XJ-160病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,在对其全基因组核苷酸序列测定的基础上,对病毒基因组序列、病毒同源性和病毒系统进化等进行了较为详细的分析,结果表明:XJ-160病毒具有典型的甲病毒属辛德毕斯病毒的序列特征.该病毒nsp3蛋白基因中有11处缺失及两处插入(4517～5485),涉及90个核苷酸.核苷酸序列的系统进化分析表明,XJ-160病毒属于辛德毕斯病毒欧洲/非洲亚组.病毒全基因组核苷酸序列进化分析显示,XJ-160病毒是一株新的甲病毒或辛德毕斯病毒的新亚型.
作者：李蕾；梁国栋；李富胜；周国林；付士红；何海怀；金奇；侯云德 刊期： 2000年第02期
从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)提取细胞总RNA,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法得到VEGF受体Flt-1胞外区前3个IgG样区域cDNA片段(Flt-1n3).将获得的受体基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组质粒pcDNA3.1/Flt-1n3,通过脂质体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO),用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆.经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆,细胞测活结果表明,表达产物具有抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的活性.鸡胚测活结果表明,CHO细胞表达的r Flt-1n3能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成.
作者：曾革非；张智清；周小明；张立国；车团结；安乃莉；陈爱君；姚立红 刊期： 2000年第02期
将蓝舌病毒(BTV)13型S7与L3基因同时插入杆状病毒双表达载体pFastBacDual,获得重组杆状病毒rvBacBTVP37.该病毒在昆虫细胞中同时高水平表达BTV13 VP3与VP7蛋白,可以高效自动装配出20面体的60～70nm空心颗粒.分析表明,所获颗粒为空心的BTV核心样颗粒(CLP),其成分为VP3与VP7,不含BTV其它任何蛋白与核酸.这种装配需要VP3与VP7的共同参与,二者缺一不可,它们均含有相互作用与装配的信息.本研究为BTV病毒样颗粒的装配打下了基础,并为BTV结构与功能研究提供了良好模型.
作者：王健伟；姜慧英；屈建国；赵同兴；洪涛 刊期： 2000年第02期
上海市卫生检疫局送检了一例HIV-1和HIV-2抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的HIV前病毒的gag和env基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的HIV双重感染样品的HIV部分基因特征.从HIV感染者淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中提取前病毒DNA,分别使用HIV-1和HIV-2特异性引物用套式PCR扩增HIV-1和HIV-2的部分基因区.PCR产物不经克隆直接测序,经GenBank检索并使用GCG软件包进行序列分析.结果表明,其中感染的HIV-2毒株中gag基因区与德国株HI2PEI2KR相似,基因离散率仅为8.1%,env基因C2-V3区与来自几内亚比绍的HIV-2U05358株近,离散率为13.04%,在其gp36区发现与HIV-2U05358基因离散率为10.63%,两个毒株均属HIV-2中的A亚型.而其HIV-1型毒株在gag和env区都与从尼日利亚分离的H92NG083株相似,属HIV-1的G亚型.本文首次对我国发现的HIV-2型毒株进行了主要基因区的序列分析,表明在非洲较常见的HIV-2A亚型和HIV-1G亚型毒株,已随援外劳工传入我国.
作者：邢辉；潘品良；冯毅；林旭东；于健石；龚新昌；戴玉琳；邵一鸣 刊期： 2000年第02期
为从全基因组水平研究乙型肝炎病毒(HBV)的核苷酸结构及复制和抗原表达特性,分别从2例HBsAg和HBeAg阳性、HBV DNA滴度为1014和1013拷贝/ml的慢性乙型肝炎患者(编号为56和2-18)血清中扩增、克隆了HBV全基因组,并测定了核苷酸序列.两株病毒基因组转染HepG2细胞的培养上清中HBsAg表达水平基本相同,但#56毒株表达的HBeAg约为#2-18株的3倍,Southern印迹及核酸杂交显示,#56HBV株复制效率显著高于#2-18株,两株HBV DNA全长均为3215个核苷酸,同源性为98.7%,均为B基因型(adw亚型).两者相差的42个核苷酸分布在C、Pre-S1、Pre-S2、P及X基因编码区,其中有位于SPⅠ、SPⅡ、Xp和ENHⅠ基因调控序列区中.#56患者感染的毒株基因组中Pre-S2起始密码ATG变异为GTG,但由Pre-S1起始翻译形成的大蛋白中包括Pre-S2的部分氨基酸,故#56血清和#56株转染细胞的培养上清仍可与Pre-S2抗体出现阳性反应.
作者：武力；袁正宏；何丽芳；蒋伟伦；邱申熊；闻玉梅 刊期： 2000年第02期
为了证实HPV18E6E7基因诱导的人胚食管上皮永生化细胞(SHEE)61代(SHEE61)部份细胞(SHEE61A)已经恶性转化,以寻找监控细胞早期恶性转化的方法.对培养的SHEE第10代(SHEE10)和61代(SHEE61)细胞,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及生长形式;用流式细胞仪分析细胞周期;用染色体G带核型分析和间期核染色体1、7、8号着丝粒探针荧光原位杂交(FISH)检测细胞染色体改变;用增殖优势克隆优选法选出生长快的细胞群体,接种裸小鼠和SCID小鼠.结果:光学显微镜下见SHEE61细胞大小不等,重叠生长;电子显微镜下见细胞核多型性和核仁增大等增殖表型;流式细胞仪检测,SHEE61增殖指数和DNA＞4n细胞高于SHEE10;SHEE61细胞染色体众数出现57～60、63～65两亚群,1、7、9、13、17等染色体出现较多3体、4体或5体;FISH间期核1、7号着丝粒数增多;SHEE61克隆优选的细胞SHEE61A接种SCID小鼠成瘤.这表明:SHEE61细胞形态及生长特性有了改变,接触抑制减弱,高倍体和不整倍体细胞增多,染色体数目明显改变,SHEE61A接种SCID小鼠产生浸润性肿瘤,可以判定SHEE61部份细胞已恶性转化.用克隆优选法筛选和染色体检测可以监控永生化细胞早期恶性转化.
作者：沈忠英；陈晓红；沈健；蔡维佳；陈炯玉；黄天华；曾毅 刊期： 2000年第02期
犬瘟热病毒(CDV)敏感细胞Vero用SDS或RIPA溶解缓冲液溶解,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定犬瘟热病毒疫苗株(CDV-onderstepoort)的细胞受体.结果发现,在Vero细胞上有两组CDV结合蛋白质,即高分子量组蛋白质(127kD、120kD、110kD)与低分子量组蛋白质(27kD和30kD).这些CDV结合蛋白组分的性质及在CDV致病中的作用有待进一步研究.
作者：郭爱珍；陆承平 刊期： 2000年第02期
人星状病毒(HAstV)是RNA病毒的新家族,从我国河南和北京两地区的急性腹泻患儿便样中鉴定了7株星状病毒,经电镜观察病毒颗粒直径约为28nm,表面呈五角或六角星状形态,用RT-PCR检定为阳性,比较PCR扩增产物的核苷酸序列构建的序列同源性树表明,1990年在河南流行的星状病毒主要为HAstV-1,另有一株HAstV-5,1996年北京流行株为HAstV-5.对HAstV患儿的临床症状进行了讨论.以上结果为我国病毒性胃肠炎流行的预防提供科学根据.
作者：方肇寅；章菁；赵章华；马莉；李永华；杨辉；S.Monroe；R.Glass 刊期： 2000年第02期
为研制蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)基因工程疫苗和进一步研究BTV结构与功能的关系,对BTV病毒样颗粒(VLP)的装配进行了研究.同时在昆虫细胞中表达BTV主要结构蛋白VP7、VP3、VP2与VP5,将细胞裂解液超速离心纯化后,发现主要存在两种形态的颗粒:一种与前文报道的病毒核心样颗粒(CLP)相同,直径约为60nm～70nm,蛋白壳厚10nm～15nm;另一种大小为70nm～80nm,蛋白壳厚20nm～30nm,与完整空心BTV颗粒形态一致.这些颗粒是由VP2/3、VP5与VP7组成的,不含核酸和其它任何BTV蛋白,并且具有诱导中和抗体的活性和血凝活性,与预期结果一致.以BTV13 VP7与VP3蛋白为内壳,以与其基因相比变异较大的BTV10 VP2、VP5为外壳,成功地实现了VLP装配,提示BTV颗粒内壳与外壳蛋白间相互作用引发装配的区域可能是保守的,VP2蛋白的高变性对其与内壳间的相互作用并无影响.
作者：王健伟；姜慧英；屈建国；赵同兴；洪涛 刊期： 2000年第02期
对我国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株全基因组核苷酸序列进行测定,阐明该病毒基因组与国外株的差异,了解其分子致病机理.测序结果显示,XJ-160病毒全基因组除5′末端帽子结构和3′末端多聚腺苷酸尾外共11626个核苷酸,编码3731个氨基酸.非结构基因的编码区长7464核苷酸(60nt～7523nt),编码2486氨基酸,翻译成四种非结构蛋白(nonstructural protein,nsp1-4).结构基因长3738核苷酸(7568～11306),编码1245个氨基酸,翻译成三种结构蛋白和两个小分子肽(capsid,E1-3、6k).病毒基因组5′末端和3′末端及结构基因和非结构基因之间分别有59个核苷酸、45个核苷酸和323个核苷酸的非编码区.核苷酸序列分析表明,XJ-160病毒具备典型的甲病毒属辛德毕斯病毒基因组特征,与标准辛德毕斯病毒AR339病毒株相比,核苷酸序列存在18%差异,氨基酸差异为8%.这是我国完成的第一株辛德毕斯病毒全基因组序列测定,序列已输入国际基因库(GenBank AF103728).
作者：李蕾；梁国栋；周国林；李富胜；付士红；何海怀；金奇；侯云德 刊期： 2000年第02期
牛泡沫病毒(BFV)具有复杂的基因组结构,其基因组除编码反转录病毒共有的gag、pol、env三个结构基因之外,在其env和3′LTR之间有两个重叠的读码框(ORF-1和ORF-2),编码Borf-1、Borf-2、Bet等多种调节蛋白,其中Borf-1(249aa)为BFV反式激活因子(Tas).为研究Borf-1的结构与功能,Borf-1在LTR上的应答元件及作用机制,Borf-2、Bet等调节蛋白在BFV基因表达调控中的作用,本研究以本室分离鉴定的BFV3026中国毒株为材料,克隆Borf-1等基因片段构建系列质粒,与带有luc报告基因的LTR系列缺失质粒共转染,作瞬时表达分析.结果表明,Borf-1 37aa～114aa、C端218aa～249aa为其行使激活功能所必需区域;Tas在BFV LTR上的应答元件(TRE)位于-983/-668(TREI)、-470/-140(TREII)和RU5区,其中TREI、TREII均位于U3区,为正调控元件,RU5区为负调控元件.进一步研究证明,TREII能在异源启动子(BIV LTR)上行使功能,且与其自身的方向无关,类似于增强子元件.此外还发现,RU5区具有抑制其下游基因表达的功能,该区在异源启动子(BIV LTR)之后使其下游基因表达量降低.计算机分析结果表明,BFV RU5区的负调控作用可能是因为该区mRNA具有稳定的二级结构,从而抑制其下游基因的表达(转录或转录后水平调控);Borf-2在体外实验中不参与BFV LTR起始的基因表达;Bet等对Borf-1的激活功能具有反式显性抑制作用(trans-dominant inhibitory effect).这些结果表明:BFV Tas作用机理与慢病毒Tat和致瘤病毒Tax均不相同.
作者：刘佳建；王世珍；张莉；乔文涛；陈启民；耿运琪 刊期： 2000年第02期
血管内皮生长因子(VEGF)受体Flt－1胞外区具有7个免疫球蛋白样袢(Ig－like loop).细胞外实验研究结果表明,配体结合域位于其氨基端3个袢内[1],其中第2个袢在Flt－1与其配体的结合中可能起关键作用[2].
作者：马骊；张智清；曾革非；周小明；陈爱君；姚立红；王小宁 刊期： 2000年第02期
庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)属黄病毒科,为单股正链RNA病毒,是新近发现的疑似引起人类肝炎的病原体[1,2],但对其致病性目前尚存在争议.GBV-C/HGV体外培养困难,不感染常规实验动物,但可感染人类和灵长类动物如黑猩猩、猴等[3-5].随着分子生物学技术的进展,一些正链RNA病毒如甲肝病毒、脊髓灰质炎病毒、登革病毒、丙型肝炎病毒等的全长cDNA克隆构建成功[6-12],这些全长cDNA克隆及其转录体被证明在细胞及动物模型中具有感染性,为我们研究GBV-C/HGV提供了一条新的可行的途径.为此我们在构建GBV-C/HGV基因组全长cDNA克隆的基础上[13],体外转录制备了RNA并直接注射到恒河猴肝脏内,进行了感染实验研究.现将结果报告如下.
作者：朱分禄；戚中田；朱诗应；任浩；邵力 刊期： 2000年第02期
90年代以来,对虾病毒病害成为制约世界对虾养殖业发展的重要因素,包括中国在内的亚洲所有主要的对虾养殖国家和地区如泰国、日本、中国台湾、印尼等养殖的对虾均受到白斑病侵袭,造成巨大经济损失,其病原被认为是一组相关的白斑杆状病毒(white spot baculovirus，WSBV)[1].中国大陆沿海对虾养殖区自1993年开始全面暴发白斑病,已证实中国对虾非包涵体型杆状病毒(Penaeus chinensis non－occluded baculovirus,PcNOBV)是造成中国大陆养殖对虾暴发性流行病的主要病原[2],病毒形态学及多聚酶链式反(PCR)技术研究资料表明,PcNOBV属WSBV的一种[2,3].
作者：徐洪涛；朴春爱；王雷；杨朵；屈建国；张宝云；候云德 刊期： 2000年第02期
在新西兰,每年因铜绿蝇(Lucilia cuprina)危害而导致该国绵羊养殖业的经济损失达4000万新币.研究铜绿蝇蜕皮激素(Lc ecdysteroid,LcEc)及其作用机制以破坏该种昆虫的正常发育和繁殖已引起重视.铜绿蝇蜕皮激素受体(LcEc receptor,LcEcR)基因cDNA为2.8kb,编码由757个氨基酸组成的蛋白质,具有带两个锌指结构的DNA结合域和甾类激素受体家族特有的配体结合域.
作者：代小江；Huang Q Sue；庞义 刊期： 2000年第02期
香蕉束顶病(banana bunchy top disease,BBTD)是香蕉生产上重要的病害之一,它威胁着世界约1/4香蕉产区的生产[1].到1998年7月,世界上报道发生该病害的国家和地区达20多个,遍及亚洲、南太平洋地区和少数非洲国家.
作者：何自福；李华平；肖火根；范怀忠 刊期： 2000年第02期
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)为单股正链RNA病毒,其基因组长约9.5kb,5'端和3'端各有一个长约345bp和60bp的非编码区,编码区含一个大开放读码框架,编码3 010aa～3 033aa残基的多蛋白前体.
作者：范涛；谢尧；梁庆华；陶其敏 刊期： 2000年第02期
以中国漳州地区感染BBTV的香蕉组织总DNA为模板,根据我国台湾地区BBTV分离物基因组I序列,设计并合成了一对引物,通过PCR扩增出约500bp的片段.利用pBluescriptⅡSK T-载体获得此片段的克隆,经测序表明为BBTV组分Ⅰ的部分序列.由已测知的BBTV基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物,以我国漳州的感染BBTV香蕉组织总DNA为模板,通过PCR扩增出约1.1kb的片段.利用pBluescriptⅡ SK T-载体获得1.1kb片段的克隆.测序结果表明漳州BBTV基因组Ⅰ含有1 104个核苷酸,其序列与澳大利亚及我国台湾地区的BBTV基因组Ⅰ核苷酸同源性分别为89%、96%,并对此序列的功能进行了推测及讨论.
作者：腊平；蔡文启；方荣祥 刊期： 2000年第02期
在大肠杆菌中表达了马铃薯Y病毒中国分离物(PVY-C)复制酶NIb基因,并制备了其抗血清.利用PCR定点突变方法使NIb基因移码-1位,构建了移码-1位NIb基因(UN)的植物表达载体.通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens LBA4404)介导转化烟草NC89,获得51株再生植株.对再生植株的分子检测结果表明,转基因烟草中检测到UN基因相应的RNA转录产物,推测该基因已经整合到烟草染色体中.攻毒试验发现转UN基因烟草(T0代)对两个PVY株系和烟草蚀纹病毒的抗病性与转全长、缺失5′端381bpNIb基因烟草(T2代)的相同.Western印迹试验结果表明,在本试验检测水平上,在转基因T2代烟草中未检测到NIb基因的表达产物.实验结果支持PVY-C复制酶NIb基因在转录水平上介导相对广谱抗病性的假说.
作者：鲁瑞芳；吕鹏飞；彭学贤 刊期： 2000年第02期
棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)能够在棉铃虫蛹卵巢细胞素SFE-HA-8212中有效复制,引起细胞解体死亡.通过培养HaSNPV感染后残存的细胞,建立了一株持续感染的细胞.该细胞在传代培养的6个月时间内(约25次传代),持续地释放有感染力的病毒粒子,培养液中病毒的效价多在104 TCID50/ml上下,同时有一小部分细胞(1%左右)中形成多角体,释放病毒的细胞占总细胞数的1.0%～3.8%.持续感染细胞的生长特性与原细胞系相比有一定的变化,对HaSNPV感染的敏感性有所降低.另一方面,持续感染细胞所释放的病毒对SFE-HA-8212及棉铃虫幼虫的感染力也有所降低.讨论了持续感染的可能机制.
作者：钟江；乐云仙；苏德明 刊期： 2000年第02期
犬瘟热是我国养犬业、毛皮动物饲养业及野生动物保护业的头号大敌.鉴于本病目前尚无特效的治疗药物和方法,疫苗接种是唯一有效可行的防治措施.但是疫苗毒株是否适用于所有动物?如何解释实际生产中出现的免疫失败现象?我国现用疫苗毒株本身的背景怎样?
作者：李金中；何洪彬；夏咸柱；殷震；徐长春；金宁一 刊期： 2000年第02期
