目的 应用人食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维,观察胃动素受体(MTLR)在套索纤维和钩状纤维的表达和胃动素对套索纤维和钩状纤维的收缩作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot技术观察人食管下括约肌套索纤维和钩状纤维MTLR的表达,应用倒置显微镜观察胃动索引起的套索纤维和钩状纤维长度的变化.结果 胃动素受体在套索纤维和钩状纤维均有表达,套索纤维表达高于钩状纤维;胃动素对套索纤维和钩状纤维均存在收缩作用,胃动素对套索纤维的收缩作用强于钩状纤维.结论 胃动素通过人食管下括约肌套索纤维和钩状纤维的胃动素受体,激发食管下括约肌的收缩,其对套索纤维的收缩作用大于钩状纤维.
作者：王艳瑜；刘俊峰；龚海峰；高庆敏；陈勇；王福顺；李保庆 刊期： 2011年第04期
目的 探讨野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)在人脑星形细胞瘤组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测32例高级别星形细胞瘤、35例低级别星形细胞瘤及10例正常脑组织中Wip1蛋白、mRNA表达,对Wip1阳性表达组织进行p53免疫组织化学和Western blot检测;同时分析Wip1表达与临床病理因素之间的关系.结果 免疫组织化学:高级别星形细胞瘤、低级别星形细胞瘤和正常脑组织中Wip1阳性表达率分别为24/32(75.0%)、11/35(31.4%)、1/10(10.0%),高级别星形细胞瘤Wip1表达高于低级别星形细胞瘤及正常脑组织,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR:Wip1 mRNA在高级别星形细胞瘤、低级别星形细胞瘤和正常脑组织表达相对量分别为:0.35±0.07、0.07±0.03、0.05±0.02,高级别星形细胞瘤Wip1 mRNA高于低级别星形细胞瘤及正常脑组织,差异有统计学意义(P＜0.05).Wip1 Western blot显示:高级别、低级别星形细胞瘤和正常脑组织表达相对量1.67±0.12、1.05±0.25、0.41±0.16,高级别高于低级别及正常脑组织的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).对其中36例Wip1阳性表达组织进行p53免疫组织化学染色,13例呈阳性表达,p53与Wip1表达呈负相关(r=-0.29).p53 Western blot显示:高级别、低级别星形细胞瘤及正常脑组织中表达相对量为:0.77±0.09、0.63±0.13、0.21±0.11,高级别组和低级别组高于正常脑组织组,差异有统计学意义(P＜0.05),高级别组与低级别组差异无统计学意义(P＞0.05).Wip1与患者年龄、肿瘤大小无明显相关(P＞0.05).结论 Wip1在高级别星形细胞瘤高表达,与肿瘤病理级别呈正相关,与p53表达呈负相关,可能与肿瘤恶性生长有关.
作者：梁朝辉；焦保华；郭二坤；卢圣奎；何心 刊期： 2011年第04期
目的 探讨白细胞介素-11(IL-11)类似物环九肽c(CGRRAGGSC)与人前列腺癌PC-3细胞的体外结合和在前列腺癌骨转移模型的体内分布.方法 印迹蛋白分析PC-3细胞和正常前列腺细胞的IL-11受体(IL-11R)的表达.荧光检测c(CGRRAGGSC)与PC-3细胞的结合位点及内化.将28只荷瘤裸鼠随机分为7组,用99Tcm标记c(CGRRAGGSC)制备99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC),经尾静脉注射0.74 MBq/0.2 ml,观察标记物在荷瘤鼠体内的生物分布.结果 PC-3细胞IL-11R是正常前列腺细胞的2.12倍.荧光示踪复染合成物结合在PC-3细胞膜及胞质.标记物在模型体内迅速持续聚集在瘤体,4 h瘤体、骨骼%ID/g达到峰值(15.12±1.19、7.03±1.83),其他脏器分布少,差异有统计学意义(F值依序为71.58、9.58,P＜0.05).结论 环九肽与PC-3细胞的结合具有特异性,标记物能与前列腺癌骨转移灶靶向结合.
作者：杨泽萱；刘璐；吴清华；朱晓莉 刊期： 2011年第04期
目的 探讨黏附分子家族的成员CD11c在胃癌组织中的表达及其与预后的关系.方法 采用免疫组织化学染色法检测125例胃癌患者癌组织CD11c的表达.结果 CD11c在胃癌中的表达高于胃炎和胃息肉组织.CD11c与患者性别、年龄、病理分级、胃癌部位无关(P＞0.05);与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、组织类型、复发和TNM分期明显相关.肿瘤直径＜5 cm组CD11c的表达水平(12.4±6.8)高于肿瘤直径≥5 cm组(7.7±4.6),差异有统计学意义(t=3.98,P＜0.01).浸润深度与CD11c表达水平显著关联,未侵入肌层组胃癌的CD11c表达水平(15.4±8.5)显著高于侵入肌层组(9.5±5.6),差异有统计学意义(t=3.1,P＜0.05).淋巴结转移与CD11c表达水平显著关联,未有淋巴结转移的CD11c表达水平(15.3±6.6)显著高于淋巴结转移组(8.6±5.1),差异有统计学意义(t=5.44,P＜0.01).未复发组的CD11c表达水平(12.3±7.4)高于复发组(9.0±5.3),差异有统计学意义(t=2.90,P＜0.01).分化型组的CD11c表达水平(9.3±5.3)低于低分化型组(12.6±7.8),差异有统计学意义(t=2.68,P＜0.01).CD11c表达随肿瘤临床分期的递增而降低,各组间差异有统计学意义(P＜0.01).多因素COX模型分析,在调整了性别、年龄、肿瘤大小、是否侵及深肌层、分化程度后,与CD11c细胞低表达组比较,高表达组有降低胃癌死亡风险的趋势(RR=0.51,95%CI=0.22～1.16).结论 CD11c表达与胃癌预后有关,可以作为反映患者免疫状态和预后的指标之一.
作者：胡文蔚；蒋敬庭；吴昌平 刊期： 2011年第04期
目的 观察Polo样激酶1(PLK1)在原发性肝癌细胞中的表达,探讨其与肝癌患者临床病理特点及预后的关系.方法 采用免疫组织化学技术观察PLK1在40例原发性肝癌组织石蜡切片中的表达.结果 癌栓、包膜侵犯、BCLC分期等因素和PLK1的阳性表达呈明显相关(P＜0.05);PLK1阳性组和阴性组的术前甲胎蛋白(AFP)差异有统计学意义(P＜0.05);秩和检验分析PLK1表达与患者肿瘤直径大小的关系发现PLK1阳性组和阴性组之间差异有统计学意义(P＜0.01).生存分析显示,PLK1的表达和患者的生存期无明显相关;Kaplan-Meier法分析原发性肝癌的预后的单因素相关因子显示与包膜侵犯、TNM分期、癌栓及转移与生存期明显相关(P＜0.05),与性别、乙肝、肝硬化、肿瘤数目BCLC分期及临床分期无明显相关;多因素Cox回归分析显示包膜侵犯、癌栓及转移3项指标反映肝癌预后(P＜0.05).结论 PLK1的表达与肝癌的发展及其临床生物学行为密切相关.
作者：李文滨；褚中华；梁明娟；林青；伍衡；王捷 刊期： 2011年第04期
目的 观察肿瘤转移相关基因(MTA1)在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨MTA1与HCC浸润和转移的关系.方法 分别采用免疫组织化学SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测42例HCC、10例肝硬化和7例正常肝组织内MTA-1的表达,并结合临床病理指标进行分析.结果 MTA1在HCC、肝硬化和正常肝脏组织中的阳性例数分别为26、2和0例,差异有统计学意义(P＜0.05);HCC组织内MTA1 mRNA的表达强度明显高于肝硬化组织(t=2.792,P＜0.05);MTA1在有包膜侵犯组、病理分级Ⅲ～Ⅳ组及有转移HCC中的阳性表达率及强度明显高于无包膜侵犯组(P＜0.05)、病理分级Ⅰ～Ⅱ级组(P＜0.05)以及无转移组(P＜0.01).结论 MTA1在HCC组织中的表达上调与HCC的浸润和转移有关.
作者：王建祥；王平；周锐；刘峰 刊期： 2011年第04期
目的 观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)基因表达沉默后对人高侵袭肝癌细胞株MHCC97-H在体内外生物学行为的影响.方法 用LV-APE1-shRNA载体感染MHCC97-H,设空载体(LV-APE1-NC)组和空白对照(Control)组.通过噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell小室法检测细胞的增殖、黏附、运动及侵袭能力的变化.建立裸鼠移植瘤动物模型,第21天剥瘤称重,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测移植瘤中APE1 mRNA及蛋白表达水平.结果 LV-APE1-shRNA组细胞的增殖、黏附、运动及侵袭能力均低于其他两组,差异有统计学意义(P＜0.01).LV-APE1-shRNA组肿瘤体积(0.467±0.052)cm3及重量(0.267±0.082)g均小于LV-APE1-NC组(1.700±0.063)cm3、(1.018±0.160)g和对照组(1.780±0.095)cm3、(1.107±0.178)g,差异有统计学意义(P＜0.01);抑瘤率为75.881%.APE1基因沉默后可下调90.622%APE1 mRNA的表达,下调72.439%APE1蛋白的表达.结论 APE1基因沉默可降低MHCC97-H细胞在体内外的增殖和侵袭能力.APE1对肝癌细胞的生物学行为具有调控作用.
作者：杜薇；李艳菊；刘景丰；郑智华；高美钦；黄爱民 刊期： 2011年第04期
目的 观察乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌的mRNA表达谱的变化,并进行生物信息学分析.方法 用长链RNA芯片检测肝癌组织和正常肝组织mRNA的表达谱,并进行GO分析将差异表达的基因进行功能和细胞定位.结果 肝癌mRNA表达量与正常对照组比较,2倍以上变化,差异有统计学意义(P＜0.05)的mRNA认为是差异表达的mRNA,共991条,占所有基因总数的5.7%.其中2倍以上升高的共733条;2倍以上降低的共258条;5倍以上升高的共94条;5倍以上降低的共39条;10倍以上升高的共18条;10倍以上降低的共11条.GO分析表明差异性表达的mRNA参与了重要生物学调节功能,其中一些基因可能是HBV相关肝癌所特有的.结论 HBV相关肝癌的mRNA表达谱发生显著变化,差异基因参与了细胞的重要生物调节过程,可能参与肝癌的重要调节过程;HBV相关肝癌的表达谱与其他病因相关的肝癌有共性,也有一定的特性.
作者：潘延凤；陶丰宝；宋丽杰；李志勤；张贤强；梁红霞；冯磊 刊期： 2011年第04期
目的 构建携带c-myc基因野生型及T58A突变型的慢病毒载体.方法 应用聚合酶链反应(PCR)方法 扩增c-myc野生型及T58A突变型基因,利用Gateway技术构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,转染293FT包装细胞,产生相应慢病毒,测定其滴度.结果 PCR和测序证实,构建分别携带c-myc野生型及T58A突变型基因的慢病毒载体,并包装慢病毒,病毒滴度测定结果 分别为6.10 × 107、5.65×107 TU/ml.结论 成功构建含有c-myc野生型及T58A突变型基因的慢病毒载体并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒.
作者：孟春晖；李福年；张佃良 刊期： 2011年第04期
目的 探讨特异性核基质结合区结合蛋白-1(SATB1)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学技术检测前列腺癌和前列腺增生症组织中SATB1、hTERT基因的表达.结果 60例前列腺癌组织SATB-1阳性表达率86.7%,而30例前列腺增生组织中无阳性表达,差异有统计学意义(P＜0.01);其中,前列腺癌转移组100.0%阳性表达,而未转移组73.3%阳性表达,SATB-1表达在有无转移组间差异有统计学意义(P＜0.01).前列腺癌组织中hTERT阳性表达率为88.3%,前列腺增生组织中阳性率为20.0%,差异有统计学意义(P＜0.01);而前列腺癌转移组和未转移组hTERT阳性率分别为90.0%和86.7%,差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析提示,前列腺癌和前列腺增生组织中SATB-1蛋白与hTERT蛋白表达无明显相关.结论 SATB1、hTERT基因的表达可能与前列腺癌的发生和转移相关,联合检测SATB1、hTERT基因对评价前列腺癌进展有一定的临床意义.
作者：毛立军；李望；杨春华；王军起；陈家存；郑骏年 刊期： 2011年第04期
目的 检测体外培养人关节软骨细胞在间断剪切力作用下细胞增殖、Ⅱ型胶原mRNA表达和聚集蛋白聚糖mRNA表达的变化,观察流体剪切力对人关节软骨细胞代谢的影响.方法 将传代的第2代软骨细胞分为载荷组和对照组,载荷组按40 r/min每天置于摇床上处理2 h,每天2次;对照组置于培养箱中静止培养.通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学法检测软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Ⅱ型胶原mRNA表达和聚集蛋白聚糖mRNA表达.结果 MTT法测得载荷组吸光度值为0.58±0.05,对照组为0.42±0.06,载荷组吸光度值高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅱ型胶原免疫组织化学检测所得平均吸光度(A)值为:对照组0.184 60±0.036 32,载荷组0.306 10±0.053 00,载荷组Ⅱ型胶原平均吸光度高于控制组,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR法检测结果 显示对照组和载荷组Ⅱ型胶原mRNA吸光度比值分别为0.080±0.006和0.150±0.005,聚集蛋白聚糖mRNA吸光度比值分别为0.100±0.004和0.230±0.004,载荷组均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 一定强度流体剪切力能够促进人关节软骨细胞的增殖及代谢,使其合成Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖增多.
作者：王华；刘世清；陈廖斌；陈彪 刊期： 2011年第04期
目的 观察促红细胞生成素(EPO)动员骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脊髓损伤局部起的修复作用,并探讨其机制.方法 将30只SD大鼠随机分成假手术组、生理盐水组及EPO治疗组,各组均经尾静脉注射Hoechst33342标记的BMSCs,移植后1、3、7、14、21、28 d采用BBB法进行大鼠后肢运动功能评分观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫荧光检测比较各组BMSCs动员到脊髓损伤处的数目,Western blot检测损伤局部BMSCs表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)的水平.结果 从第3天起,EPO治疗组BBB评分分别为(5.29±0.69)、(8.18±0.38)、(13.32±0.77)、(15.25±1.83)、(18.71±1.54),明显高于生理盐水组,移植的BMSCs计数分别为(90.12±7.68)、(116.26±13.54)、(186.32±20.35)、(211.64±31.83)、(298.71±21.54),数目明显增加(P＜0.05),其BDNF和NGF的表达也明显增强(P＜0.05).结论 EPO能够动员BMSCs向脊髓损伤部位迁移并通过促进BMSCs表达BDNF和NGF来促进神经功能的恢复.
作者：熊敏；陈森；曾云；刘志刚；余化龙；李锋 刊期： 2011年第04期
目的 探讨人食管鳞状细胞癌中Tollip对Src家族酪氨酸激酶Fyn表达的负调控机制.方法 收集3例新鲜食管鳞状细胞癌组织(ESCC)和食管正常黏膜上皮组织(UNR),采用免疫印迹法分析Tollip蛋白表达水平的变化.同时转染人Tollip质粒DNA人TE1细胞株中观察其对Fyn表达的影响.结果 免疫印迹结果 显示食管鳞癌组织Tollip蛋白表达低于食管正常黏膜组织.转染Tollip质粒DNA可以降低人食管鳞状细胞癌TE1细胞中Fyn的表达.结论 Tollip可能是人食管鳞状细胞癌中Src家族酪氨酸激酶ryn的负调控因子,在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中起重要作用.
作者：赵松；舒礼良；崔广晖；齐宇 刊期： 2011年第04期
目的 观察CD44和CD133的表达对人肺腺癌A549细胞株增殖能力的影响.方法 筛选可持续增殖的A549细胞并培养,按CD44和133表达的不同将筛选出的细胞分成5组,非转染组:CD44+CD133+细胞(A组)、CD44-/CD133-细胞(B组)、未分选A549细胞(C组);转染组:CD44-和CD133-细胞(D组)及阴性对照组(E组).筛选得到沉默效果佳的小干扰RNA(siRNA)片段,并用其转染各组细胞,采用MTS法检测并比较干扰前后各组细胞的增殖能力.结果 沉默效果佳的siRNA片段及浓度为siCD44-h_002 25 nmol/L和siCD133-h_002 25 nmol/L,沉默效率分别为62%和82%.用其转染各组样本后,CD44和CD133的表达明显被抑制,比较转染前后各组样本的灰度值,差异有统计学意义(P＜0.01).通过分析MTS图显示,转染后细胞的增殖能力显著下降.结论 CD44和CD133的阳性表达,与人肺腺癌A549细胞株较强的增殖能力有关,CD44和CD133可能是肺腺癌干细胞的表面标志物.
作者：郭晶晶；吴仙蓉；敖翔；彭静；周天俊；张惠忠 刊期： 2011年第04期
目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)导人肝癌耐药细胞,干扰多药耐药(MDR1)基因后,观察其对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响.方法 使用浓度梯度法制作SMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721/ADM),阿霉素浓度从0.1～2.0 mg/L;转染siRNA(浓度25、50、75 nmol/L)沉默此耐药株MDR1基因;转染后24、48、72 h用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞MDR1的mRNA表达水平;siRNA(浓度50 nmol/L)转染后48 h,行噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞对化疗药物的敏感性,计算各药物的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI);流式细胞仪(FCM)检测细胞对阿霉素(浓度0.2 mg/L)的凋亡.Western blot检测蛋白表达含量.结果 SMMC-7721/ADM对阿霉素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱、奥沙利铂的RI为25.43、68.32、39.17、18.31.siRNA转染沉默MDR1基因后,发现其对上述药物的RI为5.01、17.04、4.96、1.62;qRT-PCR发现其MDR1 mRNA表达量显著降低(P＜0.05);Western blot显示其MDR1表达产物P-gp蛋白显著降低(P＜0.05);FCM发现加入阿霉素后,其细胞凋亡指数显著大于沉默前(P＜0.05).结论 用siRNA沉默SMMC-7721/ADM的MDR1基因后,SMMC-7721/ADM对化疗药的敏感性显著增加.MDR1基因与SMMC-7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默其MDR1基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
作者：汪洋；褚忠华；刘建平；张大伟；韦金星；陕基德 刊期： 2011年第04期
目的 构建人微小RNA145(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pPG-miR-EGFP载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-145表达水平,黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的pPG-miR145-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配;重组质粒转染SGC-7901细胞后,miR-145表达分别上调20.45倍(P＜0.01),细胞黏附能力分别下降51.5%(P＜0.01),细胞侵袭能力分别下降30.4%(P＜0.01).结论 成功构建人pre-miR-145真核表达载体,转染胃癌细胞过表达后,能抑制癌细胞的游走和侵袭能力.
作者：张桓瑜；梁铸林；郑丽端；童强松；董继华 刊期： 2011年第04期
目的 观察靶向PPARγ基因小干扰RNA(siRNA)预防灌胃法家兔乙醇性股骨头坏死的效果.方法 将96只家兔随机分为4组,每组24只.N组:灌胃法给予生理盐水10ml/(kg·d).M组:灌胃法给予烈性酒(含乙醇度46%,V/V)10 ml/(kg·d);S组:实验1、3、5个月第1天,随机选择侧别手术,穿刺注入股骨头内25 μl siRNA重组腺病毒,同M组灌酒;CO组:同S组手术,同M组灌酒,不注入siRNA重组腺病毒.于2、4、6个月末分批处死家兔,观察血清学和股骨头组织病理学变化.结果 实验6个月时,N、M、CO、S组血清甘油三酯含量分别为(1.21±0.12)、(4.59±1.58)、(4.63±1.17)、(4.32±1.20)mmol/L;总胆固醇含量分别为(2.35±0.33)、(19.59±1.58)、(20.13±1.17)、(18.32±1.20)mmol/L;脂肪细胞平均直径分别为(40.89±2.41)、(48.65±2.93)、(49.45±2.63)、(42.52±2.57)μm;骨小梁面积分数分别为(41.80±2.47)%、(30.70±2.86)%、(29.80±2.69)%、(41.60±2.87)%;空骨陷窝计数分别为(12.30±1.73)%、(22.40±1.52)%、(23.10±1.62)%、(11.70±1.46)%;PPARγ表达量分别为(0.29±0.05)、(0.66±0.12)、(0.61±0.15)、(0.33±0.05);骨钙素mRNA表达量分别为(0.92±0.07)、(0.19±0.11)、(0.23±0.08)、(0.88±0.11);PPARγ蛋白表达量分别为(0.75±0.08)、(1.60±0.11)、(1.55±0.12)、(0.65±0.05).M、CO组病理变化明显,髓内造血组织减少,脂肪细胞增殖肥大,骨小梁变细、稀疏、部分断裂;S组股骨头内大脂肪细胞平均直径、空骨陷窝计数、骨坏死发生率、PPARγ基因与蛋白表达量均明显低于M、CO组(P＜0.01,P＜0.05),S组与N组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 靶向PPARγ基因siRNA腺病毒载体能够有效阻断乙醇诱导的家兔股骨头内MSCs中PPARγ基因表达及成脂分化,预防乙醇性ONFH的发生.
作者：王义生；刘鸣；张林锋；申子龙；王少华；殷力 刊期： 2011年第04期
目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在高糖环境下能否转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),转染成功后目的 基因表达.方法 腺病毒载体介导大鼠BMP-2和IGF-1基因高糖环境下转染Wistar大鼠BMSC,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测基因复制及表达.结果 高糖环境下BMP-2、IGF-1基因各自及共同转染BMSC后,BMSC成活,BMP-2基因表达的产物峰值出现在转染后72 h,BMP-2组灰度值为(1.86±0.06),产物浓度为(58.60±1.61)μg/L,BMP-2+IGF-1组灰度值为(2.37±0.34),产物浓度为(67.61±1.91)μg/L,两组差异均有统计学意义(P＜0.05);IGF-1基因表达的产物峰值出现在转染后48 h,IGF-1组灰度值为(1.48±0.03),产物浓度为(65.17±3.64)μg/L,BMP-2+IGF-1组灰度值为(1.93±0.17),产物浓度为(73.94±4.30)μg/L,两组差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 高糖环境下BMP-2、IGF-1可转染BMSC,且转染后基因表达产物量显著增加.BMP-2、IGF-1基因在基因表达上有协同作用.
作者：王亮；邢德国；吴建军；刘中浩；田克立；宫明智 刊期： 2011年第04期
目的 观察纳米金对表阿霉素在抑制HepG2细胞增殖中如何发挥增敏作用.方法 实验组分为纳米金预处理组和单纯表阿霉素组.常规消化HepG2细胞后种板,各组分别加入2 μg/L的纳米金溶液和无血清培养液100μl,于设定的时间点(30、60、120和240 min)加入1 mg/L的表阿霉素溶液100μl,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测两组药物对HepG2细胞的增殖抑制作用;紫外-可见分光光度计(UV-Vis)检测各组HepG2细胞内积聚的表阿霉素量;原子力显微镜(AFM)观察HepG2细胞表面形态及超微结构变化.结果 纳米金预处理组各时间点HepG2细胞增殖抑制率[(50.53±1.38)%、(51.83±0.47)%、(48.66±2.21)%、(43.55±1.01)%]均明显高于对应的单纯表阿霉素组[(37.24±3.49)%、(39.42±2.28)%、(34.98±2.27)%、(28.92±3.80)%],P值＜0.01;纳米金预处理组(60min)表阿霉索在HepG2细胞内积聚的量多,为(4.01±0.14)μg;AFM检测到纳米金预处理组HepG2细胞膜内陷,粗糙度增加,表面孔径增大,细胞核的饱满程度减少.结论 纳米金可通过增加表阿霉素在HepG2细胞内的积聚量来发挥增敏作用,纳米金预处理60 min对表阿霉素的增敏作用大.
作者：潘运龙；赵晓旭；覃莉；杜彬；吕荣钊；蔡继业 刊期： 2011年第04期
目的 观察阻断体外培养兔关节软骨细胞膜上的K+、Cl-离子通道对其糖胺多糖(GAG)、Ⅱ型胶原基质合成代谢的影响.方法 2个月龄新西兰白兔,无菌条件下切取双膝关节软骨,酶解法分离软骨细胞,以5 ×104/孔接种于24孔板中.正常培养2 d细胞贴壁后换液,并以12个孔为1组随机分为3组,对照组:用DMEM/F12正常培养;K+离子通道阻滞组(简称4-AP组):利用含1 mmol/L 4-氨基吡啶(4-AP)的DMEM/F12培养,特异性阻断电压门控型K+离子通道;Cl-离子通道阻滞组(简称SITS组):利用含1 mmol/L4-乙酰氨基-4'-异硫氰基-2,2'-乙拌磷酸均二苯乙烯(SITS)的DMEM/F12培养,阻断阴离子通道,主要是Cl-离子通道.分别在换液后第3、6、9天留取各孔上清液并分为2份,1份以阿尔新蓝法检测其GAG的含量,同时另1份以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Ⅱ型胶原的含量(n=12).结果 4-AP组在第3天时与对照组比较GAG含量明显下降(P＜0.05),但第6天和第9天差异无统计学意义(P＞0.05),同时在第3天和第6天Ⅱ型胶原含量显著增加(P＜0.05),第9天时有下降趋势,但差异无统计学意义(4-AP组GAG含量分别为17.23±1.47、20.98±2.61、33.13±8.13;Ⅱ型胶原含量分别为0.793±0.214、0.789±0.084、0.715±0.388);SITS组在第3、6、9天与对照组比较GAG含量都显著增加(P＜0.05),同时在第3天和6天Ⅱ型胶原含量显著增加(P＜0.05),第9天仍然有增加的趋势,但差异无统计学意义(SITS组GAG含量分别为54.30±4.43、56.47±3.14、58.71±2.50;Ⅱ型胶原含量分别为0.793±0.125、0.853±0.060、0.925±0.053).结论 阻断K+、Cl-离子通道后显著促进软骨细胞GAG、Ⅱ型胶原的合成,尤其是阻断Cl-离子通道后,GAG的合成增加尤为明显.
作者：任立新；王琦；丁娟；杨朝晖；段王平；卫小春 刊期： 2011年第04期
目的 观察一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在急性大面积脑梗死患者去骨瓣术后的表达.方法 急性大面积脑梗死患者16例(脑梗死组),均采用全麻开颅去骨瓣减压手术,手术中切除部分梗死额叶组织;以6例重型颅脑外伤行正常额叶组织内减压为对照组.2组均采用透视电镜观察额叶细胞超微结构,检测NO含量和NOS活性,Western blot法分析内皮型NOS(eNOS)、神经元型NOS(nNOS)和诱导型NOS(iNOS)蛋白表达特点.结果 本组病例16例脑梗死患者术后神志不同程度改善,无死亡病例;NO含量在脑梗死组和对照组分别为85.4U/ml和36.2U/ml,NOS活性在脑梗死组和对照组分别为63.2 μmol/L和37.2 μmol/L,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,eNOS、nNOS和iNOS在脑梗死组中表达均明显升高,尤其是iNOS表达相对值为0.76,远远超过对照组未见表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 去骨瓣减压是治疗急性大面积脑梗死的有效治疗手段,能够降低患者死亡率;NO和NOS参与并影响了大面积脑梗死后复杂的病理生理过程,去骨瓣减压后局部脑血供得到有效改善,NOS活性减低,尤其iNOS活性明显减少,合成NO减少,神经毒性减低,临床症状好转.
作者：陈春美；杨卫忠；王锐；石松生；王春华 刊期： 2011年第04期
目的 在活体动物模型中持续椎动脉内注射盐酸法舒地尔,观察其在不同时间点对蛛网膜下腔出血(SAH)引起的迟发性脑血管痉挛(CVS)的防治作用,并和静脉内给药对比.方法 将日本大耳白兔随机分为椎动脉7 d给药组、椎动脉5 d给药组、静脉给药组及对照组.枕大池2次注血法建立蛛网膜下腔出血模型,椎动脉给药组经微量注射泵分别于不同时间点开始给予盐酸法舒地尔或5%葡萄糖溶液,静脉给药组经耳缘静脉滴注盐酸法舒地尔,注血前及第5、7天各组均行脑血管造影及血管彩色超声检查,测算基底动脉内径变化的比例和血流峰值速度的变化.7 d时处死兔取基底动脉,行光镜、电镜检查,观察其病理改变.结果 动、静脉给药各组均对蛛网膜下腔出血引起的基底动脉痉挛有显著保护作用.在第5天,静脉给药组与椎动脉5 d给药组的保护作用差异无统计学意义(15.43±4.82)%比(10.37±6.92)%,但与椎动脉7 d给药组差异有统计学意义(2.02±6.21)%;在第7天,椎动脉5 d组与7 d组的保护作用差异无统计学意义(2.60±6.42)%比(0.44±5.12)%,但与静脉给药组差异有统计学意义(8.40±4.28)%.同时用血管彩色超声对各组基底动脉峰值流速进行监测,并行光镜、电镜等病理检查,也支持上述结果 .结论 脑血管痉挛动物模型中椎动脉内持续注射盐酸法舒地尔对蛛网膜下腔出血引起的脑血管痉挛的保护作用优于静脉内给药.
作者：刘鹏；向健威；潘力；马廉亭 刊期： 2011年第04期
目的 观察阻断转录因子Sp1蛋白及其和顺式作用元件的结合,对Ki-67基因转录的抑制作用.方法 Sp1小干扰RNA(Sp1-siRNA)、Sp1蛋白竞争剂光神霉素分别作用于宫颈癌Hela细胞、人肾癌OS-RC-2和肺癌A549细胞.Western blot检测Hela细胞Sp1蛋白表达.细胞免疫组织化学检测3种肿瘤细胞Ki-67蛋白表达.Sp1-siRNA或光神霉素与Ki-67基因核心启动子pGLBK235共转染上述3种肿瘤细胞,双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性.结果 Sp1-siRNA处理的Hela细胞Sp1蛋白表达显著减少.Sp1-siRNA、光神霉素处理的3种肿瘤细胞Ki-67蛋白均显著减少.Sp1-siRNA共转染的质粒pGLBK235启动子活性在Hela、OS-RC-2、A549细胞中分别降至单独转染pGLBK235的45.9%、64.5%、46.0%;光神霉素共转染的pGLBK235启动子活性随着药物浓度的升高而降低,其中药物浓度为500 nmol/L时其活性低,在Hela、OS-RC-2、A549细胞分别降至单独转染pGLBK235的34.7%、44.2%、29.8%.结论 抑制Sp1蛋白或是阻断其与Sp1顺式作用元件的结合,可以有效抑制Ki-67基因转录.
作者：徐为；李望；钱国伟；田卉；李连涛；刘俊杰；陈菲菲；李慧忠；章龙珍；郑骏年 刊期： 2011年第04期
目的 探讨微小RNA-29b(miR-29b)如何参与皮肤成纤维细胞胶原蛋白1的表达调控.方法 应用生物信息学平台预测靶向胶原蛋白1的miRNA.转染miR-29b模拟物和抑制剂48 h后,应用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测胶原蛋白1-α1和α2的表达.应用荧光素报告酶实验验证胶原蛋白1是否受miR-29b直接调控.结果 miR-29b过表达降低胶原蛋白1-α1 mRNA56.8%/蛋白51.6%、α2mRNA 47.8%/蛋白40.8%.抑制miR-29b表达增强胶原蛋白1-α1 mRNA4.4 倍蛋白3.6倍、α2mRNA2.2倍/蛋白1.7倍.体外共转染报告载体和模拟物后显著降低报告载体的荧光素酶活性,分别达52.1%和43.4%.且差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-29b是参与皮肤成纤维细胞胶原蛋白1的转录后调控分子之一.
作者：王琰玲；王子露；杨迷芳；程杰；吴煜农 刊期： 2011年第04期
目的 探讨镶嵌淋巴管(ML)的表达及其临床意义.方法 通过免疫组织化学法将48例直肠癌组织切片染色,观察直肠癌组织中的镶嵌淋巴管形态,并进行其与浸润深度、淋巴结转移及远处转移的相关分析.结果 46例直肠癌患者中有17例ML阳性,并且ML与直肠癌浸润深度无明显相关(r=-0.133,P＞0.05),与淋巴结转移(r=0.474)、远处转移(r=0.417)呈正相关(P＜0.01).结论 直肠癌淋巴管嵌合体的表达与直肠癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移呈正相关,它可提示病情的发展及预后.
作者：夏国兵；曹玉刚；冯茂辉 刊期： 2011年第04期
目的 建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探讨该方法 的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定佳测试时间点.方法 取C57及BALB/C小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57-BALB/C小鼠皮肤移植排斥模型,不同时间点(分别为输注后1、2、4、10 h、1、2、3、6 d),流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/C小鼠为对照组,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率:%specific lysis=1-donor cells/recipient cells×100%.结果 CFSE染色时需要较大浓度差才能完全把两群脾细胞完全分离开,在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰;即CFSE低浓度用0.3 μmol/L,高浓度用6 μmol/L.C57-BALB/C皮肤移植排斥模型在皮肤移植后两周即可建立,混合细胞悬液输注后,模型组与对照组输注混合细胞后1、2、4、10 h、1、2 d特异性杀伤率差异有统计学意义(t=39.5、41.1、26.2、27.4、15.8、5.5,P均＜0.01).模型组输注后1 h和2 h杀伤率分别高达(87.4±4.5)%、(92.2±3.9)%.结论 供体特异性体内免疫状态定量检测方法 流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果 没有影响,输注细胞后2～4h为佳检测时间点,体内细胞毒性实验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法.
作者：蒋泽生；高毅 刊期： 2011年第04期
目的 观察体外缺氧条件下肝癌细胞株HepG2中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对MAT2A基因表达的调控作用.方法 构建人MAT2A启动子真核表达载体质粒,CoCl2化学模拟肿瘤缺氧环境,检测缺氧条件下MAT2A启动子活性,HIF-1α和MAT2A在HepG细胞中的共定位、mRNA和蛋白水平的表达.以及小干扰RNA(siRNA)沉默HIF-1α后对MAT2A基因表达的影响.结果 缺氧24 h能使HepG2细胞活性增加到高峰(41.26±2.34),同时MAT2A基因的表达也较常氧时显著升高(P＜0.01),siRNA转染HepG2细胞后能显著下调HIF-1α蛋白表达(抑制率90%),并导致MAT2A基因的表达也受到明显抑制.结论 缺氧促使HepG2细胞中HIF-1α在蛋白水平表达升高,缺氧时HIF-1α能上调MAT2A基因的表达水平.
作者：刘立；刘志苏；刘权焰；王栋锋；张进 刊期： 2011年第04期
目的 探讨RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达.方法 设计合成4对靶向RhoA与RhoC基因的各两对寡核苷酸序列,退火后分别克隆入shRNA表达载体;通过一系列的酶切与连接,将该4段干扰片段串联起来,构建一个同时表达4个shRNA的重组质粒.经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体法转染HCT116,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性.结果 经酶切和测序证实重组质粒pGenesil2.7-A1+A2+C1+C2构建成功.转染该重组质粒后细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达水平分别为(0.78±0.11)和(0.90±0.21),明显低于空白对照组(0±0.15、0±0.09)和阴性对照组(-0.05±0.12、0.11±0.10,P＜0.05),且细胞的生长增殖率(63.8±12.5)%也显著低于对照组和质粒对照组(101.6±13.7)%(P＜0.05).结论 成功构建4个shRNA串联的重组表达载体,该载体可在体外高效表达.
作者：王海波；隋爱华；赵萍；杨堃；代明营；刘相萍 刊期： 2011年第04期
目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法.方法 采用自行设计的检测协同刺激分子B7-H4及内参照基因GAPDH的引物及TaqMan探针,经优化反应体系及反应条件后,检测B7-H4及GAPDH的基因表达.将B7-H4和内参照基因GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确并纯化后分别与pMD19-T载体连接,克隆构建含B7-H4及GAPDH基因片段的重组质粒,作为实时荧光定量PCR检测B7-H4及GAPDH基因表达的标准品.将重组质粒标准品进行定量及梯度稀释,建立标准曲线.结果 PCR扩增产物分别经测序证实为B7-H4及GAPDH基因的特异性片段.该法检测B7-H4基因表达的灵敏度为527 copies/ml,线性范围为5.27×102～5.27×107 copies/ml,标准曲线方程为:Y=-3.1395X+41.805,直线回归相关系数r=0.995,批间变异系数范围为2.39%～3.59%,扩增效率108.2%.该法检测GAPDH基因表达的灵敏度为386 copies/ml,线性范围为3.86×102～3.86×107copies/ml,标准曲线方程为:Y=-3.2436X+41.083,直线回归相关系数r=0.999,批间变异系数范围为2.26%～3.86%,扩增效率103.4%.结论 成功构建实时荧光定量PCR检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法,该方法 特异性好、灵敏度高、重复性好.
作者：郑晓；吴昌平；吴骏；鲁常青；季枚；徐斌；陈陆俊；蒋敬庭 刊期： 2011年第04期
目的 观察不同时点应用维拉帕米(VP)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其心肌保护的作用机制.方法 建立大鼠心肌缺血再灌注模型,将18只雄性SD大鼠随机分为3组,每组6只.Verapamil-1组于结扎前10 min开始泵入维拉帕米稀释液(0.25 mg/kg),Verapamil-2组于再灌前10 min开始泵入维拉帕米稀释液(0.25 mg/kg),IR组于结扎前10 min开始泵人生理盐水(2ml/kg).再灌注后60min处死大鼠.检测血清肌钙蛋白T(cTnT)含量、缺血区心肌组织Caspase-3表达水平;组织形态学分析心肌损伤程度.结果 Verapamil-1组血清cTnT含量、心肌组织Caspase-3表达量(4.60±1.12)ng/L,(39.51±5.01)%较IR组(7.70±1.31)ng/L,(51.10±5.30)%和Verapamil-2组(7.23±1.03)ng/L,(49.35±4.95)%明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Verapamil-2组血清cTnT含量、心肌组织Caspase-3表达水平和IR组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Verapamil-1组心肌组织形态学损伤程度较IR组和Verapamil-2明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Verapamil-2组心肌组织形态学损伤程度和IR组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 结扎前10 min开始给予维拉帕米对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用,再灌注前10 min开始给予维拉帕米对心肌缺血再灌注损伤无保护作用.
作者：郑红升；陈光献；刘海；黄邵洪；戴刚；吴钟凯 刊期： 2011年第04期
原发性肝细胞癌(HCC)是常见的恶性肿瘤之一,发病率高.细胞周期检测点激酶1(Chk1)是细胞周期检测点中重要关卡激酶之一,Chk1磷酸化而活化,有利于肿瘤细胞修复受损的DNA,避免凋亡[1],与肿瘤的发生发展密切相关.有研究表明,多种肿瘤组织及细胞株高表达Chk1[2-3],而且Chk1的高表达亦与肿瘤的耐药、不良预后有关[4].本研究旨在探讨Chk1在肝癌中的表达及与肝癌的相关性.
作者：李明；薛慧琴；朱镭；祁春茹；郭慧敏 刊期： 2011年第04期
基质金属蛋白酶(MMPs)家族成员参与细胞外基质(ECM)的降解过程,其高表达可能与软骨肉瘤的侵袭能力有关.本研究旨在观察几种MMP及其抑制剂(TIMPs)在软骨肉瘤中的表达.
作者：高峰；刘思源；胡彤宇；王晓梅；赵玉峰 刊期： 2011年第04期
骨髓基质干细胞(BMSCs)存在肾上腺素能受体,交感神经可能通过它们调节骨髓基质细胞的增殖和分化,本研究旨在观察肾上腺素受体对骨髓基质干细胞骨相关基因转录的调节作用.
作者：黄钢勇；马昕；夏新雷；金慰芳；戴志杰；黄煌渊；姜建元 刊期： 2011年第04期
本研究旨在探讨可降解多孔聚乳酸材料在骺板组织工程中的应用,现报道如下. 一、材料与方法 1.材料:可降解多孔聚乳酸,5 mm×5 mm×1 mm大小,孔隙率约90%,平均孔径约300μm.
作者：尹航；赵蕾；张锡庆；张亚；董寅生；董黎强 刊期： 2011年第04期
近年研究结果 显示,含有非甲基化的CpG基序具有强大的免疫激活作用[1].前期研究表明,CpG ODN可增强树突状细胞(DC)对胃癌细胞株MKN45的杀伤作用[2].本研究旨在观察CpGODN诱导DC的抗胃癌效应.
作者：孙梯业；颜伟；刘全达；张娜；王斌；段伟宏；贾洪琳；周宁新 刊期： 2011年第04期
目前肝癌有效的治疗方式仍是手术治疗,手术都不可避免地削弱肝脏功能.在我国,肝癌多伴肝硬化,严重影响肝脏再生能力和储备功能.我们通过分析肝癌手术治疗后出现并发症的情况,探讨ICGR 15对评估肝脏储备功能的意义,以及与其他常规肝功能评估指标的关系.
作者：姜涛；张水军；李捷；陈超群；唐哲；赵永福；柴宇霞 刊期： 2011年第04期
本实验旨在观察诱导分化剂苯丁酸钠(PB)对乳腺癌细胞形态及细胞周期的影响,探讨苯丁酸钠的作用机制.
作者：孙象军；王明春；王巍 刊期： 2011年第04期
利用自体树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤的主动免疫治疗方法 前景广阔[1].我们以胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞(DC),诱导特异性T细胞,并检测其对胶质瘤细胞杀伤能力,探讨其作用机制.
作者：冀保卫；陈谦学；田道锋；刘宝辉；吴立权；郭振涛；纪振刚 刊期： 2011年第04期
目的 观察硬膜外置管注射臭氧及得保松治疗颈椎病的临床疗效.方法 采用硬膜外置管注射臭氧及药物治疗颈椎病患者130例,其中神经根型颈椎病24例、椎动脉型颈椎病34例、颈型颈椎病18例、交感型颈椎病20例、脊髓型颈椎病6例、混合型颈椎病28例,随机分成2组,A组65例颈椎硬膜外注射臭氧(浓度20 mg/L)5 ml及得保松注射液1 mg,每天1次,7 d 1个疗程;B组65例,颈椎硬膜外注射得保松注射液1 mg,每天1次,7 d 1个疗程,观察2组患者症状改善情况.结果 经治疗后两组患者症状较治疗前明显改善,A组治疗效果明显优于B组.A组与B组疗效比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 颈椎硬膜外注射臭氧及得保松治疗能有效缓解颈椎病患者症状.
作者：程亚华；李荣春；郭晴晴；邱卫华 刊期： 2011年第04期
目的 测定下肢骨科手术术野回收血经自体血回收机处理前后及患者自血回输前后血清前炎性细胞因子浓度,观察骨科手术中自体血回输对患者细胞免疫的影响.方法 30例择期行下肢骨科手术患者,分别采集自体血回收机处理前后的术野回收血,并于自体血回输前10min、回输后1 h采集患者动脉血,采用放射酶联免疫吸附测量法测定血样中3种前炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)浓度,并观察相关并发症.结果 术野回收血经自体血回收机处理前后3种前炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF浓度分别为(0.54 ±0.22)、(0.71±0.16)、(16.23±5.68)μg/L和(0.26±0.12)、(0.29±0.09)、(6.32±2.57)μg/L,与处理前比较,处理后3种细胞因子浓度显著降低(P＜0.05);自血回输前后患者血清中3种细胞因子IL-1β、IL-6、TNF浓度分别为(0.35±0.17)、(0.47±0.15)、(8.44±3.56)μg/L和(0.39±0.19)、(0.52±0.18)、(9.48±3.45)μg/L,与回输前比较,回输后患者血清中3种细胞因子浓度增高(P＜0.05);30例患者自体血回输后12 h内均未观察到低血压、心动过速、血红蛋白尿、凝血功能紊乱、脓毒血症、空气栓塞、心肺问题等并发症.结论 骨科手术患者术中可适量自体血回输,回收血液经自体血回收机处理后前炎性细胞因子浓度显著降低,回输后未观察到严重并发症.
作者：安尔丹；龚遂良；肖旺频；周清河；沈颖彦 刊期： 2011年第04期
理想的骨移植材料能够模拟人类骨组织的三维结构,同时能使细胞在其结构上生长,能够传递细胞因子、抗体和化学试剂等,以促进骨损伤的自然修复[1-2].但是,目前的骨移植替代物和生长因子与理想中的相距甚远[3].因此,需要探索骨再生替代治疗的新策略.研究的核心是能够携带治疗基因的骨祖细胞负载在人工骨传导基质,使其具备骨传导性能和骨诱导性能.
作者：张翼；王义生；刘宏建；Abhijit S.Dighe；崔全军 刊期： 2011年第04期
目的 通过两种方法 构建兔VX-2移植性原位肾癌模型,并对其进行评估.方法 将30只新西兰白兔随机分2组,每组15只.A组采用开放手术下VX-2肿瘤组织块包埋种植法建模;B组采用经皮超声引导下VX-2肿瘤组织悬液经皮注射种植法建模,通过连续的CT及病理观察与评估模型的稳定性.结果 两组建模均成功.A组模型所有肿瘤均为单发,呈外生性肿瘤,形状规则.B组模型有2只出现腹壁种植,占13.3%,肾脏肿瘤生长多形状不规则,常较早突破包膜,沿入针处向肾外生长,部分肾脏肿瘤为完全内生型肿瘤,早期即侵犯集合系统.结论 采用开放手术下VX-2肿瘤组织块包埋种植法建模,肿瘤具有单发、呈外生性生长、形状规则等特点,有利于肾癌如射频消融等微创治疗的实验研究,为其提供稳定的动物模型.
作者：陈凡；刘光香；纪长威；郭宏骞 刊期： 2011年第04期
目的 探讨通过膀胱出口部分梗阻建立低顺应性膀胱模型的方法.方法 将成年雄性新西兰兔20只随机分为2组:对照组10只于实验开始时行尿动力学检测;梗阻组10只应用膀胱颈部分结扎的方法,造成膀胱出口部分梗阻,分别于8、12、14周进行尿动力检查,观察膀胱顺应性和膀胱重量的变化.结果 膀胱重量:梗阻14周组(14.1±2.3)g显著高于对照组(2.7±0.5)g(P＜0.01);膀胱顺应性:梗阻14周膀胱顺应性(1.21±0.44)ml/cmH2O显著低于对照组(2.68±0.67)ml/cm H2O(P＜0.01).结论 结扎法致膀胱出口部分梗阻是建立低顺应性膀胱模型的可靠方法.
作者：潘登；皇甫雪军；王伟；刘奔；赵耀瑞 刊期： 2011年第04期
经过近40多年的迅速发展,血管外科以外科为基础,不断融入新技术,在临床和基础研究中均取得了较大进步.血管外科之所以快速发展,大致有三个原因,其一:随着社会发展、饮食结构的改变、人口老龄化的加剧,血管疾病的发病率逐年升高;其二:随着科技的发展、影像学和诊断技术的提高、材料学如人工血管的出现和不断的改进、各种血管移植术尤其血管腔内治疗技术的不断完善和成熟,血管疾病的临床诊断、治疗和预后都有了飞速提高;其三:随着分子生物学、细胞生物学和基因工程技术迅猛发展和不断应用于血管疾病的基础实验研究,对血管疾病的发病机制有了新的认识.现介绍动脉疾病、静脉疾病、血管瘤和血管畸形以及支架和人造血管的实验研究和新技术研究的进展和发展方向.
作者：蒋米尔；赵海光 刊期： 2011年第04期
目的 探讨人内皮型一氧化氮合成酶基因(heNOS)转染抑制人血管平滑肌细胞(HVSMCs)增殖的机制.方法 以AdCMV-heNOS病毒感染复数分别为50、150、250、300、450 MOI,转染HVSMCs,放射免疫法检测转染HVSMCs中的环一磷酸鸟苷(cGMP)的表达变化;Western blot检测血管平滑肌细胞中p21、p27蛋白的变化,流式细胞术分析对细胞周期分布及凋亡的影响.结果 (1)转染120 h,A570值分别为1.410±0.081、1.357±0.150、1.303±0.311、0.995±0.248、0.731±0.101,其中感染复数300 MOI明显稳定抑制血管平滑肌细胞的增殖.(2)转染72 h,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组cGMP的含量分别为(7.91±0.39)、(8.36±0.34)、(12.89±2.06)μnol/L,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)转染48 h,Westem blot检测转染组p27、p21表达明显上调,而未转染组虽也有p21、p27的表达,但两组差异有统计学意义(P＜0.05).(4)无血清转染48 h后血清刺激24 h,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组G0/G1期分别为(64.23±1.58)%、(64.96±1.36)%、(76.03±2.27)%,差异有统计学意义(P＜0.01).(5)转染3 d,第1天,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组细胞凋亡率分别为(4.70±0.56)%、(5.53±0.74)%、(8.53±1.06)%,差异无统计学意义(P＞0.05).第3天,细胞凋亡率分别为(5.40±0.62)%、(8.30±0.80)%、(9.30±0.90)%,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 heNOS基因转染HVSMCs抑制细胞增殖,通过p21、p27上调导致细胞周期的阻滞,无诱导细胞凋亡.
作者：兰勇；王玉琦；符伟国；李大军；韦军民 刊期： 2011年第04期
目的 观察四氢生物蝶呤(BH4)对吸烟者大隐静脉桥内皮功能的影响.方法 取12例吸烟(实验组)及10例不吸烟(对照组)行冠状动脉旁路移植术患者的大隐静脉.在器官槽中观察经重碳酸盐缓冲液(KH液)、含0.1 mol/L N-硝基-L-精氨酸(L-NNA)或含20 μmol/L BH4的KH液浸泡30 min后,苯肾上腺素(1×10-5 mol/L)及不同浓度(1×10-9～1×10-5mol/L)的非受体介导钙离子载体引发的血管舒缩反应.结果 大收缩强度各组间差异无统计学意义(P＞0.05).大舒张反应:经KH液浸泡后实验组低于对照组[(29.50±6.22)%比(48.20±7.74)%,P＜0.01];经L-NNA[(24.50±5.72)%比(28.80±5.64)%]或BH4[(46.40±6.32)%比(50.80±6.91)%]浸泡后两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吸烟损伤大隐静脉桥内皮源性一氧化氮介导的血管舒张功能,BH4有利于此功能的恢复.
作者：李世康；栗振坤；龙村；周琦云；冼磊；何巍 刊期： 2011年第04期
目的 探讨单核/巨噬细胞在下肢静脉性溃疡的表达及其意义.方法 将下肢慢性静脉功能不全患者28例分为溃疡组和无溃疡组.采用血细胞计数、流式细胞技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法 检测不同体位下肢外周血和局部皮肤单核/巨噬细胞的表达.另选10例健康志愿者为对照组.结果 各组间两两比较,下肢外周血单核细胞计数和CD68阳性细胞率比较差异无统计学意义(P＞0.05);溃疡组平卧位、下垂位血液中CD68阳性单核/巨噬细胞mRNA相对值分别为(0.81±0.21)和(0.66±0.24);皮肤中阳性细胞数为(60.31±14.20)、(58.10±16.23);与无溃疡组和对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);各组间不同体位之间单核/巨噬细胞免疫组织化学胞阳性细胞数和含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 单核/巨噬细胞浸润与下肢静脉性溃疡的发生密切相关.
作者：刘大钺；杨超；朱易凡；王深明 刊期： 2011年第04期
目的 观察移植物动脉血管病(TA)的内膜病变机制和反义细胞外信号调节激酶2基因腺病毒载体(Adanti-ERK2)基因治疗的效果.方法 建立Brown-Norway(BN)-Lewis移植物动脉血管病模型,分为同系组、Control组、LacZ组和Adanti-ERK2组(给予5×109 pfu Adanti-ERK2基因治疗),每组各6例.术后60 d检测各组内膜病变和血管腔内膜/(内膜+中膜)比,α-肌动蛋白(α-actin)和血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)染色检测移植动脉平滑肌细胞(VSMCs)增殖和分泌功能,评估移植动脉新生毛细血管情况并检测移植动脉中环氧化酶-2(COX-2)的表达.结果 术后60 d同系组内膜无异常,Control组和LacZ组典型内膜增殖改变,Adanti-ERK2组内膜病变较轻;内膜/(内膜+中膜)比各组分别为7.6%、81.4%、85.9%、15.9%;α-actin阳性细胞(内膜平滑肌细胞)每视野计数各组分别为0、71.3±9.2、76.4±11.3、34.8±5.3;PDGF-BB阳性细胞每视野计数各组分别为0.9±0.5、28.4±3.4、29.1±3.2、8.6±1.7;移植动脉中膜和内膜新生毛细血管检测各组分别无、丰富、丰富、少量;COX-2新生血管阳性细胞计数各组分别为0、36.3±8.3、40.9±9.2、10.4±3.9.Adanti-ERK2组与其他组别间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 内膜增生,血管腔缩窄,PDGF-BB诱导内膜平滑肌细胞募集分化并激发血管新生是TA重要病理生理环节,AdantiERK2基因治疗可有效干预各发病环节,达到治疗效果.
作者：赵波；宫念樵 刊期： 2011年第04期
目的 从scFv噬菌体库中获取人源化特异性Anti-GPⅡb/Ⅲa单克隆scFv抗体.方法 对Tomlinson I+J scFv文库进行3次淘洗,富集特异性的抗GPⅡb/Ⅲa抗体.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和双脱氧终止法基因测序及同源性对比,检测出人源化的抗GPⅡb/Ⅲa单克隆抗体.结果 在3次淘洗后,得到了抗GPⅡb/Ⅲa单克隆噬菌体抗体,阳性克隆的获取率在95.6%以上;ELISA和基因测序筛选出25种不同的全长抗GPⅡb/Ⅲa噬菌体抗体,这些基因序列与人免疫球蛋白可变区基因同源性达到89%以上;分泌性抗体ELISA检测提示这些抗体顺利表达了蛋白并特异性结合GPⅡb/Ⅲa,其中15种scFv对GPⅡb/Ⅲa有更强的阳性反应.结论 人源化的特异性抗-GPⅡb/Ⅲa scFv能通过噬菌体展示技术快速有效地获得.
作者：夏红利；谭最；陈德杰；乔建国；邱仁峰 刊期： 2011年第04期
目的 应用Real time聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学技术观察OPN在夹层血管标本和正常对照标本中的表达是否存在差异.方法 选取急性期的主动脉夹层标本(AD)标本12例,正常胸主动脉12例.抽提标本总RNA,以GAPDH基因为参照,采用Real time PCR比较AD组和对照组OPN基因在RNA水平的差异;采用免疫组织化学方法 显示OPN蛋白在两组标本中的表达,两组各个标本在低倍视野下随机选择3个部位进行阳性细胞计数,比较两组OPN在蛋白质水平表达的差异.结果 AD组OPN基因的表达水平是正常组的5.56倍(P＜0.01),AD组OPN蛋白的表达水平是对照组的3.03倍(P＜0.01).结论 AD组标本OPN在基因和蛋白质水平均发生上调表达;OPN的上调表达可能与AD的形成密切相关.
作者：王利新；符伟国；郭大乔；蒋俊豪；唐骁；张京；王玉琦 刊期： 2011年第04期
目的 应用重组腺病毒载体介导的趋化素样因子1(CKLF1)基因转染大鼠血管平滑肌细胞(SMC),观察CKLF1对SMC内核因子(NF)-κB活性的影响.方法 用腺病毒介导的CKLFl以不同时间梯度转染刺激SMC,采用免疫细胞化学、荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot 等方法 分析细胞内CKLF1和NF-κB激活表达.结果 静息状态下SMC中NF-κB有基础表达量,经CKLF1刺激后2～14 d,其活性迅速增加,免疫细胞化学染色细胞质和核呈棕色,CKLF1荧光定量PCR和Western blot结果 分别为1.0500±0.0681、3.3090±0.1523、2.8540±0.1219、1.7050±0.0944、1.4350±0.0858和1.186±0.061、2.264±0.185、2.397±0.149、1.617±0.101、1.381±0.033,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).NF-κB的Western blot结果 为1.184±0.111、2.046±0.221、1.747±0.068、1.498±0.051、1.412±0.087,与对照组比较5～14 d差异有统计学意义(P＜0.05).两组刺激后5～8 d为表达高峰期,且NF-κB活性与CKLF1表达量间明显相关.结论 CKLF1可导致NF-κB表达增加并随刺激时间梯度改变,提示NF-κB信号通路可能参与了CKLF1对SMC的增殖和迁移作用.
作者：张韬；沈晨阳；李清乐；周冰莹；张小明 刊期： 2011年第04期
目的 应用比较蛋白质组学方法探讨人动脉粥样硬化闭塞症(ASO)差异蛋白质的表达及其在ASO发病机制中的作用.方法 选取ASO股动脉8例及正常股动脉5例,提取组织蛋白质,行双向凝胶电泳分离、质谱分析及数据库查询,获得差异蛋白信息.结果 成功建立ASO和正常股动脉双向电泳图谱,含量相差大于2倍以上的蛋白质53个,27个上调,26个下调,质谱鉴定出13种蛋白质,主要与炎症、免疫、氧化应激、脂质代谢等相关.结论 ASO与正常股动脉蛋白质组明显差异,差异蛋白质可能在ASO中起重要作用.
作者：赵振；赵海光；蒋米尔 刊期： 2011年第04期
目的 观察雌激素对大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中微小血管再形成的影响.方法 将40只雌性Wistar大鼠随机分成3组:单纯损伤组15只(A组),去卵巢组15只(B组)和假手术组10只(C组).8周后,在背部制成全层全损皮肤创伤愈合模型,分别于伤后1、3、7、14和21 d记录3组各个时间点伤腔容积,并在创缘取材.常规组织学观察皮肤愈合过程和微血管的数量,同时采用雌激素β受体(ER-β)进行免疫组织化学染色,观察微血管及周围细胞受体的染色.结果 比较各个时间点的伤腔容积,单纯损伤组和假手术组大鼠创面内肉芽组织形成量明显大于去卵巢组,组织学评分略高于去卵巢大鼠;而单纯损伤组和假手术组之间差异无统计学意义(P＞0.05).卵巢切除大鼠伤后各时间点,真皮内微小血管的数量较单纯损伤组减少,各组均于伤后7 d,随着成纤维细胞和毛细血管数目的 增加,肉芽组织生长达到高峰.同时,各损伤组创基内微小血管周围均出现较为幼稚的细胞,其表面可以表达ER-β,但卵巢切除组(159.91±12.65)稍弱于单纯损伤组(189.36±27.32),差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠去卵巢后创面愈合速度明显减慢与微血管形成有关,雌激素及其受体在该过程中有重要作用.
作者：新苏雅拉图；陈小波；程飚；刘宏伟；唐建兵；余文林；吴燕虹；李勤 刊期： 2011年第04期
目的 利用三维计算机血流动力学数值模拟技术分析不同形态侧壁动脉瘤的血流特点.方法 选取资料完整的侧壁动脉瘤患者14例,在三维计算机断层扫描血管造影(CTA)图像基础上,利用本课题组自写程序及美国Fluent公司的Fluent 6.02等,对动脉瘤进行三维计算机血流动力学数值模拟,得出动脉瘤血流速度、轨迹、剪切力等多项参数,结合动脉瘤形态特点进行对比分析.结果 根据分析结果 将患者侧壁动脉瘤分为两种类型.Ⅰ型:动脉瘤长径与载瘤动脉中心轴不共面,模拟结果 显示动脉瘤中有涡流产生,血流速度范围0.86～1.03 m/s.Ⅱ型:动脉瘤长径与载瘤动脉中心轴共面,模拟结果 显示动脉瘤中无明显涡流产生,血流速度范围0～0.013 m/s.结论 从Ⅰ、Ⅱ型动脉瘤特点可知,侧壁动脉瘤的形态特点决定瘤内血流特点.
作者：李淼；赵丛海；王捷；高宇飞；李东原；张环；吕明；杨新健 刊期： 2011年第04期
目的 构建大鼠STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,并观察其对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响.方法 针对STAT3基因的不同部位设计4对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒载体PLKO.1中,构建靶向STAT3基因的慢病毒载体PLK0.1-STAT3-shRNA,检测并筛选佳抑制效率的shRNA干扰载体.并将其转染大鼠血管平滑肌细胞,用噻唑蓝法和流式细胞仪检测沉默STAT3基因后对血管平滑肌细胞增殖和凋亡能力的影响.结果 靶向STAT3慢病毒表达载体构建成功.转染PLKO.1-STAT3-shRNA后,STAT3蛋白表达明显下降,其中以PLKO.1-STAT3-S1为明显,达到90%以上;转染PLKO.1-STAT3-S1的细胞增殖能力(A值=0.25±0.05)明显低于未转染组(A值=0.62±0.12)和阴性对照组细胞(A值=0.59±0.11)(P＜0.05);而早期细胞凋亡率(26.9±2.8)%和晚期细胞凋亡率(9.5±1.6)%均明显高于未转染组和阴性对照组(P＜0.01).结论 成功构建并筛选佳抑制效率的靶向STAT3慢病毒表达载体PLKO.1-STAT3-S1,该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,并促进细胞凋亡.
作者：邱志兵；陈鑫；段超；许欢 刊期： 2011年第04期
目的 探讨组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对ECV304细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响及过程中可能涉及的信号通路.方法 将ECV304细胞与Adt-PA混合培养24h后检测VEGF转录及表达水平并与混合培养48 h组及空病毒组作比较.检测空病毒转染组及转基因组ECV304细胞中磷酸化ERK(pERK)水平,以及应用PD98059阻断ERK磷酸化后细胞内VEGF的表达变化.结果 ECV304细胞内VEGF转录和表达水平在24 h和48 h两个时间点较对照组均有明显升高(P＜0.01).转染后细胞内pERK水平呈逐渐升高的趋势,而加入PD98059的ECV304细胞中VEGF蛋白的表达量及pERK水平明显下降(P＜0.01).结论 外源性t-PA可显著增加ECV304细胞中VEGF的转录和蛋白表达水平.在此过程中,ERK信号途径起重要作用.
作者：段鹏飞；吴浩荣；李晓强 刊期： 2011年第04期
目的 构建携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因的新型真核表达载体pIRES-EGFP-VEGF165,并通过转染人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞,观察载体的体外表达和对血管内皮细胞增殖的影响.方法 将VEGF165目的 基因片段插入到真核表达载体pIRES-EGFP质粒中,按每孔加入质粒DNA 1.2μg介导体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞,通过荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,n=3)和Western blot(n=5)分别检测mRNA和蛋白水平的表达,并通过MTT法(n=5)检测转染pIRES-EGFP-VEGF165质粒对血管内皮细胞增殖的促进作用.结果 成功构建pIRES-EGFP-VEGF165真核表达载体,测序结果 与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞株EA.by926细胞的转染效率约为(11.2±2.5)%;荧光实时定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-EGFP-VEGF165质粒组细胞在mRNA和蛋白水平表达的VEGF165均高于对照组(P＜0.01),MTT法检测表明转染pIRES-EGFP-VEGF165质粒组细胞增殖速度较对照组明显增加(P＜0.01).结论 成功构建pIRES-EGFP-VEGF165真核表达载体,并实现其在人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞中的表达,而且证实可以促进血管内皮细胞的增殖.
作者：王刚；张凯伦；蒋雄刚；刘成硅 刊期： 2011年第04期
