目的建立H5和H9亚型禽流感病毒(AIV)联合RT-PCR检测方法.方法针对H5和H9亚型AIV血凝素(HA)基因,在其裂解位点两侧设计引物.在确定单项RT～PCR检测方法反应条件基础上,建立、优化联合RT-PCR反应体系和反应条件,并通过相关病毒检测试验,验证其敏感性和特异性.结果所建立的H5和H9亚型联合RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便、快捷等特点.结论该方法可用于AIV的检测及致病性分析.
作者：马鸣潇；金宁一；王振国；郑敏；费东亮 刊期： 2004年第03期
目的探讨骨形成蛋白(BMP)与胶原膜复合物(复合膜)修复大鼠颅骨缺损的效果.方法将BMP与胶原膜复合,在大鼠颅骨制备骨缺损,分别采用双侧覆盖复合膜、外侧覆盖复合膜进行治疗,以外侧覆盖胶原膜作为平行对照,并设空白对照.于术后2、4、6周,取标本进行x线检查及组织学观察.结果两个覆盖复合膜组的缺损成骨面积百分比明显高于覆盖胶原膜的平行对照组(P＜0.01).术后4、6周,双侧覆盖复合膜组的成骨面积百分比明显大于单侧覆盖复合膜组(P＜0.05).双侧覆盖复合膜组的缺损术6周后已达骨性愈合.结论BMP与胶原膜复合既具有机械性阻挡作用,又具有骨诱导性,能加速骨缺损愈合.
作者：李树春；陈钢；白雪芹 刊期： 2004年第03期
目的验证长春新碱对糖尿病肾病大鼠的治疗作用.方法用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型.将模型大鼠分为治疗组与非治疗组,治疗组给予长春新碱(VCR)0.2 mg/kg,尾静脉注射,每周2次,观察给药后大鼠血糖、尿蛋白、肾功能、肾重/体重等值的改变以及肾脏病理的改善情况.结果治疗组大鼠尿蛋白明显减少,肾重/体重低于非治疗组.光镜下观察治疗组肾脏病理学变化情况有明显改善.结论长春新碱可降低糖尿病肾病大鼠的尿蛋白并改善糖尿病肾病早期病理损害.
作者：屈智慧；毕黎琦；邹洪斌 刊期： 2004年第03期
目的探讨我国流行的狂犬病毒(RV)基因差异,评价现有疫苗的适用性.方法通过RT-PCR并对其产物测序后获得4株RV街毒株的G基因序列以及G与M和L基因的区间序列.利用计算机分析软件比较4株RV与已经发表的毒株的核苷酸和推导的氨基酸序列.结果糖蛋白(GP)完整的编码基因序列长度为1 575bp.GP氨基酸序列同源性明显高于相应的核苷酸序列(除Mokola外),4株街毒与GTN的同源性高于gG株.GP不同区段比较显示,膜外区同源性高于膜内区.G-M区间核苷酸序列长度为5bp;除广西4外,其余毒株100%同源.G-L区间核苷酸序列长度为24 bp,越1与肥东同源性为100%.结论4株RV均属于基因I型.广西的毒株之间存在不同的来源.街毒与疫苗株之间基因存在差异.4株RV与SAD-B19进化途径相近,与PV株相差较远.越1与肥东株亲缘关系极近,可能是由同一毒株演化而来.
作者：刘胜牙；严家新；徐葛林；吴杰；郑新雄 刊期： 2004年第03期
目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗.方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36%和60%不连续蔗糖密度、23 000 r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗.结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上.经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99%以上.结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗.
作者：张文璇；石慧颖；张晋；丁志芬 刊期： 2004年第03期
目的探讨间质性膀胱炎(Interstitial cystitis,IC)新的治疗方法.方法29例IC患者随机分为A、B两组,A组(治疗组)15例,B组(对照组)14例.A组2%利多卡因20ml膀胱灌注10min后,0.2%透明质酸钠100ml+地塞米松10 mg膀胱灌注,每周1次,共6周.B组用1:5000呋喃西林溶液替代0.2%透明质酸钠溶液,方法类同A组,观察两组用药后临床症状评分及治疗前后尿动力学指标.结果两组用药后临床症状评分比较差异具有显著性意义(P＜0.01).A组治疗前后尿动力学指标比较差异有显著意义(P＜0.01),13例患者临床症状消失,10例患者膀胱容量明显增加.B组用药前后尿动力学指标比较差异无显著意义(P＞0.05),4例患者临床症状消失,膀胱容量无明显改善.结论透明质酸钠膀胱灌注治疗间质性膀胱炎是一种有效、简便、易行的新治疗途径.
作者：叶少波；史明；常江平；曾少明；吴锋 刊期： 2004年第03期
目的对表达HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体进行纯化.方法将收获的表达菌体洗涤、超声波破菌、预处理后进行疏水层析.结果纯化后的gp41截短体的融合蛋白纯度达到90%,并且具有较好的抗原性和特异性.结论利用疏水层析可以将目的蛋白进行有效的纯化,为下一步的应用打下基础.
作者：端义坤；汪超英；孙可芳；张涛 刊期： 2004年第03期
目的建立检测人免疫球蛋白细菌内毒素的方法.方法采用鲎试剂凝胶法对人免疫球蛋白生产过程中的阶段产品进行细菌内毒素的限量检测和监控,并经家兔法复核.结果连续监控9批人免疫球蛋白制品,鲎试剂凝胶法与家兔法热原质试验符合率100%.结论应用鲎试剂凝胶法对人免疫球蛋白生产过程中的阶段产品进行细菌内毒素的限量检测和控制是快速、准确、可行的.
作者：江波；赵虹；耿玉霞 刊期： 2004年第03期
目的研究人结缔组织生长因子的透皮吸收.方法应用氯胺T法制备125 I-人结缔组织生长因子(125 I-rCTGF),采用家兔进行不同剂量的125I-rCTGF的完整皮肤和破损(烫伤)皮肤吸收试验.结果125I-rCTGF的比活度为2.0×105计数/(分.μg).皮肤吸收试验表明,不同剂量125 I-rCTGF透皮给药后家兔均未能通过皮肤经毛细血管吸收入血.结论为重组人CTGF临床试验提供必要的实验数据.
作者：马绍辉；董少忠；王晶晶；刘龙丁；董承红；廖芸；王丽春；赵红玲；李琦涵 刊期： 2004年第03期
目的克隆小鼠白细胞介素-18(mIL-18)全长cDNA,并使其在大肠杆菌中表达.方法利用RT-PCR和巢式-PCR,从活化小鼠腹腔巨噬细胞中扩增成熟IL-18的全长cDNA.经双酶切,将该cDNA片断插入表达载体pRSET-C,构建含T7启动子的原核表达载体pRSET-mIL-18.测序鉴定后,将重组体转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和/或乳糖的诱导下,使重组质粒获得表达.结果重组质粒读码框及mIL-18的序列与预期一致,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析获得证实.结论已成功构建了原核表达载体pRSET-mIL-18,并使其在大肠杆菌中获得了融合表达.
作者：陈勇；韦罗生；成彩莲；夏瑞明；刘峡；龚太平；邱惠 刊期： 2004年第03期
目的探讨BRDT基因在正常组织及癌组织中的分布及其作为肿瘤治疗靶分子的可能性.方法运用实时荧光定量PCR方法分析BRDT在人正常组织及癌组织中的表达,使用18S rRNA作为内对照.结果在所检测的正常组织中该蛋白的mRNA只存在于睾丸组织中,而在其它组织不表达;在检测的10例胃腺癌组织标本中,有6例mRNA的微弱表达;在检测的10例食管鳞状细胞癌组织标本中,有3例mRNA的微弱表达;在检测的12例子宫颈鳞状细胞癌组织标本中均未有表达;在检测9例子宫内膜腺癌组织标本中,有2例微弱表达;在检测12例脑癌组织标本中,只有1例微弱表达.结论BRDT不可能作为子宫颈鳞状细胞癌、脑癌、子宫内膜腺癌及食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子靶点,是否能够做胃腺癌的靶点还需进一步探讨.
作者：张静敏；金宁一；米志强；李宵；连海；孙迎春；安汝国；高桥雅英 刊期： 2004年第03期
目的对实验家兔群暴发大批死亡的原因进行探讨.方法从流行病学、解剖、组织病理方面详细观察分析,做出客观、确切描述.结果该家兔群发病急,传播蔓延快,死亡率高.全身及各组织器官呈水肿、淤血、充血、出血、坏死等败血症病变.结论该家兔群爆发大批死亡原因,从临床症状及病理改变与急性、烈性传染型病毒出血症几乎完全相符.
作者：颜淑芹；杨淑萍；徐德锌；李贵才；姜媛丽；孙扬 刊期： 2004年第03期
目的建立一个简捷高效的纯化基因重组钙调蛋白(Recombinant-calmodulin,CaM)的新方法.方法培养CaM基因重组大肠杆菌,并用IPFG诱导CaM表达,将菌体冻融、超声破碎,再经三氯醋酸、硫酸铵沉淀及超速离心,获得CaM;经SDS-PAGE检测CaM的纯度与相对分子质量,用甘油电泳和Scoin Image密度扫描软件检测CaM激活肌球蛋白轻链激酶(MLCK),从而引起肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化的活性.结果SDS-PAGE显示,重组大肠杆菌表达了大量CaM,且所提取CaM的相对分子质量及纯度均与CaM标准品一致;甘油电泳结果显示,CaM0.1 μg/ml即可激活MLCK,使MLC20部分磷酸化,至3μg/ml时使MLC20双重磷酸化,其所致磷酸化的程度与等剂量的CaM标准品基本相同.ScoinImage密度扫描结果显示,CaM激活MLCK引起MLC20磷酸化的百分率与等剂量CaM标准品差异无显著意义(P＞0.01).结论已建立了简捷高效纯化CaM的新方法.
作者：杨静娴；封晓华；鲁凌云；张颖；林原 刊期： 2004年第03期
目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较.方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响.结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁不好,逐渐降低(A)加量情况可得到相应改善.结论目前无血清培养基尚不能完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞.
作者：付百年；赵睿；王智宇；王佳凤；李德娟；金立杰 刊期： 2004年第03期
目的比较HIV抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异.方法用HIV抗体诊断试剂和HIV抗体酶联免疫诊断试剂分别检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品、HIV不同亚型样品以及HIV高危人群样品.结果检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品中,20份阳性样品只检出10份阳生,5份低检出限样品只检出1份阳性.与酶联免疫试剂相比,对B亚型样品的检测,其灵敏度低2～8倍;对AE重组样品,其灵敏度低100倍;对BC重组样品,其灵敏度低2～10倍.在HIV高危人群样品中,与酶联免疫诊断试剂阳性符合率为88.2%,阴性符合率为97.3%.结论快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂,因此,其应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂.
作者：李秀华；宋爱京；王佑春 刊期： 2004年第03期
目的获得表达HIV-1 bp160膜蛋白的靶细胞,用于HIV-1特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)和抗HIV-1重组毒素细胞杀伤活性检测.方法采用PCR方法,从质粒pJen 10中扩增HIV-1 gp160基因,插入pGEM-T 载体,测序后克隆入pIRES1 ngo载体中构建成重组质粒pIRE160,酶切鉴定正确后,转染人肝癌细胞(SMMC-7721),G418加压筛选至细胞不再死亡为止,并采用Western blot和间接免疫荧光法对制备的靶细胞进行检测.结果HIV-1 gp160在SMMC7721表面表达,并裂解为gp120和gp41蛋白.结论已成功得到稳定表达HIV-1 bp160的靶细胞,且表达的蛋白具有良好的特异性.
作者：王宏；金宁一；金洪涛；徐一鸣；张立树；宋英今 刊期： 2004年第03期
目的建立一种简便的重组人溶菌酶发酵液、粗提液及纯品活性测定方法.方法在琼脂糖固体培养基上打孔,加入不同活性的标准品与待测样品同时检测活性单位.结果此方法检测的活性与常规平板(纸片)法比较误差为0.5%.结论固体培养基打孔法是检测重组人溶菌酶活性的良好方法.
作者：安米；马爱民；王晓宁；张华 刊期： 2004年第03期
目的纯化大肠杆菌表达的重组幽门螺杆菌粘附素.方法将表达HpaA蛋白的工程菌经高压均质机破菌获得包涵体,经洗涤、变性、复性,Q Sepharose High Performance阴离子交换层析和亲和层析分离纯化.采用SDS-PAGE和HPLC检测纯度,用Western blot检测其抗原性.结果纯化后HpaA蛋白纯度高达95%以上,具有良好的抗原性.结论建立了从包涵体中获得高纯度HpaA纯化工艺,为进一步的研究打下了基础.
作者：刘正祥；邹全明；洪愉；朱永红 刊期： 2004年第03期
目的扩增抗癌胚抗原单链抗体(CEA-ScFv),与绿脓杆菌外毒素(PE40)进行重组及原核表达,旨在进一步研究重组蛋白CEA-ScFv-PE40的靶向抗肿瘤作用.方法分别扩增抗癌胚抗原单链抗体的重链区、轻链区,用overlap PCR按照VH-VL的顺序连接,克隆至pMD18T载体中.再将VH-VL基因片段与含有PE40的表达载体pET28a连接,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达.结果经DNA测序,其结果与设计完全相符.SDS-PAGE分析,在相对分子质量66 000处可见明显表达带,表达量可占菌体蛋白总量的13%以上.免疫印迹表明重组蛋白具有PE40的抗原特异性.结论抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素的成功克隆与表达,为进一步研究其生物活性奠定基础.
作者：邱业峰；孟锐奇；李树民；李铁征；朱平 刊期： 2004年第03期
目的应用酶免疫方法检测生物制品中残余牛血清白蛋白(BSA)含量.方法制备高亲和力、高纯度的抗BSA单克隆抗体作为包被抗体,高纯度、高效价的兔抗BSA多克隆抗体为酶标抗体,采用ELISA夹心方法,以系列含量的BSA溶液作为标准,制备标准曲线,对样品中所含BSA进行定量.结果优化了酶免疫反应条件,标准曲线线性范围内r≥0.98,经验证,该方法对BSA的低检测限为2.5 ng/ml.分别检测5、10、ng/ml含量的BSA时,试验内(n=11)和试验间(n=3)测定的变异系数分别为2.3%～4.9%和4.0%～6.1%;回收率均值分别为104%、123%和109%.未见该方法与人、马、猪血清白蛋白之间的交叉反应.结论该法敏感度高,准确性、重复性和稳定性好,可用于生物制品的质量控制.
作者：周铁群；陈震；强东 刊期： 2004年第03期
