目的 基于反义 RNA 沉默技术构建针对细菌 FabI 的超敏全细胞筛选模型,用于筛选 FabI 抑制剂.方法 以 Escherichia coli 基因组 DNA 为模板,PCR 扩增fabI 基因的 -74 ～ 86 bp 核苷酸序列,反向插入携带 pairedtermini 结构的反义质粒 pHN678 中,得到重组质粒pHNF,再转化至 E.coli 中,得到反义工程菌 E.coli/pHNF;通过平板表型观察对反义工程菌进行筛选;考察了 IPTG浓度对筛选模型的影响,确定 96 孔板抗菌筛选模型的条件,并用三氯生作为阳性对照、氨苄西林和浅蓝菌素作为阴性对照对该模型进行评价.结果 获得了针对 fabI 的反义工程菌,确定了适 IPTG浓度为 40 μmol/L,成功构建了 FabI 特异性酶抑制剂的超敏全细胞筛选模型,并验证了其可行性.应用该筛选模型对5847 个内生真菌次级代谢产物进行活性筛选,初筛阳性率约为 9.7%,经复筛后获得 8 份阳性样品.结论 成功建立了基于反义 RNA 沉默技术的 FabI 超敏全细胞筛选模型,并利用该模型筛选到 8 份阳性样品.
作者：殷瑜；戈梅；钱秀萍；陈代杰 刊期： 2012年第03期
目的 构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌及其目的 蛋白的分泌表达,并对其酶活性进行测定.方法 从 pET-22b/pUOX 重组质粒上 PCR 获得 pUOX基因,然后通过重叠延伸 PCR 技术将 pUOX 与一段 nprB信号肽基因相连,导入穿梭载体 pP43X,构建重组载体pP43X/pUOX,运用化学转化法转化枯草芽孢杆菌 WB800中.结果 发酵表达后胞外分泌液经 SDS-PAGE 检测,在约34 kD 处有一清晰蛋白条带,这与预期分子量一致.发酵液中该重组蛋白的酶活力达 2.322 U/ml.结论 成功构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌,目的 蛋白分泌表达并具有较高活性.
作者：李辉；陈思；马娇颖；戴君；谢光蓉；陈建华 刊期： 2012年第03期
目的 确定鞘氨醇激酶(SPK)在肝癌转移中的作用.方法 用 Ad-SPK1 腺病毒感染肝癌细胞 LM-3 使其 SPK过表达,Western blot 检测 SPK1 表达及激活情况;Transwell、划痕实验检测肝癌细胞迁移情况.体外管状结构形成实验检测 SPK 对脐静脉内皮细胞(HUVEC)管状化形成的影响.建立 SPK 过表达裸鼠模型,体内检测肝癌迁移情况.结果 在体外 SPK 对肝癌细胞的迁移无显著影响;Ad-SPK 能够促进 HUVEC 管状结构形成;裸鼠皮下移植瘤结果 显示 Ad-SPK 促进肿瘤生长和转移.结论 鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移.
作者：赛岩；代学强；白纪民；刘勇；常菁；范礼斌；崔春萍 刊期： 2012年第03期
目的 应用稳定表达红色荧光蛋白的人乳腺癌 MDA-MB-231SArfp 细胞系,建立乳腺癌骨移植瘤动物模型,并应用活体成像技术检测肿瘤的生长情况.方法 注射 MDA-MB-231SArfp 细胞于 BALB/c 雌性裸小鼠胫骨髓腔,应用活体光学成像系统,连续观察肿瘤细胞在体内的生长情况,同时测量肿瘤体积的变化;4 周和 7 周时拍摄 X 线片并做组织学检查,评估肿瘤对骨组织的影响.结果 利用活体光学成像系统监测发现,至第 3 ～ 4 周期间,肿瘤进入对数生长期;肿瘤大小与荧光信号强度呈线性正相关.X 线片和组织切片显示 MDA-MB-231SArfp 细胞形成溶骨性的骨破坏.结论 成功建立了可非侵入性监测的乳腺癌骨移植瘤模型,利用活体光学成像系统结合 X 线片及组织学检查能够直观、连续、准确地检测肿瘤细胞在骨环境内的生长情况,为后续抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具.
作者：严伟；金芳纯；范启明；汤亭亭 刊期： 2012年第03期
目的 建立以结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型;用此模型筛选莽草酸脱氢酶抑制剂;进一步评价化合物对莽草酸脱氢酶活性的影响.方法 表达并纯化结核分枝杆菌 H37Rv 莽草酸脱氢酶;利用还原型辅酶 II(NADPH)在溶液中的光吸收,测定酶的活性,构建了该酶抑制剂的高通量筛选模型;用 Z′因子法评价该模型的可靠性,并对 5 万余个化合物进行筛选;测定了各抑制剂的 IC50 并对抑制剂 6186050 的酶抑制动力学进行了研究;用菌液稀释法评价了抑制剂对某些临床分离菌株包括耐药菌株的影响.结果 得到了重组莽草酸脱氢酶;测得比活力为 20987 U/mg,所建的莽草酸脱氢酶高通量筛选模型 Z′因子为 0.76,符合高通量筛选的要求;对 5 万余个化合物进行筛选得到 9 个抑制率较高的化合物;抑制剂 6186050 为竞争性可逆抑制剂;抑制剂 6230384 和 6186050 对海分枝杆菌的低抑菌浓度(MIC)都是 32 μg/ml.结论 建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型筛选得到的抑制剂可能具有抑菌活性.
作者：陈小娟；崔佳飞；杨延辉；关艳；张雪莲；肖春玲 刊期： 2012年第03期
目的 体外评价结核分枝杆菌(Mtb)铁氧还蛋白还原酶FdrA 和 FprA 的活性,探索它们分别与两种铁氧还蛋白的偶联作用,并分析它们在 CYP125A1 的电子传递链中的作用.方法 采用大肠杆菌作为宿主克隆结核分枝杆菌 FdrA、FprA 和 CYP125A1 编码基因并进行蛋白外源表达;以NADH 或 NADPH 为电子供体,2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)为电子受体评价 FdrA 及 FprA 的活性;应用细胞色素C 为电子受体研究 FdrA 或 FprA 与不同铁氧还蛋白的偶联作用;分析 CYP125A1 对 4-胆甾烯-3-酮的代谢作用进而研究 FdrA 和 FprA 在 CYP125A1 的电子传递链中的作用.结果 FdrA 对 NADH 亲和力较高,Fdx 对 FdrA 活性有明显提升作用,菠菜铁氧还蛋白(spFDX)对其活性没有提升作用,FdrA/Fdx 和 FdrA/spFDX 均不能支持 CYP125A1的活性.FprA 对 NAPDH 亲和力较高,Fdx 和 spFDX 均对 FprA 活性有明显提升作用,Fdx 尤甚,FprA/spFDX 可以支持 CYP125A1 的活性,FprA/Fdx 不能支持 CYP125A1的活性.结论 FprA 是结核分枝杆菌 CYP125A1 的电子传递链蛋白,FdrA 可能不是 CYP125A1 的电子传递链蛋白.
作者：乔峰；张健美；白银磊；杨信怡；李聪然；李国庆；胡辛欣；游雪甫 刊期： 2012年第03期
S100 家族是一个分子量在 9 ～ 14 kD 之间、以独特的螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix)EF 手型基序为特征的、可以形成二聚体和多聚体的多基因调控酸性钙结合蛋白家族,主要存在于脊椎动物中[1],在细胞内外发挥其独特的生物学功能.S100 家族到目前为止至少包含 21 个成员,其中 16 个S100 蛋白的编码基因位于人 1 号染色体 q21 区域[2].S100 家族是多功能信号蛋白家族,转导钙依赖性细胞调节信号,参与调控多种生物学过程,例如调控蛋白磷酸化和去磷酸化、调节关键酶的活性、调节细胞骨架的组成、参与调控细胞生长、运动和分化、维持胞内外钙离子平衡等[3-5].心血管疾病、中枢神经系统疾病、炎症性疾病、肿瘤等多种疾病[6]与 S100 家族蛋白表达水平改变密切相关.
作者：刘晓燕；尹磊淼；王宇；徐玉东；魏颖；冉君；单纯筱；杨永清 刊期： 2012年第03期
微生物支撑着地球上的物质循环和生命延续,除了自身可作为新基因资源的重要来源外,还可产生对人类有价值的活性物质.然而,传统纯培养方法严重限制了人们对微生物资源的认识和开发.一方面,随着对微生物活性产物研究的深入,微生物往往被重复培养和筛选,从传统方法来筛选新活性物质的几率不断下降.另一方面,多达 99% 的微生物在现有实验条件和技术下尚未得到纯培养,其中蕴含着大量潜能微生物和基因资源[1].
作者：印蕾；高向东；顾觉奋 刊期： 2012年第03期
心血管疾病是当今世界导致人类死亡的头号疾病杀手,动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是其中常见的一种血管病变.目前认为,动脉粥样硬化是由单核/淋巴细胞黏附并激活内皮细胞(EC)而开启的由多种原因导致的疾病[1].伴随着对其研究的深入,越来越多 AS 相关的细胞因子及信号通路被发现,介导细胞因子活性的信号通路在 AS 的发生、发展中有重要作用.对这些细胞因子及信号通路的广泛研究将有助于我们寻找新的抗 AS 药物,并进一步从分子水平研究药物抗 AS 的作用机制.本文总结了动脉粥样硬化中相关的信号通路,并对中药抗 AS 作用研究进行了展望.
作者：卢琼；谭睿；崔文婷；蔡少青 刊期： 2012年第03期
基于特殊的物理和化学性质,纳米材料目前已成为表面工程学研究的理想材料.纳米粒子作为肿瘤治疗中的靶向给药载体可以提高药物的靶向作用.因此,对纳米粒子的修饰,将促进其在生物医学中的应用.以超顺磁性粒子(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPION)为载体的微粒靶向递送系统已成为比较热门的研究方向[1].
作者：赵戎蓉；鲁芳 刊期： 2012年第03期
D-二聚体(D-dimer,D-D)是纤维蛋白单体经活化因子 XIII 作用后形成的交联纤维蛋白凝块,再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物,医学应用上将它作为一个特异性的纤溶过程标记物,反映纤维蛋白溶解功能[1].与纤维蛋白破坏有关的疾病,如深静脉血栓形成(DVT)、肺栓塞(PE)和弥漫性血管内凝血(DIC)等,均可导致体内 D-D水平升高[2-6].近年来 D-D 的临床应用范围越来越广,除了以上提及的疾病外,在恶性肿瘤、糖尿病、肝脏疾病、脓毒血症的诊断以及溶栓治疗监测方面均具有重要的参考价值[7-9].
作者：康可人；吴培钿；卢艳华；张健；唐时幸；王继华 刊期： 2012年第03期
全球结核杆菌感染者高达 20 亿人,每年新发病例约800 万 ～ 1000 万,其中我国每年新发患者高达 150 万.结核杆菌流行病学的一个重要特征是结核分枝杆菌的潜伏感染.结核分枝杆菌潜伏感染是一种亚临床状态,其中约有 10% 的结核分枝杆菌潜伏感染者会发展成为结核病患者[1].流行病学调查显示,我国受结核杆菌感染人数超过5 亿.因此,如何有效、全面地筛查出结核病患者和结核杆菌潜伏感染人群,是结核病控制首要解决的问题.结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白主要为小分子的分泌性蛋白,这些蛋白抗原是记忆性免疫 CD4+T 细胞的靶分子[2].以早期培养滤液蛋白为刺激源,结合 γ 干扰素释放技术,可以用于结核杆菌感染的体外诊断.
作者：都伟欣；杨蕾；苏城；沈小兵；徐苗；卢锦标；王国治；陈保文 刊期： 2012年第03期
近年来研究证实,增强成骨细胞作用、改善骨质形成代谢、促进骨质形成是治疗骨质疏松新的更为重要的途径.成骨细胞的增殖和分化受多种因素调节,其中骨形态形成蛋白家族尤其是骨形态形成蛋白 II(BMP2)在成骨细胞分化过程中起着关键作用,其作为骨形成诱导因子有望成为骨质疏松治疗的新靶点.
作者：孙银玲；贺晓波；李永臻；孙海峰 刊期： 2012年第03期
