在前期对经方栀子大黄汤中的化学成分进行定性研究基础上,本研究首次对栀子大黄汤中的9种特征成分进行定量测定,并将方法应用于分析该经方配伍前后成分的变化.试验采用HPLC-UV方法,同时测定栀子大黄汤水煎液中栀子苷、柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷的含量;并建立HPLC-FLD方法,针对该汤剂中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量进行测定,使检测更为灵敏准确.终所采用的方法经考察可以准确测定栀子大黄汤中上述9种特征成分的含量.对汤剂的测定结果显示,不同配伍组中各成分的含量发生了不同程度的变化,其中栀子大黄汤全方配伍能够增加栀子苷、柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷的含量,枳实-大黄配伍可以增加芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄素甲醚的含量,各配伍组大黄酸的含量均比单味大黄有明显增加.
作者：尧爱珉；黄金秋；徐大星；黄雪丽；冯芳 刊期： 2013年第06期
将人血清白蛋白第3结构域(3DHSA)与粒细胞集落刺激因子突变体(Nartograstim)融合基因克隆至载体pPICzαA,置于醇氧化酶启动子(AOX)和α交配因子信号肽作用下构建分泌表达质粒,电击转化入毕赤酵母GS115.SDS-PAGE结果显示3DHSA-Nartograstim相对分子质量约为42 kD,Western blot证实其同时具有HSA和G-CSF的抗原性.建立融合蛋白表达的条件为:BMMY培养基pH6.0、1.5％甲醇、诱导84 h,灰度扫描发现该条件下融合蛋白的纯度为79％.依次采用亲和色谱和疏水色谱纯化得到纯度高于90％的融合蛋白,终产量为86 mg/L.采用MTT法检测融合蛋白对NFS-60细胞株的促增殖能力,结果显示,3DHSA-Nartograstim具有剂量依赖性促进NFS-60细胞增殖的作用.本研究为3DHSA-Nartograstim的进一步研究奠定了基础.
作者：赵述强；张瑜；田浤；刘超；高向东 刊期： 2013年第06期
以两亲性透明质酸-紫杉醇高分子前药(HA-PTX)为载体,制备包载PTX的高载药量纳米胶束;分别使用HPLC、动态光散射法(DLS)、透射电子显微镜(TEM)、原子力显微镜(AFM)和X线粉末衍射法(XRD)等手段对其载药量、包封率、粒径分布和胶束形态等进行测定或表征;采用荧光芘探针法测定HA-PTX的临界胶束浓度(CMC);以市售紫杉醇注射剂(Taxol)为对照,通过大鼠体内药代动力学实验考察载药胶束的体内过程.载药胶束PTX-HA-PTX化学偶联药物和物理包载药物总量高达41.8％,包封率高达95.4％,平均粒径为213.2 nm,Zeta电位为-15.5 mV;XRD结果确证药物以分子状态或无定型状态存在于胶束内部;TEM和AFM显示胶束呈类球形;大鼠药代动力学结果显示,相对于Taxol,PTX-HA-PTX胶束组的血药浓度时间曲线下面积(AUC)显著提高(P＜0.01),而清除率(CL)显著下降(P＜0.05),说明PTX-HA-PTX胶束可延缓PTX在体内的消除,延长滞留时间,提高药效.结果表明HA-PTX可作为优良的增溶载体,具有良好的应用前景.
作者：王竞；霍美蓉；周建平；张勇；张栩源；王磊；殷婷婕 刊期： 2013年第06期
为了研究布南色林片单次给药后的中国健康志愿者体内的药代动力学,30例健康志愿者单次口服4 mg、8 mg和12 mg布南色林片后,采集60 h内动态血标本,采用LC-MS/MS测定血浆中布南色林的浓度,并用DAS 3.2.4软件对试验数据进行处理,计算药代动力学参数.单次口服4 mg、8 mg和12 mg布南色林片的主要药代动力学参数Cmax分别为(539.61±388.74)、(1 190.39±736.51)和(1 637.34±481.45) ng/L,tmax分别为(1.00±0.47)、(1.38±0.79)和(1.43±0.94)h,t1/2分别为(12.05±3.49)、(14.76±3.78)和(13.68±3.92)h,AUC0-60h分别为(4 692.21±3 041.75)、(7 964.42±3 988.07)和(9648.22±2 565.07)ng·h/L,AUC0-∞分别为(5 060.91±3 146.10)、(8 547.61±4 209.87)和(9 986.15±2 659.51)ng· h/L.可见,在4～12 mg给药剂量范围内,布南色林片的主要药代动力学参数的Cmax、AUC0-60h、AUC0-∞与剂量呈正相关.
作者：倪晓佳；胡海棠；张明；胡晋卿；尚德为；温预关 刊期： 2013年第06期
研究穿心莲内酯对舌癌细胞(Tb细胞)凋亡的作用及其机制.用瑞士吉姆萨染色法、Hoechst 33258荧光染色法、原位Annexin V/PI双染和流式细胞术检测穿心莲内酯对Tb细胞凋亡的作用;Western blot检测穿心莲内酯诱导Tb细胞凋亡的机制.结果显示:穿心莲内酯处理Tb细胞后,与对照组相比,细胞凋亡数明显增加(P＜0.05).Western blot实验结果发现,穿心莲内酯处理组与对照组相比,聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)表达明显增强(P＜0.05),表明穿心莲内酯可能通过活化PARP促进Tb细胞的凋亡.
作者：亓翠玲；周鑫磊；叶杰；杨扬；章倩倩；李江超；王丽京 刊期： 2013年第06期
通过RT-PCR方法克隆出人野生型负性共刺激分子B7-H4基因,将目的片段双酶切(EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ)后,与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-WT并进行鉴定;然后用定点突变法构建B7-H4核定位序列突变体基因,再构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-NLS-MT;脂质体转染法将重组载体导入786-O细胞,CCK8法研究转基因细胞株的增殖率及对化疗药物5-氟尿嘧啶、阿霉素和顺铂的耐药性.结果显示:B7-H4野生型转基因细胞株相较于空白质粒组,可有效促进786-O细胞增殖,并赋予786-O细胞对3种化疗药物的耐药性.与空白质粒组相比,对5-氟尿嘧啶的耐药倍数为2.06,对阿霉素的耐药倍数为1.81,对顺铂的耐药倍数为1.72.机制研究显示B7-H4野生型可赋予肿瘤细胞抗凋亡作用,1.25 μg,/mL 5-氟尿嘧啶引起B7-H4 WT/786-O的细胞的凋亡率是20.2％,而Mock/786-O和B7-H4 NLS/MT/786-O细胞的凋亡率分别是41.1％和35.1％.说明B7-H4可能通过调控细胞凋亡赋予肿瘤细胞多药耐药性.当B7-H4核定位序列被突变后,这些功能都消失,说明B7-H4促肿瘤细胞增殖、赋予其多药耐药性的功能与其核定位序列密切相关.
作者：李金美；宋慧；练启慧；陈敏吉；章良；谢炜 刊期： 2013年第06期
建立用于吡嗪酰胺含量及其有关物质测定的HPLC法,为吡嗪酰胺原料药制定质量控制标准,并采用LCMS-IT-TOF对检出主要杂质的结构进行推定.色谱柱为TSK-gel ODS-100V(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(冰醋酸调节pH 3.0)(8∶92),检测波长为268 nm,柱温为35 ℃,流速为1.0 mL/min.对方法进行了系统的验证:主峰能与相邻杂质峰较好地分离;在0.4 ～ 250 μg/mL范围内,吡嗪酰胺的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=1.00);低检测限和低定量限分别为6.5和40.5 ng/mL;9批样品含量测定结果与英国药典的非水电位滴定法结果一致.所建方法专属、耐用,操作简便,可用于吡嗪酰胺原料的含量及有关物质测定.已建议中国药典和国际药典收载.
作者：赵恂；袁耀佐；张玫；谭力 刊期： 2013年第06期
利用人白细胞cDNA文库体外扩增获得hIL23R-CHR目的基因,克隆至原核表达载体pET22b/pET28a/pET32a,转化BL21(DE3)宿主菌,并对工程菌的表达方式(直接表达、可溶性标签融合表达、分泌表达及包涵体表达)及表达量进行比较,确立pET 32a为表达载体,经IPTG诱导表达后通过镍亲和柱分离纯化融合蛋白Trx-IL23R-CHR,肠激酶4℃酶切Trx-IL23R-CHR分子24 h,上镍柱进行二次纯化,获得纯度达90％以上的rhIL23R-CHR分子.亲和力实验证实:原核重组表达的hIL23 R-CHR与hIL23在物质的量比为1∶1时可以有效结合,小脑HE病理切片提示rhIL23R-CHR分子对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型鼠有一定的保护作用.
作者：郭薇；王辰；王宇恒；高向东 刊期： 2013年第06期
为寻找由氟喹诺酮抗菌活性到抗肿瘤活性转化的有效途径,用均三唑和(口恶)二唑分别作为培氟沙星C-3羧基的等排体和修饰基,设计合成了10个未见文献报道的双杂环硫醚1-乙基-6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-[5-(5-芳基-[1,3,4](口恶)二唑-2-甲硫基)-4H-[1,2,4]-三唑-3-基]-喹啉(1H)-4-酮新化合物(7a～7j).结果显示:对L1210、HL60和CHO 3种肿瘤细胞的体外抑制活性显著高于母体培氟沙星,表明C-3羧基不是抗肿瘤活性所必需的药效团,可被杂环等排体替换,进一步扩展了结构修饰的途径.
作者：许秋菊；侯莉莉；仵钊锋；岳喜波；胡国强；黄文龙 刊期： 2013年第06期
以3,4-二甲氧基-6-溴苯甲醛、3-羟基4-甲氧基苯甲醛、2-羟基-3-甲氧基苯甲醛和4-溴苯甲酸甲酯为原料,通过U11mann反应、醛基还原、磷盐生成、Wittig反应、分子内Wittig反应、酚羟基与醛基的保护和脱保护以及烯烃的催化氢化反应等方法完成了一种未见报道的新型双联苄衍生物(17)的全合成.所得化合物的结构通过MS、1H NMR进行确证.MTT法测试目标化合物17对U20S细胞和YFP细胞体外抗肿瘤活性,结果显示,目标化合物17的活性强于地钱素C.
作者：刘德秀；潘华英；石慧；黄晓英；娄红祥 刊期： 2013年第06期
丹红化瘀口服液是传统中药复方,具活血化瘀、行气通络的功效.观察丹红化瘀口服液、胰岛素及两者联合用药对糖尿病肾病大鼠的治疗效果.采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠模型,STZ注射后1周后将造模成功的大鼠随机分为4组:糖尿病模型组、胰岛素组、丹红化瘀口服液组,丹红化瘀口服液联合胰岛素组,另设一正常组,每天给药1次,连续15周.丹红化瘀口服液联合胰岛素用药比两者单独用药能更显著降低空腹血糖、24h饮水量、摄食量和尿量,降低血清尿素与尿素/肌酐比,改善肾脏肥大和肾组织病理损伤,同时提高血清Na+与Cl-水平.结果提示:丹红化瘀口服液可辅助胰岛素治疗糖尿病肾病.
作者：钟春梅；马燕；王延东；杨威；韩重；孙晶晶；林宝琴 刊期： 2013年第06期
为探讨异鼠李素对乳腺癌细胞中的作用及其机制,以两种乳腺癌细胞株MCF7和BT549作为模型细胞株,通过加入不同浓度的异鼠李素,采用MTT法检测其对细胞增殖活性的抑制作用.在确定增殖抑制作用的基础上,采用流式细胞术测定异鼠李素对细胞周期和凋亡的影响,及采用免疫印迹的方法观察异鼠李素对细胞增殖及凋亡信号通路的影响.实验结果显示,异鼠李素可显著抑制乳腺癌细胞株MCF7及BT-549的增殖,其IC50分别为11.72和8.74 μmol/L;通过流式细胞术检测,发现异鼠李素可引起细胞G1期的周期阻滞及促进细胞的凋亡,信号通路分析显示异鼠李素可减少细胞增殖通路蛋白AKT和ERK的磷酸化及增殖核抗原Ki67的表达,减少Bcl-2的表达及增加Bax的表达,促进Caspase 3的剪切,从而导致细胞的凋亡.因此,异鼠李素具有显著的抗乳腺癌作用,其作用机制与抑制细胞的增殖通路及促进细胞的凋亡有关.
作者：胡珊；邓甬川 刊期： 2013年第06期
研究单次及多次阴道给药后硝酸布康唑栓在中国健康女性体内的药代动力学特征.12名健康女性受试者依次进行硝酸布康唑栓低(0.05 g)、高(0.1 g)剂量单次给药以及高剂量(0.1 g)连续给药3d和连续给药5d药代动力学试验.受试者单次阴道给予0.05和0.1g受试制剂后,布康唑的Cmax分别为(0.895 0±0.261 0)、(1.740±0.511) ng/mL,AUCo-96 h分别为(36.38±10.82)、(73.48±28.99)ng·h/mL,t1/2分别为(23.0±4.4)、(21.5±5.9)h.结果表明:布康唑在0.05～0.1 g剂量范围内呈线性药代动力学特征.受试者连续3d给予硝酸布康唑栓后,布康唑的血药浓度波动度(DF)为(0.54±0.27),累积常数Rcmax为(1.3±0.3),RAUC0-T为(1.4±0.3).连续给药5d后,布康唑的血药浓度DF为(0.64±0.25),累积常数Rcmax为(1.4±0.3),RAUC0-T为(1.6±0.2),在人体内的暴露量增加约60％.连续给药3d与连续给药5d的各项药动学参数均无显著性差异.
作者：程露；林云飞；丁黎；文爱东；吴琰；张润 刊期： 2013年第06期
建立与临床上单纯性浅表皮肤感染较为接近的小鼠模型,便于致病机制和外用抗菌药物筛选及疗效观察研究.选用BALB/c小鼠,采用胶带反复粘贴法破坏局部皮肤屏障,通过皮肤水分流失(TEWL)值标定皮肤屏障破坏程度,然后在其创面接种金黄色葡萄球菌(7.5×106 CFU/mL)及化脓性链球菌(1.5×108 CFU/mL),建立局部皮肤的实验感染模型,并给予氧氟沙星凝胶以验证模型的敏感性和有效性.结果显示:胶带反复粘贴7次和10次分别为金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌感染前皮肤屏障破坏的佳次数;6株金黄色葡萄球菌和3株化脓性链球菌局部感染后,创面活菌培养结果分别为4.99±4.74、5.52 ±5.45、4.92±4.56、5.24±4.84、5.20±5.01、4.94±4.69和4.82±4.87、5.34±5.45、4.63 ±4.41CFU/g,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).给予氧氟沙星凝胶后,对感染灶细菌生长的抑制率均大于80％.结果表明,所建立的皮肤浅表感染模型具有一定的敏感性和有效性,对皮肤浅表感染发病机制研究、外用抗菌药物筛选和疗效观察具有一定的应用前景.
作者：王永芳；李新宇；宋莎莎；高纪伟；徐兰芳 刊期： 2013年第06期
应用高通量药物筛选技术,筛选发现具有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)激酶抑制活性的中药提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)对其活性部位进行分析和鉴别.灰毡毛忍冬药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个相应的提取部位.采用均相时间分辨荧光(HTRF)法检测抑制EGFR激酶活性,于波长为620和665 nm处测定荧光信号的变化及信号值,计算提取物对EGFR激酶的抑制率.采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,210～ 400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据.结果显示,灰毡毛忍冬的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR激酶抑制活性,IC50为2.027 μg/mL.Q-TOF/MS测定的一级、二级质谱信息及结合文献鉴定灰毡毛忍冬乙酸乙酯提取物中1 1个化合物,其中7个分别是:咖啡酸(caffeic acid),七叶内酯(esculetin),槲皮素(quercetin),3,5-二咖啡酰奎尼酸(3,5-O-dicaffeoylquinicacid),扁柏黄酮(hinoki flavone),绿原酸(chlorogenic acid),β-谷甾醇(β-sitosterol).3,5-二咖啡酰奎尼酸、咖啡酸、扁柏黄酮为灰毡毛忍冬的主要成分,灰毡毛忍冬中含有的酚酸类和黄酮类化合物可能是抑制EGFR激酶活性的主要成分.
作者：任伟光；林森森；李文涛；黄林芳 刊期： 2013年第06期
考察姜黄素对非酒精性脂肪肝的治疗作用及洛伐他汀在正常、非酒精性脂肪肝模型大鼠及姜黄素治疗大鼠体内的药代动力学行为变化.采用高脂饮食饲养大鼠造成非酒精性脂肪肝病理模型,通过血清生化分析和肝组织病理切片HE染色确证造模成功,在该模型下研究姜黄素的治疗对洛伐他汀药代动力学行为的影响;运用LC-MS法测定洛伐他汀在大鼠体内的血药浓度,计算药代动力学参数,比较其在正常大鼠、脂肪肝模型大鼠及姜黄素治疗大鼠体内的药代动力学行为差异;Western blot法测定大鼠肝脏CYP3A2的表达.长期给予高脂饲料喂养大鼠造成非酒精性脂肪肝模型使得洛伐他汀在血浆中的暴露显著升高,相应的AUC0-∞升高到正常对照组的1.53倍,半衰期延长到正常对照组的2.54倍,而姜黄素的治疗使AUC0-∞和半衰期都有明显降低,提示长期使用保肝药会改变药物在肝病状态下的药代动力学参数,其原因很可能是由于肝脏病理状态下CYP3A2的表达减少而姜黄素的治疗使其表达量增加所致.因此,在使用保肝药治疗脂肪肝及代谢综合征时要注意与联用药物之间可能存在的药物-药物相互作用,保证临床用药安全有效.
作者：谢媛；王洪；冯冬；郝海平；王广基 刊期： 2013年第06期
随着纳米技术的发展,靶向肿瘤的纳米载体成为研究的热点.纳米载体可以通过靶向作用更有效地输送抗肿瘤药物和影像材料用于肿瘤的治疗和诊断.本文对靶向肿瘤的纳米药物载体研究的近况以及发展趋势进行分析和展望,希望从靶向载体制剂设计和开发的角度出发,探讨靶点选择、靶向机制以及载体结构和质量控制方面的关键技术问题,期望对相关研究人员有所启发.
作者：徐宇虹；曹婧 刊期： 2013年第06期
中药的质量直接关系到其临床疗效和安全性.近年来,国内外学者开展了大量的中药谱效关系的研究工作,试图将中药指纹图谱中表征的化学成分与药效活性相结合,从而建立与中药产品疗效相关且反映其内在品质的质量标准.然而,中药成分复杂,对疾病的治疗往往是多种成分通过多靶点和多环节发挥整体作用.鉴于此,本文结合作者课题组的前期研究工作,提出中药多维谱效关系这一概念,并选择与疗效密切相关的多种药效指标探讨谱效关系,为进一步完善中药质量评价体系提供新的研究思路和方法.
作者：孙莉琼；戚进；余伯阳 刊期： 2013年第06期
随着10种纳米结晶制剂先后上市,纳米结晶技术逐渐发展成为一种成熟的技术工艺,该技术能提高药物的饱和溶解度、改善药物的溶出速率从而提高其在体内的生物利用度.随着新设备、新材料的出现,纳米结晶制剂技术也逐步呈现可控化和产业化,不同给药方式的纳米结晶制剂先后上市或进入临床研究阶段.本文综述了纳米结晶制剂的产业化生产技术、生产过程中关键工艺参数、稳定剂对产品的影响,以及利用纳米结晶技术上市或进入临床研究的药物等.
作者：曾泷彪；廉云飞；张军东；唐文燕；李娟 刊期： 2013年第06期
茚并异喹啉是一类具有抗肿瘤活性的化合物,这类化合物可以克服喜树碱类拓扑异构酶Ⅰ (topoisomerase Ⅰ,Top1)抑制剂的缺陷,获得活性更加稳定、毒性更小的抗肿瘤化合物.近来发现茚并异喹啉类化合物还具有Top1和酪氨酸-DNA磷酸二酯酶(tyrosyl-DNA phosphodiesterase Ⅰ,Tdp1)双重抑制作用和潜在的肿瘤预防作用.本文简要介绍了Top1抑制剂的作用机制和茚并异喹啉类的作用优势,重点综述了近年来出现的一些茚并异喹啉酮类化合物的构效关系及研究成果.
作者：张圣淼；孙昊鹏；贾剑敏；徐晓莉；尤启冬 刊期： 2013年第06期
采用超临界CO2抗溶剂法制备头孢呋辛酯微粒,以体积平均粒径为主要评价指标,在单因素实验的基础上设计正交试验优选制备头孢呋辛酯微粒的工艺,并对优选工艺组合进行粒度分布、扫描电镜、红外吸收光谱法(IR)及差示扫描热量法(DSC)的表征.正交试验得到的优选工艺为:结晶压力10 MPa,结晶温度50℃,头孢呋辛酯质量浓度6 mg/mL.在此工艺下制得的微粒体积平均粒径为6.729 μm,IR与DSC分析表明头孢呋辛酯微粒的化学结构没有发生变化,热力学性质发生了变化,经过处理的头孢呋辛酯变为无定型.
作者：周敦晖；乐龙；王志祥；党蓓蕾；颜庭轩；黄德春 刊期： 2013年第06期
