人杯状病毒(HuCV)是世界范围内急性腹泻的重要病原.此文收集我国长春、北京、河北卢龙、兰州、昆明等13个地区1999～2005年5岁以下腹泻患儿检测轮状病毒为阴性的粪便标本 4426份,用ELISA和RT-PCR方法检测HuCV,结果表明HuCV检测阳性率为19%(8.3%～38.6%).对其中151株HuCV PCR产物测序进行核苷酸序列比对构建的系统发生树表明,我国流行的HuCV以诺如病毒(NV)为主(146/151,占96.7%),其中绝大多数为GGⅡ/4基因型(99/146),其它依次为GGⅡ/3(22/146)、 GGⅡ/5(8/146)、 GGⅡ/6(2/146)、 GGⅡ/7(2/146)、 GGⅡ/8(2/146) 和GGⅠ/2(2/146),札如病毒(SV)共5株,均属SGⅡ.此外有9株NV GGⅡ遗传组毒株,尚不能归入现有基因型,可能为我国特有的新基因型,表明我国流行的HuCV毒株存在很高的遗传多样性.我国婴幼儿HuCV腹泻全年都有发生,但秋冬季(10月～次年1月)有一个发病高峰,病例以6～17月龄组多,至3岁时超过96%的儿童都感染过HuCV.对我国流行的HuCV不同毒株的地区分布,不同年度HuCV检测阳性率的变化趋势进行了讨论.
作者：方肇寅；谢华萍；吕红霞；刘娜；章青；段招军；Duncan Steele；Baoming Jiang；Xi Jiang 刊期： 2007年第01期
在对分离于中国贵州省的9株Ⅰ型循环的疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(cVDPVs)进行全基因组核苷酸序列分析后,发现已知重要的决定病毒神经毒力的位点G-480和U-525并没有发生回复野生型突变;另外一些已知的神经毒力决定位点,如A-2438、A-2795、C-6203和G-7441等均已经发生了回复野生型突变.根据核苷酸序列的不同,从9株Ⅰ型cVDPVs毒株中选取5株病毒感染转人脊髓灰质炎病毒受体基因的小鼠进行神经毒力实验,发现它们的神经毒力都有所升高,其中CHN8184株和CHN8229-1.1株的神经毒力已经十分接近P1/Mahoney株,CHN8229-1.1株、CHN8229-2株和CHN8229-3株神经毒力依次递减,但仍处于较高水平,在它们的全基因组中分别只有7个和2个核苷酸的差异,而毒力却相差很多,提示有新的未鉴别的神经毒力决定位点的存在.对这些毒株5'非编码区(5' NCR)的第V结构域进行二级结构预测,发现它们的二级结构很稳定.在G-480位点没有发生回复突变的情况下,部分毒株的神经毒力已经非常接近P1/Mahoney的水平,提示先前的研究中关于G-480突变对Ⅰ型脊髓灰质炎病毒神经毒力的作用可能被估计过高,G-480位点不是唯一重要的神经毒力决定位点,可能多个核苷酸联合突变才能达到减毒的效果.要真正全面了解P1/Sabin株的减毒机制,还需要进行更加深入的研究.
作者：张勇；严冬梅；王东艳；赵蓉；张大勇；叶绪芳；祝双利；安洪秋；许文波 刊期： 2007年第01期
以猪生殖与呼吸综合征病毒四川分离株PRRSV-SC1株感染体外培养的Marc-145细胞为模型,通过透射电镜对PRRSV的病毒形态发生学和宿主细胞超微结构的动态变化规律进行研究.结果显示,病毒粒子呈球形,有囊膜,大小约45～65nm,内含直径约25～30nm的核衣壳.病毒感染细胞后以细胞内吞方式进入细胞,在胞浆内复制,装配好的病毒以出芽或细胞外分泌释放到细胞外.感染细胞超微结构变化主要表现为:细胞胞浆空泡增多,内质网扩张,线粒体增生、嵴肿胀、脱落,后空泡化,细胞表面的微绒毛脱落,出现典型的细胞凋亡特征,并观察到凋亡小体,后整个细胞裂解、破碎.
作者：汪铭书；程安春；刘伍梅；周毅；郭宇飞；袁桂萍；陈孝跃 刊期： 2007年第01期
采用RT-PCR技术,从HIV的非允许性H9细胞中获得载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的全长cDNA.APOBEC3G cDNA全长1 155nt,编码384个氨基酸.将APOBEC3G克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,转染CD4+ HeLa细胞,激光扫描共聚焦显微镜下可观察到表达的GFP-APOBEC3G融合蛋白定位于细胞质.
作者：杨怡姝；李岚；李泽琳；曾毅 刊期： 2007年第01期
从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDV HK'1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3'PCR片段和5'PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体.利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5'PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3'PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK'1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定.结果表明,HK'1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5'NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3'NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾.在HK'1/70株全长cDNA序列的5'端引入了T7启动子序列,在poly A 3'端引入了Psp1406Ⅰ识别序列.通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK'1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系近,且位于CB5遗传进化树的分支上.HK'1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础.
作者：郑海学；刘湘涛；尚佑军；张淼涛；冯霞；白兴文；吴锦艳；吕建亮；孙世琪；尹双辉；郭建宏；谢庆阁 刊期： 2007年第01期
为了进一步确定PrP蛋白与微管蛋白是否发生分子间相互作用以及PrP蛋白多肽链中与微管蛋白相互作用的区域,我们表达纯化了全长的PrP以及PrP蛋白缺失突变体,提取了兔脑组织中天然微管蛋白.利用pull-down及免疫共沉淀方法检测全长PrP及PrP蛋白缺失突变体与微管蛋白是否发生分子间相互作用.结果显示,全长His-PrP23-231能与微管蛋白发生体外相互作用,并首次证实了PrP与微管蛋白相互作用的区域位于PrP N端第23位至91位氨基酸.此研究为进一步研究PrP在神经细胞的主动转运机制以及Prion疾病的发病机制提供了一定的理论基础.
作者：董辰方；王小凡；安润；陈建明；单冰；韩露；雷艳君；韩俊；董小平 刊期： 2007年第01期
在以往构建的JEV疫苗株SA14-14-2感染性克隆pBRkpn-JTF的基础上,构建了去除JEV结构区域基因(prM基因和E基因),保留非结构区域基因的复制子表达载体pCTCJEV、pCTMJEV,转染BHK-21细胞后,通过反转录PCR(RT-PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)检测该载体的自主复制能力和蛋白表达情况,结果证实该载体在BHK-21细胞中能够自主复制并且表达非结构蛋白.进一步在该载体中插入报告基因EGFP,检测外源蛋白的表达情况,结果显示在转染复制子载体的24h后,荧光显微镜下能够看见绿色荧光蛋白的表达,阳性信号持续增强,能够维持10d左右,证实了构建的复制子载体pCTCJEV能够有效地表达外源蛋白,这为进一步建立以乙脑病毒复制子为基础的疫苗载体系统打下基础.
作者：黄莺；邵炜；贾丽丽；俞炜源；俞永新 刊期： 2007年第01期
选取国内1997～2005年分离的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)24株,经蚀斑纯化克隆其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,与在GenBank发表的36株国内外不同时期的NDV毒株,进行氨基酸遗传变异分析,并利用SPSS8.0软件对其不同片段的氨基酸进行同源相关比较.结果显示:国内所有NDV分离毒株氨基酸高度同源,同源性为94.4%～99.4%;与LaSota、Clone30疫苗株等的氨基酸同源性为86.9%～89%;与强毒株F48E9的氨基酸同源性为87.9%～89.9%;与国外NDV的氨基酸同源性为87.2%～96.2%.系统发育分析表明:国内NDV分离毒HN遗传距离较近,而与LaSota、Clone30和F48E9遗传距离较远.国内NDV分离毒均缺乏538～540位糖基化位点.不同片段与全长的氨基酸同源性高度相关,且与前80个氨基酸相关密切.
作者：秦卓明；马保臣；袁小远；徐怀英；何叶峰；崔治中 刊期： 2007年第01期
以HSV1 gD糖蛋白基因为靶点,设计合成5对siRNA,并构建pEGFP-N1-gD融合表达质粒,脂质体法共转染Vero细胞,利用绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的特征,流式细胞仪筛选特异沉默gD表达的siRNA.然后有效siRNA转染Vero细胞并感染HSV1,通过空斑减数实验,Real-time PCR和子代病毒滴度评价其对HSV-1感染的作用.结果显示siRNA能有效抑制gD-EGFP融合蛋白和感染细胞内gD糖蛋白的表达,但对HSV-1的感染性无明显抑制作用,故选择gD作为siRNA抗病毒靶点还需进一步的论证.
作者：朱钦昌；任哲；张春龙；张美英；廖红娟；刘秋英；张佩琢；李久香；胡巢凤；王华东；王一飞 刊期： 2007年第01期
马传染性贫血(Equine infectious anemia, EIA)是马属动物感染的一种主要经由虫媒传播的传染性疾病.该病的临床表征为反复发热、贫血、出血、水肿以及消瘦等,病理生理变化以血小板减少为主[1].EIA的致病原为马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus, EIAV),该病毒与人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV),猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus, SIV)等同属反转录病毒科,慢病毒属[2].EIA与HIV引起的人艾滋病和SIV引起的猴艾滋病在疾病特征上具有一定的相似性.然而,感染EIAV的多数马往往在经过一年左右的反复发热和与之相关联的病毒血症之后,终能够控制住病毒在体内的复制(而非清除),转归为无明显临床症状的EIAV隐性携带马[3],这与人在感染HIV 8～10年后几乎100%转归死亡是有明显差别的.也正是由于这一差别,研究马与EIAV之间相互作用的机理,可作为研究HIV等慢病毒致病机理和防治策略的良好动物模型.因此,人们对EIA发病及控制机理有了更多的关注和研究.其中,细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte, CTL)在病毒感染控制过程中起主要作用这一观点,随着相关研究的逐步深入,越来越得到人们的认同.
作者：马建；孔宪刚；沈荣显；周建华 刊期： 2007年第01期
反向遗传学是指对病原微生物的cDNA进行目的性修饰,以对其进行功能和表型的分析[1].它是相对于经典遗传学而言的,后者是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律.反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,如定点突变、基因插入/缺失、基因置换等,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体,研究生物体基因组的结构与功能,以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容.与之相关的研究技术称为反向遗传学技术.在病毒学研究中,反向遗传学常利用经修饰的克隆化cDNA用来获得有感染性的病毒,从而可研究这些修饰对表型产生哪些影响.早报道的是正链RNA病毒的反向遗传学系统.将来自正链RNA的病毒全基因组RNA转染真核细胞,可使RNA充任mRNA(s),从而可翻译出病毒蛋白;反过来,这些蛋白又有助于完整病毒的包装.
作者：程从升；舒跃龙；张智清 刊期： 2007年第01期
猪生殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)以引起母猪的生殖障碍及仔猪的呼吸道症状为特征.PRRSV 属于尼多病毒目、动脉炎病毒属.PRRSV的基因组为一单股正链RNA分子,由大约15 000个核苷酸组成,含有8个开放性阅读框架(ORFs),其线性排列顺序为5′-NCR-ORF1a/1b-ORF2-GP3-GP4-GP5-M-N-NCR-3′.大量研究表明PRRSV基因组的结构特征、表达模式及与宿主的相互作用构成了PRRSV致病的分子基础,系统了解该方面的研究进展对开展PRRSV致病机理和新型疫苗等方面的研究将有所帮助.
作者：刘光清；云涛；王根荣；倪征 刊期： 2007年第01期
诺如病毒(Noroviruses, NVs)为杯状病毒科的一个属,是引起人类病毒性胃肠炎暴发的重要病原.在美国、欧洲和日本,病毒性胃肠炎暴发中由NV引起的占93%[1-3].NV的基因组为单股正链RNA,全长约7.7kb,由3个开放阅读框(open reading frames, ORFs)组成,ORF1编码非结构蛋白,其中包括RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase, RdRp )[4],ORF2和ORF3分别编码主要(VP1)和次要(VP2)衣壳蛋白[5].VP1蛋白折叠成两个区域,壳区(Shell,S)和突出区(Protruding,P),S区形成内壳,P区形成拱样结构突出于内壳外.P区进一步分为P1和P2亚区,后者位于衣壳的外面, P2区相对于S区和P1区序列高度变异,被认为是免疫识别和受体结合的关键部位[6-9].
作者：靳淼；樊景凤；于天飞；方肇寅；王君伟 刊期： 2007年第01期
人偏肺病毒(Human metapneumovirus, hMPV)是近发现的可引起人类呼吸道感染的一种副粘病毒,现被归类于偏肺病毒属(Metapneumovirus),是至今发现的第一个与人类疾病相关的偏肺病毒属成员[1].目前已经受到世界范围的重视,已有十多个国家报道了不同年龄组人群中hMPV的感染情况.
作者：曹守春；钱渊；李国华；朱汝南；赵林清；丁雅馨 刊期： 2007年第01期
儿童下呼吸道感染已成为当前儿科发病率高的一种疾病,而病毒是小儿下呼吸道感染的重要原因.临床上有相当比例的小儿下呼吸道感染病因未能作出明确的实验室诊断,给临床诊断与治疗带来了较大的困难.
作者：林峰；曾爱平；杨恩；林海燕；郑昌华；陈弘；李桦；李旭阳；郁明素；杨宁敏；金大智；余光创；伯晓晨；文思远；王升启 刊期： 2007年第01期
