黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,在肿瘤细胞的侵袭和转移中起着重要的作用.FAK是整合素介导的或生长因子受体诱导的调节细胞迁移的信号通路的关键组分.FAK通过与相关分子作用可以调节细胞骨架重构、胞外基质降解、细胞黏附更新以及质膜突出,进而参与肿瘤细胞的运动等多个过程,所以FAK与肿瘤发展的关系已经越来越受到重视.
作者：张楠楠；魏丽丽；强荣兵；侯颖春 刊期： 2009年第03期
A型链球菌是一类革兰氏阳性病原菌,其产生的多种毒素因子是导致人体多重感染的重要原因.这些菌毒素因子的表达直接或间接地受多个毒素调控系统调控,各个调控系统之间存在相互关联并对病原菌与宿主的相互作用产生影响.干扰毒素的产生或调控通路对于发展特异的抗A型链球菌感染药物具有重要的意义.
作者：孙卫国；李少华；邵宁生 刊期： 2009年第03期
随着分子生物学技术的迅猛发展和广泛应用,参与肾脏发育过程的新基因相继被发现,肾脏发育过程中复杂的分子信号调控机制也得到进一步的研究,为阐明肾脏疾病的发病机制及从基因水平开展治疗提供了新的思路.文章对肾脏发育的3个阶段,即输尿管芽的发生和分支形成、生后肾原基的早期上皮性分化、肾小球血管球的发生和发育的分子信号调控研究进展进行了总结,主要涉及多种转录因子、生长因子及细胞因子,同时细胞外基质和黏附分子也参与其调控.
作者：梅红；童强松 刊期： 2009年第03期
piRNA是单链非编码小分子RNA,长度约26～3l nt,大部分集中在29～30 nt,5'端具有尿嘧啶偏向性(约86 %),能够与Argonaute蛋白家族中的Piwi亚家族蛋白相互结合而产生作用.piRNA的功能主要是维持基因组中转座子的正常沉默状态,以防止基因组中转座子爆发而引起相应基因的改变.piRNA与siRNA及miRNA均是近些年发现的非编码小RNA,它们均可通过一套相应的机制进行RNA干扰,在转录、转录后甚至翻译水平对靶基因及蛋白进行调节,它们之间既有联系又有区别.piRNA数据库的建立将对这类小分子RNA的研究有很大的促进作用.
作者：李海涛；杨蓉娅；樊昕 刊期： 2009年第03期
细胞维持自身的完整性存在众多调控,避免它从一个生物学状态到另一个状态随意的转换.Raf激酶抑制蛋白(Rafkinase inhibitor protein,RKIP),属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine binding protein,PEBP)家族的成员,是新的一类信号级联传导的调节器来维持细胞自身平衡.RKIP可以抑制MAP激酶途径(Raf-1/MEK/ERK),G蛋白偶联途径(G-protein coupled receptor,GPCR),以及NF-κb途径.正因为RKIP在这些信号传导中的作用,使其在细胞凋亡过程中发挥了关键性的作用.更加深入的了解RKIP如何在肿瘤细胞调控表达,了解它如何对细胞凋亡、信号传导产生影响可以为人类治疗癌症起到极大的推动作用.
作者：宋继文；邓为民；姚智 刊期： 2009年第03期
NOD1和NOD2是新发现的一类参与天然免疫的胞浆蛋白质家族--核苷酸结合寡聚域样受体(the nucleotide binding oligomerization domain-like receptor, NLRs)中的两个重要蛋白受体,它们通过识别外源病原菌的模式抗原分子而激活NF-κB等核转录因子,启动相关细胞因子的基因表达,释放炎性因子和抗菌肽等, 其介导的信号通路在宿主抵御病原体感染的天然免疫中发挥着重要作用.
作者：石青；李祥；刘金辉；谢小梅 刊期： 2009年第03期
大量实验研究和临床观察资料证明,SOCS蛋白与细胞信号转导和多种重要疾病的发生发展有着密切的关系.同时随着对JAK/STAT通路和单个SOCS蛋白功能研究的深入,SOCS蛋白在辐射导致细胞周期阻滞信号传导以及与细胞DNA损伤和修复机制相关作用机理将成为未来的研究方向之一.近年来随着重离子治癌临床应用的展开,重离子对细胞辐射损伤和修复信号转导可能与SOCS蛋白相关的研究对于重离子的安全应用提供了理论和实验依据.
作者：谢漪；张红；郝冀芳 刊期： 2009年第03期
目的 克隆小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因特异片段,制备小鼠Klotho多克隆抗体.方法 以小鼠基因组为模板进行PCR,克隆了小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因外显子Ⅳ部分序列,经BamHⅠ和NheⅠ双酶切后定向克隆到质粒pET-GST中,构建原核表达质粒pET-GST-Klotho,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.以重组GST-Klotho融合蛋白免疫家兔, 制备Klotho多克隆抗体.结果 表达产物经SDS-PAGE检测表明,在大肠埃希菌中成功表达了GST-Klotho融合蛋白,GST-Klotho融合蛋白表达量占菌体总蛋白的15 %左右;另外通过ELISA法测得抗血清抗体效价约为1∶ 10 000,Western印迹分析验证了抗体特异性.结论 GST-Klotho融合蛋白的表达和Klotho多克隆抗体的制备为进一步研究Klotho蛋白在小鼠体内的表达模式以及相关抗衰老药物的研制奠定了基础.
作者：童睿；潘红春；马静静；朱国萍；郝家胜 刊期： 2009年第03期
目的 获得能够特异性高亲和力结合肝脏特异性去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor, ASGPR)的RNA适配子,为开发诊断和治疗肝脏疾病的靶向性试剂和药物奠定基础.方法 合成一个长度为115 nt含有25个随机序列的单链DNA随机文库,通过体外转录构建出单链RNA适配子随机文库,以肝脏ASGPR大亚基为靶蛋白,采用SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选具有高亲和力的ASGPR特异性RNA适配子;通过膜结合测定实验、凝胶阻滞实验鉴定筛选适配子对靶蛋白的特异性和亲和力.结果 经过12轮筛选获得了具有高亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子.结论 成功地筛选出了具有高亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子库.
作者：刘嘉；杨燕；胡斌；马智勇；余源；黄红平；陆蒙吉；冯新华；郭培宣；杨东亮 刊期： 2009年第03期
目的 分别将人类p100基因,p100 的SN基因片段和TD片段定向连入pERFP-CI质粒,使它们可与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,从而为进一步研究P100蛋白及其片段的定位、功能及与其它蛋白的相互关系奠定实验基础.方法 PCR分别扩增出P100蛋白全长,SN片段和TD片段基因的序列,定向克隆至真核表达载体pERFP-CI, 构建相应的3种重组质粒.将构建成功的质粒转染入HeLa 细胞,荧光显微镜下可观察红色荧光融合蛋白表达.结果 ① PCR 法获得P100 基因序列, 长度为2 659 bp,SN基因片段1 918 bp,TD基因片段741 bp;②将重组质粒直接进行双酶切鉴定可见P100片段, 将经过蓝白斑筛选后的重组子经双酶切再与pERFP-CI载体连接并酶切得到SN片段和TD片段;③转染重组质粒后可观察到红色荧光蛋白的表达.结论 3种外源片段成功载入pERFP-CI质粒; P100全长、SN片段、TD片段均可与红色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.
作者：陆燕欣；李晓冬；何津岩；葛林；杨洁 刊期： 2009年第03期
目的 构建用于stathmin 1 RNA干扰的重组质粒并验证其干扰效果,初步探讨stathmin 1 对于黑色素细胞生长的影响.方法 两步PCR法构建含有shRNA编码序列的重组质粒,脂质体转染黑色素细胞.RT-PCR、Western 印迹等方法检测stathmin 1在黑色素细胞中表达水平改变;MTT、流式细胞仪等方法检测黑色素细胞生长状态.结果 成功构建3个stathmin 1特异性的RNA干扰载体,在黑色素细胞中能有效降低stathmin 1在mRNA水平的表达,蛋白质表达水平分别降低为对照组的6 %、17 %和15 %;黑色素细胞的生长由于stathmin 1 减弱表达而受到明显抑制,凋亡率提高到约60 %.结论 干扰质粒能有效介导stathmin 1的RNA干扰;stathmin 1对于黑色素细胞的生长具有重要意义.
作者：张彦；熊建军；王嘉励；杨光；朱振宇 刊期： 2009年第03期
目的 本研究旨在探讨piwil1、piwil3和piwil4在宫颈癌组织与宫颈正常组织中的差异性表达,为进一步确定其在肿瘤发生发展中的作用奠定基础.方法 根据已知的3条基因序列设计合成3对特异性引物,利用RT PCR检测9对宫颈癌组织及癌旁正常组织的piwil1、piwil3和piwil4 mRNA水平,并以β-actin基因为标准进行对比.结果 宫颈癌组织piwil1、piwil3和piwil4的表达水平明显高于正常组织.结论 piwil1、 piwil3和piwil4在宫颈癌中的表达提示其可能参与了宫颈癌的发生发展过程.
作者：刘艳坤；刘民；李怡璇；王芳；万海英；浦泳；刘涛；李欣；汤华 刊期： 2009年第03期
目的 将人类PSF基因定向连人pEGFP-C2质粒,使PSF蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究PSF蛋白的功能及定位奠定实验基础.方法 采用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切方法,从pGEX-2TK-PSF质粒中获得PSF蛋白的cDNA全长;连入pEGFP-C2质粒的C端.将构建成功的pEGFP-C2-PSF质粒转染人HeLa 细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果 ①将该质粒进行双酶切鉴定可见PSF片段;②转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论 ① PSF cDNA全长成功连入pEGFP-C2质粒;② PSF蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.
作者：东莉洁；李晓冬；何津岩；姚智；杨洁 刊期： 2009年第03期
目的 纯化人源Fank 1(fibronectin typeⅢ and ankyrin repeat domain 1)蛋白质N端FN3(fibronectin typeⅢ,Ⅲ型纤黏连蛋白)结构域蛋白,用于晶体生长的三维结构分析.方法 将FN3结构域基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有GST标签的可溶性的融合蛋白,经过Glutathione SepharoseTM4B亲和层析、Hiload 16/60 superdex200分子筛层析纯化后,蛋白纯度达到95 %以上.结果 纯化蛋白采用悬滴气相扩散法得到棒状晶体.结论 成功制备了高纯度FN3蛋白,获得FN3蛋白质晶体,为进一步的三维结构解析及Fank 1功能研究奠定了基础.
作者：黄海涛；宋伟；缪时英；王琳芳 刊期： 2009年第03期
目的 构建PET SUMO-CCL18原核表达质粒,并表达、纯化获得重组趋化因子配体18成熟肽段.方法 从人卵巢癌组织中克隆CCL18基因全长,继而扩增表达成熟蛋白质的核酸序列,连接入PET SUMO载体,重组阳性克隆转入感受态细胞BL21(DE3)中IPTG诱导表达,基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)验证后以SUMO蛋白酶切除载体部分,纯化浓缩,MALDI-TOF鉴定表达结果.结果 测序分析证实,克隆入PET SUMO载体的CCL18序列与Genbank中报道序列完全一致,纯化后蛋白质谱鉴定与天然CCL18成熟蛋白序列一致.结论 成功构建了高表达CCL18蛋白的表达系统,得到重组CCL18成熟肽段,为进一步研究CCL18蛋白在卵巢癌中的作用提供实验基础.
作者：杨莹珠；王琪；周怡；张玮；黎丹戎；唐步坚；李力 刊期： 2009年第03期
目的 鉴定人FAM33A基因的启动子,为进一步研究其转录调控机制奠定基础.方法 采用5'RACE技术(5'端cDNA快速扩增)鉴定FAM33A的转录起始位点.采用PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略,构建FAM33A启动子荧光素酶报告基因.采用LipofectamineTM 2000转染H1299细胞,并通过Dual-LuciferaseGA16A Reporter Assay System进行荧光素酶报告基因活性检测.结果 确定了FAM33A的转录起始位点,构建了覆盖FAM33A 5'端ATG附近约2 kb区域的一系列FAM33A启动子荧光素酶报告基因.启动子活性分析表明,这些重组体均具有较高的启动子活性,同时含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点.结论 FAM33A启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590 bp的区域内.
作者：杜刚；卜友泉；杨正梅；兰欢；崔涛；镇磊；刘革力；宋方洲 刊期： 2009年第03期
目的 构建MKRN1的siRNA重组腺病毒载体,并在表达MKRN1的HeLa细胞中鉴定其干扰作用和对端粒酶活性的影响,为探讨MKRN1功能及其与肿瘤关系提供有效工具.方法 人工合成靶向MKRN1的siRNA干扰序列,用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上得到pSES-HUS-MKRN1 siRNA,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组得到pAdeasy-SES-HUS-MKRN1 siRNA;在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,感染表达MKRN1的HeLa细胞株,用RT-PCR法及Western 印迹技术检测腺病毒对细胞MKRN1表达的影响,用PCR-TRAP法检测细胞中端粒酶活性的变化.结果 成功构建了MKRN1的siRNA重组腺病毒载体;MKRN1的siRNA重组腺病毒能显著抑制HeLa细胞中MKRN1的表达,并显著上调细胞中端粒酶的活性.结论 构建的Adeasy-MKRN1 siRNA腺病毒能有效地抑制HeLa细胞中MKRN1的表达并上调细胞端粒酶活性,从而为进一步研究MKRN1的功能及其与肿瘤的关系提供了有效的新工具.
作者：石艳艳；刘涛；张琴；袁成福；卜友泉；易发平；刘革力；宋方洲 刊期： 2009年第03期
目的 利用抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中SK-1基因表达,结合依托泊苷对细胞增殖的影响,研究乳腺癌的治疗新方法.方法 将依托泊苷分别处理野生型及SK-1敲除型MDA-MB-231细胞,3H-TdR掺入法分析细胞增殖,Transwell法分析细胞迁移,Western印迹检测SK-1蛋白表达及细胞周期检验点相关信号因子的蛋白表达,RT-PCR检测细胞内SK-1的mRNA表达量.结果 依托泊苷在较高剂量时,MDA-MB-231细胞存活率明显下降,但依托泊苷却呈浓度依赖性促进乳腺癌细胞SK-1 mRNA及蛋白水平表达,将SK-1敲除,细胞迁移率下降,而且可以增强G1期各抑癌基因的激活或高表达,使细胞周期阻滞.结论 SK-1基因敲除有效增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
作者：续旭；辛翠燕；任树昱 刊期： 2009年第03期
目的 对胰岛素受体酪氨酸激酶底物(insulin receptor tyrosine kinase substrate,IRTKS)基因功能进行初步研究,检测IRTKS在正常组织及肿瘤细胞株中的表达情况,构建强力霉素DOX(tet-off)调控的高表达IRTKS的稳定株并研究其对细胞形态的影响.方法 克隆并构建IRTKS的原核及真核重组质粒,制备针对IRTKS的多克隆抗体,Northern 印迹检测IRTKS组织表达谱,Western印迹检测IRTKS细胞株表达,转染HT1080细胞构建DOX调控的IRTKS高表达tet-off稳定株,细胞免疫荧光实验研究IRTKS高表达对细胞形态的影响.结果 在多种组织和细胞株中都检测到IRTKS的表达,构建了受DOX调控的高表达IRTKS的稳定株,高表达IRTKS蛋白的细胞变得铺展,纤维状肌动蛋白(F-actin)出现丝状聚集,细胞伸出板状伪足(lamellipodia).结论 IRTKS是一个在多种组织和细胞株中都有表达的蛋白,构建的IRTKS稳定株可以在DOX调控下稳定高表达IRTKS蛋白,IRTKS蛋白的高表达促进HT1080细胞铺展,纤维状肌动蛋白包装及细胞伸出板状伪足.
作者：李婷婷；程志红；王克生；陈斐；韩泽广；张新 刊期： 2009年第03期
目的 探索miRNA-214在HeLa细胞中的与其靶基因Mek3相互作用.方法 通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-214相互作用的靶基因,合成miRNA-214和对照序列,将miRNA-214、对照序列、Mek3的3'非翻译区(3' UTR)以及突变的Mek3 3'UTR分别克隆到表达载体上,转染HeLa细胞,转染48 h后提取蛋白,检测绿色荧光蛋白的表达水平; HeLa细胞转染miRNA-214后,Trizol抽提RNA,通过荧光定量PCR检测Mek3 mRNA的表达水平;Western印迹检测Mek3的蛋白表达水平.经过以上实验从mRNA和蛋白水平上验证了在HeLa细胞中miRNA-214对靶基因Mek3的作用效应.结果 生物信息学方法显示miRNA-214和Mek3存在可能的结合位点.经过实验验证了miRNA-214可以下调Mek3的mRNA和蛋白水平.结论 miRNA-214可以负调节靶基因Mek3的表达.
作者：杨作臻；陈双；栾雪晶；刘民；李欣；汤华 刊期： 2009年第03期
