学术投稿

沙门菌基因突变株的构建方法研究

叶颖;邱桥成;李嫄渊;吴淑燕;黄瑞

关键词:沙门菌, 基因突变, 转化
摘要:目的 研究沙门菌基因突变株构建的方法,为利用基因工程技术对细菌进行遗传性状改造,深入研究沙门菌防治手段提供工具.方法 选用不同感受态细菌培养时间、培养基、感受态细胞浓度和电击参数等条件,以小分子质粒pMDT-GFP电转化受试菌,通过计算转化效率确定优化的电转条件.在此基础上用大分子质粒pGBM151-spvB电转化受试菌,再以蔗糖诱导同源重组,筛选突变株.结果 以含15 g/LNaCl的高渗LB培养基培养细菌至A600为0.3,制备浓度为1010cfu/ml的感受态细胞,在参数为2.5 kV、400 Ω、50 μF条件下,小质粒pMDT-GFP电转鼠伤寒沙门菌可获得高转化效率.以往难以转化的大质粒pGBM151-spvB在该条件下成功获得转化子,进而成功构建突变株.结论 上述方法能用于高效构建沙门菌基因突变株.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 颅脑外伤患者术后颅内感染的风险因素分析

    目的 探讨颅脑外伤患者术后颅内感染的风险因素,为其防治提供参考意见.方法 分析394例颅脑外伤手术患者的临床资料,对年龄、性别、术前GCS评分、术区头皮伤口、脑脊液漏、术前抗生素应用、术区人工植入物、多次手术、术中失血量等情况与术后颅内感染之间的关系进行统计学分析,总结出颅内感染发生的风险因素.结果 本研究颅脑外伤术后颅内感染的发生率约为9.39%.脑脊液漏、多次手术及术中大量失血与颅内感染发生之间呈正相关(均P<0.05),术前抗生素的应用能减少感染发生(P<0.05).在彻底清创等情况下,术区头皮开放伤及术区植入物与感染发生相关性不大.年龄、性别及术前GCS评分与颅内感染发生之间无明显相关性.结论 术前适当使用抗生素、术区彻底清创、尽量减少手术时间、控制术中出血与输血量、严格把握人工植入物的使用指征,有助于减少颅脑外伤患者术后颅内感染的发生.

    作者:管义祥;吴德模;陆正;李军;王海波;蔡舒;刘中平 刊期: 2012年第06期

  • 低位产钳术46例临床分析

    目的 评价低位产钳术在处理第二产程头位难产中的临床价值.方法 回顾分析46例产钳分娩患者的临床资料,将产妇及新生儿并发症与同期平产的70例进行对照.结果 新生儿窒息率、产妇软产道裂伤率、产后大出血率两组差异均无统计学意义(均P >0.05).结论 只要掌握好产钳的适应证与使用技巧,手术者与会阴保护者合理配合,并不增加母婴并发症.尤其对第二产程胎儿窘迫,可及时结束分娩,改善围生儿结局.

    作者:王秀英 刊期: 2012年第06期

  • 腹腔镜游离胃与常规开腹手术在食管癌根治术中的对比研究

    目的 探讨腹腔镜游离胃代替常规开腹手术在食管癌根治术中的优点.方法 将136例食管癌手术患者分腹腔镜组和常规开腹组.分析两组腹部手术时间、腹腔引流液量、腹部切口感染率、肺部感染发生率、腹腔淋巴结清除数量、胃肠功能恢复情况、术后胃壁坏死、胃残端瘘发生率.结果 与常规开腹组相比,腹腔镜组具有腹部手术时间短、失血量小、腹部无切口感染、术后肺部感染发生率低的优点,其中手术时间和腹腔出血量两组相比,差异具有高度统计学意义(均P<0.01).术后胃肠功能恢复、腹腔淋巴结清除数量无明显差异,同时不会增加术后胃壁坏死、胃残端瘘发生率.结论 腹腔镜游离胃在食管癌根治术中具有明显优点,值得在临床上推广.

    作者:夏漫辉;夏洪 刊期: 2012年第06期

  • 阿尔茨海默病患者血浆3-NT浓度的变化及其临床意义

    目的 探讨血浆3-硝基酪氨酸(3-NT)浓度与阿尔茨海默病(AD)患者认知功能损害的关系.方法 应用简易精神状态检查量表(MMSE)检测入组患者的认知功能,将其分为3组,即正常对照组(NC,37例)、血管性痴呆组(VD组,41例)、AD组(48例),分别用酶联免疫吸附试验(ELSIA)测定3组患者的血浆3-NT浓度,并对AD组患者的血浆3-NT浓度与MMSE得分及各个认知领域分值进行相关性分析.结果 NC组、VD组、AD组患者血浆3-NT浓度分别为(55.09±9.63) nmol/1、(70.42±11.45) nmol/1、(119.46±21.82) nmol/1,AD组患者血浆3-NT浓度明显高于NC组、VD组(均P<0.05);AD组患者血浆3-NT浓度与MMSE得分成明显负相关(r=-0.638,P<0.05);AD组患者血浆3-NT浓度与记忆力、定向力、注意力和计算能力均成明显负相关(均P<0.05).结论 血浆3-NT浓度测定有可能作为判断AD患者认知功能损害的生化指标,亦可作为AD与VD鉴别诊断的生物学指标.

    作者:殷晓菁;胡玲玲;彭誉;周华;邱晨红;孙沁怡;王锋;谢红娜;赵中 刊期: 2012年第06期

  • 流式免疫微球芯片技术检测血小板膜糖蛋白特异性自身抗体的方法及其临床应用

    目的 建立流式免疫微球芯片技术(FCIBA)检测血小板膜糖蛋白(GP)特异性自身抗体的方法及其临床应用.方法 使用流式细胞仪检测包被不同GP的单克隆抗体,抗GPⅨ(SZ1)、抗GPⅠb(SZ2)、抗GP Ⅲa(SZ21)、抗GPⅡb(SZ22)、抗P-选择素(SZ51)的不同荧光强度的微球,检测结果与单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAI-PA)进行比较.选取特发性血小板减少性紫癜(ITP)组、非ITP (NITP)组和健康人对照组样本用FCIBA分析SZ1、SZ2、SZ21、SZ22、SZ51共5种特异性血小板自身抗体.结果 批内批间差异小;rTP组与NITP组和健康人对照组比较,差异均有高度统计学意义(均P <0.01);对ITP诊断的总特异度为81.4%(70/86),MAIPA总特异度为80.2%(69/86),差异无统计学意义(P>0.05).敏感度为62.00% (31/50),明显高于改良间接MAIPA的31.00%(19/50,P<0.05).结论 FCIBA可以一次同时进行5种自身抗体的联合检测,为ITP的临床诊断提供了一种快速测定的新方法.

    作者:赵赟霄;何杨;朱明清;阮长耿 刊期: 2012年第06期

  • 大鼠创伤性脑损伤后高压氧治疗的时间窗研究

    目的 观察不同开始时间和不同次数高压氧(HBO)治疗对创伤性脑损伤(TBI)大鼠神经损伤的疗效,明确HBO治疗的时间窗和有效的治疗次数.方法 采用Feeney法制备TBI模型,分别在致伤3、6、12、24、48、72 h后开始HBO治疗,观察治疗后大鼠神经行为学、海马结构形态学的变化,确定HBO治疗的有效时间窗和治疗次数.结果 治疗组伤后3、6、12 h进行1次HBO治疗,大鼠海马CA2、CA3区锥体细胞形态及神经行为学评分显著改善,细胞丢失显著减少,其中3、6h的作用佳(均P<0.01).而伤后24、48、72 h进行1次HBO治疗,与对照组比较,差异均无统计学意义(均P >0.05).伤后6h,进行1、3、5次HBO治疗,各次治疗后在神经行为学、海马结构形态学方面的差异均无统计学意义(均P>0.05).但伤后24h,进行1、3、5次HBO治疗后,3、5次治疗效果明显好于1次治疗(均P<0.05).结论 大鼠TBI后6h内起行HBO治疗效果显著,增加治疗次数有助于增加疗效.

    作者:王勇;李永财;马东明 刊期: 2012年第06期

  • 降脂煎剂治疗脂肪肝38例临床观察

    目的 观察降脂煎剂治疗脂肪肝的临床疗效.方法 将62例脂肪肝患者随机分为两组:治疗组38例,口服降脂煎剂50 ml/次,每日2次;对照组24例,口服水飞蓟素胶囊1粒/次,每日3次,2组均连续用药12周.观察两组的疗效及治疗前后的症状、体征、肝功能、血脂及肝脏B超检查情况.结果 治疗组总有效率94.7%,明显优于对照组的75% (P <0.05),且在降酶、降脂、改善B超情况及症状、体征等方面均具有明显效果.结论 降脂煎剂对脂肪肝有明显的治疗作用.

    作者:王佩 刊期: 2012年第06期

  • 经皮单侧穿刺椎体后凸成形术治疗胸腰椎压缩性骨折的疗效分析

    目的 分析经皮单侧穿刺椎体后凸成形术(PKP)治疗骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折(OVCF)的临床效果.方法 采用单侧穿刺PKP手术来治疗骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折30例,评定术前术后疼痛视觉评分(VAS)和Oswestry功能评分,正侧位X线片测量椎体高度和Cobb角.结果 所有患者VAS评分和Oswestry评分术后和术前相比,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);椎体高度和Cobb角术后与术前相比,差异均有统计学意义(均P <0.05).结论 单侧穿刺PKP手术可有效恢复骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折椎体高度,缓解疼痛,是一种安全、有效的治疗方法.

    作者:谢海明;李勇;张志明 刊期: 2012年第06期

  • 苏州市相城区2006-2010年肺结核的动态分析

    目的 分析苏州市相城区2006-2010年肺结核的动态变化情况,评价相城区肺结核综合防制措施的效果,揭示苏州市相城区肺结核的分布特点.方法 根据2006-2010年网络专报系统数据和各类结核病登记报表,对苏州市相城区户籍人口和流动人口肺结核患者发现、流行病学特征及治疗转归进行比较分析.结果 后3年较前2年新发涂阳病例登记率户籍人口明显下降,流动人口明显上升;流动人口涂阳肺结核患者中的新发病人构成比高于户籍人口(P<0.05);涂阳患者平均治愈率为90.04%,流动人口涂阳和新发涂阳患者治愈率均高于户籍人口(均P <0.01).结论 苏州市相城区2008年后新发涂阳患者登记率呈现户籍人口下降、流动人口上升趋势;实施现代结核病控制策略(DOTS)和全球基金流动人口结核病防治项目后,结核病防治成效显著.

    作者:钱珍花;蔡莉英 刊期: 2012年第06期

  • 苏州地区喘息性疾病患儿过敏原检测结果分析

    目的 分析苏州地区喘息性疾病患儿的过敏状况,有助于临床早期干预治疗.方法 采用UniCAP全自动检测仪,对404例喘息性疾病患儿和268例非喘息性疾病患儿进行过敏原特异性IgE测定,并对105例喘息性疾病患儿同时行皮肤点刺试验.结果 喘息性疾病患儿血清过敏原阳性率为40.1%,其中支气管哮喘组为77.9%,反复咳喘组(<3岁)为49.4%,均明显高于对照组(均P<0.05).吸入性过敏原阳性率随年龄增长呈递增的趋势,食物性过敏原阳性率以1~3岁组高.城区患儿吸入性过敏原阳性率明显高于郊区(P<0.05).两种检测方法对尘螨过敏原检出率的差异无统计学意义(P>0.05),对牛奶过敏原检测的符合率较低(P<0.05).结论 儿童喘息性疾病可能与过敏相关,通过血清过敏原的测定,能了解患儿过敏原状况,为疾病的诊治提供依据.

    作者:王喆;季伟;周卫芳;骆亚丽;李晓狄 刊期: 2012年第06期

  • 蒙古族人群炎症标志物与胰岛素敏感指数的相关性研究

    目的 探讨蒙古族人群炎症标志物C反应蛋白(CRP)、可溶性E选择素(sE-selectin)和可溶性细胞黏附分子(sICAM-1)与胰岛素敏感指数(ISI)的关系.方法 以年龄≥20岁蒙古族居民作为研究对象,采取调查问卷方式收集人口统计学特征和生活方式危险因素资料,测量身高、体质量和血压,检测血脂、血糖、胰岛素和CRP、sE-selectin、sICAM-1等炎症标志物等指标.采用Logistic回归分析炎症标志物水平与ISI降低的关联关系.结果 经多因素调整后,随着CRP和sE-selectin水平的升高,ISI降低的危险度呈升高趋势(P<0.05).以低分位为参比,高分位CRP和sE-selectin者的ISI降低(ISI≤0.0130)的OR值(95%可信区间)为1.324(0.990~1.771)和1.986(1.486~2.654).而sICAM-1水平升高与ISI降低的危险性无关联关系(P>0.05).结论 CRP和sE-selectin水平升高与ISI降低的危险性相关联.

    作者:王珂;陆洪敏;赵丽;韦晓淋;卜晓青;汤玲燕;张永红 刊期: 2012年第06期

  • 2型糖尿病患者血清缺氧诱导因子-1α与颈动脉粥样斑块的相关性

    目的 观察2型糖尿病(T2DM)患者血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的变化,探讨其与动脉粥样硬化性大血管病变的关系.方法 选择32例T2DM合并颈动脉斑块患者(T2DM+ CP组),24例单纯T2DM患者(T2DM组),24名健康体检者(正常对照组),采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定血清HIF-1α浓度.结果 T2DM+ CP组和T2DM组HIF-1α水平均显著高于正常对照组(均P<0.01),T2DM+ CP组HIF-1α水平明显高于T2DM组(P<0.05).血清HIF-1α水平与空腹血糖、糖化血红蛋白C(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)成明显正相关(均P<0.05).多元线性逐步回归分析表明,HbA1c是血清HIF-1 α水平的独立影响因素.结论 T2DM患者体内高水平的血清HIF-1α与血糖、胰岛素抵抗有关,在大血管并发症的发生发展过程中起着重要的作用.

    作者:鄂维琴;施毕旻 刊期: 2012年第06期

  • 高龄食管癌患者术后早期肠内营养的临床应用

    目的 探讨早期肠内营养在高龄食管癌患者术后的临床应用效果.方法 分析132例术后早期经肠内营养治疗的高龄食管癌患者的临床资料.结果 绝大多数患者术后3d肠功能恢复.均能耐受肠内营养.6例患者出现频繁腹泻,4例出现吻合口瘘.2例切口感染,清创换药后愈合.均无肺部感染,无死亡.结论 高龄食管癌患者术后早期应用肠内营养,能促进胃肠功能恢复,减少并发症的发生率,提高手术成功率.

    作者:宋心雨;马海涛;何靖康 刊期: 2012年第06期

  • 脾脏切除术治疗结缔组织病合并难治性血小板减少症的近期疗效分析

    目的 探讨脾脏切除术在治疗结缔组织病(CTD)合并难治性血小板减少症中的疗效.方法 回顾性分析15例CTD合并难治性血小板减少症患者脾脏切除前后的临床资料,选择不同时间点检测患者血小板计数,观察脾脏切除后的血小板水平变化趋势.结果 脾脏切除术后48 h,显效80%(12/15),良效20%(3/15),总有效率100%;脾脏切除术后1周,显效100%(15/15);脾脏切除术后52周,显效13.33% (2/15),良效20% (3/15),无效66.67%(11/15),总有效率33.33%.与脾脏切除前比较,血小板计数在脾脏切除后24、48 h和1、4、8周均明显升高(P<0.05).随着时间的延长,血小板计数呈下降趋势.结论 脾脏切除术对治疗CTD合并难治性血小板减少症短期疗效显著,长期疗效有待扩大例数进一步观察.

    作者:曾克勤;陈志伟;强红伟;武剑 刊期: 2012年第06期

  • 2008-2010年我院麻醉药品利用分析

    目的 了解我院2008-2010年麻醉药品的应用情况及用药趋势.方法 对我院2008-2010年麻醉用药的品种、数量、使用金额、用药频度(DDDs)进行统计分析.结果 麻醉药品的消耗金额呈上升趋势,盐酸哌替啶注射液DDDs从第6位下降到第8位,硫酸吗啡缓释片、枸橼酸芬太尼透皮贴剂DDDs3年中一直稳居前五位.结论 我院麻醉药品使用基本合理,有助于改善和提高患者的生活质量.

    作者:鲍丽琴 刊期: 2012年第06期

  • Egr-1启动子调控hNIS基因的重组质粒构建及转染细胞株的建立

    目的 构建早期生长反应基因-1(Egr-1)启动子调控人钠碘转运体(hNIS)基因的重组质粒并稳定转染人宫颈癌细胞株Hela,评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导作用.方法 以Egr-1/pMR18T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列,亚克隆至真核表达载体FL*-hNIS/pcDNA3,构成重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,酶切电泳鉴定,通过FuGENE HD转染入Hela细胞,G418筛选抗性克隆,获取单克隆Hela-Egr-1-hNIS.分别采用流式细胞仪、RT-PCR检测Hela-Egr-1-hNIS细胞系中NIS基因和NIS蛋白的表达.动态摄取碘-125实验观察Hela-Egr-1-hNIS细胞和前期研究所得细胞株Hela-NIS(+)给予不同剂量的X线辐照前后的摄碘功能.未转染的Hela细胞作为阴性对照组.结果 成功构建重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,转染Hela细胞后获得了稳定表达细胞系Hela-Egr-1-hNIS,流式细胞仪测得NIS表达效率为11.2%;RT-PCR检测到Hela-Egr-1-hNIS有NIS mRNA的转录,而对照组无NIS蛋白表达.动态摄碘实验提示Hela-Egr-1-hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞提高了13倍;辐照后摄碘能力增强,在0~6 Gy范围内与辐射剂量成正相关(r=0.960,P<0.05);而Hela-NIS(+)组辐照后摄碘功能下降,与辐射剂量无相关性(r=-0.770,P>O.05).结论 成功构建Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS细胞系,该细胞系具有较强的摄碘功能及辐射诱导作用,有望在体内治疗中获得更好的治疗效果.

    作者:吴强乐;许袁琦;黄宏;石怡珍;刘增礼 刊期: 2012年第06期

  • 辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-κB信号通路的影响

    目的 探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4细胞)增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF-κB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制.方法 以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15 μmol/L),培养24、48、72 h.采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF-κB通路相关基因mRNA的差异表达.结果 辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用(均P<0.01),且呈时间与剂量依赖性.15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72 h细胞抑制率分别达到45.75%、92.91%、96.46%,而细胞早期凋亡率分别为30.25%、64.34%、87.38%.与对照组相比,15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞48 h组中NF-κB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调.结论 辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF-κB通路相关基因的表达有关.

    作者:华晓莹;曾梅;江庭秀;顾伟英;邱国强;李曼;王志林;曹祥山 刊期: 2012年第06期

  • 蒙古族人群炎症标志物与血管紧张素Ⅱ和肾素活性的关系

    目的 探讨蒙古族人群炎症标志物与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血浆肾素活性(PRA)的关系.方法 对2 589名蒙古族研究对象进行人口统计学等资料的收集、血压等的测量,以及C-反应蛋白(CRP)、可溶性E选择素(sE-selectin)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)以及AngⅡ和PRA的检测,用Logistic回归模型分析各炎症标志物水平与AngⅡ和PRA异常的关系.结果 PRA异常组的sE-selectin显著高于PRA正常组(18.9 ng/ml vs 17.5ng/ml,P<O.001);与sE-selectin的低分位数水平组比较,第4分位数水平组PRA异常的多因素调整比值比(0R)值(95%CI)为1.42(1.08~1.87).AngⅡ异常组的CRP(6.3 mg/L vs 5.5 mg/L)和sICAM-1(335.3 ng/ml vs314.4 ng/ml)均显著高于正常组(P<0.001);与CRP的低分位水平组比较,第4分位数水平组对AngⅡ异常的多因素调整OR值(95%CI)为1.94(1.44~2.60);与sICAM-1的低分位者比较,第4分位者对AngⅡ异常的多因素调整OR值(95% CI)为1.44(1.11 ~1.87).结论 CRP和sICAM-1水平升高与AngⅡ异常相关联,sE-selectin 水平升高与PRA异常相关联.

    作者:韦晓淋;陆洪敏;赵丽;刘海英;王珂;卜晓青;汤玲燕;张永红 刊期: 2012年第06期

  • 常州市2004-2011年急性迟缓性麻痹病例监测分析

    目的 了解常州市急性迟缓性麻痹(AFP)监测系统的运转状况,为完善监测系统的各项措施提供科学依据.方法 对常州市AFP监测系统2004年至2011年报告的病例进行流行病学分析.结果 该市AFP监测指标各年均达到卫生部的要求,报告病例中脊髓灰质炎疫苗服苗史为88.31%.AFP阳性标本中以非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV)为主.在脊髓灰质炎灰病毒中Ⅱ型为该市主要型别.结论 常州市各项AFP监测指标维持在较高水平,应重视流动儿童脊髓灰质炎疫苗的接种.

    作者:凌良健;高歌;林琴;卞琛;韩长磊 刊期: 2012年第06期

  • 康成贴膏对骨折动物模型的治疗研究

    目的 研究康成贴膏对骨折愈合的影响.方法 通过制作比格犬骨折动物模型,并用康成贴膏治疗,观察骨折肢支撑着地时间,并于在给药前至给药后1~3周观测骨折肢X线片评分、血清碱性磷酸酶、血清磷、血清钙水平.结果 康成贴膏可明显缩短动物骨折模型伤肢支撑着地所需的时间,促进骨痂生长,提高骨折愈合评分,明显升高血清碱性磷酸酶水平(均P <0.05),而对血清磷和血清钙水平无影响.结论 康成贴膏具有促进骨折愈合的作用.

    作者:王禹斌;周慧英;王婧;周正宇;黄猛;薛智谋 刊期: 2012年第06期

苏州大学学报(医学版)杂志

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主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学