学术投稿

Taq Man-MGB探针Real-timePCR快速检测单增李斯特菌的研究

梅玲玲;王晶;孟真;朱敏;高筱萍

关键词:单增李斯特菌, 检测, Real-time荧光PCR, Taq Man-MGB探针
摘要:目的:建立Taq Man-MGB探针Real-time荧光PCR快速检测单增李斯特菌技术.方法:在对单增李斯特菌invA序列进行分析、比较基础上,设计一对特异性Taq Man-MGB探针法引物及探针,通过Real-timePCR反应条件和反应体系的优化,实现对单增李斯特菌的快速检测;用克隆到pMD18-T载体上的李斯特菌invA基因阳参片段及不同菌株、食品标本验证方法的特异性和敏感性.结果:方法的灵敏性高,其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系,低可检测57个拷贝数,经18 h增菌,可检测低至4.5 cfu/ml的细菌;特异性强,检测6株单增李斯特菌标准株和100株单增李斯特菌样品分离株的PCR循环域值(CT值)均小于25,而90株威氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌以及非李斯特菌PCR循环域值(CT值)大于35;快速,快1 h可出结果,实际样品20 h可出结果,而常规细菌培养法需要一周以上;对103份速冻米面食品进行检测,13份阳性,与常规方法无显著性差异(P>0.05).结论:Taq Man-MGB探针的单增李斯特菌Real-time荧光PCR检测方法具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,可推广应用.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 气相色谱法测定土壤、蔬菜和水果中硫丹类农药残留

    目的:测定土壤、蔬菜和水果中5种硫丹类农药残留.方法:应用毛细管气相色谱法,程序升温,μ-ECD检测器,外标法定量.结果:该法线性范围为0.001~0.1 μg/ml,在此浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,方法的检出限为0.394~1.330 μg/kg,测定的回收率为64%~106%,相对标准偏差<14%.结论:所建立的方法简便、快速、灵敏度高,并具有良好的精密度与准确度.

    作者:刘文杰;晋玉霞;马玲;庞新安;张利莉 刊期: 2007年第02期

  • 惠城区部分市售食品的微生物学质量调查

    目的:了解惠城区市售食品的卫生状况.方法:于2005年1月~5月对惠城区6类食品进行了菌落总数、大肠菌群数和肠道致病菌的检测.结果:6类食品(饮料、凉拌菜、糕点、灌肠类、酱卤肉类、果脯)的超标率分别为7.70%、47.06%、13.34%、11.11%、40.00%、6.25%.除饮料和果脯外其余食品均检出致病菌,检出率为6.12%.结论:凉拌类和酱卤肉类食品的污染较严重,建议有关部门采取有效措施,加强食品卫生的监督管理,以保障食品安全.

    作者:毛露甜;王绍芬;曾伟;陈蔡国;梁锦灿;杜梅 刊期: 2007年第02期

  • 用于禽流感H9亚型检测的压电免疫蛋白芯片的研制

    目的:研制禽流感H7亚型检测的压电免疫蛋白芯片.方法:采用聚乙烯亚胺(PEI)粘附、戊二醛(Glu)交联的方法,将禽流感H9抗原固定于石英晶体的金电极表面.研究了敏感材料的浓度、pH值对其固定的影响.结果:该芯片用于检测浓度范围为0.123~1.23 mg/ml的禽流感H9血清时,呈线性相关,相关系数0.9854.结论:检测阳性样品的响应值与阴性样品的噪声值之比大于2,可用于定性定量检测.

    作者:刘毅新;刘仲明;王弘;孙远明 刊期: 2007年第02期

  • 北京市朝阳区2005年11月~2006年4月流感爆发分析

    目的:对北京市朝阳区2005年11月~2006年4月流感爆发进行分析,以便制定确实有效的防治措施.方法:采集集中发热疫情病人咽拭子标本,采用MDCK细胞培养法分离流感病毒,微量血凝抑制实验进行鉴定.结果:共采集标本177份,分离到流感病毒101株,流感病毒分离率57.06%.流感爆发占集中发热疫情的88.46%,以小学流感爆发为主(95.56%).2005年11月~12月,为甲1型流感爆发,2006年3月~4月,为乙型流感爆发.结论:流感爆发是集中发热疫情的主要原因,且以小学流感爆发为主(95.56%).北京地区3月份仍可出现流感爆发的流行高峰.

    作者:白瑞婷;杨立清;邵希凤;张晓曦;马建新;张春 刊期: 2007年第02期

  • 肥胖症儿童血脂及血液流变学分析

    目的:检测、分析肥胖症患儿血脂及血液流变学指标,为临床诊断、预防儿童肥胖症及并发症提供实验室依据.方法:将117例肥胖症儿童和120例正常儿童作为肥胖组和对照组,同步空腹静脉采血检测血脂及血液流变学指标.结果:①肥胖组儿童血清胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白明显高于对照组,具有统计学意义(P<0.01).②肥胖组儿童的全血粘度(高、中、低切)、血浆粘度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数明显高于对照组,具有统计学意义(P<0.01).结论:肥胖症儿童出现脂质代谢紊乱,并存在血液高粘滞状态.

    作者:毋小玉;陈青珍;张英 刊期: 2007年第02期

  • HPLC法测定保健食品中酪蛋白磷酸肽

    目的:建立保健食品中酪蛋白磷酸肽的高效液相色谱测定方法.方法:样品经处理后,采用不同比例的乙腈、0.1%醋酸溶液梯度洗脱,用带有紫外检测器的高效液相色谱仪测定.结果:方法检测限为10 μg/ml,相对标准偏差为3.2%,回收率为91%~103%.结论:本方法前处理简便、检测灵敏度高,适用于保健食品钙片中酪蛋白磷酸肽含量的测定.

    作者:田随安;张向兵;李永利 刊期: 2007年第02期

  • 80 562名从业人员血清梅毒抗体检测分析

    目的:了解我市1995~2005年间从业人员的梅毒感染情况.方法:采用快速环状卡片测试方法(RPR)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPPA)对80 562例从业人员进行血清梅毒抗体检测分析.结果:梅毒抗体阳性306例,阳性率37.98/万,其中男性83例,女性223例,以娱乐业从业人员阳性率高为50.47/万.结论:我市从业人员梅毒感染从1995~2002年呈逐年上升趋势,2003至2005年有所回落,阳性率同1998年持平.

    作者:朱国良;平国华;周伟艳;朱旦蓉;姚漫红 刊期: 2007年第02期

  • 染发类化妆品中染发剂的使用情况分析

    目的:研究染发类化妆品中染发剂的使用情况.方法:统计分析2003~2005年290份国产和进口染发类化妆品中染发剂的使用种类、频率和用量.结果:290份样品共使用39种染发剂,其中间苯二酚、对苯二胺(及硫酸盐)、对氨基酚、间氨基酚(及盐酸盐)、2,5-二氨基甲苯(及硫酸盐)的使用频率较高,均在30%以上.结论:染发类化妆品中染发剂的使用种类繁多,某些组分使用频率较高,在使用中应引起关注.

    作者:杨艳伟;朱英 刊期: 2007年第02期

  • 吹扫效应与室内空气污染

    目的:探讨吹扫效应与室内空气污染.方法:对具有中央空调系统的宾馆中的可吸入颗粒物、CO2等室内空气污染物的采样、检测分析.结果:有滤尘罩的中央空调系统管道送风口终端(客房送风口)的可吸入颗粒物浓度小于房间中央的浓度值(P<0.05),有显著性差异.气态污染物CO2在客房送风口端的浓度与房间中央的浓度值(P>0.05)无显著性差异.结论:房间中可吸人颗粒物的浓度的增高是由于送风口的吹扫气流使得房间静止的颗粒物被吹扫搅起的结果.CO2等气态污染物在送风口终端与房间中央的浓度差异应取决于新风量的大小.除颗粒物本身的致病因素外,作为病毒等病原微生物的载体颗粒,从流行病学角度考虑应避免在有污染可能的房间内吹扫效应所导致的进一步传播.室内空气污染在不同的建筑几何结构中表现为相应的、动态的变化规律,污染物的吹扫效应是对其一定规律的总结.

    作者:谭天媛;李拥军 刊期: 2007年第02期

  • 蓖麻毒素及其检测技术

    蓖麻毒素(ricin toxin,RT)是一种从蓖麻种子的胚乳中提取的植物蛋白毒素.一个多世纪以来,RT因其具有强毒性而引起人们的兴趣.由于RT来源广泛,毒性较高,已被外军作为武器化的一种毒素加以研究[1].禁止化学和生物武器公约把RT列为为严格的控制对象之一,本身就反映了人们对RT军事价值的关注.

    作者:王俊虹;康琳;高姗;贾杨;王景林 刊期: 2007年第02期

  • C肽化学发光免疫诊断分析方法的建立及临床应用

    目的:建立一种特异、敏感的临床C肽的化学发光免疫分析诊断方法并应用于临床.方法:采用特异性的两株C-P单克隆抗体,辣根过氧化物鲁米诺酶促增敏化学发光体系,利用双抗体夹心法检测.结果:敏感度为0.02 μg/L;检测线性范围为0.02~20 μg/L;多人次检测证实试剂盒批内变异均小于10%,分析间变异小于15%;与18 μg/L人胰岛素原、2 000 mIU/L的人胰岛素无显著交叉反应.结论:该方法灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,适合应用于临床.

    作者:钮心怡;路晟;孙旭东;江振友 刊期: 2007年第02期

  • 气管骨形成症3例报告并文献复习

    目的:探讨气管骨形成症(tracheopathia osteoplastica,TO)的临床特点,诊断要素,提高对TO的认识.方法:回顾性总结我院收治的经手术或经纤维支气管镜活检确诊的3例TO患者的临床资料,分析其临床特点、病理表现和诊疗依据.结果:3例TO患者均为男性,均有慢性咳嗽、咯痰,反复肺部感染的病史.纤维支气管镜检查可见气管、支气管软骨部结节样或鹅卵石样突起,活检可见粘膜下软骨和骨组织形成.结论:综合上述3个病历和文献认识到TO是一种罕见的病因不清的临床病理变化,可能与化学物质、油烟等慢性刺激及病人自身内分泌变化导致钙磷代谢异常有关.慢性不明原因的咳嗽应警惕本病的存在,纤维支气管镜检查是发现和确诊此病的主要手段.

    作者:张歆刚 刊期: 2007年第02期

  • 海水产品副溶血性弧菌污染定量检测分析

    目的:为了掌握副溶血性弧菌在海水产品中污染情况,以不同季节,定量检测副溶血性弧菌在海水产品中污染程度的动态变化,提出有效的控制措施,减少食物中毒的发生.方法:根据不同季节,从不同的农贸市场采取鱼类、虾类标本;采用MPN法进行副溶血性弧菌定量检测;并完成分离菌株血清型和毒力基因的检测.结果:副溶血性弧菌在海水产品中的污染有明显的季节性,并且与我省的细菌性食物中毒的发生季节基本一致;副溶血性弧菌的血清型分布以O4/O5/O1/O11血清型为主;海产品分离株,其携带TDH基因明显低于食物中毒标本中分离株.结论:通过检测分析,得出副溶菌在鱼虾等海产品中的污染具有明显的季节性,虾和鱼的污染密度也有差别(x2=12.40;P<0.05).而且检测的两类海产品中,高污染量的副溶菌对食品安全存在高风险.加强对TDH阳性副溶菌的检测,是控制副溶菌食物中毒发生的重要方面.

    作者:程苏云;张俊彦;王赞信;童贵忠;孟真 刊期: 2007年第02期

  • 饮用水中微囊藻毒素快速检测方法的应用研究

    目的:探讨快速检测方法(ELISA)检测饮用水中微囊藻毒素的实用性和优越性.方法:按要求采集农村集中式水厂源水,同时用HPLC法和ELISA法双盲测定,比较结果;选择微囊藻毒素高、中、低3种不同浓度的水体,分别加入不同浓度的微囊藻毒素标准用ELISA法各进行6次测定,统计出相应的回收率及相对标准偏差.结果:ELISA法检测饮用水中微囊藻毒素准确度及精密度较理想,与HPLC法比较,无显著性差异(P>0.05).结论:ELISA法实用、准确、简便、快速,适合大批量样品的测定.

    作者:余天莉;蒲朝文;何军 刊期: 2007年第02期

  • 应用大型水蚤对农药和无机砷污染的饮用水和地表水源水毒性检测

    目的:验证采用大型水蚤检测农药和无机砷污染的饮用水和地表水源水毒性的可行性.方法:采用大型水蚤的急性毒性试验方法检测饮用水和地表水源水的毒性,用SPSS12.0统计分析计算大型水蚤的LC50.结果:大型水蚤能够灵敏检测饮用水和地表水源水的0.2%高渗甲维盐和25%毒死蜱氯氰菊酯乳液污染,在农药浓度达到微克时,仍然有响应;对砷酸钠的敏感度相对较低,但仍然可以达到毫克.结论:大型水蚤的急性毒性测试方法可以用来检测饮用水和地表水源水中农药和无机砷的污染.

    作者:潘力军;高世荣;孙凤英;王俊起 刊期: 2007年第02期

  • mtDNA 4 977 bp缺失突变的研究进展

    线粒体是真核细胞的重要细胞器,在细胞的能量代谢和氧自由基生成过程中扮演重要角色.线粒体DNA(mitochon-drial DNA,mtDNA)是独立于细胞核染色体外的基因组,具有自我复制、转录和编码功能,以母系遗传的方式进行遗传[1].研究表明,mtDNA突变与电离辐射、肿瘤和生物衰老等有着很紧密的关系.在这些情况下,mtDNA会发生许多不同的缺失,从而影响生物体正常功能的行使.特别是对mtDNA 4 977 bp缺失的研究国内外学者做了很多的尝试.

    作者:陈晓培;王平;吕玉民 刊期: 2007年第02期

  • 单核细胞增生李斯特菌快速检测的靶基因及其生物学特性

    单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的人畜共患病原菌,该菌在自然界分布广泛,极易通过各类污染食品进行传播,感染人和动物引起食源性李斯特菌病.

    作者:杨振泉;焦新安 刊期: 2007年第02期

  • 实验室中的化学品安全管理

    SARS病毒在实验室造成人员感染事件后,世界各国都意识到了实验室生物安全管理的重要性,2004年WHO出版了《实验室生物安全手册》(第三版),加拿大出版了《实验室生物安全指南》.我国也先后颁布了《病原微生物实验室生物安全管理条例》(2004)、《国家突发公共事件总体应急预案》(2006)、《人间传染的病原微生物名录》(2006)、《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》(2006)、《实验室生物安全通用要求》GB19489-2004、《CNAL实验室生物安全认可准则》(2005),使实验室生物安全的管理更加科学、规范.

    作者:徐东群 刊期: 2007年第02期

  • 过氧乙酸空气消毒剂中和试验方法的改进及现场应用效果的评价

    目的:以过氧乙酸消毒剂为例,对空气消毒中和试验方法进行改进,并观察现场应用效果.方法:以金黄色葡萄球菌为试验菌,采用微生物采样器采集空气,进行中和剂选择试验.结果:现行中和试验方法可能检测不出中和剂对试验菌的抑制作用,而改进后的中和试验方法能提高检测效能.2 000 mg/L过氧乙酸溶液作用20 min,对不同污染程度场所的空气中自然菌消除率均为90%以上.结论:改进试验方法提高了空气消毒剂消毒效果检测的准确性.2 000 mg/L过氧乙酸溶液可有效用于空气现场消毒.

    作者:江永忠;唐非;姜朴 刊期: 2007年第02期

  • 舟山海岛341例慢性前列腺炎病原学分布及耐药性分析

    目的:研究慢性前列腺炎的病原学分布及对临床常用药物的耐药性.方法:对341例慢性前列腺炎患者的前列腺液进行细菌培养和药敏试验,同时检测解脲脲原体、人支原体和沙眼衣原体.结果:341例慢性前列腺炎患者中201例(58.9%)常规细菌培养阳性,共分离出细菌18种共204株,阳性球菌占82.4%,阴性杆菌占17.6%,又以溶血葡萄球菌为主(46.6%);154株葡萄球菌中MRS139株(90.3%),对β-内酰胺酶类抗菌药物的耐药率与MRS检出率一致,对庆大霉素、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和四环素等均表现出50%~90.9%的高耐药率,对呋喃妥因和利福平较敏感.12株粪肠球菌中,万古霉素耐药(VRE)3株(25%);高浓度链霉素耐药(HLSR)5株(41.7%);高浓度庆大霉素耐药(HLGR)7株(58.3%);对红霉素、环丙沙星、四环素、利福平耐药率较高(58.3%~100.0%).14株大肠埃希菌中8株ESBLs阳性(57.1%),除对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南和阿米卡星较敏感外,对其他常用药物的耐药率均在40%以上.支原体或(和)衣原体检测阳性50例(14.7%),在140例细菌培养阴性和201例细菌培养阳性病例中,支原体或(和)衣原体感染检出率分别为20例(14.3%)和30例(14.9%)(x2=0.03,P>0.05).结论:慢性前列腺炎病原菌以细菌感染占主导地位,分离菌株对常用药物耐药严重.支原体、衣原体感染也应加以重视.适时监测前列腺液病原菌及药敏试验对临床诊断和治疗慢性前列腺炎具有重要意义.

    作者:马红松;沈忠海;夏邦世;林奇龙;梁博卿 刊期: 2007年第02期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

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