1 概述口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)属小RNA病毒科FMDV属,根据动物交叉保护和血清学试验分为O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asial 7个血清型,型间无交叉反应.每型又根据抗原亲缘关系分为不同亚型.小RNA病毒科包括鼻病毒、肠道病毒、甲肝病毒、心病毒和口蹄疫病毒5个属.
作者：张显升；刘在新；赵启祖；谢庆阁 刊期： 2001年第04期
香蕉是重要的经济作物和粮食作物,广泛种植于热带、亚热带地区.在我国的广东、福建、海南、广西和云南等地均有大面积种植,产销量一直居南方四大水果之冠.然而,近年来,许多病毒病害成为香蕉生产发展的主要限制因素,主要包括香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)、香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)、香蕉苞片花叶病毒(banana bract mosaic virus,BBrMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)等引起的病害.
作者：费继锋；肖火根；李华平；范怀忠 刊期： 2001年第04期
实验研究发现,萝卜提取物在小鼠体内有抗病毒和抗肿瘤作用.卫青萝卜提取物对受流行性乙型脑炎病毒感染的小鼠有很强的保护作用;萝卜提取物在小鼠体内可抑制网状细胞肉瘤实体瘤的生长,并且可增强自然杀伤细胞的活性.
作者：许兆祥；李蕾琴 刊期： 2001年第04期
对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)的胞嘧啶5-甲基转移酶(MTase)基因的结构及序列进行了分析.序列比较分析表明,ISKNV MTase编码区全长684bp,编码长227个氨基酸的蛋白质,推测分子量为25855D.与一些细菌的MTase比较,ISKNV MTase也含有负责转移甲基的4个保守区,但缺乏识别靶序列的保守区.比较ISKNV与其它6种脊椎动物虹彩病毒的MTase序列并建立系统树,ISKNV显著不同于蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属.7种脊椎动物虹彩病毒MTase具有高度保守区,可以此设计引物用PCR方法鉴定脊椎动物虹彩病毒.
作者：何华虹；邓敏；何建国；翁少萍 刊期： 2001年第04期
XJ-90260病毒是从新疆乌苏县境内采集的赫坎按蚊中分离到的一株病毒,病毒的鉴定结果显示:XJ-90260病毒可引起BHK-21细胞病变,表现为圆缩,脱落;可引起Vero细胞病变,表现为圆缩,破碎,脱落;可以在C6/36细胞中增殖,但不引起细胞病变.对3日龄小白鼠2～3天致死,对3周龄小白鼠3～4天致死.该病毒株对酸、乙醚敏感,抵抗5-氟脱氧尿苷.病毒与甲病毒组特异性免疫腹水起反应,与乙型脑炎病毒及布尼亚病毒组特异性免疫腹水不反应.进一步的分子生物学鉴定表明,该毒株基因组3′非编码区(ntranslated region,UTR)核苷酸序列具有典型的西方马脑炎病毒特征,与标准西方马脑炎病毒(California株)的同源性为99%.结果证明:我国新疆分离的XJ-90260病毒为西方马脑炎病毒.这是我国有关西方马脑炎病毒的首次报导,有重要的流行病学意义.我国9省区,886份血清的流行病学调查显示,该病毒抗体阳性血清24份,阳性率为2.71%.其中新疆(8/157)、河南(6/76)、甘肃(5/94)三省区抗体阳性数较多,占总阳性数的79.2%(19/24).
作者：吕新军；付士红；杨益良；何海怀；张桂筠；陈相伟；梁国栋 刊期： 2001年第04期
流行性感冒(流感)病毒的M2蛋白是其保护性抗原之一,在几乎所有甲型流感病毒中高度保守,因此可以用来研究具有交叉保护能力的流感疫苗.然而M2分子在病毒颗粒中含量非常少,用从病毒中纯化的方法很难获得足够的免疫原.在原核表达时发现,M2蛋白对宿主菌具有很强的毒性作用,导致其死亡,因此很难获得高表达.在本研究中,采用RT-PCR方法从病毒感染的MDCK细胞中克隆了A1/PR/8/34毒株的M2基因,然后通过基因工程手段缺失了M2蛋白的跨膜区26～55位氨基酸的编码序列,将其克隆到pET-32a中,与硫氧还蛋白融合,在大肠杆菌中获得了高效表达,并且表达产物以可溶形式存在,不形成包涵体.利用硫酸铵盐析结合金属离子鏊和柱亲和层析的方法纯化了表达的融合蛋白.免疫荧光实验表明,融合蛋白免疫小鼠后产生的抗血清能够与流感病毒感染的细胞发生特异性的结合,证明表达产物具有流感病毒M2蛋白的抗原性.
作者：张立国；曾革非；董婕；陈爱君；姚立红；郭元吉；张智清 刊期： 2001年第04期
将中和性流行性感冒(流感)病毒基因工程抗体IV-2、IV-6的轻链和重链Fd段基因,分别克隆入全抗体表达载体pAC-L-Fc,构建成杆状病毒表达载体pAC-L-Fc-Ⅳ-2和pAC-L-Fc-Ⅳ-6,转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现抗体的分泌型表达,表达产物进行亲和层析分离纯化.SDS-PAGE电泳和Western blot法证实有完整免疫球蛋白的表达,免疫印迹法证实它们能与流感病毒血凝素蛋白特异性结合.经间接竞争性抑制ELISA法测定,抗体与流感病毒抗原结合的解离常数KD值分别为2.5×10-9M和3.0×10-9M.流感病毒基因工程全抗体经在昆虫细胞中的表达、纯化和抗体特性鉴定,获得了两株纯化的全抗体,可用于以后的动物模型呼吸道粘膜被动免疫抗感染的研究.
作者：杨贵宾；吴淑华；梁米芳；赵小东；王艳；侯云德 刊期： 2001年第04期
根据GenBank上发表的IBV S2基因序列,自行设计了两对引物,分别扩增SD/97/02株S2基因的上游1100bp部分和下游的900bp部分,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列.将此两段分别克隆入pGEM T-easy载体,测序后将序列用分析软件DNASTAR和网上的BLAST软件进行分析,结果表明,S2基因比S1基因相对来说更保守,位于氨基酸第560～600位很可能是与囊膜锚着的部位,而S2与S1的交界处以HRRRR为特征,这不同于常规的RRF/SRR.
作者：潘杰彦；陈德胜；戴亚斌；陈溥言 刊期： 2001年第04期
用电穿孔转染法,建立稳定表达野生型LMP1及其不同突变体的鼻咽癌细胞系,并以这些细胞系为材料,用MTT法检测增殖期活细胞,观察LMP1及其不同的结构域对鼻咽癌细胞生长的影响.结果得到了LMP1及其三种突变体、空白载体表达的鼻咽癌细胞系:HNE2-LMP1(野生型)、HNE2-LMP1△185-351(CTAR1缺失型)、HNE2-LMP1(1-231)(CTAR2缺失型)、HNE2-LMP1(1-185)(羧基端胞浆区缺失型)、HNE2-pSG5(空载体型).进一步证实HNE2-LMP1、HNE2-LMP1(1-231)、HNE2-LMP1 △185-351平均吸光度(A)比值高于对照组HNE2-pSG5及HNE2(P＜0.01).这提示:EB病毒LMP1及其LMP1(1-231)和LMP1△185-351在体外明显促进HNE2细胞增殖.结果表明EB病毒LMP1可能在鼻咽癌中发挥着重要的作用.
作者：王承兴；邓锡云；李晓艳；顾焕华；易薇；翁新宪；夏林庆；曹亚 刊期： 2001年第04期
研究了肌注腺伴随病毒(adeno-associated virus,AAV)介导凝血Ⅸ因子基因治疗血友病B的安全性.首先采用PCR、反转录PCR(RT-PCR)分别检测rHSV/AAV包装系统产生的重组腺伴随病毒AAV-mFⅨ,和病毒感染细胞后所得上清再次感染的BHK细胞中的HSV(herpes simplex virus,HSV)和野生型AAV.同时观察HSV引起的细胞毒作用.结果表明:纯化后的AA-mFⅨ中HSV≤1个病毒基因组(viral genome,v.g.)/108个病毒基因组AAV-mFⅨ,且不具备感染活性;没有野生型AAV.其次,采用PCR、RT-PCR、免疫组化等方法检测了AAV-mFⅨ在体内的分布和表达时间;通过抗AAV的抗体检测和病理切片等方法观察了AAV-mFⅨ在体内引起的免疫反应和病理变化.结果表明:AAV-mFⅨ仅分布在注射点肌肉组织内,表达可持续200天以上;抗体水平低,各主要脏器均未发生明显的病理变化.AAV介导的凝血因子Ⅸ系统是安全的.
作者：邹蓓艳；陈立；伍志坚；吴小兵；卢大儒；邱信芳；薛京伦 刊期： 2001年第04期
为研究EB病毒在恶性T细胞淋巴瘤发生中的作用,将EB病毒感染的人胚胸腺细胞移植于Scid鼠皮下,于移植后第3日起在移植处对侧皮下注射TPA50 ng/只,每周1次.于移植后第4周起,移植处皮下有结节状隆起形成,并逐渐增大.于6～15周内行病理学检查和免疫组织化学染色,证实为T细胞淋巴瘤8例.其中实验组胸腺细胞+EBV的成瘤率为25%(1/4),胸腺细胞+EBV+TPA组的成瘤率为53.8%(7/13),对照组胸腺细胞+TPA的成瘤率为0(0/5).PCR和原位杂交在诱导肿瘤中可检测到EB病毒的基因EBERs、LMP1和BARF1,并有病毒基因LMP1蛋白编码产物的表达.EB病毒可感染人胚胸腺细胞,并使其发生恶性转化,EB病毒可能在恶性T细胞淋巴瘤的发生中起病因作用.于移植后第4周起,移植处皮下有结节状隆起形成,并逐渐增大.于6～15周内行病理学检查和免疫组织化学染色,证实为T细胞淋巴瘤8例.其中实验组胸腺细胞+EBV的成瘤率为25%(1/4),胸腺细胞+EBV+TPA组的成瘤率为53.8%(7/13),对照组胸腺细胞+TPA的成瘤率为0(0/5).PCR和原位杂交在诱导肿瘤中可检测到EB病毒的基因EBERsLMP1和BARF1,并有病毒基因LMP1蛋白编码产物的表达.EB病毒可感染人胚胸腺细胞,并使其发生恶性转化,EB病毒可能在恶性T细胞淋巴瘤的发生中起病因作用.
作者：黄燕萍；郭秀婵；何祖根；赵健；曾毅 刊期： 2001年第04期
将传染性法氏囊病病毒(IBDV)ZJ2000株的多聚蛋白(VP2/VP4/VP3)基因插入pCI质粒的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pCI-VP2/VP4/VP3,在Lipofectin介导下转染Vero细胞进行了多聚蛋白的瞬时表达.以免疫刺激复合物(ISCOM)为佐剂制备DNA疫苗,进行不同免疫剂量间、不同免疫途径间、一次免疫和二次免疫间的效果对比试验.结果表明:以肌内和皮内联合免疫法效果好,而口服和点眼等途径未能诱导足够的免疫反应;大于200μg的剂量DNA疫苗才能产生良好的免疫力;二次免疫的效果明显优于一次免疫.与常规的弱毒疫苗B87和D78相比,DNA疫苗产生中和抗体的潜伏期长、效价相对较低,对强毒攻击的保护率相当.本试验还证实,免疫刺激复合物具有明显提高DNA疫苗免疫效果的作用.DNA疫苗能诱导产生保护性反应,为今后IBD疫苗的研究开创了一条新的途径.
作者：李建荣；于涟；黄耀伟；梁雪芽；孟松树；谢荣辉 刊期： 2001年第04期
测定1972～2000年间在中国分离并保存的乙型流行性感冒(流感)病毒一些毒株的HA1区核苷酸序列,结合GenBank中其它毒株的相关序列以及流行病学资料进行分析,结果提示,当前在世界上流行的乙型流感病毒两大谱系起源于20世纪70年代中期,而不是以前推测的60年代末,并且其中一个谱系起源于中国.结果还提示,乙型流感病毒的演变同时受到很强的正选择与负选择的作用,而以前人们认为选择对乙型流感病毒的演变作用甚微.还修正了乙型流感病毒变异速率的计算方法.
作者：陈继明；郭元吉；吴昆昱；郭俊峰 刊期： 2001年第04期
将HIV-1中国株42(B亚型)的gag基因及gag与gp120 V3区的嵌合基因gag V3插入腺病毒伴随病毒(AAV)表达载体pSNAV质粒中,构建重组质粒pSNAV-gag及pSNAV-gagV3;采用脂质体转染的方法分别将重组质粒转入BHK细胞,G418筛选得到转入重组质粒并能表达外源基因的细胞系,命名为BHK-gag及BHK-gagV3.用具有重组腺病毒伴随病毒(rAAV)包装功能的一种重组单纯疱疹病毒(rHSV)分别感染这两株细胞系,纯化后得到rAAV,电镜观察可见到大量实心病毒颗粒,核酸杂交检测重组病毒滴度达到1012病毒颗粒/ml,重组病毒感染293细胞,ELISA检测有gag及gagV3基因的表达.用重组病毒免疫Balb/C小鼠,检测抗体及细胞免疫水平,证明重组病毒可以在小鼠体内诱导产生细胞及体液免疫.
作者：刘雁征；吴小兵；周玲；伍志坚；侯云德；曾毅 刊期： 2001年第04期
对重组乙型肝炎(乙肝)病毒前S1抗原(1-42)及核心抗原(1-144)表达的融合蛋白CS1进行了免疫原性的研究分析,以便为探索HBV治疗性疫苗的研制提供实验依据.用脂质体转染的方法转染小鼠肥大细胞瘤细胞系P815,用乳酸脱氢酶的方法检测了该融合蛋白诱导小鼠的细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,用ELISA方法测定了小鼠的体液免疫反应.结果表明,用脂质体转染的方法建立了表达乙肝核心和前S1抗原的细胞系(P99-815),该融合蛋白诱导出小鼠的细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,小鼠的体液免疫反应也较好.这为今后进一步探索慢性乙肝治疗性疫苗奠定了必要的基础.
作者：赵阳青；詹美云 刊期： 2001年第04期
近年,由虹彩病毒引起的爬行动物、两栖动物和鱼类疾病已在美洲、欧洲、亚洲和澳洲等地普遍流行[1].
作者：张奇亚；肖枫；李正秋；桂建芳 刊期： 2001年第04期
为澄清浙江省豇豆病毒病病原及其分类,采用马铃薯Y病毒属通用引物Sprimer扩增了浙江豇豆线状病毒基因组3′-末端序列.同时又根据已知CMV RNA3序列设计引物pCMV-44-63/1200-1181,扩增了混合侵染的CMV-ZJ运动蛋白基因全序列.外壳蛋白氨基酸序列分析表明,病样中仅存在一种线状病毒(CV-ZJ),该病毒与一泰国豇豆蚜传花叶病毒(CABMV)具有高的同源性(98.6%),与花生条纹病毒(PStV)、石斛花叶病毒(DeMV)、赤豆花叶病毒(AZMV)、黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)和菜豆普通花叶病毒(BCMV)分离物间的同源性为88.5%～94.4%,而与其它CABMV分离物的同源性均低于70%.进化树分析表明,PStV、AZMV、DeMV、BlCMV和BCMV为同种异名,应统称为BCMV,而CABMV为另一种病毒;CV-ZJ和泰国CABMV分离物应分类为BCMV豇豆株系.CMV-ZJ的运动蛋白序列分析表明,该分离物属于CMV亚组Ⅰ,与其它分离物氨基酸序列同源性为93.1%～97.8%.
作者：陈炯；郑红英；程晔；陈剑平 刊期： 2001年第04期
利用RT-PCR方法克隆获得马铃薯Y病毒烟草叶脉坏死株系(PVYN)的可翻译和不可翻译外壳蛋白(CP)基因,并分别插入pROKⅡ质粒中获得重组双元表达载体.通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的基因转化方法,将可翻译和不可翻译的PVYN-CP基因分别导入烟草栽培品种NC89叶片组织中,得到抗卡那霉素的再生植株.对所得到的抗卡那霉素的再生苗进行PCR检测表明,被导入可翻译和不可翻译CP基因的植株分别占卡那霉素抗性植株的95%和98%.攻毒实验表明,两种类型的转基因烟草对PVYN的抗病性具有相似性,其表现型为:免疫、抗病和感病.免疫型转基因植株的抗病性不受接种物类型及其剂量的影响.Southern印迹杂交结果显示,目的基因已经整合到烟草基因组中.Northern印迹杂交证明,两种类型的CP基因都已在RNA水平上得到了表达,但细胞内RNA的积累量与转基因植株的抗病强度成负相关.Western印迹杂交表明,在表达不可翻译PVYN-CP基因的转基因植株内未检测到CP蛋白,而在导入可翻译的PVYN-CP基因的植株内检测到了CP蛋白,且CP蛋白含量与抗病性不存在正相关.本研究结果证明,表达可翻译与不可翻译PVYN-CP基因的转基因烟草对PVYN的抗病性均为RNA介导的抗病性.
作者：郭兴启；温孚江；宋云枝；孟祥兵；吕士恩；郑成超；朱常香 刊期： 2001年第04期
