目的:研究大鼠脑外伤后胎脑移植的增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的表达.方法:自由落体撞击法制作脑外伤模型,延迟2周作创伤灶内胎脑细胞移植,伤后6周观察创伤灶HE染色,PCNA和Bcl-2的免疫组化染色、计数.结果:伤后均表现为胶质细胞和毛细血管的增生,胎脑移植后更明显;PCNA表达两者基本相同;Bcl-2在单纯损伤组未见表达,而在损伤后移植组明显表达.结论:胎脑移植可促进创伤脑区Bcl-2表达,对脑外伤引起的神经细胞死亡具有保护作用.
作者：胡华；傅伟明；郑秀珏 刊期： 2004年第02期
目的:分析佛波酯(PMA)对细胞表面CD3、CD4和CD8表达的影响,及与胞浆内细胞因子分泌的关系.方法:取10例健康儿童及27例呼吸道感染患儿外周血单个核细胞作体外培养后,用不同浓度及时间PMA刺激后作胞浆内细胞因子及细胞表面分子标记物分析.结果:与未刺激组相比,PMA不同浓度(5、10、20和50 ng/ml)刺激4 h后CD4表达均有明显下降,分别从41.03%、40.18%、42.29%及42.85%下调至28.22%、24.44%、26.09%及25.70%,10 ng/ml浓度刺激4、6 h后细胞表面CD4也有显著下调,分别从45.54%及40.56%下调至28.88%及20.03%,且CD4表达与胞浆内细胞因子分泌呈负相关(r=-0.601,P<0.001).PMA对CD3(刺激前后分别为49.57%及51.54%)及CD8(刺激前后分别为13.02%及12.85%)表达差异无显著性,而在CD3+T淋巴细胞中,CD4-CD8-细胞仅占5.52%.结论:PMA刺激对辅助性T淋巴细胞(Th)表面CD4表达有显著下调作用,且Th细胞胞浆内细胞因子分泌越多,CD4分子下调越明显,而PMA对CD3及CD8无明显下调作用.可采用CD3+ CD8-表面标记的方法间接定义Th细胞,替代CD4分子,以避免PMA这种效应对Th1/Th2数量检测所带来的困难.
作者：毛建华；陈志敏；汤永民；梁黎；杜立中；张扬 刊期： 2004年第02期
目的:探讨浙江汉族人群中血管紧张素原(AGT)基因M235T变异与原发性高血压的关系.方法:对116例高血压病患者与114名正常血压者进行对照研究.采用聚合酶链式反应(PCR)与限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测AGT基因M235T变异.同时测量血压、身高、体重、空腹血糖与血脂.结果:①高血压组收缩压与舒张压水平显著高于对照组(P＜0.01);而两组间年龄、性别、体重指数、血糖与血脂差异无显著性(P＞0.05).②经PCR扩增及Tth 111 I酶切,AGT基因型有三种形式:MM、TT与MT基因型.两组AGT基因型的分布均符合Hardy-Weinberg 平衡.③AGT基因M235T基因型在高血压组与对照组的分布差异有显著性(χ2=6.966,P＜0.05).高血压组TT基因型与T235等位基因的频率高于对照组(TT基因型:0.47 vs 0.33,χ2=5.36,P＜0.05;T235等位基因:0.71 vs 0.60,χ2=6.179,P＜0.05).结论:在浙江汉族人群中,AGT基因M235T变异与原发性高血压的发病显著相关,TT基因型或T235等位基因可能是高血压的一个遗传方面的危险因素.
作者：蔡思宇；俞锋；施育平 刊期： 2004年第02期
目的:探讨哌替啶扩张血管导致低血压的机制.方法:制备大鼠离体主动脉环,记录血管环张力,观察哌替啶对高钾和苯肾上腺素(PhE)预收缩血管的作用.结果:哌替啶不影响血管的静止张力,但可对高钾和PhE诱导的收缩产生非内皮依赖的舒张作用,并呈剂量-反应关系.哌替啶既不影响咖啡因诱导的血管收缩,也不改变钌红作用后对高钾诱导收缩的抑制作用.在无钙条件下,哌替啶仍能抑制PhE的收缩,也抑制后续加入钙后引发的收缩.结论:哌替啶对高钾和PhE诱导的血管收缩有舒张作用,机制可能与其阻断细胞膜钙通道和抑制IP3敏感钙池的钙释放有关.
作者：张雄；柴灵莺；童晓嵋；陆源；夏强 刊期： 2004年第02期
目的:研究雷公藤内酯醇对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及合成前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)的影响,并探讨其机制.方法:分离培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,用TNFα(20 μg/L)刺激,同时加或不加雷公藤内酯醇(TP,0～100 μg/L).分别用3H-TdR法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)和硝酸酶还原法、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶免疫法及蛋白免疫印迹(Western-blot)法,检测滑膜细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2和NO的水平,滑膜细胞COX-2和iNOS mRNA表达水平及蛋白表达水平.同时提取各组细胞蛋白,测定其核转录因子NF-κB活性.结果:TP(>20 μg/L)能显著抑制TNFα诱导的RASF COX-2和iNOS表达,并明显减少PGE2和NO的生成,抑制作用与TP浓度呈明显相关性.同时观察到,TP对TNFα激活的RASF核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用(IC50≈35 μg/L),TP对RASF NF-κB活性的抑制程度与其抑制RASF COX-2和iNOS表达的效应相一致.实验未观察到TP对RASF增殖的影响.结论:TP可显著抑制TNFα刺激的RASF COX-2和iNOS的表达及其诱导产物PGE2和NO的生成,这种作用可能通过TP抑制RASF NF-κB的活性而实现.
作者：邵雪婷；冯磊；姚航平；孙文佶；张立煌 刊期： 2004年第02期
目的:研究肝移植术后呼吸系统并发症的原因和治疗对策.方法:对1999年2月至2003年4月,术前无呼吸系统疾病行肝移植163例,监测术后2周的肺部并发症的发生,观察其治疗效应.结果:呼吸系统并发症发生率76%(124/163),治愈92%(114/124).各并发症的治愈率分别为:胸腔积液100%(113/113),肺部感染92%(76/83),急性呼吸衰竭91%(59/65),肺水肿98%(58/59),肺动脉高压98%(101/103),肺不张100%(4/4),气胸100%(2/2).结论:单腔静脉导管引流胸腔积液安全有效.肝移植术后重要脏器功能不全导致气管插管时间的过长是引起肺部感染的主要原因,使用有效的抗生素,吸痰时无菌操作和通畅呼吸道引流是防治肺部感染与肺不张的重要措施.限制性通气功能障碍与换气功能障碍是术后呼吸衰竭的主要类型.肺动脉高压与肺水肿主要与肺的血管张力及肺循环血量相关,处理以扩血管、利尿为主.
作者：郑树森；卢安卫；梁廷波；王伟林；沈岩；张珉 刊期： 2004年第02期
目的:了解大肠癌细胞的免疫表型特征.方法:采用三色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞仪检测了40种抗白细胞分化抗原单克隆抗体(MoAbs)与大肠癌细胞系HR8348的反应性.结果:抗CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、TCR(α/β)、TCR(δ/γ)、CD10、CD11b、CD14、CD16、CD19、CD22、CD25、CD28、CD33、CD34、CD35、CD36、CD38、CD41a、CD45、CD45RA、CD45RO、CD56、CD61、CD64、CD66b、CD69、CD71、CD117、CD122和 Lambda F(ab')2MoAbs与HR8348细胞系均不反应(阳性率(10%).抗CD13、CD15、CD20、CD38、CD95和HLA-DR MoAbs与细胞系HR8348呈不同程度的阳性反应(阳性率11.33%～86.39%).结论:实验证明,大肠癌细胞系HR8348与白细胞谱系有部分相同的细胞表面抗原决定簇.
作者：杨世隆；汤永民；沈红强；钱柏芹；宋华；石淑文；宁铂涛；陈英虎；徐卫群 刊期： 2004年第02期
目的:研究结直肠癌的癌前病变.方法:应用免疫组织化学方法,检测101例结直肠癌及相应的癌旁黏膜和远端切缘黏膜,16例溃疡性结肠炎、16例克隆氏病和3例健康成年人结直肠各部位黏膜的KiA10的表达.结果:在结直肠癌中KiA10阳性率为14.85%(15/101),癌旁黏膜和远端切缘黏膜均有18例KiA10阳性腺窝分布,但并非一一对应.结论:KiA10阳性腺窝可能是一种新的结直肠癌癌前病变.
作者：来茂德；黄琼；Parwaresch Reza 刊期： 2004年第02期
目的:建立耐甲氨蝶呤(MTX)的人绒毛膜癌细胞株,并检测其生物学特性.方法:采用剂量递增间歇诱导的方法,对人绒毛膜癌细胞株JAR进行长期诱导培养,建立耐药细胞株JAR/MTX.比较两种细胞倍增时间、绒毛膜促性腺激素(HCG)分泌量、对MTX和一些常用化疗药的敏感性,P-糖蛋白、谷胱甘肽S转移酶、核增殖抗原的表达,以及细胞自发和MTX诱导调亡率.结果:历时1年建成JAR/MTX细胞株,耐药性稳定,耐药指数7.3,对紫杉醇、长春新碱有交叉耐药.JAR/MTX细胞增殖缓慢,核增殖抗原表达低于JAR细胞(3.09±0.42 vs 3.72 ± 0.35, P<0.05).谷胱甘肽S转移酶表达高于JAR, P-糖蛋白的表达两者无差异.HCG分泌高于JAR细胞,培养48 h后每105个细胞分泌HCG分别为(95.7±5.4 vs 41.3±2.8)mIU(P＜0.01).JAR/MTX细胞的自发凋亡及MTX诱导的凋亡均明显少于其母系JAR细胞(P<0.05).结论:JAR/MTX细胞对MTX耐药性稳定,具有独特的细胞形态、染色体核型、增殖与凋亡等特征,为进一步研究绒癌的耐药机制提供了理想的细胞模型.
作者：陈亚侠；谢幸；陈怀增；程琪；周彩云 刊期： 2004年第02期
目的:探讨外源性FHIT基因的表达对胃癌细胞株凋亡作用的影响.方法:将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pRcCMV-FHIT用脂质体介导转入胃癌细胞株MGC-803,用流式细胞仪、普通光镜、透射电镜观察FHIT基因的表达对MGC-803细胞凋亡的影响.结果:转染FHIT基因的MGC-803细胞的凋亡水平(32%)与空质粒转染组(12.15%)相比明显增高,且存在显著性差异(P<0.01),同时细胞的生长周期出现了明显的G0/G1期阻滞(64.375% vs 49.5%).结论:外源性FHIT基因能诱导胃癌细胞株MGC-803凋亡,细胞生长周期阻滞.
作者：孔梅；陈慰浙；陈智；李敏伟 刊期： 2004年第02期
目的:为三氧化二砷 (As2O3) 适应证的扩展提供实验依据.方法:应用MTT法,检测了As2O3分别与柔红霉素(DNR)、阿糖胞苷(Ara-C)、三尖杉酯碱(H)和长春新碱(VCR)联合对23例初治急性非早幼粒细胞白血病(ANPL)、16例难治复发ANPL原代细胞的细胞毒性.结果:①As2O3对初治及难治复发ANPL细胞具有明显的细胞毒性,1.0 μmol/L As2O3的细胞毒性分别为12.6%±7.7%和10.1%±6.2%,该毒性作用在两组间无统计学差异(P>0.05).②As2O3与Ara-C、H和VCR的细胞毒性无相关性(r分别为:0.279、0.276、0.204,P均>0.05),与DNR有相关性(r=0.432,P<0.05).③As2O3分别与DNR、Ara-C、H和VCR联用,对多数患者的细胞毒性呈协同及相加作用,当As2O3分别与DNR、VCR联用时,其细胞毒性明显大于单用化疗药物(P<0.05).结论:As2O3与Ara-C、H及VCR无交叉耐药性,与DNR有部分交叉耐药性;可与DNR、VCR等组成新的化疗方案,治疗初治及难治复发ANPL患者.
作者：魏国庆；张绍林；邹典斌；林茂芳 刊期： 2004年第02期
目的:建立转基因A549细胞株,从特性上进行分析,探讨其作为抗肿瘤瘤苗的可能性.方法:将pLXSN质粒与人IFN-γ基因体外重组,转染入人肺腺癌细胞株A549中,经筛选获得稳定表达γ-干扰素的A549-IFN-γ细胞株,对其生长特性、细胞表面MHC分子表达变化、IFN-γ的分泌量及致瘤性等方面进行了探讨.结果:转基因细胞株与原细胞株相比较,生长状态没有明显的变化,转基因细胞株可稳定表达并向细胞外分泌γ-干扰素;而且其细胞表面MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子表达明显增加,提示其免疫原性增强;裸鼠实验表明其致瘤性下降.结论:该转基因细胞株有可能成为治疗肺癌的转基因瘤苗.
作者：于晓虹；刘祥麟；马洁羽 刊期： 2004年第02期
目的:建立脑膜瘤短期原代培养的体外模型,研究羟基脲对脑膜瘤培养细胞的抑制作用及其可能机理.方法:进行脑膜瘤细胞原代培养,应用羟基脲作药敏试验,利用细胞计数、MTT法、流式细胞仪等检测结果.结果:显微镜下可见羟基脲明显影响脑膜瘤培养细胞的生长状态;5×10-3 mol/L组的细胞数减少84%,5×10-4 mol/L组减少46%,而5×10-5 mol/L组减少20%(P<0.01);5×10-3 mol/L组的细胞活力减少86%,5×10-4 mol/L组减少60%,而5×10-5 mol/L组减少28%(P<0.01).应用流式细胞仪检测细胞凋亡,5×10-3 mol/L组的细胞凋亡率增加了8.82倍,5×10-4 mol/L组增加了3.94倍,而5×10-5 mol/L组增加了0.73倍(P<0.01).结论:羟基脲能抑制脑膜瘤培养细胞的增生,且呈浓度依赖性;羟基脲抑制脑膜瘤培养细胞的增生可能与羟基脲诱导其凋亡有关.
作者：杨树旭；王义荣；甘海鹏 刊期： 2004年第02期
目的:研究β-catenin在结直肠肿瘤中异常表达的意义.方法:应用免疫组织化学SP法,检测β-catenin在腺癌患者正常黏膜、癌旁黏膜、腺癌组织中及其在腺瘤组织中的表达情况.结果:在正常黏膜和癌旁黏膜中,β-catenin主要定位于细胞膜(胞膜阳性率分别为94.6%和86.5%),并有部分在胞浆中表达(胞浆阳性率分别为38.7%和55.0%),胞核均为阴性;在腺瘤与腺癌中,其阳性染色主要定位于细胞浆(胞浆阳性率分别为85.1%和93.7%),并有部分细胞核阳性(分别为12.8%和23.4%),胞膜阳性表达程度显著低于正常和癌旁黏膜(P<0.05),胞浆、胞核的表达高于正常和癌旁黏膜(P<0.05);而高、中分化腺癌在细胞浆的阳性表达率显著高于低分化腺癌(分别为100%、95.5%、68.8%,P<0.05);在腺癌组织中β-catenin的胞浆阳性表达程度与腺癌的Dukes分期相关,A期表达程度显著低于B/C期.结论:β-catenin在结直肠腺瘤、腺癌中胞浆的表达高于正常黏膜及癌旁黏膜;其表达与结直肠癌的分化程度及Dukes分期相关,因此,β-catenin表达检测可以作为预后判断的参考指标之一.
作者：黄琼；朱益民；邢晓明；来茂德 刊期： 2004年第02期
目的:系统地分析由SSH方法获得的结肠正常黏膜和腺癌的差异表达基因.方法:构建基于Linux的核酸自动分析平台,对用SSH方法获得的3个文库之一的T-N差减文库进行分析.用半定量RT-PCR对部分结果进行验证.结果:成功构建了基于Linux的核酸自动分析平台,得到了15个contigs,其中与已知基因相匹配的有13个(T-N),未与已知基因匹配或者意义未明的有2个;部分基因的半定量RT-PCR发现,人胸腺素β4(Homo Sapiens thymosin beta 4,THY)和人乙型肝炎病毒x抗原反式活化蛋白2(Homo Sapiens HbxAg transactivated protein 2,XTP)的表达从正常黏膜-腺癌有逐步增高的趋势.结论:构建基于Linux的核酸自动分析平台是系统分析核酸序列的有效方法,根据对3个文库的系统分析结果,为进一步阐明结肠肿瘤分子机制提供了许多有价值的信息.
作者：谷雪梅；张昊；来茂德 刊期： 2004年第02期
目的:了解GR6基因及其蛋白质产物GR6假设蛋白的结构特征,以及GR6基因在结直肠肿瘤中的表达改变.方法:采用生物信息学的软件和数据库,分析GR6基因的结构特点及其蛋白质产物GR6假设蛋白的二级结构特征和功能特点等,并采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测39例结直肠癌组织和配对的远端切缘正常组织,以及19例癌旁组织和14例腺瘤组织中GR6的转录表达水平.结果:序列分析表明,GR6基因由3个外显子组成,含有4个CpG岛,编码产物为149个氨基酸组成的GR6假设蛋白.用生物信息学分析发现,GR6假设蛋白含有1个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶II磷酸化位点和3个N-肉豆蔻酸化位点及核定位信号,提示GR6基因的表达产物可能是细胞核内的一种信号分子.mRNA水平上,GR6的转录表达水平从正常-癌旁-腺瘤-腺癌逐步递减,其中,正常与腺瘤(P<0.05)、正常与腺癌(P<0.01)的表达差异具有显著意义.结论:GR6基因的表达产物即GR6假设蛋白可能是细胞核内的一种信号分子.GR6基因在结直肠肿瘤中低表达,在结直肠肿瘤的发生、发展过程中可能起着重要的作用.
作者：林洁；朱益民；来茂德 刊期： 2004年第02期
目的:探讨溃疡性结肠炎和不典型增生、癌变组织的p53基因改变和微卫星不稳定性状况.方法:采用SP法检测21例70个手术切除的溃疡性结肠炎标本和25例正常人的P53蛋白表达;人工微切割-PCR-SSCP/HA-克隆测序技术检测溃疡性结肠炎标本p53基因第5-8外显子的点突变;SSLP-测序技术检测10个微卫星位点的改变情况.结果:P53蛋白免疫组化发现25例正常人全部阴性;溃疡性结肠炎患者4例阳性,其中炎症性、低度不典型增生(LGD)、高度不典型增生(HGD)与癌变阳性标本分别为0/5例、1/7例、2/7例和1/2例.SSCP/HA、SSLP结果各有2例阳性,其中1例癌变病例癌组织 p53基因第6外显子及Bat26微卫星位点均阳性,其LGD区Bat26也阳性;1例LGD病例Bat26位点阳性;另1例HGD病例p53基因第8外显子阳性,后者经测序证实发生了移码突变.21例标本在TGFβRII(A)10、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFβRII(GT)3、BAX(G)8、hMSH3(A)8、hMSH6(C)8、TCF4(A)9和DPC4(CA)179个微卫星位点都阴性.结论:溃疡性结肠炎和癌变黏膜的早期就存在P53蛋白的过表达和微卫星不稳定性,前者部分是基因突变的结果.
作者：李君；来茂德；黄琼 刊期： 2004年第02期
RNA干扰技术已被广泛应用于线虫、植物和果蝇的基因功能分析中.随着Dicer酶和siRNAs的发现,人们已经能够利用人工合成的siRNAs,或转染siRNAs的表达载体来诱发哺乳动物细胞特定基因的抑制以及将上述方法应用于整体实验中,证明整体哺乳动物也存在RNA干扰现象.
作者：邱爽；罗建红 刊期： 2004年第02期
目的:超声探讨室间隔缺损合并动脉导管未闭(VSD+PDA)患者的动脉导管未闭(PDA)显示方法.方法:超声测量41例VSD+PDA和41例单纯室间隔缺损(VSD)患儿的主动脉峰值流速(Vp),平均流速(Vm),流速时间积分(VTI)和心排指数(CI).除常规在胸骨旁大动脉短轴切面探查以外,彩色多普勒超声心动图在胸骨旁肺动脉分叉切面、胸骨上主动脉弓长轴,向短轴扫查切面及剑突下主动脉短轴切面探查PDA.结果:41例VSD+PDA患者检出PDA 29例,占70.73%,漏诊12例,漏诊率29.27%.VSD+PDA患者的Vp、Vm、VTI和CI参数明显高于单纯VSD患者,P<0.001.4例在胸骨旁大动脉短轴切面未显示的PDA,其中2例在胸骨旁肺动脉分叉切面发现PDA,1例在胸骨上主动脉弓长轴向短轴扫查切面显示PDA,1例在剑突下主动脉短轴切面显示PDA.结论:VSD患儿主动脉Vp、Vm、VTI和CI参数增高时提示合并PDA存在.探查VSD患儿胸骨旁肺动脉分叉切面、胸骨上主动脉弓长轴向短轴扫查切面及剑突下主动脉短轴切面有助于发现PDA.
作者：蒋国平；何瑾；康曼丽；叶菁菁；赵镭；彭学慧；何彧；杨秀珍 刊期： 2004年第02期
生物信息学是研究生物信息处理(采集、管理和分析应用),并从中提取生物学新知识的一门科学,它连接生物数据和医学科学研究.生物信息学在基因组学研究中发挥了不可替代的作用,并为解决生物系统的复杂问题提供了可能.对生物信息学的基本概念,同源性和相似性的区别作了介绍,并且对生物信息学在新基因发现、蛋白鉴定和生物芯片结果分析中的应用作了概述.
作者：来茂德 刊期： 2004年第02期
1病例摘要患者,女性,18岁,汉族,学生.因四肢无力半年,加重伴气急1周,于1999年5月来浙江大学医学院附属第二医院神经科住院治疗.患者半年前无明显诱因下出现四肢乏力,肌肉酸痛,但尚能独立行走,时有恶心、呕吐.
作者：刘建仁；张敏；徐彬；黄鉴政；程源深 刊期： 2004年第02期
