目的 探讨雌激素是否能激活MAPK信号转导通路,以及对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响.方法 培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,按药物干预分为3组:雌二醇(E2)组、U0126(MAPK激酶抑制剂)+E2组、对照组.采用荧光定量PCR技术检测各组MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达的变化;Western blot法检测各组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的活化程度;流式细胞仪检测各组的细胞周期比例;细胞集落形成实验检测各组细胞的增殖能力;体外穿膜实验比较各组细胞的迁移能力.结果 E2组MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达增加(P=0.025,P=0.002),U0126+E2组中,U0126能阻断E2诱导MEK1/2、ERK1/2mRNA的表达上调(P=0.000,P=0.000).E2组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平升高(P=0.049,P=0.028);U0126+E2组中,U0126能阻断E2诱导的p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化(P=0.018,P=0.003).E2组G1期细胞比例显著低于对照组及U0126+E2组(P=0.017),集落形成率显著高于对照组及U0126+E2组(P=0.009),穿过微孔的细胞数显著多于对照组及U0126+F2组(P=0.000).结论 雌二醇通过激活MAPK通路,促进子宫内膜癌的发展,MEK抑制剂能阻断并抑制这一作用.
作者：容雁；卢燕琼；张洁清；宋红林；李力 刊期： 2016年第03期
目的 探讨蝎毒多肽(peptide extract from scorpion venom,PESV)逆转白血病干细胞(leukemiastem cells,LSC)在体内多药耐药(multidrug resistance,MDR)的分子机制.方法 以多药耐药的K562/A02细胞株成模白血病BALB/c裸鼠为例,成模鼠随机分为6组:模型对照组、阿霉素(ADM)组、PESV组、ADM+PESV(H)组、ADM+PESV(M)组、ADM+PESV(L)组.模型对照组给予等体积0.9％氯化钠溶液腹腔注射,其余各组予相应剂量ADM和(或)PESV腹腔注射,连续给药14天.第21天观察各组裸鼠移植瘤生长情况,分别检测瘤块中LSC:细胞膜上P-gp的表达,细胞质中ALDH、PI3K的变化及细胞核中MDR1、NF-κB的活性.结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率和IC50值分别为31.5％、(60.33±10.68)μg/ml和92.8％、(58.33±9.72)μg/ml,分选后细胞干性显著提高,而耐药性无差异性损失;各组造模裸鼠成瘤率100％.瘤体中LSC:流式细胞仪检测细胞膜上P-gp表达结果:检测对照组89.8％、ADM组91.9％、PESV组88.4％、ADM+PESV(H)组53.9％、ADM+PESV(M)组78.0％、ADM+PESV(L)组78.7％;半定量RT-PCR检测MDRl mRNA的表达:PESV组＞ADM+PESV(L)组＞ ADM+PESV(M)组＞ADM+PESV(H)组＞ADM组;免疫组织化学检测ALDH,显示灰度值ADM组＞PESV组＞ADM+PESV(H)组＞ADM+PESV(M)组＞ADM+PESV(L)组;Western blot检测PI3K分子与Elisa检测NF-κB因子结果一致,在ADM组、PESV组表达上调,在ADM+PESV组中表达下调,下调强度与PESV剂量呈正相关.结论 PESV具有下调白血病干细胞膜上P-gp,细胞质内ALDH、PI3K及细胞核中MDR1、NF-κB的表达水平,增强了白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,逆转其多药耐药特性.
作者：杨向东；杨文华；刘宝山；伊学军；高宏；姚芳；王兴丽；闫理想 刊期： 2016年第03期
目的 探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术抑制血管生成抑制因子1(VASH1)的表达对人脑胶质瘤U-87MG细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用pGCL-GFP质粒构建针对VASH1的慢病毒shRNA载体,转染入工具细胞293T,筛选出适合浓度的慢病毒转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;通过RT-PCR和Western blot评价其对U-87MG细胞内VASH1表达的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察U-87MG细胞增殖活性的改变;用流式细胞仪(FCM)检测U-87MG细胞凋亡的变化.结果 与转染阴性对照组和空白组相比,转染pGCL-GFP-VASH1慢病毒载体的U-87MG细胞VASH1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.01);细胞的增殖活性显著上调(P＜0.01),细胞凋亡明显减少(P＜0.01).结论 VASH1shRNA慢病毒载体可抑制VASH1在人脑胶质瘤U-87MG细胞中的表达,并增加肿瘤细胞的增殖活性,抑制细胞凋亡.
作者：付锴；江普查；刘细国 刊期： 2016年第03期
目的 建立人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231顺铂(DDP)耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析.方法 采用逐步增加顺铂浓度、间歇诱导的方法,建立人三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP体外耐药细胞模型;MTT法检测MDA-MB-231/DDP的耐药特性;高效液相色谱法检测耐药细胞内DDP药物浓度的改变;实时荧光定量PCR法分析两种细胞耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及GST-π表达差异.结果 MTT显示MDA-MB-231/DDP的顺铂、5-氟尿嘧啶及环磷酰胺的耐药指数分别为9.80、4.43及2.21;高效液相检测显示2种细胞分别与6μg/ml的DDP接触24 h后,MDA-MB-231细胞内DDP的浓度为(47.10±2.37)ng/(5×104) cells,而MDA-MB-231/DDP细胞则为(6.30±1.64)ng/(5×104) cells (P＜0.01);MDA-MB-231/DDP细胞中MDR1、BCRP、MMP7及GST-π基因mRNA的表达量分别是亲本细胞的15.39、13.73、22.52及44.90倍(P＜0.01).结论 逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的MDA-MB-231/DDP细胞株,其耐药机制可能与ABC转运蛋白表达增加等多种机制相关.
作者：盛佳钰；时百玲；陈红风 刊期： 2016年第03期
目的 建立大鼠(乳鼠)肠上皮组织体外培养实验体系,检测TGF-β干预后大肠组织DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,Dnmt)及相关miRNA表达的变化,研究TGF-β诱导上皮组织的相关机制.方法 取出生3天的SD大鼠大肠组织建立体外组织块培养体系,观察组织块生长的情况,再用10 ng/ml TGF-β干预组织生长,对比干预前后组织生长状况的变化,并在干预不同的时间取组织样本;HE染色观察组织结构变化,提取组织块中RNA,采用RT-PCR方法检测DNA甲基转移酶及其相关miRNA的表达水平变化.结果 TGF-β处理不同时间的组织块HE染色分析结果表明,在培养过程中,组织基本结构逐渐不能保持.对Dnmts及相关miRNA的表达水平检测结果表明,TGF-β干预组织后,Dnmts及相关miRNA的表达水平异常,相应升高或降低;在TGF-β干预过程中,使用甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC干预24 h后,Dnmts的表达水平下降至无法检出,而此时相关miRNA的表达水平相应升高,甚至恢复至接近无TGF-β干预状态.结论 组织块培养过程中加入TGF-β干预,组织块的生长情况、Dnmts及相关miRNA的表达水平表现出异常,甲基化转移酶抑制剂能够抑制Dnmts的表达并且调节miRNA异常表达.
作者：张凌杭；吴丽云；杨万斌；文彬 刊期： 2016年第03期
目的 探讨CRNDE在胶质瘤细胞中发挥的功能和可能的作用机制.方法 将CRNDE基因干扰siRNA转染人胶质瘤U87细胞系,利用CCK8和Transwell实验分别检测细胞增殖和迁移能力变化,并利用Real-time PCR研究下游基因表达情况.结果 siRNA干扰CRNDE表达的胶质瘤细胞中,细胞增殖和迁移能力明显降低,MAPK/ERK通路中关键蛋白激酶Rafl、MEK2、ERK1、ERK2基因及转录因子c-Myc、NF-κB基因的表达均有显著降低.结论 CRNDE可能通过调节MAPK/ERK通路一系列相关基因表达,增加胶质瘤细胞的增殖和迁移能力.
作者：李昊文；李奇；李子瑞；王雅杰 刊期： 2016年第03期
目的 探讨化疗相关基因表达水平与EGFR突变状态的关系及其对化疗疗效的影响.方法 采用MTT法分别检测紫杉醇、顺铂对A549与HCC827细胞的24 h半数抑制浓度(IC50);比较紫杉醇、顺铂单独及联合作用于A549与HCC827细胞杀伤作用的差异;荧光定量PCR法检测紫杉醇、顺铂作用前后A549与HCC827细胞化疗相关基因(BRCA1、ERCC1、TUBB3)的表达水平.结果 紫杉醇对A549与HCC827细胞24 h的IC50分别为100和70 μg/ml,顺铂对两种细胞的IC50分别为40和50 μg/ml.单独作用时,紫杉醇对HCC827细胞的杀伤作用明显高于A549细胞(P＜0.05);顺铂对A549细胞的杀伤作用明显高于HCC827细胞(P＜0.05);紫杉醇和顺铂联合作用对A549和HCC827细胞的杀伤作用差异无统计学意义(P＞0.05),且均表现为单纯相加作用(Q=1.03,1.06).HCC827细胞中BRCA1基因表达明显高于A549细胞(P＜0.05);顺铂作用于A549细胞后,其ERCC1基因表达明显升高(P＜0.05).结论 紫杉醇、顺铂单独作用对EGFR野生型与突变型肺腺癌细胞杀伤作用有明显差异,而两者联合无明显差异,可能与BRCA1基因的表达有关;EGFR野生型比突变型肺腺癌细胞更容易对顺铂出现耐药.
作者：徐虹；梅家转；李瑞君；赵继智 刊期： 2016年第03期
目的 探讨miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 通过脂质体瞬时转染法将miR-711过表达(miR-711 mimics)、miR-711抑制表达(miR-711 inhibitors)、miRNA空质粒转染人胃癌细胞株MGC-803.以miRNA空质粒转染组作为阴性对照组(NC组),以空白转染组作为空白对照组(K组).转染48 h后在荧光显微镜下观察转染效率,然后采用Transwell侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot实验检测上皮蛋白和间质蛋白表达量的变化.结果 Transwell侵袭实验结果显示:与阴性对照组穿膜细胞数(120.00±4.58)及空白对照组穿膜细胞数(119.67±5.13)分别比较,miR-711 mimics组穿膜细胞数(70.67±5.51)明显下降(P均＜0.05);划痕实验显示:划痕48 h,与阴性对照组细胞愈合率(32.52±1.73)％及空白对照组细胞愈合率(32.15±1.55)％分别比较,miR-711mimics组细胞愈合率(7.08±0.73)％明显下降(P均＜0.05);Western blot实验显示:miR-711 mimics 组与阴性对照及空白对照组分别比较,上皮标志物(E-cadherin蛋白)相对蛋白表达量增多,差异有统计学意义(P均＜0.05);间质标志物(vimentin蛋白)相对蛋白表达量水平减少,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 过表达miR-711可抑制胃癌MGC-803细胞侵袭迁移及上皮间质转化的发生.
作者：戴勇；穆柏银；唐亚平；肖伟升；邓文兵；廖爱军 刊期： 2016年第03期
目的 探讨IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B细胞增殖的影响及可能的机制.方法 用不同浓度IWR-1(2、4、8、16μmol/L)处理Hep3B细胞,CCK-8法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中蛋白表达的变化,实时定量RT-pCR检测β-catenin和c-myc mRNA表达的变化.结果 IWR-1对人肝癌Hep3B细胞的生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性(P＜0.01).流式细胞术结果显示,Hep3B细胞的细胞周期呈现明显的G0/G1期阻滞,且细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),呈现剂量依赖性.IWR-1可引起β-catenin和c-myc mRNA表达下降,β-catenin、c-myc蛋白表达下降,而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升.结论 IWR-1可以抑制人肝癌细胞株Hep3B的增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路来实现.
作者：时汀；张建淮 刊期： 2016年第03期
目的 分析EZH2和H3K27me3在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及与食管鳞状细胞癌临床病理指标之间的关系,并评价其表达对食管鳞状细胞癌患者预后的意义.方法 利用免疫组织化学法检测65例ESCC患者癌组织及相应的癌旁组织中EZH2及H3K27me3的蛋白表达,分析两者表达与ESCC患者临床病理学指标之间的相关性,并分析两者之间表达的相关性.利用Kaplan-Meier方法及Log rank检验分析两者表达与食管癌生存率之间的关系.结果 癌旁组织中EZH2和H3K27me3蛋白阳性表达率分别为44.6％和26.2％,ESCC组织中分别为70.8％和47.7％,EZH2和H3K27me3蛋白表达均与ESCC患者的组织学分级及淋巴结转移状态呈正相关关系,且EZH2和H3K27me3蛋白表达之间存在正相关关系.EZH2和H3K27me3表达阳性的ESCC患者五年总生存率均明显低于EZH2和H3K27me3表达阴性的患者;EZH2和H3K27me3双阳性的ESCC患者五年总生存率明显低于EZH2和H3K27me3单阳性和双阴性的ESCC患者.Cox回归结果显示,淋巴结转移、组织学分级、EZH2和H3K27me3表达是ESCC患者的独立预后因素.结论 EZH2和H3K27me3在ESCC中均高表达,并与ESCC患者的组织学分级和淋巴结转移状态相关,可能是ESCC患者的不良预后因子.
作者：张凤娟；刘飞；谷丽娜；桑梅香 刊期： 2016年第03期
目的 评价初诊非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者胸腔积液中肿瘤细胞(tumor cell,TC)水平的临床价值.方法 收集2013年1月～2013年12月安徽省立医院呼吸内科50例初诊NSCLC合并胸腔积液患者的首次胸腔积液标本,采用配体靶向多聚酶链反应(ligand-targeted polyenzyme chain reaction,LT-PCR)检测胸腔积液中的肿瘤细胞水平.分析胸腔积液中肿瘤细胞水平与患者性别、年龄、病理类型等临床特征以及身体状况(performance status,PS)评分、胸腔积液中癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)水平、转移部位数量的关系,同时,比较该方法与常规脱落细胞学检查之间的阳性诊断率.结果 初诊NSCLC患者胸腔积液中肿瘤细胞水平与患者性别、年龄、病理类型无明显相关性(P＞0.05),与患者PS评分呈正相关,PS分值越高、转移部位越多的患者肿瘤细胞水平也越高(P＜0.01).胸腔积液中肿瘤细胞水平和CEA水平呈显著正相关(r=0.667,P＜0.01).胸腔积液脱落细胞学检查阳性组患者的肿瘤细胞水平显著高于阴性组患者[(261.74±272.44)/ml vs.(90.61±144.24)/ml,P＜0.01].部分肿瘤细胞水平显著增高的患者,常规细胞学检测为阴性.结论 NSCLC患者胸腔积液中肿瘤细胞水平定量检测方法较传统的脱落细胞病理学检查方法可能有较高的诊断效率,对肺癌合并胸腔积液的诊断以及预后的评估有一定的参考价值.
作者：纪子梅；梅晓冬；费广茹；郭欣；蒋旭琴 刊期： 2016年第03期
目的 评价保守性手术在卵巢恶性生殖细胞肿瘤(malignant ovarian germ cell tumor,MOGCT)患者治疗中的价值,为MOGCT患者选择合理的治疗模式提供科学依据.方法 采用多中心、前瞻性对照临床试验方法,将MOGCT患者分为保守性手术组33例和广泛性手术组36例,从卫生经济学、手术安全性、月经、生育情况及疗效指标等多方面对两种治疗模式进行评价.结果 (1)卫生经济学指标:保守性手术组、广泛性手术组患者的平均初次住院时间分别为16.27、19.91天,平均初次住院费用分别为16 603.11、24 701.58元,差异均具有统计学意义(P＜0.05).(2)手术安全性:保守性手术组患者的平均手术时间、平均术中出血量、平均肠道恢复时间均明显短于广泛性手术组患者(P＜0.05);两组间患者平均拔尿管时间差异无统计学意义(P＞0.05);手术并发症发生率分别为12.12％(4/33)、47.22％(17/36),差异有统计学意义(P＜0.05).(3)保守性手术组、广泛性手术组患者治疗结束后月经规律比率、妊娠率差异均无统计学意义(P＞0.05).(4)疗效指标:保守性手术组患者3、5年累积生存率分别为94％、87％,广泛手术组患者均为94％;保守手术组患者3、5年累积无进展生存率均为92％,广泛手术组患者均为97％,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 保守性手术在缩小手术范围、减少手术创伤、提高MOGCT患者生存质量同时,不影响MOGCT患者的预后.
作者：林佳静；曾定元；贺红英；谭广萍；兰鹰；蒋福彦；生淑亭 刊期： 2016年第03期
许多病毒感染可导致肿瘤发生,这些病毒虽隶属于不同种属,但其进化出的分子干扰机制却有共通之处,即靶向调控与细胞生长和增殖相关的关键蛋白.病毒和宿主之间的相互作用也发生于表观遗传水平.本文对DNA病毒导致癌症发生的表观遗传机制进行综述.
作者：胡玉倩；郑义；宁勇；郗娟；谢圣高 刊期： 2016年第03期
高级别脑胶质瘤恶性度高,手术加术后常规放疗及化疗综合治疗是目前标准治疗方案,但疗效仍未见明显改善.研究显示高级别脑胶质瘤对放疗敏感度差,这就需要探索不同放疗分割模式的获益可能,为改善高级别脑胶质瘤患者的预后,近年来不少学者在放射治疗分割方式方面做了大量研究.本文就脑胶质瘤放疗剂量分割现状及其疗效作一总结.
作者：盖晓惠；薛晓英 刊期： 2016年第03期
雌激素受体(estrogen receptor,ER)是一类有配体激活的核转录因子,介导大部分的雌激素反应,在体内具有重要的生理功能效应.ER主要分为ER-α和ER-β两个亚型,其中ER-α主要表达于乳腺和子宫组织内,在乳腺癌发生发展过程中发挥重要调控作用.ER-α36是ER-α的一个分子量大小为36kD的新亚型,缺少ER-α的转录活化结构域AF-1及AF-2.ER-α36主要表达于乳腺癌细胞的细胞膜与胞质中,介导非核途径的雌激素信号转导.目前的研究认为ER-α36的调节异常与乳腺癌的发生、发展及治疗疗效密切相关,其有可能成为一个新的乳腺癌诊断、治疗及预后的标志物.在此,本文将对ER-α36的生物特性与功能、及其在乳腺癌内分泌耐药中的作用机制作一综述,评价其潜在的临床应用价值.
作者：李广亮；滕理送 刊期： 2016年第03期
