目的 对重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白(rHSA/GCSF)开展药效学、药理学和毒理学动物评价研究,以确认其安全性和有效性.方法 ①对 rHSA/GCSF 开展的药效学研究内容主要有:以恒河猴骨髓细胞为研究系统,在体外条件下培养骨髓粒细胞-巨噬细胞集落(CFU-GM),计数不同浓度的 rHSA/GCSF对 CFU-GM 数的影响的体外药效学评价;以小鼠 60Coγ照射、氟尿嘧啶注射液所致的鼠白细胞低下和对 60Coγ射线照射致食蟹猴白细胞低下的治疗作用.②药理学研究观察了 rHSA/GCSF 对小鼠中枢神经系统和狗呼吸及心血管系统功能的影响.③毒理学研究考察了 rHSA/GCSF 静脉和皮下给予小鼠、食蟹猴的急性毒性反应,以及长期和反复给药对大鼠和食蟹猴的安全性做出评价.④ rHSA/GCSF 的药代/毒代试验则是对 125I-rHSA/GCSF 不同剂量单次皮下注射给予小鼠、大鼠后,rHSA/GCSF 在各器官的分布、总放射性和 TCA 沉淀放射性的动力学参数测定,以及对不同剂量 rHSA/GCSF 连续给药食蟹猴后的血浆药物浓度及代谢动力学参数开展了考察.结果 ① rHSA/GCSF 可以使骨髓的粒白细胞系(粒系)增生活跃,骨髓粒系造血细胞及成熟中性粒细胞均明显增多;对氟尿嘧啶所致小鼠白细胞减少症有明显的治疗作用,在使用化疗药早期,可以减缓白细胞的降低,特别是可以使粒白细胞提前恢复到正常水平;rHSA/GCSF 可显著缩短食蟹猴白细胞减少症放疗模型产生的白细胞低下持续时间,使外周血白细胞加速恢复,尤其以中性粒细胞的增加为主,同时对红细胞和血小板的影响不大.②从获得的 PD/PK 数据t1/2 来看:rHSA/GCSF 半衰期平均值约为 38.6 h;单次皮下注射 rHSA/GCSF,在 500、1500、3000 μg/kg 剂量范围内对小鼠中枢神经系统无影响,与戊巴比妥钠无协同作用;单次皮下注射 rHSA/GCSF 在 50、200 μg/kg 剂量范围内对狗呼吸和心血管系统无明显影响.实验表明 rHSA/GCSF单次皮下和静脉注射给予小鼠的大耐受量(MTD)≥37.5 mg/kg,单次皮下注射给予食蟹猴的大耐受剂量为 11.6 mg/kg;长期反复给药对大鼠的基本安全剂量为300 μg/kg,对食蟹猴则是≥ 150 μg/kg.结论 rHSA/GCSF 融合蛋白每 4 天给药 1 次,对放、化疗所致的动物外周血白细胞减少症具有治疗作用,与市售常规 rhGCSF 每天注射 1 次相比具有长效作用.所获得的大量药效学、药代动力学、毒理学、毒代动力学的试验数据可供正在开展的临床试验研究参考,并具有很好的指导意义.
作者：富岩；尹丽莉；顾静良；马宪梅；左从林；于在林 刊期： 2012年第04期
目的 优化蠕虫 NADH-延胡索酸还原酶及哺乳动物NADH 氧化酶的高通量筛选模型,评价沃特曼内酯 F 的活性及选择性.方法 提取猪蛔虫和猪心线粒体,对温度、pH、NADH 浓度和线粒体浓度等参数进行优化,确定适宜反应条件.在佳反应条件下测定沃特曼内酯 F 对猪蛔虫 NADH-延胡索酸还原酶和猪心 NADH 氧化酶的抑制活性.结果 猪蛔虫 NADH-延胡索酸还原酶佳反应条件为37 ℃,pH 6.5,NADH 浓度为 0.18 mmol/L,线粒体浓度为0.025 g/L.沃特曼内酯 F 的 IC50 为 5.0 nmol/L;对于猪心NADH 氧化酶的 IC50 大于 6.2 μmol/L.结论 沃特曼内酯 F 是一种选择性猪蛔虫 NADH-延胡索酸还原酶的抑制剂,抑制活性达到了 nmol/L 级,具有成为新型抗蠕虫药物的潜力.
作者：李原；刘文财；孙文龙；董悦生；阎浩林 刊期： 2012年第04期
目的 研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响,为基因疫苗的设计提供参考.方法 利用分子克隆技术,分别构建能表达不同细胞定位的EGFP-HPV16L1 融合蛋白和截短型 EGFP-HPV16L1△NLS融合蛋白的重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS 真核表达载体;通过转染 CHO 细胞,并在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位;用重组pcDNA 载体免疫 BALB/c 小鼠;EGFP 作为抗原,ELISA法检测血清抗体吸光度.结果 ①重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 转染的CHO 细胞核内可见到绿色荧光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体转染的 CHO 细胞质内可见到绿色荧光;②两种不同的重组 pcDNA 载体均可诱导 BALB/c 小鼠体液免疫反应,但重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450 值显著高于重组pcDNAEGFP-HPV16L1 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450值(P < 0.001).结论 表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体液免疫应答水平,定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应,这为以增强体液免疫反应为目的 的基因疫苗的设计提供了参考.
作者：杨军；陈晓黎；王一理；司履生 刊期： 2012年第04期
目的 比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和 16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同.方法 将<伯杰细菌鉴定手册>中载入的 49 种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于适温度下孵育.挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和 PCR 扩增,获得 DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行 16S rRNA 序列测定.结果 49 种分枝杆菌模式株中,采用 RP-HPLC 分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共 7 种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用 16S rRNA 序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共 12 种因各组内基因序列相似性百分比为 100% 而难以进行鉴别.通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将 49 种分枝杆菌模式株中的 47 种进行明确鉴别.结论 分枝菌酸 RP-HPLC 和 16S rRNA 序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法.两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种.
作者：陈保文；都伟欣；杜蓉；闫李侠；郭磊；杨蕾；王国治 刊期： 2012年第04期
目的 通过选择合适的启动子来实现外源基因在 Jurkat 细胞中的高效表达.方法 以 pGL3-MCS 质粒为基础构建不同启动子(SV40、CMV、EF1α和 UbC)驱动萤火虫荧光素酶 Fluc 报告基因表达的重组质粒,并将其与作为内参的表达海肾荧光素酶Rluc 报告基因的质粒共转 Jurkat 细胞,检测 Jurkat 细胞中这两种荧光素酶与相应底物反应所产生的荧光强度,计算Fluc 与 Rluc 荧光强度的比值即 Fluc 的相对酶活,通过比较 Fluc 相对酶活的大小来选取在 Jurkat 细胞中具有高表达活性的启动子.结果 以 pGL3-MCS 质粒为基础成功构建了不同启动子驱动 Fluc 报告基因表达的重组质粒 pGL3-CMV 、pGL3-EF1α和 pGL3-UbC.在 Jurkat 细胞中,不同启动子驱动的 Fluc 报告基因的相对酶活的强弱关系为pGL3-UbC > pGL3-EF1α > pGL3-CMV > pGL3-MCS.结论 可以选择高活性的人源泛素 C 启动子实现外源基因在 Jurkat 细胞中的高效表达,以利于 Jurkat 细胞系在哺乳动物 T 淋巴细胞以及免疫相关功能研究中的应用.
作者：袁娟；牟宗春；游佳；马维骏 刊期： 2012年第04期
近年来,由于过度使用抗生素,特别是滥用抗生素,病原菌日益广泛的耐药性已成为药物治疗中越来越常见的问题[1].为了克服细菌的耐药性,特别是多重耐药性问题,人们需要运用新的思路去发掘新的抗生素,因此,探索新型抗菌机制已成为目前的迫切需要.本文综述了近几年发现的抗菌药物的新靶位,分别从作用于细菌(真菌)细胞壁、细胞膜、RNA 聚合酶、胞内代谢及调控等 4 方面来谈抗菌药物的新作用靶位.
作者：陈盈盈；张玉彬；顾觉奋 刊期： 2012年第04期
自 1975 年,Kohler 创建杂交瘤技术并成功制备单克隆抗体以来,人们已研制出数以千计的单克隆抗体.单克隆抗体因其高度的靶向特异性已经成为科学研究,疾病诊断,药物靶向治疗等不可或缺的工具.由于杂交瘤技术制备单克隆抗体为鼠源性,在人体应用时易发生免疫排斥反应,难以有效激发人体免疫效应,而人源的基因工程抗体很好地解决了这一问题.借助 DNA 重组和蛋白质工程技术,人们可以获得人源单克隆抗体,并可在基因水平对抗体进行拼接、修饰、重新组装成为一种新型抗体.
作者：于礼；梁米芳 刊期： 2012年第04期
现代生物技术的迅猛发展使大规模表达异源重组蛋白成为现实,这极大地促进了蛋白类产品的开发,尤其是重组蛋白药物的研发.目前非糖基化的重组蛋白表达多采用大肠杆菌的原核表达系统,该系统的突出特点是表达产物多以包涵体形式存在.与蛋白可溶性表达相比,包涵体具有产量高、蛋白稳定、容易纯化等优点,对毒性蛋白制备尤其适宜.因此,采用包涵体形式已成为规模制备重组蛋白产品的主要途径之一.
作者：罗莉；李坤；王保成；王明蓉 刊期： 2012年第04期
基因芯片(DNA microchip)也称 DNA 微阵列(DNAmicroarray),是把大量基因探针或基因片段按特定的排列方式固定在芯片载体上,形成致密有序的 DNA 分子点阵,按碱基互补配对原则与样品 DNA 杂交,然后通过计算机进行解读和分析获取大量信息,实现对生物样品高效、平行地检测或医学诊断.由于具有高通量、快捷、便宜等优点,基因芯片在各个领域起着越来越重要的作用.
作者：郭育奇；赵春燕 刊期： 2012年第04期
随着电子信息化的迅速普及,条形码发展十分迅速,它已广泛应用于商业贸易、生产制造、医疗卫生[1]、仓储物流[2]等领域.条码的应用大大提高了信息处理和数据采集的速度,提高了工作效率,促进商品贸易管理的现代化和科学化[3].但是传统的一维码信息量有限,纠错能力差,二维条码信息容量大,信息密度高,编码能力强,可以对文字、照片、指纹、掌纹、声音、签名等信息进行编码,并且它容易印制,成本低廉,纠错能力强,译码可靠性高[4-5],在国外已经得到应用[6-7],本文主要就生物样本库管理中二维码的应用进行介绍.
作者：郭爱华；张翠；余永国；傅启华；金燕樑；江帆；王伟；刘世建 刊期： 2012年第04期
2011 年国家知识产权局受理发明专利申请 52.6 万件,同比增长 34.5%.国内(含港澳台,下同)发明专利申请为 41.6 万件,占总量的 79.1%,同比增长 42.0%.2011年发明专利授权量达到了 17.2 万件,同比增长 27.4%.国内发明专利授权为 11.2 万件,占总量的 65.1%,较 2010年提高 5.8 %,可以看出能反映科学技术发展和创新水平的发明专利授权量大幅提高.统计数据表明,2011 年发明专利授权排行前十的技术领域中就包括生物医药等高新技术领域.中国的企业、高校和科研院所已成为发明专利的主要权利人,这表明我国的生物医疗研发力量日益发展壮大,国内申请人已经充分认识到保护知识产权的重要性,在此基础上提高专利授权数量以及专利质量将是其关注的主要目标.
作者：孙春梅；倪晓红 刊期： 2012年第04期
2011 年,基因科学研究不断向前发展,笔者仅就和医学有关的基因测序,新基因和新功能的发现,基因的应用研究等加以总结,供读者参考.1 基因测序方面美国科学家首次绘制出了人体胚胎干细胞内一个名为5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)的修饰因子的全基因图谱.5hmC在一些被打开或激活的基因内出现的频率非常高,新研究将有助于癌症的控制.研究论文发表在美国<基因组生物学>杂志上.
作者：赵贵英；张树庸 刊期： 2012年第04期
