突触传递的长时程抑制(long-term depression,LTD)和长时程增强(longterm-potentiation,LTP)是突触可塑性的两种重要形式,并且与学习记忆密切相关.本文探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠在海马齿状回区(dentate gyrus,DG)注射36 h孵育形成的寡聚体Aβ142 30 d后,在体海马前穿通纤维-齿状回通路(perforant path-dentate gyms pathway,PP-DG)的突触可塑性和空间记忆能力的变化.2.5月龄SD大鼠随机分为寡聚体Aβ1-42注射组[即阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型组,n=12]和正常对照组(n=12),分别在双侧海马DG区注射5μg寡聚体Aβ1-42或生理盐水.应用Morris水迷宫检测大鼠空间记忆能力.同时运用神经电生理在体胞外记录技术,检测寡聚体Aβ1-42引起的海马双脉冲易化(paired pulse facilitation,PPF)、LTD、LTP等突触可塑性形式的变化.结果显示:(1)AD模型组大鼠空间记忆能力下降(P＜0.05);(2)寡聚体Aβ1-42降低海马PPF强度(P＜0.05),并减小PPF宽度;(3)寡聚体Aβ1-42显著抑制海马LTP形成(P＜0.05),而易化LTD形成(P＜0.05).上述结果提示:寡聚体Aβ1-42对海马PP-DG通路突触可塑性的破坏,会导致大鼠空间记忆功能障碍.
作者：谭涛；张保良；田心 刊期： 2011年第03期
本研究旨在探讨cAMP-PKA通路在Ⅱ组代谢性谷氨酸受体对离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响中的作用.制作新生大鼠离体延髓脑片标本,主要包含延髓面神经后核内侧区(medial region of the nucleus retrofacialis,mNRF),并完整保留舌下神经根,以改良Kreb's液(modified Kreb's solution,MKS)恒温灌流脑片,用吸附电极记录舌下神经根呼吸节律性放电活动(respiratory rhythmical discharge activity,RRDA).待放电活动稳定后,第1组灌流Ⅱ组代谢性谷氨酸受体特异性拮抗剂(2S)-a-ethylglutamic acid(EGLU)10 min,第2组先给予cAMP-PKA通路激动剂Forskolin灌流10 min,而后MKS洗脱至正常,灌流cAMP-PKA通路抑制剂Rp-cyclic 3',5'-hydrogen phosphorothioate adenosine triethylammonium salt(Rp-cAMPS)10 min,第3组首先给予Rp-cAMPS 10 min,洗脱后联合Rp-cAMPS+EGLU持续灌流10 min,记录各组各时间点RRDA的变化.结果显示,给予Ⅱ组代谢性谷氨酸受体拮抗剂EGLU后,呼吸周期(respiratory cycle,RC)缩短,放电积分幅度(integral amplitude,IA)和吸气时程(inspiratory time,TI)没有变化;Forskolin兴奋呼吸,缩短RC,增加IA,延长TI;Rp-cAMPS则延长RC,降低IA,缩短TI;并且cAMP-PKA通路被阻断之后,EGLU缩短RC的效应也被抑制.这些结果提示在离体延髓水平上,cAMP-PKA通路参与了Ⅱ组代谢性谷氨酸受体对脑片呼吸节律性放电的调节.
作者：郑奇辉；李国才；程静；方芳；吴中海 刊期： 2011年第03期
为了探讨CyclinDl反义核酸在肺癌基因治疗中的作用,本研究构建了含有CyclinDl反义核酸的表达载体(命名为:pcDNA3.1-CyclinDl),并将该载体转染肺腺癌细胞A549,进行G418筛选后,获得稳定表达CyclinDl反义核酸的A549细胞(命名为:anti-CyclinDl-A549).通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,结果显示稳定转染CyclinDl反义核酸后,A549细胞增殖显著被抑制,细胞凋亡增加.为探讨CyclinDl反义核酸诱导细胞凋亡的机理,应用Western blot的方法检测了细胞内视网膜母细胞瘤蛋白质(retinoblastoma protein,pRb)、adenovirus E2 factor-1(E2F-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达,其结果显示,稳定转染CyclinDl反义核酸后,A549细胞内pRb、E2F-1、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著降低.以上结果表明,CyclinDl反义核酸可引起肺癌细胞的凋亡,其机制可能与细胞内pRb、E2F-1、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达降低相关.
作者：李尊岭；邵淑红；谢书阳；岳真；马颖 刊期： 2011年第03期
本研究旨在观察六味地黄(Liu Wei Dihuang,LWDH)对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)致衰老大鼠的学习记忆能力及中枢胆碱能神经系统的保护作用.采用成年Sprague-Dawley(SD)大鼠64只,雌雄各半.雄性、雌性大鼠均随机分为4组(n=8):空白对照组即生理盐水+生理盐水(N+N)组;对照组即生理盐水+LWDH(N+L)组;模型组即D-gal+生理盐水(D+N)组和治疗组即D-gal+LWDH(D+L)组.D+N组和D+L组连续每天项部皮下注射D-gal(100 mg/kg)6周,N+N和N+L组大鼠注射相同体积生理盐水.第三周起给D+L和N+L组大鼠连续每天LWDH汤剂灌胃6周,同时给N+N组和D+N组连续每天相同体积生理盐水灌胃6周.D-gal衰老大鼠造模结束后,采用Morris水迷宫测定大鼠学习、记忆能力,用HE染色法观察海马和视皮质的形态学变化,检测视皮质中乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)含量,以及胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)及乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的活性,用免疫组织化学方法观察视皮质中胆碱能神经元ChAT、AChE的表达.结果显示:与N+N组相比,D+N组表现出明显的学习记忆能力下降,提示D-gal衰老模型建立成功;D+L组逃避潜伏期显著缩短,游泳速度明显增加,同时其对靶象限搜寻时间百分比和平台穿越次数均显著增加,提示LWDH显著改善了D-gal诱导的学习记忆障碍.LWDH显著地增加了D+L组的视皮质匀浆ACh含量和ChAT活性,而降低了AChE活性.免疫组织化学结果显示:D+L组视皮质神经元AChE和ChAT均明显高于D+N组.HE染色结果显示:与N+N组相比,D+N组海马和视皮质神经元凋亡增加,细胞密度明显下降,而LWDH显著地增加了D+L组神经元密度.LWDH对衰老雌、雄大鼠的神经保护作用存在差异,D+N组雄性大鼠平台穿越次数的改善情况优于雌性大鼠,而雌性大鼠在ChAT表达水平和视皮质神经元密度指标上的改善情况则优于雄性大鼠.以上结果表明,LWDH显著逆转了D-gal诱导的学习记忆能力障碍及海马和视皮质的神经元损伤,其保护的机制可能是通过恢复视皮质中ACh的含量及ChAT活性,提高视皮质中ChAT及AChE的表达而起作用.此外,LWDH对大鼠大脑的保护作用有性别差异.
作者：张伟伟；孙启新；刘银辉；高薇；李延海；卢坤；王卓 刊期： 2011年第03期
为了研究乙醇对心肌动作电位的作用及其机制,本实验采用标准玻璃微电极细胞内记录技术记录离体大鼠心肌细胞的动作电位(action potential,AP),采用全细胞膜片钳技术记录HEK293细胞上表达的人Kv1.5(human Kv1.5,hKv1.5)通道电流,观察6.25、12.5、25.0、50.0、100.0及200.0 mmol/L的乙醇对离体大鼠心房肌和心室乳头状肌细胞AP各参数的改变及对Kv1.5通道电流的影响.结果显示,6.25和12.5 mmol/L的乙醇对心房肌细胞AP各参数无明显影响;25.0～200.0 mmol/L的乙醇可引起心房肌细胞的动作电位时程(action potential duration,APD)、AP复极至50%的时程(action potential duration of 50% repolarization,APD50)及AP复极至90%的时程(action potential duration of 90% repolarization,APD90)明显延长(P＜0.05或P＜0.01);而且100.0和200.0mmol/L的乙醇还可使心房肌细胞的动作电位幅值(actionpotentialamplitude,APA)降低(P＜0.05或P＜0.01).6.25～25.0 mmol/L的乙醇对心室乳头状肌细胞AP各参数无明显影响;50.0～200.0 mmol/L的乙醇可引起心室乳头状肌细胞的APD、APD50及APD90明显延长(P＜0.05或P＜0.01);而且200.0 mmol/L的乙醇还可使心室乳头状肌细胞的APA降低(P＜0.05).全细胞膜片钳结果显示,6.25～200.0 mmol/L的乙醇可浓度依赖性地抑制Kv1.5通道电流.以上结果表明,6.25和12.5 mmol/L乙醇对离体大鼠心房肌、心室乳头状肌AP各参数无明显影响,而50.0～200.0 mmol/L乙醇可明显延长离体大鼠心房肌、心室乳头状肌APD,其作用机制可能与抑制Kv1.5通道电流有关.
作者：胡浩；周筠；孙强；于晓江；张宏丽；马欣；刘传镐；臧伟进 刊期： 2011年第03期
本文旨在研究肿瘤条件培养基(tumor conditioned medium,TCM)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、黏附和迁移能力的影响.采用MTT法测定TCM作用24 h后内皮细胞的增殖水平,实验设对照组、TCM原液(TCM stock solution)处理组、TCM一倍稀释液(TCM monodilution)处理组以及TCM二倍稀释液(TCM didilution)处理组(n=6);用纤连蛋白Fn包被培养板以检测内皮细胞与基底膜的黏附能力,实验分为对照组和TCM原液处理组(n=6);应用划痕法检测内皮细胞的的迁移能力,实验分为对照组和TCM原液处理组(n=6),并且取12 h和24 h两个时间点分别进行检测.结果显示,不同浓度的TCM对内皮细胞增殖能力的影响程度不同,相对于对照组(吸光度值为0.58±0.04),TCM原液对内皮细胞增殖无明显影响(吸光度值为0.55±0.01),TCM一倍稀释液和两倍稀释液均能显著促进内皮细胞的增殖[吸光度值分别为0.66±0.03(P＜0.01)和0.70±0.02(P＜0.001)];与对照组相比,TCM可以显著降低内皮细胞与基底膜的黏附;与对照组[12 h和24 h细胞的迁移距离分别为(14.05±6.25)μm和(48.75±16.37)μm]相比较,TCM可显著增强其迁移能力[12 h和24 h的迁移距离分别为(68.25±26.20)μm和(119.70±34.90)μm,均P＜0.05].以上结果表明,TCM对血管内皮细胞黏附能力的抑制和迁移能力的增强可能是其促进肿瘤转移的重要机制之一.
作者：张婷；蒋春雷 刊期： 2011年第03期
本研究旨在探讨慢性间歇性低压低氧(chronicintermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对大鼠胸主动脉和肺动脉收缩功能的影响及其机制.雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组:CIHH处理14天组(CIHH 14)、28天组(CIHH 28)、42天组(CIHH 42)和对照组(CON).CIHH大鼠分别给予14、28和42天相当于海拔5 000 m高度、每天6 h的CIHH处理;常规制备胸主动脉和肺动脉环,通过离体动脉环灌流和描记方法记录动脉的收缩活动.结果显示:(1)CIHH各组大鼠由去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)和KCl诱发的胸主动脉和肺动脉环收缩幅度与对照大鼠无显著差异.(2)CIHH各组大鼠由血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,ANGⅡ)诱发的胸主动脉环收缩幅度较对照大鼠明显降低,而由ANGⅡ诱发的肺动脉环收缩幅度与对照大鼠无显著差异;CIHH14、28和42三组大鼠由ANGⅡ诱发的胸主动脉环收缩幅度无显著差异.(3)CIHH对ANGⅡ诱发的胸主动脉环收缩的抑制作用呈非内皮依赖性,此作用可被ATP敏感钾通道(KATp)阻断剂格列苯脲、一氧化氮合酶抑制剂L-NAME所逆转,而不被环氧合酶抑制剂吲哚美辛所阻断.结果提示,CIHH处理可非内皮依赖性地降低ANG Ⅱ诱发的大鼠胸主动脉收缩反应,此作用可能与KATP通道开放和NO生成增多有关.
作者：宋士军；徐瑛；李芳芳；袁芳；周兆年；张翼 刊期： 2011年第03期
氧化应激能够引起细胞自噬和凋亡同时发生,但其中细胞自噬的作用仍不十分明确,研究表明Beclin 1作为调节前自噬体形成的关键基因,参与了胶质瘤氧化应激的损伤过程.为了探讨自噬在H2O2引起的神经胶质瘤U251细胞损伤中的作用,本文应用真核细胞转染技术将Psilencer3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人神经胶质瘤U251细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照组.于24 h后收集细胞,分别提取细胞总蛋白,通过Western blot检测Beclin 1、Bcl-2和Bax蛋白表达,鉴定转染效率.应用1 mmol/L H2O2作用Beclin 1-siRNA细胞株,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色检测细胞自噬空泡的变化;Western blot检测自噬蛋白LC3表达;流式细胞仪PI/Annexin V-FITC双染色法检测细胞凋亡率.结果显示,Beclin l-siRNA重组质粒明显降低Beclin 1蛋白表达,并且对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达无明显影响;与正常对照组相比,1 mmol/L H2O2作用的神经胶质瘤U251细胞自噬空泡明显集聚,LC3-Ⅱ蛋白表达增强,细胞凋亡率增加(P＜0.05);与1 mmol/L H2O2组相比,转染Beclin 1-siRNA质粒后降低了H2O2引起的自噬空泡集聚,LC3-Ⅱ蛋白表达下降,但细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);H2O2与自噬特异性抑制剂3-methyladenine(3-MA)联合应用时,U251细胞凋亡率亦显著增加(P＜0.05).上述结果表明,Psilencer3.1-siRNA-Beclin 1转染神经胶质瘤U251细胞后,可有效抑制Beclin 1的蛋白表达,降低H2O2引起的细胞自噬水平,增加细胞凋亡率,与添加自噬抑制剂3-MA的结果一致.本研究提示自噬在氧化应激过程中是一种细胞的自我保护机制,抑制自噬促进了细胞凋亡的发生.
作者：孔晓霞；张宏宇；陈兆琴；范小芳；龚永生 刊期： 2011年第03期
本文旨在研究c-SRC蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的活性及对磷酸化的信号转导与转录激活子-3(phosphorylated signal transducer and activator oftranscription-3,p-STAT3)表达的影响.人宫颈癌HeLa细胞转染c-SRC RNA干涉质粒后,分别用RT-PCR和Western blot检测细胞内c-SRC mRNA和蛋白的表达;用MTT比色法观察c-SRC敲减后细胞的活性;用流式细胞仪检测细胞周期;同时检测细胞内p-STAT3的表达情况.转染c-SRC RNA干涉质粒后,HeLa细胞内c-SRC mRNA和蛋白的表达显著降低;在转染c-SRC RNA干涉质粒24、48、72及96 h后,细胞活性分别下降了23.1%、29.3%、38.6%和45.0%(均P＜0.05).转染c-SRC RNA干涉质粒24、48、72及96 h后,HeLa细胞S期细胞数分别下降了5.6%、10.0%、15.2%和19.9%(均P＜0.05).敲减c-SRC后,细胞内p-STAT3的含量也显著下降.与对照组相比,STAT3抑制剂Piceatannol处理细胞24、48、72、96 h后,细胞活性分别下降了23.8%、29.7%、37.3%和45.4%(均P＜0.05),而Piceatannol预处理细胞后再用重组人c-SRC蛋白处理增加细胞内c-SRC蛋白的含量,细胞活性未见明显增加.以上结果表明,c-SRC敲减后抑制HeLa细胞的活性可能与其抑制STAT3蛋白磷酸化相关.
作者：陈加祥；徐林林；吴圣娇；刘红宇；王晶磊；邹挺 刊期： 2011年第03期
一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)系统对正常或应激状态下心脏电-机械活动起着复杂的调控作用.本研究采用心肌细胞收缩与钙瞬变同步检测手段,研究NOS系统对心肌细胞收缩的潜在调控机制.在急性分离的正常大鼠心室肌细胞,100μmol/L spermine选择性抑制神经源性一氧化氮合酶(neuronal NOS,nNOS)显著加强了细胞的收缩活动[正常对照组:(10.5±0.21)%;nNOS抑制组:(12.4±0.18)%]与内质网的钙释放[正常对照组:(0.27±0.03)%;nNOS抑制组:(0.42±0.01)%],但是延缓了心肌细胞的舒张[正常对照组:(25.2±1.3)ms;nNOS抑制组:(53±2.8)ms]与内质网的钙回收[正常对照组:(129±4.3)ms ; nNOS抑制组:(176±7.1)ms].该效应与30μmol/Ldynasore抑制内陷调节蛋白--发动蛋白的结果类似.NO供体S-Nitroso-N-acetylpenicillamine(SNAP)可以缓解nNOS抑制或发动蛋白抑制所致的收缩与内质网钙释放加强的效应.结果表明,nNOS系统对心脏机械活动的调节可能部分涉及发动蛋白介导的内陷机制.
作者：刘锴；李俊；陈义汉 刊期： 2011年第03期
本研究旨在探讨可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响.采用胰蛋白酶-DNase消化法培养人早孕期(孕6～8周)细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70%～80%,分别加入没有添加(对照组)和添加sEng(10μg/L)的细胞培养液培养24 h;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT-PCR法检测细胞滋养细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达;Western blot方法分别检测细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达.结果显示,sEng组细胞滋养细胞浸润能力低于对照组.与对照组比较,sEng组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达明显下降(P＜0.05).以上结果提示,sEng可能通过调节人早孕细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9的表达而影响细胞的浸润能力,从而参与子痫前期的发生.
作者：董微；许群星；韩玉环；尹利荣 刊期： 2011年第03期
内皮型与神经型一氧化氮合酶(eNOS,nNOS)在心肌细胞内持续表达,而细胞应激可引起诱导型NOS(iNOS)表达.心肌细胞结构型eNOS与nNOS源性NO,在生理条件下对心肌主要发挥4方面的抑制作用:减缓心肌细胞搏动频率,轻度抑制心肌细胞收缩功能,加速心肌细胞舒张并增加顺应性,以及轻度抑制线粒体电子传递而增强氧利用效率.在生理条件下动员心肌储备与心肌肥厚时,与细胞膜上受体形成复合体的eNOS,其分泌的NO通过适度的抑制作用,调和受体介导的信号,形成类似于增强性拮抗的作用;与RyR形成复合体的nNOS源性NO,经抑制作用而稳定RyR钙释放功能,并增加肌质网钙离子转运效率.在心肌缺血-再灌注损伤或心力衰竭条件下,除上述eNOS和nNOS源性NO发挥的作用外,iNOS源性NO则主要通过抑制线粒体的电子传递,防止线粒体可通透转化孔的开放.由上述研究结果可见,无论在生理还是病理条件下,NO呈现出多种适度抑制作用,从而发挥心肌保护作用.
作者：岳志杰；余志斌 刊期： 2011年第03期
本文旨在运用实时荧光PCR技术建立大鼠脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)中IL-1β和Caspase-3基因绝对定量分析方法.成年雄性Sprague-Dawely大鼠被随机分成了5组:假手术组、I/R模型组、黄芪甲苷组、川芎嗪-黄芪甲苷组、尼莫地平组.除假手术组外,其余各组均进行脑I/R处理,然后通过腹膜内注射进行药物处理,时间为脑I/R后0 h、12 h、1 d、2 d直至7 d.假手术组和I/R模型组注射生理盐水(5 mL/kg),黄芪甲苷组中黄芪甲苷剂量为20 mg/kg,川芎嗪-黄芪甲苷组中川芎嗪和黄芪甲苷剂量分别为10 mg/kg和20 mg/kg,而尼莫地平组中尼莫地平剂量为10 mg/kg.通过常规RT-PCR克隆了大鼠的IL-1β和Caspase-3基因,运用TA克隆技术分别构建了重组质粒pTA2-IL1和pTA2-Casp3,重组质粒经过紫外分光光度计测定A260/A280比值,并计算拷贝数.以该质粒作为标准品,首先对实时荧光PCR反应的引物进行筛选和验证,然后进行反应退火温度的优化,后定量检测各组损伤的脑组织中IL-1β和Caspase-3的基因表达情况.结果显示,从候选引物中各筛选到一对佳引物,熔解度曲线分析显示单一峰,琼脂糖电泳表明反应产物与预计目标产物大小一致.梯度退火温度实验表明IL-1β和Caspase-3基因的佳退火温度分别是59°C和61.2°C.实时荧光PCR检测结果表明,与假手术组相比,I/R模型组中的IL-1β和Caspase-3表达显著升高;和I/R模型组相比,黄芪甲苷组、川芎嗪-黄芪甲苷组、尼莫地平组中IL-1β和Caspase-3基因表达水平均有所下降,特别是川芎嗪-黄芪甲苷组基因下调显著.以上这些结果提示,本研究建立的方法适用于中药处理I/R模型后IL-1β和Caspase-3基因的定量分析.
作者：朱振洪；万海同；李金辉 刊期： 2011年第03期
神经纤维的快速传导在动物和人的机体活动中有着重要的功能意义.在生理学和神经生物学教科书中通常都将无脊椎动物、脊椎动物和人的各类神经纤维的传导速度列于表中,提示无脊椎动物的神经纤维传导速度都相应地明显低于脊椎动物和人的,而在后者中又以Aα-有髓鞘神经纤维的120米/秒的传导速度为快.但是,早在1961年,中国科学院上海生理研究所的范世藩、徐科和中国科学院海洋研究所的陈芳顺、郝斌就报道过,贯穿于中国对虾(Penaeus chinensis)腹神经索中的一对内侧巨大神经纤维的传导速度高达80～200米/秒(n=7).
作者：徐科 刊期： 2011年第03期
