自2004年4月18日起至6月末,江苏省东台市发生以发热、咽部充血、扁桃体肿大为临床表现的原因不明的疫情暴发,发病人群以中小学生、幼儿为主,地域以许河镇、新街镇以及临近乡镇为主.疫情涉及东台市9个镇,合计报告709例,分布在75个学校,240个班级.暴发的特点为传染性强,短期内出现大量的患者,发病有班级聚集性特点,未发现成人感染.临床表现以发烧(100%)、咽部充血(91.40%)、扁桃体肿大(60.22%)、咽痛(50.00%)为主;X线检查可发现肺纹理增强(90.3%).用Hep-2细胞从患儿20份咽拭子标本中分离到12株病毒,经PCR扩增腺病毒L3部分基因及其PCR产物的序列测定和分析,证实这12株病毒为腺病毒3型;对28份咽拭子标本直接进行DNA提取和PCR扩增,有17份标本PCR扩增L3部分基因呈阳性,经序列测定和分析,也为腺病毒3型.这29个阳性标本L3基因的1 446个核苷酸的序列与GenBank上所发表的腺病毒3型序列同源性高达99.5%.双份血IgG检测:对江苏省采集10份患儿急性期和恢复期双份血清,以从患儿咽拭子分离到的腺病毒3型作为抗原,进行病毒抗体测定,6份患儿的双份血清腺病毒总IgG滴度呈4倍以上增高.患儿急性期血IgA检测:对暴发疫情34例患儿急性期血清(发病时间为1～3天)进行腺病毒IgA抗体测定,结果有9份标本为阳性,1份标本为可疑阳性,阳性率为26.47%.IgA阳性率低可能与血清采集时间过早有关,机体还未全部产生IgA.另外,还对江苏省送检的从患儿血培养基培养的细菌毒株进行了鉴定,对其16S rRNA基因进行了基因扩增及序列分析,序列测定和分析提示为A组M3型化脓性链球菌.实验研究结果并结合此次疫情的流行病学和患儿的临床表现,证实腺病毒3型是引起此次儿童不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病原体,部分病例伴有原发或继发化脓性链球菌感染.
作者：许文波；崔爱利；史智扬；汪华；张勇；唐震；刘和平；李显；朱贞；唐浏英 刊期： 2005年第05期
为研究福建省2000～2003年急性散发性戊型肝炎病毒(HEV)分离株的分子流行病学特征,采用RT-PCR方法扩增HEVORF2的基因片段,经纯化、克隆、测序后,对其序列用Neighbor-Joining法和Bootstrap法进行基因进化分析.从158例急性散发性戊型肝炎的血清标本中扩增出72份HEV RNA,经基因进化树分析,这72株HEV均属于HEV基因Ⅳ型,且被明显地分为A、B、C、D共4个组群.A群的同源性高,群内同源性为93.3%～100%;D群的同源性低,群内同源性在86.6%～100%之间.A群和B群流行株所占比例没有差异;C群流行株所占比例由2002年的7.1%逐渐增加到2003年的26.3%(x2=10.553,P=0.014);D群则由85.7%逐渐减少到44.7%(x2=8.136,P=0.043).引起福建地区急性散发性戊型肝炎流行的HEV均属于HEV基因Ⅳ型,基因型内存在不同的组群,其中D群的变异较大.
作者：胡盈莹；黄兢姚；郑玲；柳丽娟；江家骥 刊期： 2005年第05期
为了解北京地区人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)的遗传变异和分子流行病学特征,首次对北京地区2003～2004年63株HRSV分离株进行了G基因3′末端的第2个高度变异区的序列测定,并进行了基因分型和遗传变异的分析.使用不同的型特异性引物对GPA-F1和GPB-F1分别扩增A、B血清型HRSVG基因3′末端核苷酸序列,特异性扩增产物和随后的序列测定结果均显示,北京地区2003～2004年63株HRSV毒株中,96.8%(61/63)为A血清型,3.2%(2/63)为B血清型,说明北京地区在2003～2004年间存在HRSV A、B血清型共循环,但以A血清型病毒为主.分别对北京流行的A和B血清型病毒进行了基因亲缘性关系分析,结果提示,61株北京A血清型分离株全部为GA2基因型;2株B血清型分离株为GB3基因型.由此看来,GA2基因型是北京地区2003～2004年的优势流行基因型.北京61株GA2分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别在87.8%～100%和77.9%～100%之间;2株B血清型分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为94.7%和88.1%.这说明在2003年和2004年有很多个不同的GA2基因型HRSV毒株在北京地区共循环,北京地区的HRSV流行存在着许多由不同病毒株引起的传播链.B血清型分离株Beijing04-11于G基因3′末端含有一个60个碱基的重复序列,这是HRSV多聚酶易于重复复制限定序列的一个极端的例子,有可能是HRSV逃逸免疫压力而不断进化的一种方式.该研究首次对北京地区2003年和2004年流行的HRSV进行了基因分型和遗传变异的研究,对于了解北京HRSV流行株的基因特征具有重要意义,可以为北京乃至中国疫苗株的选择提供参考依据,从而指导HRSV的免疫预防控制.
作者：张燕；申昆玲；许文波；谢正德；芦起；刘亚谊；刘春艳；梁国栋 刊期： 2005年第05期
用ELISA方法测定95例SARS患者急性期、恢复期血清细胞因子水平,用流式细胞仪检测该组患者急性期、恢复期淋巴细胞亚群,并分析细胞因子水平和淋巴细胞亚群变化的关系.结果发现,IL-10和TGF-β在观察期(急性期和恢复期)持续升高,急性期CD4+和CD8+T细胞显著减少,恢复期患者外周血CD8+记忆T细胞减少36.78%.IL-10和TGF-β升高与淋巴细胞变化具有统计学相关.结果提示,SARS病毒感染抑制宿主的细胞免疫功能,引起急性期CD4+和CD8+T细胞显著降低和恢复期的免疫记忆细胞减少.而IL-10和TGF-β过表达可能在SARS免疫病理中起重要作用.
作者：黄嘉凌；卫菁；段朝晖；闽军；黄健；罗小红；吴立志；刘然义；黄必军；李焱；曾益新；黄文林 刊期： 2005年第05期
为了探讨人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒scFv-Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体(scFv抗体)基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv-FcHA16融合抗体的分泌表达,并对表达产物进行了纯化.同时对表达产物的生物学特性进行了一系列鉴定.表达的pPiscFv-FcHA16融合抗体为具有不同糖基化形式的同源二聚体,与相应的CHO细胞表达的IgG抗体相比,pPiscFv-FcHA16融合抗体仍保持很好的抗原结合活性,以及与中和性鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的竞争抑制能力.同时也保持了对甲肝病毒的体外中和活性.这些结果表明,在酵母中表达的单链可变区(scFv)与IgG1Fc区的融合抗体具有很好的生物学活性,有希望用做体外诊断,用纯化相应的抗原,或者可能用于体内预防与治疗.
作者：曹经瑗；De Jaeger Geert；李川；孟庆玲；Terryn Nancy；Depicker Ann；毕胜利；李德新；梁米芳 刊期： 2005年第05期
猪呼吸道冠状病毒(PRCV)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的自然缺失株,二者主要区别在于PRCV的S基因缺失B、C两个主要抗原位点.因此,利用RT-PCR技术分别扩增TGEV Purdue毒株S基因近N端的S1和S1-2两个片段,将之克隆到pGEX-KG原核表达载体的GST基因下游,经表达,获得大小约52kD和108kD两种融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的45%和35%,主要以包涵体的形式存在.利用TGEV和PRCV两种阳性血清进行Western blot检测,当第一抗体为TGEV阳性血清时,可检测到52kD和108kD两条带;而当第一抗体为PRCV阳性血清时,只检测到108kD一条带.结果表明这两种融合蛋白具有良好的反应原性,且可用于TGEV和PRCV的鉴别诊断,为进一步研制开发TGEV和PRCV的鉴别诊断试剂盒奠定了基础.
作者：杨乐乐；郭福生；孙淑芳；吴斌；陈焕春 刊期： 2005年第05期
根据基因库中对虾桃拉综合征病毒(TSV)、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(I-HHNV)的基因序列,分别设计了三对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时检测鉴别TSV、WSSV和IHHNV的多重RT-PCR.该技术对同一样品中的TSV RNA、WSSV DNA和IHHNV DNA模板进行扩增,结果均同时得到3条大小与实验设计相符的231bp(TSV)、593bp(WSSV)和356bp(IHHNV)的特异性多重RT-PCR扩增带,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性.敏感性试验结果表明,该技术低能检测到10pg TSV RNA、100pg WSSV DNA和100pg IHHNV DNA.临床检测试验结果表明,该技术对TSV、WSSV和IHHNV的检出率明显高于传统的临床症状观察和组织病理学检查,提示该技术适用于这三种病毒的临床快速检测和鉴别诊断.
作者：谢芝勋；庞耀珊；邓显文；唐小飞；刘加波 刊期： 2005年第05期
根据GenBank中发表的山羊关节炎脑炎病毒CAEV-CO株(caprine arthritis encephalitis virus-CO,CAEV-CO)的全基因组序列(序列号:NC-001463),设计合成了7对引物,对CAEV甘肃株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序.结果表明,CAEV-甘肃株基因组全长为9 186nt.与国际标准毒株CAEV-CO株相比,在编码区有12个碱基的缺失,二者的核苷酸同源性为91.0%;在非编码区有27个核苷酸的插入,核苷酸同源性为97.0%.gag、pol、蛋白Q、tat、env基因编码的氨基酸同源性分别为94.6%、94.7%、87.9%、94.7%和91.5%.
作者：曲娟娟；郭巍；赵立平；沈荣显；相文华 刊期： 2005年第05期
用杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒6型(human papillomavirus type 6,HPV6)主要衣壳蛋白(major capsid protein,L1)作为抗原,对尖锐湿疣(condyloma acuminata,CA)患者抗体进行检测.采用昆虫杆状病毒系统表达HPV6 L1蛋白,通过镍柱亲和层析法获得纯化抗原;以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测30例CA、20例献血员和10例儿童血清中的HPV6 L1 IgG抗体.感染重组杆状病毒的昆虫细胞经SDS-PAGE和Western blot检测,在大约55kD处有明显的外源蛋白表达条带.ELISA结果显示,CA组的血清阳性率为66.7%(20/30),献血员组的阳性率为15%(3/20),两组之间有显著性差异(P＜0.05).22例HPV6型感染的CA患者有15例血清阳性(68.2%),6例HPV11型CA患者4例阳性(66.7%),1例混合感染者为阳性,1例HPV16型患者为阴性.女性CA患者的血清抗体阳性率高于男性(P=0.0052).本研究建立的ELISA体系具有敏感性和针对低危型HPV感染的特异性.这不仅对于HPV血清流行病学研究是有价值的,而且对于临床诊断HPV感染可能具有一定的应用价值.
作者：唐旭；张瑾；李远宏；周伟；赵玉铭；董小平；陈洪铎 刊期： 2005年第05期
使用2×107pFU乙脑病毒野毒株GSS抗原preM-E-NS1-NS2a的非复制型重组痘苗病毒NTV-JEV免疫3周龄BALB/c小鼠,小鼠体内乙脑病毒特异性抗体滴度1:71,IgG2a/IgG1为1.5,中和抗体滴度为1:8,免疫组小鼠产生特异性补体介导的细胞杀伤作用.以10 LD50乙脑P3株病毒对小鼠进行了脑内攻击,NTV-JEV免疫组小鼠存活率为100%,与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2免疫组存活率相同.100 LD50 P3株病毒攻击后NTV-JEV免疫组存活率28.6%,与SA14-14-2组免疫效果无明显差别.存活小鼠体内乙脑病毒特异性抗体升高为1:179,IgG2a/IgG1比值为1.9,中和抗体大于1:16.以30 LD50 GSS株病毒进行攻击后,NTV-JEV免疫组和SA14-14-2组保护率均为8.3%.上述结果表明,NTV-JEV与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2株具有相近的保护力,NTV-JEV不仅可以保护小鼠抵抗同株病毒GSS的攻击,而且可以抵抗异株病毒P3的攻击.
作者：王文玲；陆振华；辛伟；李仁清；张相民；邓瑶；陆柔剑；梁国栋；阮力 刊期： 2005年第05期
人类朊病毒病中约10%～15%具有家族遗传特性,其中插入或缺失突变多发生于PrP蛋白N末端的八肽重复区域.运用PCR成功地构建并表达了含不同八肽重复数目的PrP蛋白,并观察八肽重复数目的增加对PrP与Cu2+等二价离子以及tau蛋白的相互作用的影响.实验结果显示:各种纯化后的PrP蛋白对常规浓度PK消化是敏感的,而与Cu2+共同孵育可使PrP蛋白的PK抗性增强;八肽重复序列的数目及Cu2+的浓度决定了PK抗性的出现和强弱.另外,Mn2+可诱导产生与Cu2+相似的结果,但其诱导效应似乎低于Cu2+,而Zn2+对PrP蛋白的PK抗性无影响.GST-tau包被的ELISA检测证实,重组的PrP呈现出明显的tau蛋白结合能力,并且与八肽重复序列的数量相关,重复序列数量越多,结合能力越强.这些结果提示,Cu2+诱导产生的PrP蛋白PK抗性是通过八肽重复序列区域产生的,并且直接与重复序列的数量相关.另外,PrP蛋白八肽重复序列的存在和数量直接影响PrP与tau蛋白的结合效应.除了八肽区域外,PrP蛋白其它区域似乎也具有一定的tau蛋白结合能力.
作者：高建梅；万言珍；韩俊；王小凡；陈岚；聂凯；周伟；董小平 刊期： 2005年第05期
应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒(HCV)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV 1～3 011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中.通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中.再利用脂质体介导转染Huh7细胞,30h后收获细胞,经Western blot验证,证实HCV的NS5A基因在Huh7细胞中已经获得表达.在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Huh7细胞与pcDNA3.1(-)转染的细胞在转染30h后被收集起来,乙醇固定,PI染色后利用流式细胞仪检测细胞周期变化.G0/G1期由60.6%下降到49.7%,S期由23.9%上升到32.7%,而转染pcDNA3.1(-)细胞的细胞周期与正常的Huh7细胞则差别不大.从而证明HCV NS5A蛋白对Huh7细胞周期具有调节作用.
作者：杨小骏；叶林柏；郜金荣；刘静；郑义；廖庆姣；佘应龙；吴正辉；叶力 刊期： 2005年第05期
肿瘤坏死因子(TNFα)是一种多功能细胞因子,目前已知许多病理性反应与之有关,如类风湿性关节炎、脓毒性休克、慢性心衰等[1].TNF的生物学功能是通过结合到细胞表面相应的受体(TNFR)来实现的,因此在炎症区引入可溶性TNF受体或TNF抗体,与膜上受体竞争性结合TNF,可以抑制TNF介导的生物学活性[2].在临床上,Enbrel、Infliximab和efalizumab等TNF拮抗剂,对类风湿性关节炎、节段性肠炎具有良好的治疗效果[3-5].
作者：徐春晓；喻宏；严馨蕊；黄国锦；姚立红；陈爱珺；张智清 刊期： 2005年第05期
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是真核生物体内由双链RNA(double-stranded RNA)介导的同源RNA降解现象.在细胞内,长的dsRNA被Dicer酶切割成21～26核苷酸(nucleotide,nt)的小干扰RNA(small interfering RNA或short interfering RNA,siRNA);siRNA与多种蛋白结合后形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC),同时解链;有活性的RISC可在siRNA的指引下与互补的转录物结合,并导致RNA的降解,这种转录后水平基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)也称RNA沉默(RNA silencing)[1,2].人为地向细胞内导入dsRNA、siRNA,或者是它们的表达载体都可以诱发RNAi,有效地中止同源基因表达.这就为建立基因与表型之间的关系提供了可靠的手段.目前,RNAi技术正因其简捷高效性而广泛应用于功能基因组研究、疾病治疗研究,以及植物抗病毒研究等.
作者：燕飞；宋雪梅；成卓敏 刊期： 2005年第05期
风疹病毒(rubella virus,RV)是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员,是常见、重要的TORCH综合征病原体之一.其感染的危害主要在于先天性感染,孕妇在妊娠期、特别是妊娠前3个月感染RV,可引起胎儿宫内感染,产生先天性风疹综合征(congenital rubella syndrome,CRS),造成婴儿全身多种器官发育畸形或功能异常,如白内障、耳聋、先天性心脏病等,严重时可出现死胎或流产.
作者：吴冰；王志玉 刊期： 2005年第05期
