目的:检测同种带瓣大动脉(conduit valved homograft,CVH)移植后的免疫反应,探讨其作用机制及临床意义.方法:①建立液氮冻存和4℃保存犬CVH (各14例)移植于异性受体犬腹主动脉实验模型;②在移植术后不同时点切取植入的CVH标本;免疫组织化学染色法检测细胞免疫及体液免疫反应,用光镜、扫描电镜及透射电镜进行观察.结果:术后7 d即可出现细胞免疫反应;1～3月达高峰;6～12月呈持续的低水平状态;表现为CVH内膜、动脉外膜、瓣下心肌组织中T细胞(以CD8+细胞和CD4+细胞为主)浸润,IL-2Ra持续表达.体液免疫反应仅发生于术后7 d～3个月,IgG沉积于CVH内膜和动脉中层平滑肌细胞周围;CVH瓣下心肌细胞、动脉中层平滑肌细胞间有散在的CD2r细胞浸润.结论:①CVH具有免疫原性.内皮细胞、平滑肌细胞、心肌细胞是其免疫原性表达的主要部分;②CVH移植术后早期(3个月以内)行免疫排斥反应的监测及防治具有临床意义.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:观察新型发光纳米材料-无机纳米晶体颗粒量子点对小鼠骨髓造血细胞的标记和成像,探讨它在血液细胞分化发育研究中的作用.方法:采用大发射波长为550 nm的绿色量子点转铁蛋白复合物分别在体外和体内对小鼠骨髓造血细胞进行标记研究,并观察量子点转铁蛋白复合物对骨髓造血干细胞CFU-GM的影响.结果:量子点转铁蛋白复合物可标记骨髓中大部分造血细胞,而且荧光强度强,光学和化学稳定性好,对骨髓造血干细胞的增殖分化功能无影响.结论:量子点在血液细胞成像方面表现了优良的特性,在细胞生物学研究中具有重要作用.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)与正常T细胞表达和分泌的调节活化蛋白(RANTES)的相互关系及其在子宫内膜异位症(EMs)发病中的作用.方法:培养EMs在位内膜基质细胞作为体外实验模型,分别加入浓度为0.1、1.0、10.0 ng/ml的IL-1β后采用RT-PCR、ELISA法从转录及转录后水平观察趋化因子RANTES的表达.结果:RT-PCR结果显示,基础状态下EMs在位内膜基质细胞有RANTESmRNA的表达.0.1ng/ml的IL-1β作用4h即可明显增加细胞RANTES mRNA的表达(P<0.05),1.0 ng/ml的IL-1β作用8 h时作用达高峰,随着时间的递增,mRNA水平呈递减趋势,且各浓度组之间差异无显著性.ELISA结果显示,基础状态下细胞培养上清液内有微量RANTES蛋白的表达.0.1ng/ml浓度的IL-1β作用4 h即可显著诱导细胞分泌RANTES,1.0 ng/ml浓度的IL-1β作用12 h培养上清液中RANTES含量达高峰.结论:IL-1β可增强EMs在位内膜基质细胞对RANTES的基因表达,二者在EMs的发病过程起重要作用.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨同种瓣移植后早期环孢素A(CsA)的钙化防治作用.方法:成年SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,行同种异体带瓣主动脉腹主动脉的异位移植,分为CsA组、对照组和同基因组3组.CsA组移植后给予CsA 15 mg/(kg·d),共2周;对照组不做任何处理;同基因组行同一种系的近交系大鼠同种异体瓣膜移植.各组随机分为5组,每组8只,分别于术后2、4、8、12、16周采用流式细胞仪测定大鼠CD25、CD71的表达,取出移植物,原子火焰吸收法测定钙含量,对移植物行电镜观察.结果:①对照组移植后CD25和CD71表达的高峰时段主要在移植后早期,此后逐渐回落,12周后维持在低水平.CsA组在移植后2～4周CD25和CD71的表达明显低于对照组(P<0.01),但8周后的表达水平与对照组无差异(P>0.05);②对照组的钙含量从4周开始随时间的推移逐渐升高,12周达到高峰,此后进入平台期.CsA组的钙含量在移植后4、8、12、16周4个不同时点显著低于对照组(P<0.01);③移植后早期,CsA组的内皮细胞脱落和平滑肌细胞的坏死情况较对照组轻.结论:同种瓣移植后早期使用环孢素A具有抗钙化作用.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:建立稳定的人口腔粘膜白斑上皮细胞体外培养体系.方法:用离解蛋白酶(DispaseⅡ)分离上皮及皮下组织.采用改良的无血清及无3T3细胞的培养体系培养口腔粘膜白斑上皮细胞.结果:用DispaseⅡ可成功分离上皮和皮下组织.细胞生长曲线显示改良无血清角化细胞培养液(Defined KSFM)可明显促进口腔粘膜白斑上皮细胞的分裂增殖.此实验上皮细胞可传6～7代.结论:Defined K-SFM可显著促进口腔粘膜白斑上皮细胞的分裂和成熟,为癌前病变研究提供足够寿命的体外细胞.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨青霉胺对腹腔粘连的预防作用及对刀口愈合的影响.方法:随机将60只昆明小鼠分成A、B、C 3组,每组20只.行1.5 cm腹正中切口,在右侧腹膜缝植5 mm2大小乳胶片,关腹前A组留置生理盐水1 ml,B组留置3%青霉胺1 ml,C组留置3%青霉胺1 ml且术后连续每天口服3%青霉胺1 ml.术后10、20 d分别处死各组的一半,根据Bigatt's计分法计算每组小鼠粘连发生率和粘连积分,观察刀口愈合情况,行抗张力测试,部分粘连组织行免疫组化染色,观察血管及组织增生情况.结果:术后10 d,B、C组粘连发生率低于A组(P<0.05)、粘连积分明显低于A组(P<0.01);术后20 d,粘连发生率C组低于A组(P<0.05),粘连积分B、C组明显低于A组(P<0.01).B、C组刀口均甲级愈合,但抗张力测试低于A组(P<0.01).结论:青霉胺具有明显预防腹腔粘连的作用,降低刀口抗张力而不影响刀口愈合.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨抵抗素基因第2内含子多态性在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)发病中的作用.方法:为75例多囊卵巢综合征患者(PCOS组)和66例正常者(对照组)的DNA进行测序,观察两组间抵抗素基因第2内含子序列有无差异.结果:两组抵抗素基因在距第2外显子末端39 bp位点上存在C和CT两种基因型,CT均表现为套峰,未发现由C向T的突变,内含子2其余碱基序列稳定不变.PCOS组C等位基因出现的频率为0.96(72/75),出现CT套峰的频率为0.04(3/75);对照组中C等位基因出现频率为0.95(63/66),CT套峰出现频率为0.05(3/66),两组差异无统计学意义(P>0.05).结论:①抵抗素基因第2内含子基因多态性位于距第2外显子末端39位点上,存在C和CT两种基因型;②抵抗素基因第2内含子多态性与多囊卵巢综合征的发病无关.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)诊断子宫内膜癌肌层浸润程度的准确性及其临床应用价值.方法:对51例经手术病理证实为临床Ⅰ期的子宫内膜癌患者术前行MRI检查,判断其肌层浸润程度,并与术后病理结果进行对照分析.结果:51例患者术前MRI均能做出准确诊断,其判断子宫内膜癌肌层浸润的准确率为86.27%(44/51),浅肌层浸润的准确率88.46%(23/26),深肌层浸润的准确率88.23%(15/17),动态增强MRI的准确率为90.5%(19/21).结论:MRI能准确地诊断子宫内膜癌并判断肌层浸润深度,动态增强MRI尤为准确,是术前判断肌层浸润程度的有效途径.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:研究驱动蛋白Rbkinesin-6对人肺腺癌细胞系A549有丝分裂的影响.方法:采用Rbkinesin-6特异性esiRNA介导的RNAi技术,系统分析Rbkinesin-6对肺癌细胞系A549有丝分裂的影响.结果:Rbkinesin-6 esiRNA可特异性地消除A549细胞Rbkinesin-6的表达,Rbkinesin-6缺失的细胞无法完成有丝分裂末期/胞质分裂,进而转变为双/多核细胞.结论:Rbkinesin-6在A549细胞有丝分裂末期/胞质分裂后阶段起重要作用,Rbkinesin-6基因沉默可以抑制肺癌细胞的生长,为肺癌基因治疗的研究提供了新的思路.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨女性压力性尿失禁(stress urinary incontience,SUI)的手术治疗效果.方法:采用尿道中段无张力悬吊带术治疗41例女性压力性尿失禁患者,其中经阴道无张力悬吊带术(tension-free vaginal tape,TVT)治疗33例,经耻骨上途径无张力悬吊带术(suprapubic Arch sling,SPARC)治疗8例.结果:41例手术时间25～50 min(平均35.5 min),出血量10～25ml(平均15ml).膀胱损伤5例,2例为双侧损伤.40例患者拔尿管后排尿良好,1例因带气囊拔尿管而损伤尿道,出现尿潴留.术后随访1～23个月,4例患者在明显增加腹压时有少许尿液滴出,其余患者皆可很好地自主控尿,1h尿垫试验<2g,治愈率为90.2%(37/41).结论:尿道中段无张力悬吊带术可有效地治疗女性压力性尿失禁.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因体系联合重组干扰素α-2a(rIFNα-2a)对前列腺癌PC-3m细胞的体外杀伤作用.方法:应用逆转录病毒载体将HSV-TK基因转染PC-3m细胞,经RT-PCR鉴定后,MTY法检测应用丙氧鸟苷(ganciclovir GCV)前体药物及联合应用rIFN-α2a对转染PC-3m细胞的杀伤作用,以未转染PC-3m细胞为对照;同时采用流式细胞仪检测药物作用前后的变化.结果:GCV对转染后PC-3m细胞有较强的细胞毒作用,半数抑制浓度(IC50)为8.34μg/ml,但其旁观者效应不明显;联合应用rIFN-α2a可明显增强旁观者效应,两药相互作用指数小于0.7.结论:HSV-TK基因与rIFNα-2a联合应用对前列腺癌细胞具有协同杀伤作用.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨二甲双胍治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的作用及机制.方法:选择30例PCOS患者作为研究对象,口服二甲双胍,1 500mg/d,连续12周.观察服用二甲双胍后患者的临床特征、性腺激素及糖代谢指标的变化.结果:PCOS患者经二甲双胍治疗后,BMI、WHR、LH、LH/FSH比值、T、A、DHEAS、FI、Homa IR、Homa β cell均较治疗前明显降低(P<0.01,P<0.05),ISI较治疗前明显增高(P<0.05).结论:二甲双胍可显著改善PCOS患者的临床特征,其机制与二甲双胍降低胰岛素水平、提高胰岛素的敏感性密切相关.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨中耳乳突手术治疗慢性分泌性中耳炎的适应证及治疗效果.方法:回顾分析接受中耳乳突手术治疗30例36耳慢性分泌性中耳炎患者的临床资料.36耳均接受了完壁式(闭合式)乳突-上鼓室切除、鼓室探查术,其中28耳同时行中耳置管术,5耳同时行听骨链成形术.所有病例术中清除的肉芽术后均作病理检验,其中炎性肉芽28耳,胆固醇肉芽肿8耳.结果:中耳置管者于术后1～3月拔除中耳通气管,鼓膜愈合良好.术后所有患耳均有不同程度的听力改善,以语频气导听阈的平均值为标准,听力达到应用水平(语频气导平均听阈30 dB以内)的31耳(31/36,86.11%).鼓室功能曲线检查结果显示,A型27耳(75%),C型8耳(22.22%),B型1耳(2.78%).术后随访0.5～3年,除1耳因鼓室积液复发,再次中耳置管外,其余患者症状无复发,主观听力无下降,鼓室功能曲线C型8耳有2耳转为A型.结论:经过各种治疗无效的慢性分泌性中耳炎,应积极采取中耳乳突手术治疗.中耳乳突手术可彻底清除病变,建立鼓室、鼓窦及乳突的通气引流,以防复发.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:构建靶向于人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)调控区的反义RNA腺病毒.方法:PCR扩增hTERT调控区1 779 bp的DNA片段,与腺病毒穿梭载体pShuttleCMV连接,PCR筛选反向插入的hTERT反义腺病毒穿梭载体pCMV-ashTERT,将pCMV-ashTERT与骨架质粒pAdEasy-1共转染受体菌BJ5 183,进行同源重组.用含卡那霉素的LB平板筛选同源重组阳性的克隆,酶切鉴定后,以Pac Ⅰ酶切线性化,转染包装细胞HEK293,在显微镜下观察细胞形态以鉴定重组的腺病毒,并以空斑形成实验测定重组病毒的滴度.结果:成功构建了端粒酶催化亚单位调控区的反义RNA重组腺病毒(pAd咀shTERT),滴度为2.8×1011pfu/ml.结论:成功构建hTERT调控区反义腺病毒,为探讨以端粒酶为靶点的抗肿瘤药物奠定了基础.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:建立大鼠绿脓杆菌性角膜炎模型,探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对绿脓杆菌脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导产生的大鼠角膜炎模型的抗炎作用.方法:建立角膜炎动物模型,模型制作前30 min于大鼠球结膜下分别注射生理盐水(炎症组)和PDTC(治疗组),模型制作后1、3、6、12 h观察大鼠表现,角膜的组织学改变;免疫组化法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的活化情况.结果:LPS刺激后大鼠角膜组织中NF-κB早期活化.治疗组大鼠角膜中的NF-κB p65核染色阳性细胞明显少于炎症组;鼠眼表现和角膜组织学改变较炎症组改善显著.结论:成功建立了绿脓杆菌性角膜炎动物模型.NF-κB活化在绿脓杆菌性角膜炎的发病中起重要作用,PDTC可有效减轻角膜炎症.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨急、慢性乏氧标记物(HIF-1α、GLUT1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达,及其与NSCLC患者临床病理特征和预后的关系.方法:应用HIF-1α和GLUT1抗体对46例NSCLC组织进行免疫组化染色,检测两者表达水平,分析其与NSCLC患者临床病理特征和预后的关系.结果:HIF-1α与GLUT1在NSCLC中的阳性表达率分别为58.70%(27/46)和39.11%(18/46),r=0.492(P=0.001).HIF-1α表达与年龄、性别、肿瘤大小、分期、淋巴结转移、组织学类型和分化程度均无显著相关,而GLUT1与淋巴结转移(P=0.021)和鳞癌(P=0.001)密切相关.Kaplan-Meier生存分析,GLUT1阳性的NSCLC患者术后无病生存率低于阴性患者(P=0.039),而HIF-1α与总生存率、无病生存率均无关.结论:NSCLC患者肿瘤组织中同时存在急、慢性乏氧,其无病生存率主要与慢性乏氧有关.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spike protein,S蛋白)与钙调蛋白结合肽(calmodulin binding peptide,CBP)-蛋白A串连亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)标签在Vero细胞内的融合表达及亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础.方法:从质粒pGEM-4Z-S中扩增S片段,在5'端加入Kozak序列,并与TAP标签基因共同插入pcDNA3.1(-)中,构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C).将构建好的质粒瞬时转染Vero细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光及Western-blotting技术检测融合蛋白的表达及亚细胞定位.结果:成功构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C),瞬时转染Vero细胞后S-CBP-蛋白A融合蛋白[S-TAP(C)]得到表达,重组痘苗病毒vTF7-3可有效增强该融合蛋白的表达水平,且检测到S-TAP(C)融合蛋白表达于细胞膜上.结论:S蛋白与TAP标签融合蛋白表达于细胞膜上,且vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高,可用于S蛋白结合蛋白的筛选.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:损伤大鼠双侧基底核形成阿尔茨海默病(AD)模型,用空间参考记忆和空间工作记忆共同检测该模型的可靠性.方法:选用3月龄大鼠16只,随机选8只制成模型组,将鹅膏蕈酸钠(IBO)注入大鼠双侧基底核,其余8只为青年对照组.另选24月龄大鼠8只为老年对照组.用Morris水迷宫对3组大鼠进行行为学检测.结果:模型组与青年组、老年组相比,空间参考记忆和空间工作记忆均明显下降(P<0.01).结论:空间参考记忆和空间工作记忆是检测AD模型的可靠方法.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨ES细胞-D3来源的胰岛素分泌细胞(IPCs)分泌的胰岛素的降糖活性及IPCs移植对糖尿病(DM)鼠的降糖作用.方法:ES细胞-D3培养于经处理的鼠胚成纤维细胞滋养层上保持未分化状态扩增,对数生长期时转入无血清含bFGF的DMEM诱导液进行诱导分化,使其分化为IPCs.于诱导的第21天,用ELISA法检测IPCs受高糖刺激2 h后所分泌的胰岛素,同时将分泌的胰岛素静脉注射给小鼠,观察受鼠血糖的变化;将诱生的IPCs移植给链脲菌素(STZ)诱导的DM小鼠,观察受鼠血糖水平的改变.结果:ES细胞-D3体外诱导生成的IPCs所分泌的胰岛素具有降糖活性,且IPCs经两次移植给DM小鼠后第5天,血糖水平较移植前显著降低(P<0.05),第2次移植后第15天,受鼠血糖水平反弹到与移植前没有差别.结论:小鼠ES细胞-D3诱导生成的IPCs能够分泌有活性的胰岛素,且在一段时间内可显著降低DM受鼠的血糖.
作者： 刊期： 2005年第08期
目的:探讨胰岛素对体外肾小管细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:建立体外肾小管细胞损伤模型.取肾小管细胞,随机分为3组,分别用正常兔血清(SC组)、再灌注损伤兔血清(SIR组)和再灌注肾损伤兔血清+胰岛素(IN组)处理培养48 h后,分别用分光光度计比色法检测肾小管细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、钙ATP酶(Ca2+-ATPase)活性、一氧化氮(NO)和培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)含量.细胞组化染色检测肾小管细胞内SDH活性.结果:IN组与SIR组比较,肾小管细胞内SOD、SDH、Ca2+-ATPase活性明显升高(P<0.05);细胞上清液MDA、LDH、NO含量显著下降(P<0.05);细胞组化染色显示IN组SDH颗粒密集,着色较深,而SIR组颗粒稀疏,着色浅淡.结论:胰岛素对损伤肾小管细胞有明显的保护作用,其机制为提高细胞抗氧化能力、减少氧自由基生成并减轻细胞内Ca2+超载,促进细胞能量代谢.
作者： 刊期： 2005年第08期
山东大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：山东大学
