目的 探索应用异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型,并初步阐明其机制.方法 昆明种小鼠50只,随机分为异烟肼正常剂量造模组(常量组)、2倍剂量造模组(2倍量组)、5倍剂量造模组(5倍量组)、8倍剂量造模组(8倍量组)和空白对照组,每组各10只.各造模组分别以90、180、450、720 mg/kg剂量的异烟肼灌胃,18 h后检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平并取肝组织进行光镜观察,探索导致明显急性肝损伤的相对合适剂量.另取昆明种小鼠90只,随机分为单纯造模组(40只)、干预造模组(40只)和空白对照组(10只),各造模组以相对合适剂量异烟肼灌胃,其中干预造模组于造模前以甘利欣75 mg/kg体重连续灌胃5 d,18、36、54、72 h后分别检测血清ALT、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)水平,并进行肝组织光镜和电镜观察,探索导致明显急性肝损伤的相对合适时间及可能机制.结果 在探索相对合适剂量实验中,2倍量组小鼠血清ALT、AST分别为(101.6±6.3)和(108.1±14.9)U/L,明显高于空白对照组的(30.1±3.6)、(35.3±6.5)U/L和常量组的(52.8±5.3)、(53.9±8.9)U/L,差异均有统计学意义(均P＜0.05),肝细胞出现广泛的脂肪变性和水肿,肝窦几乎消失;5倍量组小鼠死亡7只,8倍量组小鼠则全部死亡.在探索相对合适时间及发生机制实验中,应用2倍剂量异烟肼灌胃后18 h,单纯造模组小鼠血清ALT、MDA水平明显高于空白对照组,SOD、GSH-Px水平明显低于空白对照组,肝细胞广泛损伤,细胞超微结构显著变化.结论 应用2倍剂量(180 mg/kg)异烟肼灌胃可成功建立小鼠急性肝损伤模型.异烟肼所致急性肝损伤可能与自由基脂质过氧化反应密切相关.
作者：禄保平；杨晓娜；许家艳 刊期： 2007年第04期
目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)中转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad3的表达下调与再生障碍性贫血(再障)发生的可能关系.方法 取20例重型再障患者骨髓MSC,分离制备出Flk1+CD34-MSC后进行以下试验:①体外定向诱导MSC向脂肪细胞分化,倒置显微镜观察成脂分化情况,油红O染色法鉴定脂肪细胞,用实时荧光定量PCR检测分化过程中脂蛋白酯酶(LPL)基因的表达;②用蛋白质印迹法检测MSC中TGF-β1及Smad3的表达,用ELISA检测MSC分泌TGF-β1的能力;③观察不同剂量(0、5、10、15、20 ng/ml)TGF-β1对再障患者骨髓MSC成脂分化和增殖的影响.以7名健康成人的骨髓MSC相应检测为对照.结果 再障患者骨髓MSC经4 d培养后即分化为脂肪细胞,而健康成人骨髓MSC中仅见少量细胞出现脂肪滴.再障患者MSC培养4和8 d时LPL基因表达水平分别为0.091±0.028、0.142±0.033,均高于健康成人骨髓MSC(分别为0.021±0.011及0.049±0.010,均P＜0.01);而TGF-β1及Smad3表达水平明显低于健康成人骨髓MSC,TGF-β1分泌水平(3.4 μg/L±0.9 μg/L)也明显低于健康成人骨髓MSC(11.6 μg/L±1.2 μg/L,P＜0.01).在向脂肪细胞分化过程中,仅加入5 ng/ml的TGF-β1即可明显抑制再障患者骨髓MSC向脂肪细胞定向诱导分化,同时促进其增殖.结论 再障患者骨髓MSC中TGF-β1及Smad3表达水平的显著下调可能参与了再障的部分发病环节.
作者：宋永平；房佰俊；张龚莉；林全德；汪萍；买玲；魏旭东 刊期： 2007年第04期
目的 考察不同浓度的甘氨酸和Triton X-100对葡萄球菌蛋白质A ZZ亲和肽-增强型绿色荧光蛋白(ZZ-EGFP)融合蛋白在大肠杆菌分泌表达的影响.方法 研究设计为两因素三水平析因设计.向液体培养基中分别加入终浓度0、1%、2%的甘氨酸和0、1%、2%的Triton X-100(共9种组合方式,终浓度均为0者为对照组),诱导大肠杆菌周质腔内ZZ-EGFP融合蛋白泄漏到液体培养基中,以培养上清液荧光强度为观察指标,通过ZZ-EGFP融合蛋白浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中ZZ-EGFP融合蛋白表达量.结果 培养基中分别加入1%、2%甘氨酸或1%、2%TritonX-100培养后,培养上清液荧光强度分别为 283±11、711±19和622±25、733±25,与对照组(74±5)比较,组间差异均有统计学意义(甘氨酸:F=10.881,P=0.024;Triton X-10:F=12.848,P=0.018);而且甘氨酸与TritonX-100两者之间有交互效应(F=5.441,P=0.005),其中培养基中同时含有终浓度2%甘氨酸及1%Triton X-100时培养上清液荧光强度高(1854±45),ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达量达到10.4 mg/L,与对照组(0.94 mg/L)相比提高了11倍.结论 甘氨酸和Triton X-100能提高ZZ-EGFP融合蛋白在液体培养基中的分泌表达量.
作者：唐金宝；杨洪鸣；张义军；李万忠 刊期： 2007年第04期
目的 探讨抗癌生物活性肽(ACBP)对人乳腺癌nm231细胞的作用及其机制.方法 nm231细胞经不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.25 μg/ml)ACBP作用72h,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性.以0.25 μg/ml的ACBP分别作用于nm231细胞4、6、24、48、72 h,行光镜和透射电镜(作用48 h细胞)观察.应用DNA凝胶电泳和磷脂结合蛋白V(Annexin V,AV)/碘化丙啶(PI)双标记染色流式细胞术等方法,观察0.25 μg/ml的ACBP作用不同时间对nm231细胞凋亡发生及作用48 h对细胞周期的影响.以上各项检测均设以RPMI 1640培养液取代ACBP的对照组.结果 浓度为0.1 μg/ml的ACBP即对nm231细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率为10.3%,抑制作用具有浓度依赖性,ACBP浓度为0.25 μg/ml时抑制率达35.1%.光镜观察显示,经0.25 μg/ml的ACBP作用24 h,细胞出现凋亡特征;作用48 h,光镜及电镜下均可见大量的典型凋亡细胞.DNA凝胶电泳显示,经0.25μg/ml的ACBP作用24 h的细胞出现DNA断裂;作用48 h的细胞出现典型的梯形电泳图谱.流式细胞术分析显示,ACBP作用后AV(+)/PI(一)细胞和AV(+)/PI(+)细胞比例均随培养时间延长而增大;作用48 h的nm231细胞G0/1期细胞比例高于对照组(P＜0.01),而细胞增殖指数低于对照组(P＜0.01).结论 ACBP可抑制nm231细胞的增殖,其机制与抑制nm231细胞的DNA合成和诱导细胞凋亡相关.
作者：贾淑芹；王文礼；苏秀兰 刊期： 2007年第04期
目的 以国产培养基替代昂贵进口培养基发酵培养重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)工程菌.方法 利用国产LB培养基对自行构建的含重组质粒pTK-rhSOD的基因工程菌E.coli DH5α通过摇瓶进行发酵培养,以SDS-PAGE分析方法考察不同菌体接种量(1%～5%)、菌体生长密度[波长600 nm处吸光度(A600)值]、诱导时间(1～8 h)、氨苄青霉素(Amp)浓度(终浓度150、200、250 μg/ml)及加入时机(分别于接种前和诱导前加入)、摇瓶装液量(10%～40%)和诱导温度(42、43、44、45℃)对rhSOD表达的影响,优选适培养条件,并与进口LB培养基进行比较.结果 对于国产LB培养基,采用3%～5%接种量,菌体密度生长至A600达0.38～0.63,诱导前补加Amp由初始的100 μg/ml至200 μg/ml,于42～44℃诱导3～5 h,rhSOD表达量可达30%;对于进口LB培养基,采用2%接种量,菌体密度生长至A600达0.55～0.93,诱导前补加Amp由初始的100 μg/ml至150 μg/ml,于42～43℃诱导2～4 h,rhSOD表达量可达30%.两种培养基摇瓶装液量对rhSOD的表达均没有明显影响.结论 国产LB培养基经条件优化后可获得与进口培养基相同的 蛋白表达量,可以替代昂贵的进口产品,为rhSOD进一步规模化生产降低发酵成本提供了实验依据.
作者：刘建荣；赵晓瑜；步得志；顾雅君；静天玉 刊期： 2007年第04期
目的 研究发酵条件对蛇足石杉支项孢属内生真菌2F09P03B石杉碱甲生成的影响,并探讨发酵条件的优化.方法 通过测定2F09P03B生长曲线、石杉碱甲积累曲线和培养液pH值随时间的变化情况,了解该菌株的培养特性;考察不同碳源和氮源对石杉碱甲积累的影响.在单因素试验的基础上,利用正交试验优化培养基碳源、氮源组成;考察MgSO4、KH2PO4、NaCl、CaSO4对石杉碱甲生成的影响,确定无机盐组成;优化接种量、发酵时间、培养温度、摇床转速等发酵工艺条件.结果 菌株2F09P03B的佳培养基组成为:马铃薯150 g/L,玉米粉30 g/L,麦芽糖25 g/L,酵母膏10 g/L,麸皮30 g/L,KH2PO41.5 g/L,MgSO4 0.5 g/L,NaCl 0.3 g/L,CaSO4 0.3 g/L,pH自然;佳发酵工艺条件为:接种量8%,发酵时间10d,培养温度28℃,摇床转数140 r/min.在此条件下,发酵液中石杉碱甲含量为8.17 μg/L,高达到8.32 μg/L,约为其干重的0.07%左右.结论 发酵条件对菌株2F09P03B石杉碱甲产量有明显影响.优化后的发酵条件可使该菌株石杉碱甲产量明显提高,有望成为石杉碱甲新药源.
作者：黎万奎；周吉燕；林子为；胡之璧 刊期： 2007年第04期
制备型高效液相色谱(preparative high performance liquid chromatography,Prep-HPLC)是一种使用高压、大流量液体输送系统在高分辨率、大内径、高载量分离柱上进行样品高纯度分离的液相色谱制备方法.应用该方法分离的产品在纯度、回收率、分离效率等方面远远优于传统的制备方法,因此在生物制品和药物研究、生产领域得到广泛应用[1-3].本文就近年来Prep-HPLC方法的研究进展及其在生物医药制品领域的应用做一综述.
作者：杨国锐；杨晓彤；杨庆尧 刊期： 2007年第04期
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是一类蛋白水解酶,可以降解多糖以外的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的多种成分,在组织塑型过程中影响着ECM的代谢、新生血管的形成等过程.在胎盘发育过程中滋养细胞的入侵包括细胞基质的溶解和重塑,其生物学行为与有着高度侵蚀性的肿瘤细胞相似,又被称为假恶性细胞.
作者：李向红；马海燕；王晓燕 刊期： 2007年第04期
基因载体问题以及与载体相关的免疫反应、细胞毒性和安全性等问题,是基因治疗领域亟待解决的关键问题之一.聚乙烯亚胺(PEI)是阳离子聚合物非病毒载体的典型代表[1],是一种很早便为人所知并予以应用的有机大分子.目前,以PEI阳离子聚合物与DNA形成的PEI/DNA复合物已成为非病毒基因载体的研究热点.本文就近年来这方面的研究进展作简要综述.
作者：杨冬；周启；樊国栋 刊期： 2007年第04期
1924年Ramon提出免疫佐剂的概念,80多年来,虽然进行了深入的研究,人用疫苗佐剂主要还是铝胶佐剂.直到近几年才上市了几种新型的疫苗佐剂,如MF59(高压条件下将鲨烯与Tween 80 和Span 85混合后进行微流化形成的均一小滴状乳液,应用于美国Chiron公司开发的流感亚单位疫苗),重组霍乱毒素B亚单位(rCTB,应用于瑞典SBL Vaccin AB公司研发的霍乱疫苗Dukoral),AS04(一种含有单磷脂A和皂角苷的油包水乳剂,应用于英国GlaxoSmithKline公司的乙型肝炎疫苗Fendrix)等,但应用范围较小.
作者：廖文勇；盛长忠；金永杰；吴全忠；刘方；李小强 刊期： 2007年第04期
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞.骨髓衍生干细胞(bone marrow-derived stem cells,BMSC)不仅可以向多种组织细胞分化表现出形成不同细胞的可塑性,还具有广泛的迁移现象,参与各种组织的修复和再生.骨坏死是骨科疑难病症之一,其发病机制尚未明确,目前提出的有骨内高压学说、脂肪栓塞学说、微血管内凝血学说等.
作者：吴星火；杨述华 刊期： 2007年第04期
人类基因组研究肇始于上世纪80年代后期,以1990年人类基因组计划实施为里程碑,迄今已届20载.20年来,人类基因组研究取得了举世瞩目的成就.回顾一下人类基因组研究为实现其主要目标和任务所走过的历程,有助于认识其今后的发展方向和趋势.
作者：方福德 刊期： 2007年第04期
作者： 刊期： 2007年第04期
项目管理作为管理学的一个应用分支,已经越来越受到人们的关注,特别是在建筑、IT、制造等行业已经得到深入广泛的应用.由于项目管理特别适用于投资巨大、关系复杂、时间和资源有限的一次性工作任务,新药研发过程也需要借助项目管理.
作者：周洲；贾晋斌；罗朝霞；王敏；宋华妮；余慧敏；邢玉芝；孙强 刊期： 2007年第04期
