学术投稿

特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究

张晓;王传新;李伟;郑桂喜;张建;阚士锋;王立水

关键词:乳头状瘤病毒, 人, HLA抗原, 基因, RNA干扰, HaCaT细胞
摘要:目的 筛选针对HPV16 E7基因有效的siRNA,探讨其对HaCaT-E7细胞中HPVl6 E7 mRNA及细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达的影响.方法采用化学法合成3条HPV16 E7特异性siRNA,应用转染试剂Lipofectamine2000将其转染入HaCaT-E7细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HPV16 E7 mRNA的表达,采用流式细胞术(FCM)检测细胞表面HLA-Ⅰ类分子的表达.结果 3条siRNA均能有效抑制HaCaT-E7细胞中H/N16 E7的转录表达,以siR-NA2作用效果明显,抑制率达75%,细胞膜表面HLA-Ⅰ类分子的表达明显上调,平均荧光强度(MFI)为130.18±1.07,高于空转染对照组(100.32±3.01)和非特异性siRNA对照组(100.82±2.87).结论化学合成的HPV16 E7特异性siRNA能有效抑制HaCaT-E7细胞中E7 mRNA的表达,同时使细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达上调.
山东大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 黄芪对小鼠哮喘模型肺组织α-SMA及FN的抑制作用

    目的 探讨黄芪对哮喘平滑肌肌动蛋白-α及纤维连接蛋白的影响.方法随机将BALB/C小鼠60只分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、黄芪治疗组(C组)各20只.以腹腔注射0.02%鸡卵清蛋白(OVA)和1%OVA雾化吸入建立慢性哮喘模型.治疗组在每次激发前给予黄芪干预.将右肺分离固定,用石蜡包埋切片,并用免疫组化染色技术染色,用LEICA QWIN V3分析系统,计算表达阳性结果,把左肺置于液氮中保存,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织中平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)及纤维连接蛋白(FN)中信使核糖核酸(mRNA)含量,用Al-phaImager 2200半定量分析系统分析.结果哮喘组α-SMA及FN阳性表达结果显著高于对照组(P<0.01).α-SMA mRNA及FN mRNA的表达上调(P<0.01);黄芪治疗组的α-SMA及FN的阳性表达、α-SMA mRNA及FN mRNA的表达均显著低于哮喘组(P<0.01).结论FN及α-SMA为气道重构的重要标志物,黄芪可抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织中α-SMA及FN表达,推测抑制α-SMA及FN的表达可能是黄芪抑制哮喘气道重构的重要机制之一.

    作者:王莉;王芬;刘毅;马卫霞;李怀臣 刊期: 2009年第11期

  • 葡萄糖耐量减低人群血小板相关功能研究

    目的 探讨糖耐量减低(IGT)人群血小板活化状态及影响因素.方法选择IGT组33例、糖尿病组和正常对照组各30例为研究对象.采用流式细胞术(FCM)检测血小板膜蛋白CD62P、血小板激活复合物(PAC-1)阳性率和平均荧光强度(MFI);电阻抗法测定血小板数目(count)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)及大血小板比率(P-LCR)等参数及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(Fins).结果 IGT组、糖尿病组CD62P%(P<0.01)、CD62PMFI(P<0.05)、PAC-1%(P<0.01)、MPV(P<0.05)、PDW(P<0.05)及P-LCR%(P<0.05)均较正常对照组升高;IGT组与糖尿病组之间差异无统计学意义(P>0.05).多元回归分析显示,IGT组与CD62P密切相关的因素依次为P-LCR、LDL-C、TC和体质量指数(BMI);与PAC-1相关的因素依次为P-LCR、MPV及DBP.结论IGT人群存在与糖尿病同等程度的血小板活化;LDL-C、TC、DBP及BMI是影响血小板活化的因素.

    作者:刘燕;王红梅;亓文波 刊期: 2009年第11期

  • SPK/S1P信号途径对人肝癌细胞增殖、凋亡的作用

    目的 探讨鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇信号途径(SPK/S1P)对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响.方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,观察5~20μmoL/L浓度范围鞘氨醇激酶的特异性抑制剂N,N'-二甲基鞘氨鞍醇(DMS)对HepG2细胞增殖、凋亡的影响.结果MTT实验结果显示,5~20μmoL/L浓度范围的DMS对细胞增殖均有抑制作用,透射电镜观察对照组细胞可见细胞凋亡的变化,TUNEL标记法检测处理组阳性细胞表达百分数较对照组明显增多(P<0.01).结论DMS对HepG2细胞的生长增殖具有抑制作用,并促其发生凋亡.

    作者:姜大磊;高艳景;刘慧亚 刊期: 2009年第11期

  • 罗格列酮对肝星状细胞MMP-2、TIMP-1mRNA表达的影响

    目的 探讨罗格列酮对体外培养肝星状细胞MMP-2及TIMP-1基因表达的影响.方法采用HSC-T6肝星状细胞系,经不同浓度的罗格列酮干预,采用RT-PCRA法检测各组MMP-2及TIMP-1基因的表达情况.结果在10、20μmol/L罗格列酮组,TIMP-1的表达较空白对照组明显降低(P<0.05),而MMP-2的表达与空白对照组相比差异无统计学意义.结论罗格列酮的抗肝纤维化作用与抑制HSC表达TIMP-1有关.

    作者:李森林;赵景润;任晓燕;马青竹;谢佳平;李振方;郎翠翠 刊期: 2009年第11期

  • 腮腺癌在多形性腺瘤中p16基因的表达及甲基化改变

    目的 研究腮腺癌在多形性腺瘤中(carcinoma ex pleomorpbic adenoma,CXPA)p16基因的蛋白表达和甲基化改变,并评价其在该肿瘤癌变中的意义.方法收集40例腮腺CXPA标本及10例正常腮腺标本,应用免疫组织化学技术和甲基化特异性PCR技术,检测p16基因的蛋白表达和甲基化改变.结果正常腺体p16蛋白表达均为阳性,21例(21/40,52.5%)CXPA标本表现为表达降低或表达缺失,二者存在统计学差异(P<0.05).正常腺体p16基因启动子未见高甲基化,16例(16/40,40%)CXPA出现启动子高甲基化,二者存在统计学差异(P<0.05).结论p16基因表达降低或表达缺失、启动子高甲基化对于腮腺CXPA的癌变具有重要意义,后者可能是p16基因在CXPA中的重要失活机制.

    作者:李海燕;郭小玲;王建华;曲伟栋;赵华强 刊期: 2009年第11期

  • 喜树碱Pluronic P105/L61混合胶束系统的制备

    目的 制备栽有喜树碱的混合胶束系统,增加喜树碱的载药量.方法以Pluronic P105(P105)和Phronic L61(L61)为材料,难溶性抗癌药物喜树碱为模型药物,制备了载药混合胶束系统.对混合胶束系统的载药量、稳定性进行了研究.采用人胸腺癌细胞系(MCF-7),对载药混合胶束的细胞毒性进行了研究.结果所制备的混合胶束系统,长期存放和多倍稀释后仍然能够稳定存在;加入L61后喜树碱的载药量明显提高.细胞毒性实验结果表明,混合胶束对人胸腺癌细胞系(MCF-7)的细胞毒性高于原料药.结论 Phronic P105/L61混合胶束系统是一种比较稳定的喜树碱给药系统.

    作者:孙新堂;王金丽;李凌冰 刊期: 2009年第11期

  • 应用噬菌体随机十二肽库筛选hFGF-7相关模拟肽

    目的 应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽.方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体的结合力,对结合力较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,进行测序,并行序列分析.结杲经过4轮生物淘选,特异性噬菌体模拟肽荻得了富集,ELISA检测结果显示获得的一些噬菌体模拟肽具有较好的结合力,测序获得11个与促进细胞分裂、增殖或抑制细胞增殖有关的碱基序列.结论从噬菌体随机十二肽库中可淘选到与hFGF-7相关的噬菌体模拟肽,其中部分噬菌体模拟肽可能会促进表皮细胞增殖,期望将来可应用于促进创面愈合.

    作者:宗宪磊;蔡景龙;姜笃银;付小兵;盛志勇;单菲 刊期: 2009年第11期

  • 胰岛素抵抗大鼠脑组织APP代谢及其相关酶的表达及吡格列酮的干预效果

    目的 观察胰岛素抵抗(IR)大鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)、淀粉样前体蛋白(APP)及其代谢相关酶的表达及吡格列酮(PIO)的干预效果.方法从45只Wistar大鼠中随机选取10只作为对照组(NC组),35只给予10%果糖水诱发胰岛素抵抗,4周后根据胰岛素抵抗指数(IRI),将制作成功的胰岛素抵抗模型26只大鼠随机分为IR组、PIO组.PIO组灌服吡格列酮(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))12周,IR组和NC组给予相同体积的生理盐水.免疫组化法观察大鼠海马Aβ42的表达;免疫印迹法检测大鼠脑APP、β-分泌酶(BACE1)、γ-分泌酶(PSI)的变化.结果IR组和PIO组大鼠海马Aβ42的表达明显高于NC组,与IR组相比,PIO组表达明显减低(P<0.01);与NC组相比,IR组和PIO组大鼠脑组织APP、BACE1及PS1的表达增高,PIO组表达较IR组减少(P<0.05).结论胰岛素抵抗大鼠脑组织通过上调BACE1、PS1活性,使Aβ42生成增加;吡格列酮能抑制BACE1、PS1的表达,减少Aβ42生成.

    作者:袁树华;高顺宗;刘雪平;郝跃伟;赵婷婷;侯亮 刊期: 2009年第11期

  • Dishevelled2和Vangle2蛋白在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的表达变化及意义

    目的 探讨Dishevelled2和Vangl2蛋白在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用.方法采用免疫组织化学及图像分析方法,检测维甲酸致畸小鼠(实验组)和相应对照组小鼠腭板中Dishevelled2和Vangl2蛋白的表达状况.结果Dishevelled2在实验组间充质的表达量明显高于相应对照组,在腭板上皮表达量先明显高于而后又明显低于相应对照组;Vangl2在实验组腭板间充质中的表达量先明显高于而后又明显低于相应对照组.结论Dishevelled2在间充质细胞中表达的上调以及在上皮细胞中先上调又明显下调和Vangl2在腭板间充质细胞中表达的先上调后下调可能与维甲酸致昆明小鼠腭裂发生相关.

    作者:尹海燕;卓煜娅;邹维艳;孙美群;耿慧慧;刘凯 刊期: 2009年第11期

  • 脐血CD34~+细胞向巨核细胞的分化扩增及基因的表达变化

    目的 研究脐血CD34~+细胞向巨核细胞的诱导分化及体外扩增,并观察此过程中巨核细胞特异性基因表达的变化.方法免疫磁珠法分离获得CD34~+细胞培养在无血清无基质培养基中,采用TPO+SCF+IL-3+IL-6、TPO+SCF+IL-3、TPO+SCF三种不同因子组合对其诱导分化及扩增.收集3、7、10、14 d的扩增产物,运用荧光显微镜检测巨核细胞的表面标志;流式细胞术(FCM)检测巨核细胞的凋亡;对巨核细胞进行DNA含量检测以及荧光定量PCR检测特异性基因表达的变化.结果分离获得的CD34~+细胞在体外可以有效扩增,随培养时间的延长,CD34~+/CD41~+细胞数第7天达高值,之后逐渐下降;而CD41~+、CD42b~+、CD61~+细胞随培养时间的延长表达量逐渐增高.DNA含量检测发现,随着培养天数的增加,多倍体细胞所占的百分比增加.三种因子组合中TPO+SCF+IL-3+IL-6组扩增效率高.荧光定量PCR显示转录因子GATA-1、NF-E2、TXS、GPⅡb和HPRT在第7天表达量高,之后下降.凋亡转录因子APAF-1随培养天数的延长表达量增加.结论脐血CD34~+细胞在体外可向巨核细胞诱导分化及扩增,其基因表达的变化也支持这一结论.

    作者:王海莲;鞠秀丽;葛伟;李栋;沈柏均 刊期: 2009年第11期

  • 轻度认知功能障碍与ApoE基因多态性及血脂水平的研究

    目的 分析轻度认知功能障碍(MCI)患者载脂蛋白E(ApoE)基因型及等位基因频率的分布及血脂水平,为MCI的防治提供理论依据.方法对120例MCI患者(MCI组)和120例健康者(对照组),进行简易精神状态检查表(MMSE)、日常生活行为量表(ADL)、总体衰退量表(GDS)、Hachinski缺血积分量表、汉密顿抑郁量表(HAMD)评测,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性分析方法(PCR-RFLP),测定ApoE各基因型和等位基因频率并测定各例总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平.结果MCI组在时空定向、即刻记忆、延时记忆、注意计算力、理解力均较对照组差;ε3/4基因型频率及ε4等位基因频率均高于对照组(P<0.05);TC和LDL-C明显高于对照组(P<0.05),MCI组和对照组ε4组血脂均较ε3、ε2高(P<0.05).结论ApoE基因型频率和等位基因频率在MCI组和对照组间的分布不同,ApoE基因可能是MCI的风险基因,MCI患者存在血脂紊乱,ApoEε4与MCI患者血脂紊乱有关.

    作者:徐明明;易咏红;张萌 刊期: 2009年第11期

  • p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂对小鼠早胚发育及植入的影响

    目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂S8203580对小鼠早胚发育及植入的影响.方法①采用体外胚胎培养技术,将孕2 d小鼠早胚随机分组,接种到添加不同浓度抑制剂的培养液内进行培养,以观察p38MAPK特异性抑制剂对早胚发育的影响;②体内官腔注射:取孕4 d小鼠,由子宫角注射不同浓度的SB203580,于孕8d检查胚胎植入数,同时取子宫,观察内膜的组织学变化.结果①添加抑制剂组的早胚不能发育为胚泡,停滞在8~16细胞阶段.但去除抑制剂后继续培养,幼胚仍能发育到胚泡阶段;②注射SB203580组的小鼠,胚胎植入数明显少于对照组(P<0.01).镜下可见,其胚胎组织呈退化坏死状态,胚胎周围蜕膜细胞呈明显的空泡样变性,蜕膜及胚胎中均见大量血细胞浸润.结论①p38MAPK在小鼠植入前胚胎发育过程中起作用;②p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制在体小鼠胚泡植入及植入后胚胎和蜕膜细胞的发育.

    作者:于清梅;武玉玲 刊期: 2009年第11期

  • HPLC法测定降糖宁胶囊中格列本脲含量的不确定度分析

    目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定掺入降糖宁中的格列苯脲含量的不确定度评定方法.方法建立数学模型,对含量测定过程中各影响因素进行分析评估.结果通过不确定度来源的识别及量化分析,计算各变量的不确定度和合成不确定度,得出测定结果的扩展不确定度.结论该评定方法适用于HPLC法测定中药中非法掺入的格列苯脲含量的不确定度评定.

    作者:凌霄;解斐;吴敬德 刊期: 2009年第11期

  • 慢性阻塞性肺疾病与胰岛素抵抗的临床研究

    目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)与胰岛素抵抗(IR)的相关性.方法选择330例COPD患者,根据<慢性阻塞性肺疾病诊治指南>(2007年修订版)分为:轻度COPD组95例,中度COPD组95例,重度COPD组75例,极重度COPD组65例,并设正常对照组40例.取新鲜标本以全自动生化分析仪测定所有对象的空腹血糖、胰岛素、血脂,免疫比浊法测定尿白蛋白排泄率,电发光测定法测定胰岛素敏感指数(ISI)等指标.结果与正常对照组相比,各COPD组空腹血糖、血脂、尿白蛋白排泄率均显著升高,ISI显著降低(P均<0.05).与轻、中度COPD组相比,重度、极重度COPD组空腹血糖、血脂、尿白蛋白排泄率显著升高,ISI显著降低(P均<0.05).结论慢性阻塞性肺疾病的患者存在胰岛素抵抗,并随疾病程度的加重,胰岛素敏感性降低.

    作者:黄芬;蒋钰;朱厚珍;李春明 刊期: 2009年第11期

  • 经皮椎体成形术治疗骨质疏松性骨折的应用体会

    经皮椎体成形术(percutaneous vertelbropltasty, PVP))具有稳定骨折、恢复椎体力学强度、防止椎体进一步压缩和缓解疼痛等作用,在临床上逐步得以推广.本文对2004年8月~2007年8月52例骨质疏松性骨折病例应用经皮椎体成形术治疗的疗效进行了总结,报告如下.

    作者:信维伟;程光齐;朱颖华;李展春 刊期: 2009年第11期

  • ADM对大鼠早期肾脏机械损伤的影响

    目的 探讨外源性肾上腺髓质素(ADM)对肾脏机械性损伤早期肾小管评分的影响.方法选健康成年普通级Wistar大鼠104只,随机分为4组:正常对照组8只,创伤组32只,创伤前注射ADM组32只,创伤后注射ADM组32只.后3组动物分别于创伤后1、6、12和24 h各处死8只,采用自由落体打击仪直接打击大鼠脊肋区制作肾机械性损伤模型.两给药组分别于创伤前、后10min腹腔注射ADM(0.1 nmol/kg).3组肾损伤大鼠平均分为4批,分别于创伤后1、6、12和24 h迅速解剖动物提取下肾脏标本,10%甲醛固定.HE染色观察创伤后肾组织的基本病理改变.结果单纯创伤组于创伤早期(1、6 h)肾小管评分明显升高(P<0.05),急性创伤后期(12、24 h)上述指标逐渐降低,接近正常对照组(P>0.05).外源性ADM可降低肾小管评分.结论肾脏损伤期间给予外源性ADM对肾组织均有明显的保护作用,其作用强弱与给药时间关系密切.

    作者:韩晓鹏;孙少华;刘宏斌 刊期: 2009年第11期

  • 内毒素脂多糖诱导人牙髓细胞凋亡的机制

    目的 观察内毒素脂多糖(lipopolysaecharide,LPS)时体外培养的人牙髓细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤.2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤相关蛋白X(Bax)活性的影响.方法用不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00、100.00mg/L)的LPS作用于细胞,采用MTT染色法检测LPS对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡;采用免疫组织化学染色技术检测细胞的caspase-3、Bcl-2、Bax表达变化.结杲不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P<0.05),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的12S作用细胞72 h,细胞的凋亡率分别为3.1%、3.5%、12.1%、14.4%、24.3%、59.7%;免疫组织化学染色显示Bax表达增强,Bcl-2、caspase-3表达减弱.结论LP3可显著地抑制人牙髓细胞增殖.诱导细胞凋亡,降低Bcl-2、caspase-3活性,升高Bax活性,并呈明显的量效关系.

    作者:张彦聪;张志芹 刊期: 2009年第11期

  • 单核细胞被诱导表达淋巴管内皮标志物

    目的 淋巴管生成存在于肿瘤、炎症等许多疾病的病理生理过程中.本研究旨在探讨单核-巨噬细胞在炎症环境中转分化成淋巴管内皮细胞的可能性.方法取成人新鲜外周血,分离单核细胞,用ECM培养,分别在FN铺板或VEGF-C、TNF-α、LPS刺激下诱导培养24h,用RT-PCR和免疫荧光细胞化学方法检测单核-巨噬细胞对淋巴管内皮特异性标志物LYVE-1、Podoplanin、Prox1及内皮细胞共同标志物vWF、eNOS的基因和蛋白表达.结果在未诱导组,单核-巨噬细胞LYVE-1呈阳性表达,Podoplanin、Prox1、vWF、eNOS表达呈阴性;在FN铺板或VEGF-C、TNF-α、LPS诱导组,单核-巨噬细胞Podoplanin、Prox-1表达阳性,vWF和eNOS表达仍呈阴性.结论 FN、VEGF-C、TNF-α、LPS均能有效刺激单核-巨噬细胞表达淋巴管内皮标志物.

    作者:王长明;田铧;梁艳红;于伟;肖琼;张肇林 刊期: 2009年第11期

  • 黄连水煎剂漱口对固定正畸患者牙龈炎症的影响

    目的 观察黄连水煎刑漱口对固定正畸患者牙龈炎发生率的影响.方法选取11~19岁固定正畸患者100名,随机分为治疗组50例(常规卫生保健措施和黄连水煎剂漱口)和对照组50例(常规卫生保健措施和生理盐水漱口),在放置固定矫治器前及放置后4、8、12周分别测定上下颌第二前磨牙和第一磨牙处的牙龈指数(GI)和菌斑指数(PLI),并进行统计学分析.结果放置固定矫治器后4周复查,两组患者牙龈指数和菌斑指数均上升,对照组明显,但二者之间无统计学差异.8、12周后复查,治疗组与对照组牙龈和菌斑指数均升高且二者有统计学差异(P<0.05).结论黄连水煎剂漱口可有效降低固定正畸患者牙龈炎的发生率.

    作者:田李静;梅银生;张文娟;张君;王智 刊期: 2009年第11期

  • MPO对内皮细胞MCP-1表达的影响及二甲双胍的干预研究

    目的 观察髓过氧化物酶(MPO)对内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及二甲双胍的干预作用.方法应用western-blot检测内皮细胞内MCP-1、腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(AMPK_α)蛋白表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养液中单核细胞趋化蛋白-1的含量变化.同时应用RNA干扰技术,进一步观察AMPK_α的作用.结果MPO显著增加MCP-1的蛋白表达和培养液中MCP-1的浓度(P<0.01),随作用浓度和时间增加而显著增强.二甲双胍显著减少内皮细胞MCP-1的蛋白表达和培养液中MCP-1的浓度(P<0.01),而AMPK_αSiRNA干预后,二甲双胍对内皮细胞MCP-1的影响作用显著减弱(P<0.01).结论MPO可刺激内皮细胞MCP-1的蛋白表达和分泌,二甲双胍通过促使AMPK_α磷酸化,激活AMPK_α,抑制MPO对内皮细胞的促炎性反应,从而发挥其有益作用.

    作者:张栩;于文;管庆波;赵家军 刊期: 2009年第11期

山东大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:山东大学