控，红细胞膜有多种受体，如补体受体、趋化因子受体参与补体活化，细胞因子浓度调控，红细胞胰岛素受体参与胰岛素和血糖浓度调控［1-7］。当异抗原（如艾滋病毒）进入血液后，首先激活补体系统，艾滋病毒颗粒黏附上补体C3b，被红细胞CD35分子作用后，降解为C3 d和C3 dg ，将这种艾滋病毒交给B淋巴细胞CR2分子处理，终通过有关机制递交给CD4阳性淋巴细胞而发病。有关研究还发现红细胞可释放NK细胞增强因子，调控NK细胞活性。红细胞血红蛋白参与抗淋巴细胞代谢中氧化作用，使 CD4／CD8比值上调。红细胞数量巨大，膜受体种类众多，红细胞参与血液免疫反应和内分泌及生化反应等系统血液生物学功能调控机制复杂。淋巴细胞可分泌抗体和各种白细胞因子参与抗感染和抗肿瘤免疫反应，淋巴细胞膜有多种受体如激素受体参与内分泌功能调控等。血小板可释放多种凝血因子调控凝血过程，血小板模有补体受体参与补体活化调节，血小板模有CD55、CD59分子参与T淋巴细胞活性调节［4］。所有血细胞都参与抗感染和抗肿瘤免疫反应，血液系统对外来致病原的反应是一种系统血液免疫反应［1-7］。这需要用系统血液生物学的理论和系统模式实验方法学去研究，才会有新发现和理论创新。这方面研究工作有很大进展，现将有关研究进展综述如下。
作者：郭峰；查占山；钱宝华 刊期： 2014年第05期
单核细胞（ Monocyte ）来源于骨髓造血干细胞，参与抗原提呈、病原微生物的吞噬、T细胞功能调节等重要过程，是机体固有免疫和获得性免疫的重要组成部分。此外，单核细胞浸润于特定靶器官后，进一步分化为巨噬细胞，在炎性反应过程中发挥着重要作用。上述功能的多样性提示循环中存在着执行不同功能的单核细胞亚群。1989年德国学者Zie-gler-Heitbrock等利用双色流式细胞技术，首次证实人外周血中存在着CD14＋CD16-和CD14＋CD16＋两种单核细胞亚群［1］。随着流式细胞技术的迅猛发展，第三类在表型和功能上具有异质性的单核细胞亚群（ CD14＋＋CD16＋）也陆续被多个研究组报道［2-5］。单核细胞亚群的比例和功能变化与正常妊娠和病理性妊娠的关系受到人们的关注。本文对单核细胞亚群与正常妊娠的建立及病理性妊娠疾病发生的研究进展进行综述。
作者：唐茂兴；廖爱华 刊期： 2014年第05期
目的：预测人IL-37b蛋白质的二级结构及B细胞抗原表位。方法：以IL-37b蛋白质的氨基酸序列为基础，应用ProScale、Bcepred服务器，分析人IL-37b亲水性、柔韧性、可及性和抗原性指数，并结合二级结构特征，预测IL-37b的B细胞表位。结果：IL-37b的二级结构主要由β折叠（31．65％）、无规则卷曲（52．75％）、α螺旋（8．26％）和β转角（7．34％）组成。其B细胞表位可能位于第21-27、34-75、175-192和213-215氨基酸区段。结论：此结果将有助于确定IL-37 b的B细胞表位，为研制人IL-37单克隆抗体提供了理论依据。
作者：高巧艳；李燕；周密；高雪明；袁仙丽；李明才 刊期： 2014年第05期
目的：筛选7型腺病毒的结合多肽，并研究其与腺病毒受体的相关性。方法：利用噬菌体肽库，筛选7型腺病毒的结合多肽，并制备其抗体，利用抗体进行免疫荧光实验，观察抗体与细胞膜的结合情况。结果：筛选到了GTS09多肽，其与噬菌体的复合物能特异的结合7型腺病毒，亲和常数可以达到1．93×1010 L/mol；制备了GTS09的兔多克隆抗体，免疫荧光显示，该抗体可以特异地结合在293细胞的细胞膜上。结论：抗GTS09的抗体可以特异的结合于细胞膜上，表明7型腺病毒受体可能与GTS09具有一定的同源性，为鉴定和分离7型腺病毒受体打下了基础。
作者：许元生；田新贵；刘铭龙；李晨阳；周荣 刊期： 2014年第05期
目的：建立小鼠骨髓源耐受性树突状细胞（CD11b＋F4/80＋TDCs）体外培养及功能鉴定方法。方法：以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（ rmGM-CSF ）和重组白介素4（ rmIL-4）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为未成熟树突细胞（iDCs），收集第六天的细胞采用流式细胞术分离纯化CD11b＋F4/80＋TDCs。倒置显微镜动态观察细胞形态学变化，流式细胞术观察并分选CD11b＋F4/80＋TDCs，CD11b＋F4/80＋TDCs的耐受功能通过MHCⅡ类分子、CD83、IDO、TLR-2的表达及IL-10和TGF-β1细胞因子的产生进行评价。流式细胞术测定MHCⅡ类分子表达，免疫组化法测定CD83、IDO、TLR-2的表达，ELISA法测定IL-10和TGF-β1的水平，同时设LPS刺激诱导的成熟树突细胞（mDCs）作对照。结果：镜下可见新鲜分离的骨髓细胞呈圆形，体积小，2 d后，部分细胞形态发生改变，体积增大，细胞聚集成团，培养5～6 d，细胞集落增多，形态不规则。同时表面出现较多毛刺样突起。 CD11b＋F4/80＋TDCs 含量在23％左右，经流式分选后细胞纯度达到99％以上。与 mDCs 比较， CD11b＋F4/80＋TDCs低表达MHCⅡ和CD83，高表达IDO、TLR-2，并分泌IL-10和TGF-β1。结论：用小鼠rmGM-CSF和rmIL-4体外能成功诱导小鼠骨髓源CD11b＋F4/80＋TDCs，并且CD11b＋F4/80＋TDCs通过表达IL-10、TGF-β1、IDO和TLR-2显示耐受功能。
作者：付静静；盛康亮；李影；李培培；汪庆童；陈镜宇；吴华勋；张玲玲；魏伟 刊期： 2014年第05期
目的：建立人血清CYFRA21-1双抗体夹心酶联免疫检测方法。方法：以高碘酸钠法标记4株自制的CY-FRA21-1单克隆抗体，从中筛选配对抗体，建立双抗体夹心ELISA检测方法，并对其特异性、稳定性和灵敏度进行评价。结果：在4株单克隆抗体中筛选出1对配对抗体：2 F9株做包被抗体、6 F11株做酶标抗体。以0．50μg/ml的包被浓度、1∶6000的酶标抗体稀释度建立双抗体夹心检测方法。标准曲线在0．7～25 ng/ml范围内成线性关系，相关性为99．08％，低检测限为0．6668 ng/ml，回收率为98．14％；与血清类似物的交叉性反应低于0．1％；批内（n＝10）、批间（n＝5）精密度分别为6．8％和11．4％，与国外试剂盒检测对比的相关性为91．42％。结论：成功地建立了双抗体夹心ELISA检测人血清CYFRA21-1的方法，为后续的检测试剂盒的生产奠定基础。
作者：张慧茹；翟晋豫；王雪琴；刘珍；王云龙；米海 刊期： 2014年第05期
目的：分析鼠抗人IL-6Rβ（gp130）单克隆抗体[anti-IL-6Rβ（gp130）mAb]的生物学特性及对IL-6信号分子的调节作用。方法：利用Western blot、竞争性ELISA实验、功能表位结合实验，检测anti-IL-6Rβ（gp130） mAb的亲和力、效价及与gp130抗原表位结合特异性。进而探讨anti-IL-6Rβ（gp130） mAb对U266细胞、RA患者外周血单个核细胞（PBMC）及滑膜液单个核细胞（SFMC）增殖和分化中的IL-6信号分子的调控机制。结果：Anti-IL-6Rβ（gp130）mAb对gp130具有高亲和性（如10A1细胞株的亲和力常数可达为2．62E-10），所获得的多株单抗还具有针对不同抗原结合表位的特性，可用于分析和研究IL-6信号通路及下游STAT3的磷酸化。结论：获得针对不同抗原结合表位的anti-IL-6Rβ（gp130）mAb，初步的实验结果表明此类单抗不仅具有调控IL-6信号分子和下游STAT3磷酸化的生物学功能，并为解析临床RA的发病与IL-6信号分子的关联性提供了初步的实验结果。
作者：周晓薇；苗平；陈呢喃；赵蓉；钱柳；余奇文；张继英；许荣；何东仪；肖连波；陆梅生；张冬青 刊期： 2014年第05期
目的：探讨hsa-microRNA-218（hsa-mir-218）对颗粒溶素（Granulysin，GLS）表达的影响。方法：抽提佛波酯（ Phorbol 12-myristate 13-acetatefor ， PMA）激活的THP-1细胞的总RNA，逆转录后PCR扩增GLS基因，将其克隆至pDsRed-Ex-press-C1，构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218（pGenesil-mir-control）共转染293T细胞，36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况，48 h后提取细胞总RNA和蛋白，RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果：酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功，且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比，Western blot 结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50％，而GLS mRNA表达无明显变化。结论：hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达，为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。
作者：樊宇；杨春；张璐渝；杨静；何永林；徐蕾；冯鑫；张春燕；穆柳青 刊期： 2014年第05期
目的：检测白细胞介素29（Interleukin-29，IL-29）对胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体（Protease activa-ted receptor，PAR）-1，2，3，4表达的调节作用。方法：P815肥大细胞培养后，用不同浓度的IL-29、胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞，在不同时间点收集激发细胞，用流式细胞术（ FCM）及实时定量PCR检测P815肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果：IL-29单独作用能够下调肥大细胞PAR-1蛋白及mRNA水平的表达，上调PAR-3、PAR-4 mRNA的表达，与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0．05）；以IL-29预处理肥大细胞后，IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PAR-2、PAR-3、PAR-4表达起促进作用，与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论：IL-29能够调节胰蛋白酶引起的肥大细胞PARs表达，从而参与肥大细胞相关的炎症反应。
作者：隋丽；陈冬；张慧云；何韶衡 刊期： 2014年第05期
目的：探讨红霉素对香烟烟雾刺激的人巨噬细胞组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）表达的影响。方法：体外培养人类单核细胞系U937细胞，用佛波脂（PMA）将其诱导分化为人巨噬细胞。按传统方法制备好香烟烟雾提取物（CSE）用于实验。将传代后的细胞分组：对照组、CSE组、红霉素＋CSE组、HDAC特异性抑制剂曲古霉素（ TSA）组。采用比色法检测细胞HDAC总活性；Western blot检测HDAC3和NF-κB蛋白表达；通过酶联免疫吸附实验（ ELISA ）检测细胞上清液中TNF-α的浓度。结果：1％CSE刺激人巨噬细胞引起细胞HDAC总活性减弱和HDAC3蛋白表达下降，诱导转录因子NF-κB活性增高，释放TNF-α；红霉素（1μg/ml）预孵育24 h可以增强CSE抑制的巨噬细胞HDAC3蛋白表达，下调NF-κB蛋白表达，抑制TNF-α的合成和释放。结论：红霉素通过上调HDAC3蛋白表达水平而抑制香烟烟雾诱导增强的转录因子NF-кB活性，进而影响炎症介质TNF-α的合成调控。
作者：李梅华；钟小宁；明智；何志义；彭信言 刊期： 2014年第05期
目的：为了解雌性山羊星状神经节是否具备接受γ-干扰素（ Interferon-γ，IFN-γ）作用的条件，即是否有IFN-γ受体（ Interferon-γreceptor，IFNGR）存在。方法：取雌性山羊星状神经节，用免疫组化SP法和PCR方法检测IFNGR在星状神经节的表达情况。结果：结果显示，在雌性山羊星状的神经元、支持细胞和神经纤维均有IFNGR免疫阳性产物分布，但主要分布于神经元细胞膜与细胞核，IFNGR在神经元胞体的相对表达量极显著高于非神经细胞结构（P＜0．01）。在山羊星状神经节扩增到IFNGR1基因的cDNA片段全长376 bp，山羊IFNGR1基因与绵羊基因同源性高（98％），其次为牛（97％）。结论：在雌性山羊星状神经节中IFNGR主要在交感节后神经元表达与分布，具备对IFN-γ刺激做出反应的条件，提示雌性山羊星状神经节可能作为IFN-γ对心血管免疫调节途径和自主神经对心血管调节的神经途径之间相互协调的关键点。
作者：李强；王志豪；金秀芳；徐永平；郭晓；陈文东；董伟 刊期： 2014年第05期
目的：观察亚低温治疗对创伤性脑损伤大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α（ Tumor necrosis factor alpha ，TNF-α）、白细胞介素-1β（ Interleukin-1β， IL-1β）及核转录因子-κB（ Nuclear factor-κB，NF-κB）表达的影响，探讨亚低温的脑保护作用及可能机制。方法：将45只SD大鼠随机分为假手术组（ Sham组），脑损伤组（ TBI组），亚低温治疗组。采用Marmarou’ s法建立创伤性脑损伤大鼠模型，损伤后立即开始诱导亚低温，持续3h，于伤后1d、3d、5d分别处死各组大鼠留取脑组织。采用干湿重法测量脑组织含水量，免疫组织化学法及Western blot法检测各组大鼠脑组织TNF-α、IL-1β及NF-κB的蛋白表达情况。结果：与Sham组相比，TBI组大鼠脑组织含水量升高（P＜0．05），3 d达水肿高峰，TNF-α、IL-1β和NF-κB的表达显著增加（P＜0．05），均为1 d达高峰，持续高表达至5 d；与TBI组相比，亚低温治疗组大鼠各时间点脑组织含水量降低（P＜0．05），TNF-α、IL-1β和NF-κB的表达明显减少（P＜0．05）。结论：高表达的TNF-α、IL-1β和NF-κB参与了TBI的病理过程。亚低温治疗可通过下调NF-κB信号分子，减轻创伤性脑损伤后脑组织的炎性反应，缓解脑水肿，进而起到脑保护作用。
作者：王亚楠；张勇；王宁；刘鑫颖 刊期： 2014年第05期
目的：将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素（ mouse thymic stromal lymphopoietin ，mTSLP）与人免疫缺陷病毒1型（ hu-man immunodeficiency virus type 1，HIV-1）B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法：以真核表达质粒pCEP-Pu为载体，构建mTSLP与gp120BAL V1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后，使用PEI瞬时转染293 F悬浮细胞，表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析，并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果：SDS-PAGE、Western blot分析显示，在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带，并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。 HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论：在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白，该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位，能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。
作者：楚鹰；王亭亭；芮昱文；宋思维；苏艾荣；程林；宋红勇；郑大同；吴稚伟 刊期： 2014年第05期
目的：观察胶原、基质金属蛋白酶13（Matrix metalloproteinase 13，MMP13）及其抑制物基质金属蛋白酶抑制物-1（Tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1）在猪血清诱导的肝纤维化大鼠肝组织中的表达及大鼠白介素10（rat inter-leukin-10， rIL-10）基因干预的影响，探讨rIL-10基因抗肝纤维化的作用机制。方法：30只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组（C组）和纤维化模型组。 C组每周腹腔注射2次生理盐水，每次0．5 ml，共8周；纤维化模型组每周腹腔注射2次猪血清，每次0．5 ml，共8周。至造模第5周开始模型组随机分为纤维化组（M组），rIL-10基因干预组（I组）及空质粒对照组（P组）。 C组和M组大鼠尾静脉注射林格氏液作为试剂对照，I组大鼠尾静脉注射rIL-10质粒pcDNA3-rIL-10， P组大鼠尾静脉注射pcD-NA3空质粒，每周1次。于第8周末处死所有大鼠。天狼猩红染色检测各实验组大鼠肝组织胶原沉积情况，S-P免疫组化检测各组大鼠肝脏MMP13及TIMP1表达的情况。结果：天狼猩红染色显示：与C组比较，猪血清诱导的肝纤维化模型M组及空质粒对照P组大鼠肝组织中胶原沉积面积显著增多（P＜0．01）；与M组和P组比较，rIL-10基因干预I组大鼠肝组织中胶原的沉积面积显著减少（ P＜0．01）；免疫组织化学染色结果显示：与C组比较，猪血清诱导的肝纤维化模型M组及空质粒对照P组大鼠肝组织中MMP13及TIMP1表达明显增强（P＜0．01），I组纤维化大鼠肝组织中MMP13表达上调而TIMP1表达显著减少（P＜0．01），与M组和P组比较，I组纤维化大鼠肝组织中MMP13及TIMP1表达显著减少（P＜0．01）。结论：rIL-10基因抑制肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积与其抑制基质金属蛋白酶抑制物TIMP1的表达相关。
作者：黄月红；陈运新；张莉娟；陈治新；王小众 刊期： 2014年第05期
目的：探讨不同毒力的结核杆菌分别感染小鼠肺泡巨噬细胞后铁蛋白（ Fn）和铁转运蛋白（ FPN）表达量及其时相性变化。方法：利用制备的结核杆菌国际标准强毒株H37Rv株（以下简称H37Rv株）和卡介苗菌株（以下简称BCG）菌悬液，分别经小鼠尾静脉注射，建立各组小鼠感染模型。各组小鼠感染模型建立成功后，分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天，进行肺泡灌洗，收集小鼠肺泡灌洗液，获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法检测各组感染组小鼠肺泡巨噬细胞中Fn和FPN的表达含量；应用Western blot技术检测上述时间点各组感染的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn的表达量。结果：用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达，结果显示：于模型建成后第7、9、11天，H37Rv株组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低，并且于第7天时表达量低，差异有统计学意义（P＜0．05）。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内FNP的表达，结果显示：不同毒力的结核杆菌菌株感染小鼠肺泡巨噬细胞后，各感染组内小鼠肺泡巨噬细胞FPN随处理时间延长表达逐渐降低；于感染第5天开始下降明显，第7、9天低。 H37 Rv株组和BCG组表达接近，于第5、7、9天明显低于正常对照组FPN的表达量，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论：结核杆菌感染导致巨噬细胞内Fn与FPN的表达均降低，并且感染巨噬细胞Fn和FPN的表达与结核杆菌的毒力强弱关系无相关性。
作者：庄睿；王霞；张锋；宝音；章乐；吴芳；吴江东；张春军；张辉；李文娟；梁晨；樊超；张万江 刊期： 2014年第05期
目的：观察雷公藤多甙对老年大鼠肾小球肾炎的疗效及炎症指标的影响。方法：将老年清洁级Wistar大鼠（18月龄）随机分为雷公藤组、对照组、模型组，在雷公藤组及模型组大鼠上建立系膜增生性肾小球肾炎模型，雷公藤组采用雷公藤干预。结果：实验12周后，模型组及雷公藤组大鼠24 h尿蛋白均显著高于实验前及对照组水平（ P＜0．05）；雷公藤组24 h尿蛋白显著小于模型组（P＜0．05）。实验12周后，模型组及雷公藤组TG、TC均显著高于对照组（P＜0．05），同时ALB显著低于对照组（P＜0．05）。雷公藤组大鼠TG及TC显著低于模型组（P＜0．05），但ALB显著高于模型组（P＜0．05）。实验12周后，雷公藤组大鼠肾脏病理分级为0～1级的比例显著高于模型组（χ2＝6．667，P＝0．010）。实验12周后，与对照组及雷公藤组相比较，模型组肾小球系膜TNF-α及IL-6表达量显著升高（P＜0．05）。结论：雷公藤多甙可以抑制老年肾小球肾炎大鼠肾小球系膜内炎症因子的表达，改善组织学表现及临床症状。
作者：刘珊；刘伦志；覃智慧；杨晓芬 刊期： 2014年第05期
目的：探讨逍遥散对阿尔茨海默病大鼠海马CA3区PP-2A、GSK-3β表达的影响。方法：将清洁级大鼠随机分为4组，其中模型组、西药组、中药组均采用D-gal 腹腔注射和A-β1～42 peptide 双侧海马注射联合造模，生理组仅采用等体积灭菌生理盐水腹腔及海马注射造模。造模完成后，生理组、模型组均用生理盐水灌胃，西药组和中药组分别用奥拉西坦溶液和逍遥散煎剂灌胃，四组灌胃体积均为5 ml/kg，每日1次，连续28 d。灌胃结束后即分离鼠脑，分组标记放入4℃4％戊二醛固定液玻璃容器密封，4℃保存。修块，切取海马区组织，石蜡包埋，切片。 PP-2A稀释度为1∶200，GSK-3β稀释度为1∶150。图像采用Image-pro Plus 5．0分析系统分析，数据采用SPSS11．5统计软件分析，4组间比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，检验水准α＝0．05。结果：PP-2A阳性细胞数、平均光密度及阳性面积、积分光密度等指标的表达，在逍遥散灌胃干预后与模型组比较明显增加（P＜0．01）；GSK-3β以上各项指标在经逍遥散灌胃后较模型组明显减少（P＜0．01）。结论：逍遥散可以上调PP-2A表达和下调GSK-3β表达，可能对凝聚态A-β1～42 peptide诱导的海马Tau蛋白过度磷酸化有一定的抑制作用。
作者：赵唯贤；李高申；王保伟；李宜培；刘建涛；郭梅珍；刘俊玲 刊期： 2014年第05期
微生物学和免疫学是学生较早接触临床的专业基础课，也是医学检验专业学生重要的必修课程。我校医学检验专业的微生物学和免疫学与临床医学、口腔医学和麻醉医学等临床有关的专业使用的是同一个教学大纲，在多年的教学中，无论是理论课还是实验课，没有明显突出检验专业的特点。而检验专业对微生物和免疫学的学习重点和要求应该与上述几个专业不同，因此，这样的教学模式很难引起学生的兴趣，教学效果也不甚理想。针对这一情况，我们在教学内容、方法和教学手段上进行了探索，取得了一些效果，与同仁分享。
作者：丁剑冰；王红英；王松；马秀敏；张朝霞；张峰波 刊期： 2014年第05期
目的：研究Akt磷酸化抵抗rsTRAIL蛋白诱导肺癌A549细胞株凋亡的作用机制。方法：rsTRAIL蛋白和哌立福新单独和联合作用于细胞株A549，Western blot检测A549细胞中Akt磷酸化水平变化、c-FLIPLL表达水平变化、caspase-8蛋白活化变化情况。流式细胞术进行细胞凋亡检测。 MTT法检测A549细胞增殖率。结果：Western blot结果显示，rsTRAIL蛋白可以导致A549细胞中Akt磷酸化水平的增加，哌立福新能够抑制A549细胞中Akt的磷酸化水平及c-FLIPLL表达水平，增强A549细胞中caspase-8的活化。哌立福新能提升rsTRAIL蛋白诱导A549细胞的细胞凋亡率至（76．5±3．02）％和杀伤活性到（83．2±2．54）％。结论：Akt磷酸化是导致A549细胞对抵抗rsTRAIL 诱导细胞凋亡的重要原因，抑制其活性可以促进rsTRAIL蛋白发挥抗NSCLC的活性。
作者：刘磊；方艳秋；齐亚灵；芦小单；魏海峰；谭岩 刊期： 2014年第05期
