学术投稿

人内皮细胞特异性分子-1表达载体的构建、体外表达及初步纯化

张素梅;王雪;胡若磊;朱华庆;熊江霞;周青;桂淑玉;汪渊

关键词:聚合酶链反应
摘要:目的探讨人内皮细胞特异性分子-1(hESM-1)表达载体的构建、体外表达及表达产物的初步纯化.方法从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,用反转录-PCR扩增出hESM-1的cDNA.插人质粒pET-28b中构建成表达载体,转化人大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达,表达产物用电洗脱的方法初步纯化.结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为含hESM-1的重组质粒,经SDS-PAGE分析证实获得产物为分子量23 808 u的融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的24%.结论成功构建了重组hESM-1表达载体,并在大肠杆菌中获得表达,为进一步研究及临床应用奠定了良好基础.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 人骨桥蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

    目的构建人骨桥蛋白(hOPN)表达载体,体外表达及表达产物的纯化.方法培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pGEX-6P-1,转化到XL1-blue中进行诱导表达.表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,切下目的蛋白进行洗脱纯化.结果构建的表达载体经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA测序,证明所构建的质粒是pGEX-6P-OPN.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白(表达量为16.7%),这种蛋白不存在于诱导后的pGEX-6P-1表达产物中,纯化后蛋白纯度为99%.结论成功构建了hOPN表达载体,并进行体外表达.

    作者:王雪;桂淑玉;张素梅;胡若磊;朱华庆;熊江霞;周青;汪渊 刊期: 2002年第06期

  • 确炎舒松对增生性瘢痕PCNA、bcl-2表达的影响

    目的观察局部注射确炎舒松后增生性瘢痕(HS)中增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2的表达水平变化,探讨糖皮质激素治疗瘢痕的机制.方法用免疫组织化学SP法检测比较42例HS激素注射前后PCNA、bcl-2表达水平变化.结果HS中PCNA、bcl-2阳性细胞均较正常皮肤显著增多,注药组PCNA及bcl-2阳性细胞率均较对照组明显减少,两者差异有显著性(P<0.05).结论成纤维细胞增殖过度、凋亡不足是HS形成的重要原因,激素可通过抑制PCNA基因的表达来抑制HS成纤维细胞增殖;激素可能通过抑制bcl-2基因的表达而诱导成纤维细胞凋亡.

    作者:丁浩;汪春兰;孟刚;曹东升 刊期: 2002年第06期

  • 银屑病患者居住环境及饮用水类型与其发病的流行病学研究

    目的探讨银屑病患者居住环境及饮用水类型与其发病的相关性.方法采用病例一对照研究方法,使用统一的调查表,调查了597例患者组及601例健康组,对他们的居住情况及饮用水类型进行了相关分析.结果①住土坯房,噪音,潮湿,泥土、砖石及其他地面饮用井水与银屑病的发生呈正相关(P<0.01);而水泥地面,饮用自来水与银屑病的发生呈负相关(P<0.01);②住土坯房、噪音,及其他地面、饮用井水与男性及女性银屑病的发病呈正相关(P<0.01).砖石地面只与男性发病呈正相关(P<0.01),而潮湿只与女性发病呈正相关(P<0.05).饮用自来水与男性及女性银屑病的发病呈负相关(P<0.05);③土坯房,潮湿,泥土、水泥及其他地面,饮用井水仅与Ⅰ型银屑病发病呈正相关(P<0.05).水泥地面和饮用自来水仅与Ⅰ型银屑病发病呈负相关(P<0.05).结论不同的居住环境及饮用水类型在银屑病的发病中起一定作用.

    作者:葛宏松;杨森;李明;魏生才;李诚让;王红艳;张安平;崔勇;张学军 刊期: 2002年第06期

  • 肺栓塞21例临床分析

    肺栓塞(pulmonary embolism,PE)是内源性或外源性栓子堵塞肺动脉或其分枝引起肺循环障碍的临床和病理生理综合征,是急性肺部疾病主要致死原因之了.

    作者:卢家忠;倪新海 刊期: 2002年第06期

  • 痴呆模型大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的形态学改变

    目的观察铝中毒痴呆模型大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)神经元的形态学变化,探讨中枢多巴胺递质在学习、记忆中的作用.方法以慢性铝中毒方式建立痴呆模型,以酪氨酸羟化酶(TH)为DA神经元的阳性标记物,采取免疫细胞化学ABC法观察中脑VTA TH免疫反应阳性神经元的形态学改变,利用图像分析系统测算VTA TH免疫反应阳性神经元的数目,分析试验结果.结果痴呆模型组中脑VTA TH免疫反应阳性神经元数量明显下降(P<0.01),部分神经元出现突起消失、胞体肿胀或碎裂等表现.结论中脑VTA DA神经元与认知功能关系密切,其病变可能同老年性痴呆有关.

    作者:侯海龙;陈晓蓉;胡祥友;王取南;齐威琴;贾友苏 刊期: 2002年第06期

  • 女性生殖道畸形并发子宫内膜异位症19例临床分析

    女性生殖道畸形并发子宫内膜异位症(EMS)文献报道较少,我们对我院女性生殖道畸形并发EMS的临床资料进行回顾性分析,并与仅有生殖道畸形而未发生EMS的资料进行比较,探讨女性生殖道畸形与EMS的关系,以期减少或预防EMS的发生.

    作者:吕文杰;曹云霞 刊期: 2002年第06期

  • 6岁以下儿童白内障术后后囊混浊手术预防的研究

    目的探讨6岁下儿童白内障人工晶体术后后囊混浊的预防方法.方法对56例80眼6岁下儿童白内障人工晶体植入患者随机分两组,A组,单纯行一期连续环行后囊撕囊术(PCCC);B组行一期PCCC+前部玻璃体切除术.结果术后随访2年Ⅱ级以上后囊混浊A组27眼,B组5眼,两组比较有差异(x2=21.73,P<0.01).视力(第2年),两组比较也有差异(t=2.162,P<0.05).结论一期PCCC+前部玻璃体切除术是真正有效预防儿童白内障人工晶体术后后囊混浊发生的术式,应为6岁以下儿童白内障首选的手术方法.

    作者:朱子诚;袁华音;孙思勤;温跃春;张国梅;陈逖 刊期: 2002年第06期

  • 改良S形切口+挛缩带Z形松解术治疗臀肌挛缩症

    目的探讨臀肌挛缩症手术方式的合理选择.方法设计股骨大粗降后上方前上后下方向斜S形切口+挛缩带Z形松解术治疗56例臀肌挛缩症患者,与42例选择其它术式的对照组进行比较.结果本组病例在术中出血、手术用时、切口裂开及窦道形成等方面均较对照组减少(P<0.05).结论选用改良S形切口+挛缩带Z形松解术治疗臀肌挛缩症操作简便,并发症少,具有较大临床实用价值.

    作者:孙军;高学纯 刊期: 2002年第06期

  • 多发梗塞性痴呆与多发性脑梗塞脑容积线性指标的对照研究

    目的探讨脑容积在高级认知功能代偿中的作用,以及老年脑的脑容积改变与多发性梗塞性痴呆(MID)的关系.方法采用病例对照研究的方法,21例MID匹配以年龄相当的63例多发性脑梗塞(MI).CT下测量平均脑沟宽度,平均侧裂宽度,纵裂宽度,3脑室宽度,额角指数,尾状核指数,脑室指数,Evans指数,及侧脑室指数.结果MID组病灶多累及左侧半球、丘脑,且病灶容积大于MI组;除纵裂宽度、3脑室宽度外各指标亦均大于MI组(P<0.05;P<0.01).结论在剔除年龄混杂因素后,老年脑脑容积的下降可能是MID发生痴呆的又一重要因素.说明脑容积和脑结构完整性在高级认知功能代偿中起关键作用.

    作者:汪凯;卞兴华;孟玉;王长青 刊期: 2002年第06期

  • 细胞凋亡检测的研究进展

    细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身程序,自己结束其生命的过程.

    作者:朱启星;沈彤 刊期: 2002年第06期

  • 鸡Ⅱ型胶原镇痛的作用

    目的观察一次性灌胃和口腔喷雾给予鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)5、10、20 μg/kg对小鼠痛阈的影响.方法采用热板法和温浴甩尾法测定小鼠的痛阈.结果一次性灌胃给予CⅡ5、10、20μg/kg和腹腔注射哌替啶10 mg/kg可以明显升高小鼠的痛阈,且大剂量组(20 μg/kg)较哌替啶起效快,维持时间长.而口腔喷雾给予上述剂量的CⅡ有提高痛阈的趋势,但差异无显著性.结论口服CⅡ具有明显的镇痛作用.

    作者:刘丽华;沈玉先;王华;汪倪萍;魏伟 刊期: 2002年第06期

  • 肺螨病的HBDT和Dot-ELISA免疫病理研究

    目的探讨肺螨病患者的免疫病理改变,阐明肺螨病的发病机制,为肺螨病的防治提供依据.方法应用嗜碱性粒细胞脱颗粒试验(HBDT)和Dot-ELISA对49例肺螨病患者进行免疫病理观察,并用ELISA法检测血清中总IgE和特异性IgE0结果49例肺螨病患者嗜碱性粒细胞脱颗粒总体阳性率达95.92%(47/49),其脱颗粒百分率(DI)以~40岁组高,与正常对照组相比,差异有显著性(P<0.01).患者血清粉螨特异性抗体(IgG)总体阳性率为95.92%(47/49),其中强阳性者占22.45%(11/49),与正常对照相比,差别有显著性(P<0.01).肺螨病患者血清总IgE、特异性IgE水平均较正常对照组明显增高,差异均具有显著性(P<0.01).结论HBDT是反映肺螨病患者免疫病理变化的敏感指标,螨特异性抗体可较准确反映病原螨的感染类型.IgE水平可反映机体的致敏状态和变态反应的强弱.

    作者:李朝品;王克霞 刊期: 2002年第06期

  • 脂代谢异常与动脉粥样硬化状况的关系

    目的研究血脂水平(血脂全套)与动脉粥样硬化的关系,评价高脂血症以及其他危险因素在颈动脉粥样硬化形成中的作用.方法将178例患者分为血脂正常组和血脂异常组(根据不同血脂成分的异常变化,分成6个组),进行颈动脉超声检测,以双侧颈动脉内膜-中层厚度的大值(IMTmax)作为评价颈动脉粥样硬化严重程度的指标,并进行颈动脉粥样硬化的危险因素分析.结果部分血脂异常组IMTmax与血脂正常组存在差异(P<0.01,P<0.05),不同IMTmax组段间的部分血脂成分水平(TC、LDL、APO-B、HDL和APO-A)存在差异(P<0.01,P<0.05),且随IMTmax的增厚而呈升、降趋势.颈动脉粥样硬化的多因素分析表明,高胆固醇血症是动脉粥样硬化的主要危险因素之一,而其他成分如LDL、APO-B、LP-a也在动脉粥样硬化的发生、发展中起着不可忽视的作用.而HDL、APO-A有对抗动脉粥样硬化,保护血管的作用,此二者血清水平的降低增强了升高的TC、LDL、TG、VLDL的促动脉粥样硬化的作用.结论血脂异常是动脉粥样硬化的发生、发展的重要原因之一,而积极控制血脂水平和其他动脉粥样硬化易患因素是防止、延缓动脉粥样硬化发生、发展的必要措施.

    作者:郭士遵 刊期: 2002年第06期

  • 6例左房黏液瘤的外科治疗

    1990年4月~2001年10月,我院共收治左心房肿瘤6例,均经手术和病理证实为左心房黏液瘤.

    作者:陶勇;陶忠;陈荣林 刊期: 2002年第06期

  • 羊水过少258例临床分析

    目的探讨羊水过少影响围生儿结局的有关因素及其防治措施.方法对258例羊水过少有关临床资料进行回顾性分析.结果羊水过少发生率为2.00%,以妊娠41周以上发生率高(67.05%),与对照组比较:羊水过少组胎儿窘迫、新生儿窒息、围生儿病死率均增高(P<0.05)且羊水量减少的程度与围生儿结局有直接关系,超声检查是产前诊断羊水过少的重要手段,尤其是羊水指数法准确率较高.结论羊水过少严重影响围生儿预后,早期诊断、加强监护、及时处理、选择适当分娩方式是改善围生儿预后的关键.

    作者:杨媛媛;周家德 刊期: 2002年第06期

  • 乳腺浸润性导管癌中c-erbB-2、p53的表达与预后因素间的关系

    目的探讨c-erbB-2、p53蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达与预后关系及其意义.方法应用免疫组化S-P法对58例乳腺浸润性导管癌进行c-erbB-2、p53和ER、PR标记.结果58例乳腺浸润性导管癌中c-erbB-2、p53阳性率分别为48.3%(28/58)、41.4%(24/58);其与细胞学分级、淋巴结转移呈正相关(P<0.05,P<0.025);并与ER、PR呈负相关(P<0.05).结论c-erbB-2、p53与乳腺浸润性导管癌的预后密切相关,可作为判断乳腺癌预后不良的独立指标.

    作者:王兰;金玉湘 刊期: 2002年第06期

  • 安徽省口腔健康流行病学抽样调查结果分析

    目的为了掌握安徽省不同地区及年龄段人群的口腔健康状况及人们对口腔健康知识、卫生行为的知晓情况,探索龋病、牙周病的发病情况,预测发展趋势与人群特点及与社会因素的关系.方法对5岁、12岁、15岁、18岁、35~44岁、65~74岁6个年龄组共13 974人进行了安徽省第一次口腔健康流行病学抽样调查.采用多阶段的分层、不等比、整群抽样.结果dmf 5岁66.3%,DMF 12岁30.3%,15岁39.0%,18岁39.9%,35~44岁45.9%,65~74岁62.5%;平均需治牙数为5岁乳牙2.79颗,恒牙12岁0.61颗,15岁0.89颗,18岁0.84颗,35~44岁2.35颗,65~74岁8.47颗.牙结石平均区段数,12岁组0.89,15岁组1.64,18岁组2.39,35~44岁组3.70,65~74岁组3.01;需洁治的人数12岁组38.5%,15岁组59.8%,18岁组79.4%,35~44岁组93.4%,65~74岁组86.6%.12岁与15岁氟牙症指数为0.219与0.28.刷牙率为97.2%.结论恒牙患龋率不高,乳牙患龋率较高.牙周检查中牙结石检出率较高,牙周洁治需要量大.老年人群失牙过多,带义齿率较低,无论对全口义齿或局部义齿的修复需要量都很大.普遍缺乏口腔卫生知识.有效刷牙差.

    作者:颜雨春;韩晓兰;张黎;蒋勇;周健;权循珍;钱元太 刊期: 2002年第06期

  • 心包腔置管术在心包积液中的应用

    目前国内心包积液的诊治仍以心包穿刺为主,此方面存在部分不足,如部分病例需反复穿刺,不便进行间断注药治疗等.为此我们在心包积液病例诊治中,进行常规病因治疗的同时,采用心包腔置管术并取得了较好的临床效果,现报道如下.

    作者:何林生 刊期: 2002年第06期

  • 人胎十二指肠神经肽分布和发育的研究

    目的研究人胎十二指肠壁P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)-IR肽能神经的分布和发育规律.方法①苏木精-伊红染色;②免疫组织化学ABC法.结果第14周开始,胎儿十二指肠壁黏膜下层、肌层间结缔组织中偶见SP能、CGRP能神经纤维及神经元免疫反应产物,反应渐强,神经元从浅棕色到深棕色,神经纤维呈串珠状或点线状.从SP、CGRP免疫组织化学相邻切片上看,两者部分存在共存现象.结论人胎十二指肠壁存在SP-IR、CGRP-IR能神经,黏膜下和肌间神经丛存在SP-IR、CGRP-IR肽能神经元和神经纤维,它们在发生、分布上有差异.

    作者:陈晓宇;陈晓蓉;贾雪梅;王惠珠;齐威琴 刊期: 2002年第06期

  • 几种中药有效部位抗炎作用的比较

    目的比较研究木瓜总苷、白芍总苷(TGP)、雷公藤多苷(TWH)以及青藤碱对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀及大鼠棉球肉芽肿的影响.方法用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀;足爪容积测定法测定足爪肿胀度;棉球包埋法诱导大鼠棉球肉芽肿并测定肉芽肿的净重.结果治疗给药木瓜总苷120、240 mg/kg分别在致炎后5 h、3 h开始起效;TWH 40 mg/kg在致炎后3h开始起效,TGP 50 mg/kg和青藤碱50 mg/kg在致炎后5 h发挥疗效,四种中药有效部位疗效都持续到致炎后7h.木瓜总苷60、120、240mg/kg、TWH 40mg/kg、青藤碱50 mg/kg治疗给药对大鼠棉球肉芽肿均有抑制作用,TGP 50 mg/kg治疗给药对大鼠棉球肉芽肿无抑制作用.结论木瓜总苷、TWH、TGP、青藤碱都具有抗炎作用,但作用特点不同,表现在剂量和起效时间等不尽相同.

    作者:张玲玲;戴敏;沈玉先;汪倪萍;王华;岳莉;陈群;魏伟 刊期: 2002年第06期

安徽医科大学学报杂志

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