本文研究了野生和突变H7N9禽流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)对奥司他韦羧酸盐及扎那米韦的敏感性.将密码子优化的H7N9(A/Hangzhou/1/2013)病毒神经氨酸酶DNA克隆到pcDNA3.1/His载体(简称NAH7N9-WT质粒)后,将该质粒转染293T细胞,48h后裂解收集上清液,得到野生型H7N9神经氨酸酶.利用一步PCR突变法,在NAH7N9-WT质粒中引入H274Y和R292K突变(NA以N2编号),简称NAH7N9-H274Y、NAH7N9-R292K质粒,测序确认正确后将两种突变质粒转染293T细胞,48h后裂解收集上清液,获得突变H7N9神经氨酸酶.Western blot鉴定野生和突变NA的表达.以4-MUNANA为底物检测野生及突变NA活性,检测奥司他韦羧酸盐和扎那米韦对野生及突变NA的抑制活性.结果显示,野生及突变NA质粒转染细胞后均获得了分子量约为70kD的目标蛋白,但H274Y突变酶的表达量显著低于野生酶及R292K突变酶;所表达的NAH7N9-WT、NAH7N9-H274Y和NAmN9-R292K均有活性;奥司他韦羧酸盐对NAH7N9-WT、NAH7N9-H274Y和NAH7N9-R292K的半数抑制浓度分别为1.6 nM、15.1 nM和大于1 000 nM,耐药倍数分别为9和大于625倍;扎那米韦对NAH7N9-WT、NAH7N9-H274Y和NAH7N9-R292K的半数抑制浓度分别为1.1 nM、1.4 nM和38.0 nM,耐药倍数分别为1.3和34倍.本研究结果表明奥司他韦和扎那米韦可显著抑制NAH7N9-WT活性,NAH7N9-R292K对奥司他韦和扎那米韦有显著的耐药性(耐药倍数34～625倍),NAH7N9-H274Y对奥司他韦和扎那米韦敏感(耐药倍数1～9倍).结果提示,临床感染H7N9的患者可用扎那米韦或奥司他韦治疗,但当该病毒发生NAH7N9-R292K突变时,建议停止使用这两种药物.
作者：魏燕楠；张超；陈勍；郭颖 刊期： 2014年第04期
对存于中国疾病控制预防控制中心病毒病预防控制所病毒性腹泻室的一例卢龙G3型仔猪GARV LLZ212的主要基因片段VP7、VP4、VP6、VP2和NSP2-5进行扩增,确定其基因型,并探讨其与当地人G3型GARV的进化关系.采用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR),对LLZ212标本及6例当地儿童G3型GARV阳性标本的VP7、VP4、VP6、VP2和NSP2-5进行扩增,并进行序列测定.应用A组轮状病毒自动分型工具(RotaC v2.0)对各个片段进行分型.应用DNAStar和MEGA5.0软件包与GenBank上的参考株进行同源性和系统进化分析.卢龙猪LLZ212基因型为G3-P [8]-I5-C1-N1-T1-E1-H1,6株人GARV基因型均为G3-P [8]-I1-C1-N1-T1-E1-H1.LLZ212基因片段VP7、VP4、NSP4和NSP5分别与人GARV E885、CMH014/07、Wa和RMC321株同源性高,且进化树在同一亚枝内;LLZ212基因片段VP6、NSP2和NSP3均与猪GARV PRG921株同源性高,基因片段VP2与猪GARV OSU株同源性高,且进化树在同一亚枝内.确定一株罕见G3-P[8]-I5-C1-N1-T1-E1-H1型猪GARV,可能为人-猪重配株,LLZ212基因片段VP7、VP4、NSP4和NSP5与人GARV同源性高,LLZ212基因片段VP6、VP2、NSP2和NSP3猪GARV同源性高.
作者：郭延青；向静瑶；马鑫；李丹地；段招军 刊期： 2014年第04期
探讨载有日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)编码基因重组子(命名为pJME/GM-CSF)的壳聚糖纳米颗粒的免疫佐剂效应及其机制.本研究采用复凝聚法制备壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒;免疫组化法检测肌肉注射部位浸润细胞的类型,流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾脏DC表型和功能的变化;乳酸脱氢酶释放法检测CTL活性.结果显示制备的壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒鉴定正确;pJME/GM-CSF募集包括非成熟树突状细胞、巨噬细胞、粒细胞到注射部位,增加脾脏树突状细胞表面MHCⅡ的表达,抗原摄取和递呈功能,增强疫苗诱导的细胞免疫反应,壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒可进一步扩大pJME/GM-CSF的上述作用.这些结果表明壳聚糖可作为DNA疫苗肌注免疫时的传送载体,能够增强pJME/GM-CSF疫苗的细胞免疫应答.
作者：翟永贞；周言；马力；冯国和 刊期： 2014年第04期
对2010年福建省龙岩市长汀县埃可病毒6型(ECHO6)肠道病毒引起的暴发性脑炎,进行病原学分析,为该病的防控提供有价值的信息.对病例脑脊液标本进行荧光RT-PCR、病毒分离(RD细胞)、中和鉴定进行病原确认,再经PCR法对其中4株毒株进行VP1片段或全基因组核苷酸序列测定,用DNAStar软件中的MegAlign等软件进行同源性分析,Mega 4.0软件进行进化树分析.经病原学检测方法确认为ECHO6型肠道病毒,VP1片段核苷酸序列分析显示为C2亚型.全基因组序列共7 407个核苷酸,与其他ECHO病毒和CVB(Coxsackie virus B)病毒基因组构成相似,同源性为78.5％～87.3％.此次暴发性脑炎是由肠道病毒ECHO6 C2亚型引起,病毒株全基因组序列长度与标准株(U16283)相近,同源性达80.4％.
作者：曹春远；陈前进；何春荣；罗招福；何云；廖亦红；吴水新 刊期： 2014年第04期
了解兰州地区病毒性腹泻患儿中人博卡病毒1～4型(HBoV1～4型)的流行情况及临床特点,并探讨HBoV与急性胃肠炎的疾病相关性.收集兰州大学第一医院2012年7月至2013年6月5岁以下腹泻患儿的粪便标本331份,采用PCR方法检测人博卡病毒,同时检测常见的肠道病毒.331份标本中共检出博卡阳性标本49例(14.80％),其中HBoV1～4型分别检测出26例、15例、7例和1例.分析其流行规律发现HBoV相关的腹泻全年散发,无明显季节分布.HBoV感染的患儿年龄为11.04±6.92月龄,高发年龄是7～12月龄.2岁以下患儿占HBoV阳性患儿总数的93.88％.HBoV与其他病毒混合感染率为71.3％,以混合轮状病毒为主.HBoV感染对腹泻患儿的发热和呕吐发生率无明显影响.检测出一例罕见的HBoV4病毒LZFB086,与泰国(序列号JQ267789)参考株的同源性为99.0％.未检测出HBoV2B型.从研究结果得出我国兰州地区人博卡病毒以HBoVl为主,在我国首次发现HBoV4病毒.HBoV1～4与其他病毒的混合感染率高,主要是混合轮状病毒.HBoV可能不是导致急性胃肠炎的致病病原.
作者：向静瑶；李丹地；马鑫；郭延青；段招军；李宇宁 刊期： 2014年第04期
为了明确传染性性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)分离株CK/CH/SD09/005的分子特征,以进一步丰富国内IBV的分子流行病学信息.本研究设计了25对引物对其全基因组进行了序列测定,并与参考株进行了同源性比较和S1基因遗传进化分析.结果显示CK/CH/SD09/005基因组为27 691bp(不包括5'端Cap和3 '端Poly A).全基因组同源性比对发现,CK/CH/SD09/005仅与GenBank中广西2009年分离株GX-NN09032各基因高度同源(97％～99％).除GX-NN09032外,CK/CH/SD09/005基因组5'端复制酶基因(Gene 1)和3'端非转录区(Untranslated region,UTR)与2个QX基因型参考株ck/CH/LDL/091022和SDIB821/2012同源性高,分别为97％和98％,但是3'端结构蛋白和非结构蛋白基因(S-3a-3b-3c/E-M-5a-5b-N)与这两个毒株同源性较低,仅为72％～90％.其ORF3c/E、5a、5b和N分别与韩国分离株1011、国内分离株CK/CH/LXJ/02I、DK/CH/HN/ZZ2004和YX10同源性高,分别为97％、96％、99％和96％,而其ORF3a、3b和M与参考株同源性均低于90％.S1基因遗传进化分析发现,CK/CH/SD09/005和国内外39个参考株形成7个进化分支(基因型),CK/CH/SD09/005和2007以来几个分离株属于基因Ⅳ型,与其它6个基因型参考株S1和S2基因同源性为66％～69％和72％～81％,S1基因不仅表现广泛性点突变,而且有多处碱基插入和缺失,S2仅表现点突变.本研究结果表明CK/CH/SD09/005是一个变异株,可能是QX基因型IBV流行株与其它毒株重组进化而来,此外还涉及基因突变、插入和缺失等多种变异机制.
作者：胡北侠；杨少华；张秀美；张伟；曹三杰；许传田；黄庆华；张琳；黄艳艳 刊期： 2014年第04期
滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA (cccDNA)耐药突变分析等研究.为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法.通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA.然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定.应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性.该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础.
作者：苏何玲；王慧敏；冉敬塬；王知；李红岩；杨易；徐东平；刘永明 刊期： 2014年第04期
本研究旨在掌握禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布.针对IBV流行毒Jin-13株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV Sybr green Ⅰ荧光定量PCR方法.人工感染90日龄SPF鸡1、4、7、10、14、21、28和35d后检测心脏、肝脏、脾脏、肺脏、气管、肾脏和十二指肠等内脏器官病毒载量,以研究体内病毒复制动态及分布情况.该方法在7.77×108～100拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中7.7拷贝/μL的病毒核酸,比常规RT-PCR方法敏感100倍.结果表明鸡群从感染后第4日开始发病,各组织器官内IBV病毒含量逐渐升高,至第7日肾脏病毒含量高达到7.13×104拷贝/μL,其余依次为气管、肺脏、脾脏、心脏、肝脏和十二指肠.攻毒10日后各组织内含量均逐渐降低.肝脏于攻毒后21日时已检测不到IBV.于攻毒后第28日肾脏、气管和肺脏仍能检测到IBV.心脏可持续带毒35d.本研究从组织嗜性和动态分布方面为解释了IBV Jin-13株感染后的持续排毒及其严重的致肾损伤现象.
作者：李欢；杨霞；赵军；王忠田；陈陆；王新卫；常洪涛；李永涛；刘红英 刊期： 2014年第04期
Bel1是原型泡沫病毒(Prototype foamy virus,PFV)的反式激活因子,在病毒的复制周期中发挥关键作用.研究表明,Bel1含有核定位信号(Nuclear localization signal,NLS),但其精确氨基酸组成尚不明确,介导其入核的核输入蛋白亦未见报道.本研究利用插入Bel1截短片段的EGFP-GST融合表达体系,通过绿色荧光观察其亚细胞定位,首次精确确定Bel1 NLS序列为215 PRQKRPR221;定点突变明确了K218、R219和R221为Bel1核定位的必需残基,证明Bel1 NLS属单分型核定位信号;GST-Pulldown实验显示这段序列可与α核输入蛋白(Importin α/Karyopherin alpha,official symbol:KPNA) KPNA1、KPNA6和KPNA7相互作用,即Bel1可能藉此转运入核.
作者：马庆林；于淼；罗迪；谈娟；乔文涛 刊期： 2014年第04期
了解2011年石家庄地区流感样病例(Influenza-like Illness,ILI)病毒感染及流行情况,为呼吸道感染的诊断和防治提供科学依据.在监测点医院采集ILI咽拭子标本483例,采用多重RT-PCR检测15种呼吸道病毒.483例ILI中病毒阳性的有214例,总阳性率为44.31％,依次为腺病毒(ADV)和肠道病毒(HEV)各8.70％、呼吸道合胞病毒(RSV)A 8.07％、鼻病毒(HRV) 7.45％、甲型流感病毒(FLuA) 5.38％、冠状病毒(HCoV) OC43/HKU1型和副流感病毒(PIV)3型各2.90％、偏肺病毒(HMPV) 1.86％、PIV1型1.24％、HCoV229E/ NL63型和PIV2型各1.04％、博卡病毒(HBoV)0.83％和乙型流感病毒(FLuB) 0.41％.两种及以上病毒混合感染26例(5.38％),以HEV/HRV合并其他病毒检出占首位.全年均可检出病毒感染病例,检出高峰在1～2月.ADV和HRV几乎全年均可检出,无明显季节性,HEV在4～11月均可检出,流行高峰在夏秋季,FLuA/B流行主要集中在冬春季,RSV检出全部为A亚型,PIV检出以3型为主,HCoV-OC43/NL63型阳性率明显高于229E/NL63型.2011年石家庄地区ILI中前五位病毒为HEV、ADV、RSV-A、HRV和FluA,各病毒随时间不同而各具其流行特征.
作者：李岩；韩光跃；刘艳芳；刘兰芬；李琦；齐顺祥 刊期： 2014年第04期
通过分析急性呼吸道感染(Acute respiratory tract infection,ARTI)患儿腺病毒(Adenovirus,ADV)的流行病学特点及其临床特征,为临床早期诊治提供理论依据.2011年1月至2012年12月在常州市第二人民医院住院的3480例ARTI患儿,采集鼻咽部分泌物,采用直接免疫荧光法检测ADV抗原.两年共检出ADV阳性病例80例,阳性率为2.30％ (80/3 480);2011年感染率显著高于2012年.ADV夏秋季感染率较高,冬春季感染率较低;1岁以内ADV感染率较低,仅为1.14％,其他年龄段感染率明显升高.ADV是常州地区ARTI患儿重要病原体,在1岁以上儿童中多发,呈常年散发状态,夏秋季节感染率高;ADV感染临床表现多,重症患儿多,危害大.
作者：黄志英；程宝金；林红；张小玉；万瑜 刊期： 2014年第04期
初步研究六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白(Nucleocapsid protein,NP)抗原的抗原性,为开发相应的血清学诊断试剂提供理论依据.利用原核表达系统表达纯化六种致病性白蛉病毒核蛋白,并分别免疫新西兰白兔.通过间接ELISA方法及Western-blotting方法对所获得的兔免疫血清进行交叉反应检测,确定其抗体ELISA滴度.此外,分别用上述六种致病性白蛉病毒NP抗原包被ELISA反应板并对发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)病人血清进行间接ELISA检测,确定其血清学交叉反应及IgG抗体滴度.通过原核表达系统表达并纯化的六种白蛉病毒NP抗原浓度及纯度均达到免疫和检测要求.ELISA及Western-blotting检测结果显示六种病毒NP抗原兔免疫血清中的每种血清与其余五种病毒NP抗原可能存在血清学交叉反应.SFTSV病人血清与除SFTSV-NP以外的五种NP抗原亦可能存在部分交叉反应.本研究初步评价了原核表达的六种致病性白蛉病毒核蛋白的抗原性和免疫反应性,为相应诊断试剂的研制奠定了基础.
作者：芜为；张全福；李川；张硕；梁米芳；李德新 刊期： 2014年第04期
本研究旨在建立H7N9亚型禽流感病毒NA基因分子标签的焦磷酸测序检测方法,用于H7N9型禽流感病毒的快速检测和鉴定.通过对公开发表的H7N9亚型禽流感病毒NA基因序列进行比对,发现分离株在NA基因特定区域缺失的15个核苷酸可作为H7N9亚型禽流感病毒NA基因特异性的分子标签.通过设计覆盖此区域的特异性扩增引物和测序引物,建立了H7N9型禽流感病毒NA基因焦磷酸测序检测方法.基于NA基因特定缺失区域建立的焦磷酸测序技术能用于H7N9亚型禽流感病毒国内分离株NA基因的快速检测和鉴定,且具有较好的特异性和重复性.通过对3株H7N9亚型禽流感病毒分离株的检测,表明3株H7N9亚型禽流感病毒的NA基因均存在15个核苷酸缺失的分子标签.本研究建立的H7N9亚型禽流感病毒NA焦磷酸测序检测方法,可用于H7N9禽流感病毒的检测和鉴定.
作者：赵永刚；刘华雷；王静静；郑东霞；赵云玲；戈胜强；王志亮 刊期： 2014年第04期
小鼠诺如病毒(Murine norovirus,MNV)属于杯状病毒科诺如病毒属成员,是2003年新发现的感染实验小鼠的病毒,也是目前已知的小鼠病毒中感染率高的一种病毒.本研究利用RAW264.7细胞从MNV感染小鼠的盲肠内容物中进行病毒分离,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法、病毒空斑试验、TCID50试验、电镜观察、间接免疫荧光试验和测序分析等方法对分离到的病毒进行鉴定,结果显示RAW264.7细胞接毒24～48h后出现明显的细胞病变,表现为细胞圆缩、变亮、聚集,后大部分细胞死亡脱落.分离株在RAW264.7细胞上传代至第2～3代时可出现稳定的细胞病变.经病毒空斑试验获得一株纯化病毒,病毒滴度TCID50为10525/0.1mL.电镜观察可见明显的病毒颗粒,颗粒呈球形,无囊膜,直径约30～35nm.分离株经鉴定后命名为MNV Guangzhou/K162/09/CHN.采用RT-PCR技术分段扩增基因组开放阅读框(ORF),同时应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增基因组的3'-UTR和5'-UTR,分别对扩增片段进行克隆和测序,经拼接后获得分离株全基因组序列.结果显示分离株基因组序列全长7 380个核苷酸(GenBank登录号:HQ317203),将分离株全基因组序列与GenBank登录的国外参考毒株进行同源性比较,结果表明该毒株与其他MNV分离株核苷酸同源性为87.4％～89.7％.基于VP1蛋白核苷酸序列绘制MNV毒株系统发生进化树,结果表明该分离株与来自日本(S7-P2和S7-PP3)、美国(CR3和CR18)、韩国(K4)和德国(Berlin/04/06/DE和Berlin/05/06/DE)的毒株进化距离较近,同属一个进化分支.本研究是国内首次对MNV病毒进行分离鉴定和全基因组序列分析的报道.
作者：袁文；张钰；王静；刘香梅；赵维波；黄韧 刊期： 2014年第04期
脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种自然疫源性人兽共患病病原,但有关地方土猪EMCV的分离、鉴定及全基因组研究等尚未见报道.本研究应用“细胞接种与RT-PCR方法相结合”技术,成功分离到国内首株淮南猪源EMCV,命名为HNXX13株,并对其进行了系统鉴定和全基因组序列测定分析.结果显示,该病毒粒子大小约为24～30nm,呈圆形,不耐酸和热,对胰蛋白酶敏感,对氯仿不敏感,二价阳离子没有保护作用,所感染BHK-21细胞的细胞浆内可见到特异的绿色荧光;基因组全长为7 725bp(GenBank登录号:KF771002),与不同动物源参考毒株的核苷酸同源性为81.0％～99.9％,与国内猪源参考毒株同源性为99.5％以上;基于全基因组序列和ORF的系统发育进化树显示,EMCV可分为G1、G2和G3 3个群,HNXX13株与国内其他参考毒株同属于G1群.研究结果表明,地方土猪可感染EMCV并引起发病,丰富了我国EMCV分子流行病学资料,并提醒在进行地方品种养殖中要充分考虑人兽共患疫病传播的生态学;EMCV存在较大的地域差异,其传播具有一定的区域限制性;EMCV在地方土猪和鼠之间可能存在着交叉感染与传播;EMCV在感染地方土猪时可能会发生个别氨基酸的突变,以适应不同的猪种.
作者：常洪涛；刘慧敏；贺秀媛；赵军；陈陆；王新卫；杨霞；姚惠霞；王川庆 刊期： 2014年第04期
水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease parvovirus,AMDV)主要侵害宿主的单核-巨噬细胞,引起持续性感染.病毒感染后可产生免疫复合物疾病、高γ球蛋白血症和高水平的抗体,抗病毒抗体在体内不能有效地清除病毒,反而通过Fc受体介导的抗体依赖性感染增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE)使感染增强,并造成免疫系统功能紊乱.目前,ADE的可能感染致病机制为①抗体复合物与FcR受体、补体成分C3或C1q、C1qR结合,促进了病毒与细胞的吸附;②免疫复合物通过上调模式识别受体的负调控因子抑制了干扰素介导的抗病毒机制;③通过IL-10的早期活化,抑制机体的先天性免疫抗病毒机制.本文就AMDV ADE作用的几种可能机制以及ADE在致病过程中的作用进行了探讨,以期为ADE的分子机制研究、病毒的致病机理及疫苗设计提供参考.
作者：朱洪伟；邢秀梅；温永俊 刊期： 2014年第04期
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型核酸体外扩增技术,具有等温、快速、高特异性和灵敏度、产物检测简便等特点.自建立以来,该技术被广泛应用于病原检测、动物胚胎的性别鉴定、转基因食品检测和肿瘤的基因检测等领域并得到不断改进和完善,主要体现在特异性提高,反应速度加快,样本处理简化,检测方法特异化,多重扩增得以实现.由于LAMP满足现场检测的诸多要求,当前基于LAMP技术的现场检测平台正向着微型化、集成化、自动化方向发展,并呈现出与芯片实验室和数字扩增等技术联合应用的趋势.本文综述了近年来LAMP技术的改进及其在现场检测平台上的应用进展.
作者：关丽；马学军 刊期： 2014年第04期
EB病毒(Epstein-barr virus,EBV),与多种人类疾病尤其是恶性肿瘤相关,包括单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤和鼻咽癌等,其进入宿主细胞的机制仍是研究的热点.经过多年的研究,已经确定了EBV侵入宿主细胞时的部分关键蛋白以及不同的模式.病毒包膜糖蛋白gp350/220 (EBV glycoprotein 350/220)与B淋巴细胞表面受体CR2(Complement Receptor type 2)的相互作用以及其他病毒糖蛋白如gp42(EBV glycoprotein 42)、gB(EBV glycoprotein B)、gH(EBV glycoprotein H)和gL(EBV glycoprotein L)的相互作用,使得EBV能够有效侵入B淋巴细胞.由于绝大多数上皮细胞缺少CR2受体,病毒侵入上皮细胞的机制要比侵入B淋巴细胞复杂得多.主要有三种EBV进入上皮细胞的模式:①EBV通过感染的B淋巴细胞或郎罕氏细胞直接接触上皮细胞,“转移感染”进入上皮细胞;②EBV利用自身的相关蛋白与宿主相应的受体蛋白相结合后,通过膜的融合或内吞作用,感染上皮细胞;③感染EBV的上皮细胞经基底膜将病毒颗粒传递给邻近的细胞.本篇综述将介绍近年来在EBV进入B淋巴细胞与上皮细胞的相关机制的研究进展.
作者：左埒莲；朱美娟；都树娟；卢建红；李桂源 刊期： 2014年第04期
小RNA病毒基因组的两侧分别为5'非编码区(UTR)和3'UTR.研究表明:5'/3' UTR能形成复杂的RNA结构,如颈-环结构、三叶草结构和假结体结构等,在病毒的复制或翻译过程中发挥重要调节作用.本文即对近10年来有关小RNA病毒3'UTR的结构与功能研究方面的进展情况进行综述.
作者：梁瑞英；李传峰；孟春春；陈宗艳；刘光清 刊期： 2014年第04期
鸟苷酸结合蛋白1 (Guanylate-binding protein 1,GBP1)为一种干扰素诱导蛋白,其属于鸟苷酸结合蛋白家族的一员.GBP1在抗病原微生物与抗肿瘤等多种生物学反应中发挥着重要作用.随着对GBP1的深入研究,发现IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL1α、IL1β、TNF-α和LPS均能够诱导GBP1的表达;因此,GBP1发挥的生物学效应也越来越广泛,并逐步地被挖掘和展现出来.尤其是GBP1发挥的抗病原微生物与抗肿瘤功能受到了极为广泛的关注.本论文综述了GBP1的分子结构、生物学活性、抗病原微生物特性以及已发现的一些其他功能的研究进展,为GBP1的后续研究提供参考和依据.
作者：朱紫祥；曹阳春；曹伟军；杨帆；马志永；郑海学 刊期： 2014年第04期
柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)是引起手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的重要致病原,常与另一重要病原体肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)共同或交替流行.该病毒在世界多个国家和地区引起过暴发流行,成为重要的公共卫生问题.CVA16可分为A和B两个基因型;其中基因型B可以分成B1和B2两个基因亚型;B1亚型又可进一步分成B1a、B1b和B1c三个进化分支.基因型A与B2在世界范围内已不再流行;我国大陆分离到的CVA16毒株均属B1a和B1b进化分支.CVA16感染多为自限性轻症,但亦可引起严重的并发症,甚至引起患者死亡.目前尚无针对该病毒的有效药物或治疗手段,研发安全有效的疫苗成为控制该病毒的重要措施.随着EV-A71疫苗三期临床试验的成功完成,CVA16疫苗的研究也显得更加迫切.多家机构正在研究各种类型的CVA16疫苗,包括灭活疫苗、基因工程疫苗及DNA疫苗等.本文就CVA16的分子流行病学及其疫苗研究进展进行了综述.
作者：陈祥鹏；檀晓娟；许文波 刊期： 2014年第04期
伪狂犬病毒UL49基因编码的蛋白VP22是一种皮层蛋白,其生物学功能尚不清楚.预测并确定PRV UL49的核定位信号,可为研究其编码蛋白VP22的蛋白转导功能及作用机理奠定基础.通过生物信息学软件分析预测到,PRV UL49基因存在潜在的两个核定位信号:5～21位氨基酸序列(RKTRVA ADETASGARRR) NLS1和241～247位氨基酸序列(PGRKGKV) NLS2.本文将实验分为对照组、NLS1和NLS2同时缺失组、NLS1缺失组和NLS2缺失组四组,并通过PCR扩增、分子克隆等技术获得PRV Ea株UL49基因.以pEYFP-N1为载体,将UL49基因及各组缺失或突变片段插入EYFP上游,成功构建PRV pUL49-EYFP重组质粒及一系列缺失突变体,转染COS-7细胞后观察荧光定位.实验结果表明,确认预测到的NLS1和NLS2具有核输入功能,且位于241-247位的氨基酸序列(PGRKGKV)的入核功能更强,5～21位氨基酸序列(RKTRVA ADETASGARRR)为双向核定位信号,其同时具有核输出的功能.
作者：齐晓玲；任晓明 刊期： 2014年第04期
2011年初开始,猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)在河南省及周边省份再次突然出现严重暴发.为查明原因,应用PRV gE抗体ELISA检测试剂盒对2011年1月至2013年5月送检的16 800份猪血清、905份猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)“返饲”病料和56份PR基因缺失活疫苗分别进行野毒感染检测,通过PCR方法对11株PRV新流行毒株的TK、gE基因进行序列测定与分子特征分析,同时对这些毒株的毒价测定、免疫攻毒保护试验以及疫苗效价测定等开展研究.结果显示,PRV野毒感染阳性猪场检出率高达68.06％,血清总阳性率为38.47％,种母猪、种公猪、后备猪和商品猪的阳性率分别为40.12％、30.88％、54.67％和26.52％;新流行毒株聚在同一进化分支,均属于强毒株,但毒力较经典毒株变化不大,gE基因长度均为1 787bp,TK基因长度均为963bp,与不同年代中国参考毒株的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为98.2％～99.8％、97.1％～99.8％和98.9％～99.6％和97.5％～99.4％;商品疫苗对新流行毒株的保护率为100％;疫苗和“返饲”病料中,PRV野毒阳性检出率分别为0％和40.44％.研究结果证实,2011年后河南省及周边省份猪群中,PRV野毒感染率大幅攀升;PRV新流行毒株的主要毒力基因并未发生明显变异;疫苗中未存在PRV野毒污染,而且可完全抵抗新流行毒株的攻击;种公猪、后备猪普遍带毒和PEDV“返饲”病料中严重污染野毒是造成2011～2013年间河南省及周边省份猪群中PRV大面积感染和疫情暴发的主要因素.
作者：常洪涛；刘慧敏；郭占达；杜季梅；赵军；陈陆；杨霞；王新卫；姚惠霞 刊期： 2014年第04期
构建含EB病毒核抗原1(ebna1)重组腺病毒疫苗防治鼻咽癌,并为鼻咽癌疫苗的研究提供药效学资料.PCR法扩增B95-8细胞株中ebna1的C-端部分片段,EcoRⅠ和BglⅡ酶切后插入pDC316穿梭质粒,ebna1片段测序比对正确后,与腺病毒骨架质粒pBHG共转染293细胞.收集病变后细胞,通过流式细胞仪和Western blot检测EB-NA1在293细胞中的表达.电镜下观察所获得的病毒颗粒大小,TCID50法确定重组腺病毒滴度.以2×108 VP/只的rAd-ebna1免疫BALB/c小鼠.在免疫结束后的第1、2、4和8周检测小鼠体内EBNA1特异性细胞免疫应答的水平变化.结果显示,经PCR扩增获得约900 bp ebna1目的片段,测序结果与标准株序列一致,质粒共转染293细胞后,细胞出现病变,获得含EB病毒核抗原1重组腺病毒(rAd-ebna1),流式细胞仪和Western blot检测结果证实,ebna1在细胞中正确转录表达,收获病毒二代滴度可达108 TCID50/mL.rAd-ebna1免疫小鼠后,能够激活EBNA1的CD4+T细胞特异性细胞免疫应答.本实验成功构建了含ebna1片段的重组腺病毒,并具激活CD4+T细胞免疫应答活性.
作者：仝艳艳；李红霞；张丽霞；王湛；周玲；曾毅；杜海军 刊期： 2014年第04期
