应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B亚型,与国际参考株RL42的基因离散率为4.87%±0.31%,1个为B亚型,与国际参考株HXB2的基因离散率为5.43%.根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并且分析及比较了重要的功能结构域.发现这15个序列的N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及净电荷数目,预测大多数分离株使用CCR5辅助受体;V3环四肽序列以典型欧美B亚型GPGR多,占40%;gp120/gp41剪切位点高度保守,预测所有gp160前体都能有效剪切;四种广谱中和抗体2G12、IgG1b12、4E10及2F5的识别位点高度保守,表明大多数分离株对这四种中和抗体敏感.有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗研究和药物开发提供依据.
作者：冯霞；杨海儒；余双庆；周玲；李红霞；李泽琳；曾毅 刊期： 2009年第02期
利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了口蹄疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性.结果表明,根据口蹄疫病毒多聚蛋白基因保守区段设计的LAMP引物能够在65℃下,1 h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直接用肉眼判断.该检测体系具有极高的特异性,只能检测到目标病毒,与其他类似病毒如猪水泡病病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒等无交叉反应,可检测到10-5稀释度的目标病毒核酸量,比普通RT-PCR的灵敏性高100倍,比荧光PCR高10倍.
作者：李健；陈沁；熊炜；方雪恩 刊期： 2009年第02期
为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002～2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒:2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析.结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正处于不断进化状态中.14株H5N1禽流感病毒均在NA的茎部缺失20个氨基酸(49～68位),而其他N1亚型的禽流感病毒的NA都未见发生此缺失.H3N1病毒可能与H1N1病毒发生了NA基因的重排,但是目前还没有直接证据表明华东地区家鸭中H5N1禽流感参与了基因重排.
作者：仇保丰；刘武杰；唐应华；彭大新；刘秀梵 刊期： 2009年第02期
绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病.感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物.健康羊基因组中存在15～20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性PCR检测法及套式PCR检测法.以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用.
作者：罗军荣；刘霄卉；余群英；张淑琴；周建华；马学恩 刊期： 2009年第02期
为了探讨风疹病毒包膜糖蛋白E1中二硫键对风疹病毒细胞融合活性的影响,在构建重组载体pBSK-SPE2E1的基础上,利用PCR定点突变与体内同源重组相结合的方法,构建了11个突变体,分别将E1外功能区的11个半胱氨酸残基突变为其它氨基酸残基,从而去除一个二硫键,利用Giemsa染色法定性检测由此引起的细胞融合情况,流式细胞术检测导入的外源DNA在细胞表面的表达效率,血吸附检测重组表达的突变体蛋白的受体识别活性.结果表明E1外功能区的10个二硫键对RV的细胞融合活性都有重要影响,任何一个二硫键的去除均导致E1的细胞融合活性丧失;其中第5和第8个半胱氨酸残基所形成的二硫键与E2和E1的相互作用有关,第3、第4和第13个半胱氨酸残基所形成的二硫键可能直接影响E1的细胞融合功能.
作者：刘晓丽；吴冰；王志玉 刊期： 2009年第02期
采用RT-PCR和TAIL-PCR方法,首次对我国分离的巴泰病毒(YN92-4株)基因组的全编码区进行序列测定和分析.结果显示,YN92-4株病毒基因组由S、M、L三个片段组成,长度分别为947、4 371、6 860个核苷酸.其中,S片段基因编码由234个氨基酸残基组成的核衣壳蛋白和由102个氨基酸残基组成的非结构蛋白,M片段基因编码由1 435个氨基酸残基组成的前体蛋白,L片段基因编码由2 239个氨基酸残基组成的RNA聚合酶.与国外其它地区的巴泰病毒分离株进行基因组全编码区序列比较后发现,YN92-4株与日本牛血清分离株(ON-7/B/01株)在S、M片段核苷酸(氨基酸)的同源性高,分别为97.7%(100%)和95.7%(98%);由于本研究首次开展对巴泰病毒L基因片段核苷酸序列的研究,因此国际基因库尚无可参考的序列信息,本研究比较了我国分离的巴泰病毒与同一血清组的代表病毒Bunyamwera病毒L片段的核苷酸和氨基酸序列同源性,分别为73.5%和81.6%.系统进化分析显示,YN92-4株基因组与其它巴泰病毒分离株在各自分支下形成独立分支.本研究提示我国分离的巴泰病毒YN92-4株未发生基因重配(如Ngari病毒),其基因组与日本牛血清分离株(ON-7/B/01株)的亲缘关系密切.
作者：王凤田；吕志；王静林；付士红；张海林；王志玉；梁国栋 刊期： 2009年第02期
以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒.PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA.将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Westernblot方法均检测到M1和HA基因的表达.共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础.
作者：郭建强；姚立红；陈爱珺；徐一；贾润清；薄洪；董婕；周剑芳；舒跃龙；张智清 刊期： 2009年第02期
通过部分生物学特性鉴定、RT-PCR及F基因的序列测定与遗传进化分析,对2005～2006年从我国江苏省和广西省部分地区的发病鸡群和鹅群中分离到的20株新城疫病毒(NDV)进行了研究.各分离株经典毒力测定结果显示:MDT在45.3h～58.2h之间,ICPI在1.61～2.00之间,均为新城疫病毒强毒株特征.血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV强毒株的特征.F基因的序列测定表明,分离株之间的核苷酸序列具有79.7%～100%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为78.1%～83.4%,与国内标准强毒株F48E8同源性为80.2%～90.1%.推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112R-R-Q-R/K-R-F117,具有NDV强毒株特征,与毒力测定结果相符.根据序列所绘制系统进化发生树,表明20株NDV分离株中有18株为基因Ⅶd型,2株为基因Ⅲ型.
作者：姚春峰；刘文博；胡顺林；马怀良；薛峰；刘慧谋；刘秀梵 刊期： 2009年第02期
从河南和陕西既往献血感染的109份HIV-1阳性血浆样本中提取病毒RNA,扩增并测定其gag全长基因序列.按照采样时间对序列进行分组并利用Entropy软件分析不同组别的氨基酸序列差异.结果表明,2004年、2005年的序列与2002年的序列比较,分别存在8个和13个氨基酸组成有统计学意义的位点,其中有5个位点在两组比较中同时出现.存在差异的16个氨基酸位点中,10个位点的氨基酸分布呈现多态性增加的趋势,其中8个位点被我国人群主要HLA递呈的CTL表位覆盖;6个位点的氨基酸分布呈现多态性减少的趋势,这些位点均位于Gag蛋白重要的功能区内.
作者：周晓兰；何翔；洪坤学；王哲；邢爱华；阮玉华；陈健平；邢辉；邵一鸣 刊期： 2009年第02期
为了研究我国札如病毒(Sapovirus,SV)的流行情况及变异特点,收集了2006年2月至2007年1月安徽省、福建省、海南省、河北省、河南省等9个地区5岁以下腹泻患儿的粪便标本共1 110份,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对札如病毒进行检测,结果表明,札如病毒阳性率为0.9%.对检测到的全部10株札如病毒进一步进行系统进化分析,表明这10株札如病毒属于三个基因型:GⅠ/1、GⅠ/3和GⅡ/3.
作者：常昭瑞；靳淼；刘娜；谢华萍；崔淑娴；章青；段招军 刊期： 2009年第02期
TRIM(Tripartite motif protein)家族蛋白,又称为三重基序蛋白,它们均含有RING、B-box和Coiled-Ciol三个结构域.
作者：汤霞；况轶群；郑永唐 刊期： 2009年第02期
马立克氏病(Marek's disease,MD)是由禽疱疹病毒属的马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)引起的一种禽恶性T淋巴细胞增生性疾病,其致瘤的分子途径和机制还尚未完全清楚.MDV是一种严格细胞结合性的疱疹病毒,共有三个血清型,分别为MDV-1、MDV-2、MDV-3(即HVT).
作者：牛博学；滕丽琼；韦平 刊期： 2009年第02期
XJ-160病毒是我国分离的一株辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV),隶属于披膜病毒科(Togaviridea)甲病毒属(Alphavirus)[1,2].
作者：朱武洋；付士红；王力华；何英；唐青；梁国栋 刊期： 2009年第02期
