张浩明；付汉江；铁轶；朱捷；邢瑞云；汪成富；郑晓飞
目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195.
作者：张浩明；付汉江；铁轶；朱捷；邢瑞云；汪成富；郑晓飞 刊期： 2008年第04期
曲妥珠单抗是靶向人表皮生长因子2(c-erbB-2,HER2)的单克隆抗体,治疗HER2阳性乳腺癌疗效确切,然而其客观反应率并不高,而且多数患者在1年内出现获得性耐药.目前的基础研究初步解释了曲妥珠单抗耐药的分子机制,一些新的治疗策略为曲妥珠单抗耐药患者带来新的希望.本文综述了近年来有关曲妥珠单抗的耐药机制及其应对策略的研究进展.
作者：李晓玲；徐建明；宋三泰 刊期： 2008年第04期
目的:研究复方丹参方中水溶性单体原儿茶醛对血管内皮细胞炎症反应的药理作用及机制.方法:使用脂多糖(LPS,0.5 μg/ml)刺激人脐静脉内皮细胞,造成炎症模型,用原儿茶醛(0.25 mmol/L,0.5 mmol/L,1.0 mmol/L)加以干预;用RT-PCR和ELISA方法检测细胞间黏附分子-1和纤连蛋白的表达水平以及单核细胞趋化蛋白-1的分泌量;用Western印迹方法观察了丝裂原激活的信号转导通路中ERK1/2、JNK和p38的活化情况.结果:原儿茶醛呈剂量依赖性地降低LPS导致的细胞间黏附分子-1及纤连蛋白的高表达,减少了单核细胞趋化蛋白-1的过度分泌,并能抑制ERK1/2、JNK和p38分子的活化.结论:原儿茶醛能通过抑制NF-κB-MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症反应.
作者：邢雅玲；叶志华；钟芝茵；马永洁；周喆；王升启 刊期： 2008年第04期
呼肠病毒属于呼肠病毒科正呼肠病毒属,是无包膜、有双层蛋白衣壳、分节段的双股RNA病毒,被广泛用于感染动物模型,研究无包膜病毒的致病机制.本文综述了呼肠病毒感染实验动物的致病性研究进展.
作者：左庭婷；端青 刊期： 2008年第04期
目的:研究3′-二甲氨基亚甲基葛根素在大鼠体内的组织分布与排泄情况,了解药物在动物体内变化过程,为临床试验提供药代依据.方法:大鼠尾静脉注射3′-二甲氨基亚甲基葛根素(生理盐水溶液,剂量50 mg/kg),采用机械匀浆处理组织.排泄实验是在不同时间点收集全部粪、尿、胆汁样品.用经验证的LC/MS/MS联用测定各组织、粪、尿、胆汁中3′-二甲氨基亚甲基葛根素的含量.结果:大鼠给药后,12 d内从粪中收集到给药剂量的(13.6±2.8)%,尿液中回收到(65.4±11.5)%,粪尿合计(79.0±14.3)%,5 d内胆汁中收集到(14.8±4.4)%.3′-二甲氨基亚甲基葛根素在大鼠各组织中均检测到,大肠内容物、小肠内容物和肝中浓度较高.结论:3′-二甲氨基亚甲基葛根素广泛分布于大鼠各组织中,主要以原形经尿和粪便排泄.
作者：高瑛；孟志云；朱晓霞；孙文种；吴卓娜；路金才；窦桂芳 刊期： 2008年第04期
目的:对华北地区29条军事坑道内32个平均储存20年左右的水库储水进行真菌学及其污染原因分析,为采取预防措施提供依据.方法:用沉降法对坑道空气真菌浓度进行检测.用萨布罗琼脂培养基以倾注法检测储水真菌浓度.对部分检出的空气和储水真菌菌株根据菌落形态特征及显微镜下生长结构进行鉴定.结果:①有散在或连成片状真菌斑膜的占37.5%,有大面积片状真菌斑膜的占25.0%,水面全部被真菌斑膜覆盖的占9.4%.②29条坑道空气真菌浓度平均2 532 CFU/m3.32个水库平均真菌浓度819.9 CFU/ml.③对1 734株空气真菌菌株及1 125株储水真菌菌株鉴定,均以青霉属(45%及46.8%)、曲霉属(12.9%及13.7%)、链格孢属(8.9%及6.8%)为优势菌.结论:储水真菌污染较普遍,污染原因主要是未采取消毒措施,空气中飘浮的真菌通过孔门及缝隙进入水库沉降水面造成污染.如果采取消毒措施,切断传播途径,严格管理制度,可以防止真菌污染,确保储水的卫生质量.
作者：张永良；侯小平；关宏坤；郑铁钢；郑世英 刊期： 2008年第04期
目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)感染者在慢性致病过程中抗HVR1抗体的变化规律.方法:分别利用融合HVR1抗原和多靶点HVR1抗原组合包被酶联板,采用间接酶联免疫法,检测不同阶段慢性HCV感染者体内HVR1抗体存在情况及HVR1抗体的异质程度.结果:在42份无临床症状、41份慢性肝病变、38份肝硬化患者中HVR1抗体的检出率分别为90.5%、95.1%和94.7%,并无显著差异(P>0.05);而这3组患者血清中HVR1抗体异质程度分别为5.39±3.75、11.74±3.29和10.61±4.09;慢性肝病变和肝硬化患者组的抗体异质程度要显著高于急性患者组(P<0.01).结论:HCV慢性感染的严重程度与HVR1抗体的异质程度相关,但与HVR1抗体的存在情况无关.
作者：修冰水；王国华；张贺秋；凌世淦；宋晓国；陈坤；柴文菡；冯晓燕；何竞；朱翠霞；邱艳；王袆；高波；查袆 刊期： 2008年第04期
目的:构建超大容量天然噬菌体抗体库.方法:从正常人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞(>180份),提取RNA,用RT-PCR分别扩增抗体可变区轻重链基因(VH和VL),通过重叠PCR技术将VH和VL连接为单链抗体ScFv形式,克隆插入到pDF噬菌粒载体,转化XL1-Blue细菌得到ScFv初级抗体库,并以高感染复数(MOI≥100)感染Cre+菌株BS1365,利用Cre/LoxP位点特异性重组原理,使VH和VL基因定向同源重组匹配,随后以低感染复数(MOI<1)感染XL1-Blue,获取次级工作库.分别用5种不同抗原进行筛选,所获阳性克隆送测序以获取抗体基因.结果:抗体V区基因得到有效扩增,初级库库容3.6×107,工作库容1.8×1011,5种不同抗原筛选均得到特异性结合噬菌体抗体;测序结果表明,所获取抗体涵盖了不同的基因亚群,进一步证明抗体库具有良好的多样性.结论:经Cre/Loxp定位重组系统成功构建了超大容量天然噬菌体抗体库,初步尝试对5种抗原进行筛选均获成功,提示该抗体库多样性较好,可用于制备人源抗体.
作者：王辉；黄英；王琰；沈倍奋 刊期： 2008年第04期
目的:制备紫杉醇长循环肝靶向脂质体(pac-GLs),并对制备的脂质体的性质进行评价.方法:用薄膜水化-高压均质法制备紫杉醇长循环肝靶向脂质体,纳米粒度测定仪测定其粒径,高效液相法测定其包封率.结果:制备的紫杉醇长循环肝靶向脂质体中的药物浓度为(1.00±0.10)mg/ml,包封率为(94±3)%.结论:本研究制备的紫杉醇长循环肝靶向脂质体包封率较高,质量可控,重复性好.
作者：杨瑞；梅丹宇；杨媛；梅兴国 刊期： 2008年第04期
作者： 刊期： 2008年第04期
目的:探讨mag-1基因与肿瘤细胞转移的关系.方法:检测mag-1在人肺巨细胞癌高低转移细胞株PLA801D与PLA801C、肺癌高低转移细胞株A549与H1299及乳腺癌高低转移细胞株MCF-7与MDA-MB-231中mag-1的表达水平;检测构建的mag-1正反义真核表达载体转染细胞后mag-1表达水平的变化;将mag-1正义表达载体分别转染低转移细胞株PLA801C及MCF-7并筛选出稳定克隆;研究mag-1过表达对细胞形态、增殖、迁移、黏附及侵袭等生物学行为的影响.结果:高转移细胞株PLA801D中mag-1的mRNA及蛋白表达水平均显著高于低转移细胞株PLA801C中mag-1的表达水平,乳腺癌高低转移细胞株中mag-1的蛋白表达水平也有明显的差异;过表达mag-1细胞的形态及增殖能力没有发生改变,而细胞的黏附、迁移及侵袭能力增强.结论:mag-1可能促进肿瘤细胞的转移.
作者：贾海泉；蔺会云；徐元基；杜芝燕；王妍；陈惠华；姜云波；陆应麟 刊期： 2008年第04期
目的:制备以小分子丝瓜素(luffin)S2为毒性部分,以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH)为导向部分的重组嵌合毒素GnRH-luffinS,体外检测其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:重叠PCR方法扩增GnRH-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化.纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa, A549, HepG-2, SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒性.结果:成功构建了GnRH-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为93%.GnRH-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为67.19, 70.42, 84.44和106.25 μg/ml,而对CEF无作用.结论:重组毒素GnRH-luffinS对肿瘤细胞有一定的杀伤作用.
作者：刘艳华；康琳；高姗；王俊红；赵金银；高艳丽；胡瑞；王景林 刊期： 2008年第04期
生物分子调控网络的研究从分子之间相互作用的角度揭示复杂的生命现象,是基因组学、蛋白组学研究的重要内容,也是生物信息学研究的前沿.本文从数据库平台、调控网络特性、构建方法及应用和展望等方面综述了生物分子调控网络研究进展.
作者：高宏生；伍瑞昌；王运斗；王世鑫 刊期： 2008年第04期
核磷蛋白(nucleophosmin,NPM)是一个具有多种功能的重要蛋白,定位于核仁,可在胞核与胞浆之间快速穿梭.NPM基因在多种人类肿瘤中过表达,因此被公认为肿瘤标志物和癌基因.后来研究发现NPM也具有抑制肿瘤的功能,它的缺失、突变甚至重排与多种肿瘤的发生密切相关.这表明NPM的作用及其机制非常复杂,可能通过多种机制调控肿瘤的发生.
作者：徐诚望；杨晓明 刊期： 2008年第04期
将抗原与抗体的高特异性免疫反应与高灵敏度的化学发光检测技术相结合而形成新的免疫分析技术,即为化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)[1].CLIA通常分为闪光型(flash type)和辉光型(glow type)两种.
作者：沙栩正；王仁芝；邹应全 刊期： 2008年第04期
目的:构建本室新分离的登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,为深入研究登革病毒致病机制奠定基础.方法:根据登革1型病毒广州06株基因组全序列中单一酶切位点设计特异引物,分别扩增并克隆5个病毒亚基因组cDNA片段,将其逐一拼接连入pWSK 29低拷贝质粒载体,获得病毒全长cDNA克隆,并将其体外转录为RNA,再转染细胞获得恢复病毒.进一步通过RT-PCR扩增病毒5′和3′非编码区序列和特异性间接免疫荧光对其恢复病毒进行鉴定.结果和结论:构建获得登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,其恢复病毒与野生型病毒具有相似的生物学特性.
作者：刘然；韩剑峰；陈水平；于曼；姜涛；邓永强；秦成峰；秦鄂德 刊期： 2008年第04期
目的:构建IL-1ra-Fcε融合基因的真核表达载体pCI-neo-IL-1ra- Fcε,研究其在体外的表达情况.方法:利用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆大鼠IgE 恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因.利用重叠延伸PCR技术合成了IL-1ra-Fcε融合基因.将其克隆入真核表达载体pCI-neo,以脂质体法转染293T细胞,G418筛选稳定表达细胞株.利用Western印迹、RT-PCR验证融合蛋白的表达,并在EL-4/CTLL-2细胞中对融合蛋白活性进行了验证.结果和结论:成功构建了pCI-neo-IL-1ra- Fcε表达载体,Western 印迹、RT-PCR验证融合蛋白在293T细胞得到表达,并获得了稳定表达IL-1ra- Fcε的细胞株.表达的融合蛋白在体外具有拮抗IL-1的功能.为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础.
作者：刘中成；王园园；邹民吉；王嘉玺；徐东刚 刊期： 2008年第04期
目的:为实验方法鉴定细菌sRNA靶标和研究sRNA功能提供生物信息学支持.方法:首先以实验证实的132个sRNA与靶标相互作用数据为训练集,其中包含46个阳性数据和86个阴性数据;其次,以实验证实的22个阳性数据和随机生成的1 700个阴性数据为测试集;后以RNA二级结构谱等特征为变量,运用支持向量机(SVM)方法构建sRNA靶标预测数学模型.结果和结论:构建的模型对训练集的敏感性和特异性均为100%,对测试集的敏感性和特异性分别为72.73%和80.65%.所构建的数学模型为实验发现sRNA靶标提供了生物信息学支持.
作者：赵雅琳；李华；侯妍妍；查磊；曹源；王立贵；应晓敏；李伍举 刊期： 2008年第04期
目的:用氧化燃烧炉样品预处理技术研究[3H]-乙酰紫草素在小鼠体内的组织分布、排泄和血中分布.方法:小鼠单次灌服[3H]-乙酰紫草素后,收集组织、血、尿和粪样,氧化燃烧炉法进行样品预处理,液闪计数仪测定放射性水平.结果:小鼠单次灌胃给[3H]-乙酰紫草素(120 mg/kg,2.96×107 Bq/kg)后,放射性主要分布在胃、肠,其次是胆囊、肝、肾、肺,脑和脊髓分布较少.271 h后从粪中收集到给药剂量的(68.5 ± 3.3)%,尿中收集到(17.6± 3.1)%,粪尿合计(86.1 ± 5.5)%.另对乙酰紫草素在血中存在形式、血细胞和血浆中的分配比例以及与血浆蛋白结合的形式、结合率进行了探索性研究.结论:乙酰紫草素吸收较差;组织分布广泛;排泄较完全;1 h血样中没有检测到原形;血浆、血细胞药物含量分配比约为4∶ 1;人血浆蛋白结合率高;血浆蛋白的结合为共价和疏水作用两种形式并存.
作者：孙东晓；田慧芳；孟志云；周佳雨；丁建刚；吴广瑞；窦桂芳 刊期： 2008年第04期
1 临床资料病例1,男性,47岁,确诊急性粒细胞性白血病,为进行异基因造血干细胞移植入院.高血脂、高血糖病史多年,药物控制效果不理想.
作者：杨青；刘亚红；胡琼 刊期： 2008年第04期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
