学术投稿

鱼腥草蛋白酶抑制剂的分离和纯化

付煊赫;刘同祥;张宗申

关键词:胰蛋白酶抑制剂, 鱼腥草, 分离纯化
摘要:目的 以鱼腥草为材料,研究鱼腥草蛋白酶抑制剂(HCTI)的分离提取工艺.方法 HCTI的佳粗提条件是采用pH 7.0的双蒸水为提取溶剂,在体积比为1∶30, 45 ℃条件下浸提2.0 h,提取2次.硫酸铵部分沉淀后,再经DEAE-52离子交换层析柱纯化.结果 粗提液经45%~60%饱和度的硫酸铵沉淀比活力高,经过DEAE-52离子交换层析柱梯度洗脱后,检测到HCTI活性峰.结论 用DEAE-52离子交换层析柱可分离纯化HCTI,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,计算出该HCTI的分子量约为28 KDa.
时珍国医国药杂志相关文献
  • 舌诊的现代技术和方法研究

    随着社会的不断进步以及中医现代化步伐的不断加快,舌诊作为中医具特色诊断的内容之一,在其现代化的研究进程中也取得了可喜的成绩.首先,传统的研究方法结合现代医学手段如B超、电镜、热象仪、舌色检查仪、舌体测算仪等的广泛使用,实验室血液流变学的检测、舌苔脱落细胞的检测、酸碱度、细胞免疫机制的检测以及分子生物技术的应用,使舌诊的研究进入了一个崭新的平台;其次,电子计算机技术和网络信息技术的发展和应用,如运用中医舌诊专家系统测定舌质的RGB值以及多色度空间的转换实现舌象的量化,改进的Confidence connected区域生长算子提取裂纹区域,有限维模型分析舌色范围,监督FCM聚类算法区分舌质舌苔,基于JSEG 算法和k-NN法对苔质自动分离使舌象数字化以及新型的舌象采集装置实现舌象信息的全面提取和舌色、苔色、苔厚、腐腻、裂纹、润燥等指标的自动分析等等,中医舌诊研究更是由此进入了现代化、信息化、客观化、标准化之飞速发展的轨道;再者,舌诊研究的动物模型的出现等将舌诊研究拓展到动物实验领域.文章对近些年舌诊研究技术及方法方面的一些成果进行概述,以期为进一步的研究提供参考.

    作者:丁宏娟;何建成 刊期: 2010年第05期

  • 益寿饮抗D-半乳糖所致衰老作用研究

    目的 探讨益寿饮延缓D-半乳糖所致衰老作用机理.方法 采用小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖溶液制备小鼠亚急性衰老模型,空白对照组、模型对照组、阳性对照组(维生素E 20 mg/kg)和3个不同剂量的益寿饮给药组(1,2,3g生药/kg)分别灌胃45 d后,测定小鼠脾脏指数和全血中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果 益寿饮高、中、低3个剂量组及阳性对照组均能显著提高亚急性衰老小鼠脾脏指数和全血中CAT和GSH-Px活力(P<0.05,P<0.01).结论 益寿饮对于D-半乳糖诱发的亚急性衰老模型有明显的延缓衰老作用.

    作者:鄢泽然;冯丽莉;乔庆彬;甄建华;白玉亭;姚婷;王庆国 刊期: 2010年第05期

  • 头顶一棵珠对实验性脑缺血的保护作用

    目的 研究头顶一棵珠对脑缺血的保护作用.方法 小鼠断头形成急性脑缺血模型观察断头后张口喘气的时间;结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血模型,观察头顶一棵珠对大鼠脑含水量的影响;利用结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血再灌注模型,观察对脑含水量、脑组织ATP酶的活性、LPO含量的影响.结果 头顶一棵珠明显延长小鼠断头后张口喘气时间,减少脑含水量,并可有效降低脑毛细血管通透性,明显提高脑组织ATP酶活性,减少过氧化脂质LPO的生成.结论 头顶一棵珠对实验性脑缺血具有明显保护作用.

    作者:刘红;艾明仙;阳辉 刊期: 2010年第05期

  • 大花红景天中镉和铅的电感耦合等离子体原子发射光谱法测定

    目的 建立利用电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法测定大花红景天中重金属元素Cd和Pb的方法.方法 比较干灰化法和湿化法两种样品处理方法对分析结果的影响,并测定云南一些地区大花红景天中的Cd和Pb含量.结果 采用电感耦合等离子体原子发射光谱法检测大花红景天中的Cd和Pb,低检出限(DL)分别为1.43和1.16 ng·ml-1;相对标准偏差(RSD)分别为2.35%和1.93%;回收率分别为102.84%和97.78%.利用湿法消解样品,精密度好,回收率高,优于干灰化法.干灰化法适合测定大花红景天中Pb,但不适合测定Cd,其回收率仅为0.2%.用湿法消解样品,测定不同产地大花红景天的Cd和Pb含量.结论 所测地区大花红景天的Cd,Pb含量大大低于<中国药典>(2005)规定的中药材重金属含量标准,符合GAP生产的要求.

    作者:王云美;王元忠;赵自仙;黄清梅 刊期: 2010年第05期

  • 针灸治疗抽动秽语综合征临床随机对照试验系统评价

    目的 评价针灸治疗抽动秽语综合征的临床疗效,分析目前临床研究的现状.方法 检索PubMed、Cochrane图书馆、CBM数据库、CNKI数据库等收集针灸治疗抽动秽语综合征临床随机对照试验,选择符合纳入标准的临床试验,以Cochrane系统评价手册5.0进行质量评价,统计学分析采用RevMan 4.2.8.结果 6篇文献符合纳入标准,共508例患者.Meta分析显示针灸治疗抽动秽语综合征对照常规药物临床症状改善有效率比较差异有统计学意义[合并OR(固定效应模型)=3.39,95%CI(1.73,6.65),Z=3.56,P=0.000 4];YGTSS减分率有效率评价的OR=3.18,95% CI(1.00,10.07),P=0.05.结果显示两组差异没有统计学意义,即表明针灸治疗抽动秽语综合征在减低YGTSS减分率上没有优势;临床症状发作频度进步率有效率评分的RR=2.18,95% CI(0.54,8.75),P=0.27.结果 显示两组差异没有统计学意义,即表明针灸治疗抽动秽语综合征在临床症状发作频度进步率评分上没有优势.结论 针灸治疗抽动秽语综合征临床症状改善疗效优于常规西药;在YGTSS减分率、临床症状发作频度进步率评分尚未见明显治疗优势,但纳入样本量均较小、部分文献质量较低,结论 尚不确定;尚需高质量研究进一步验证针灸治疗抽动秽语综合征的优势.

    作者:肖丽;陈元武;杜元灏;高翔;林小苗;孙攀 刊期: 2010年第05期

  • 蒙药材草乌及其炮制品中几种双酯型生物碱的含量比较

    目的 用高效液相色谱法比较蒙药材草乌及其炮制品中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的含量.方法 色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶15, V/V),B为 0.1 mol·L-1醋酸铵-冰醋酸(100∶0.05,V/V),梯度洗脱;检测波长为235 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温为30℃;进样量10 μl.结果 蒙药材草乌经特殊炮制后,炮制品中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的含量均低于草乌生品,诃子制草乌中含量低,甘草制草乌含量次之,酸奶制草乌含量高.结论 3种炮制方法使草乌药材中双酯型生物碱含量大大降低,可用于指导蒙医临床用药.

    作者:吕颖;王栋;林燕;王伟;孙立新 刊期: 2010年第05期

  • 抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻及再通后大鼠尿微量蛋白的影响

    目的 研究单侧输尿管梗阻(UUO)及再通后大鼠尿微量蛋白的变化和抗纤灵对尿微量蛋白变化的影响.方法 建立大鼠UUO模型120只和UUO再通模型90只,随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组和科素亚组.于造模后各时间点检测大鼠尿转铁蛋白(TRF)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿β2-微球蛋白(β2-M).结果 在UUO模型中,模型组各时间点TRF、RBP、β2-M较正常组和假手术组明显升高(P<0.01),并随梗阻时间的延长逐渐升高.在UUO再通模型中,各时间点TRF、RBP、β2-M较正常组和假手术组明显升高(P<0.01),并随梗阻时间的延长逐渐降低.与模型组比较,抗纤灵能明显降低两模型中TRF、RBP、β2-M.结论 抗纤灵冲剂能减少UUO模型和UUO再通模型中的尿微量蛋白尿,改善两种模型中的肾损伤.

    作者:吴锋;沈丽萍;张新志;黄迪;董飞侠;何立群 刊期: 2010年第05期

  • 银杏内酯滴丸对异丙肾上腺素致心肌损伤的影响

    目的 观察银杏内酯滴丸(bilobalide drop pill,BDG)对小鼠耐缺氧能力以及对大鼠心肌缺血损伤的影响.方法 采用正常及异丙肾上腺素(Iso)诱导心肌缺血小鼠常压耐缺氧实验,观察银杏内酯滴丸对小鼠存活时间的影响;采用Iso诱导的大鼠心肌缺血模型,观察BDG对心电图、心肌含水量、血清乳酸(LD)和丙二醛(MDA)的含量、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力以及心肌组织病理形态学的影响.结果 BDG(27,54 mg/kg)和BDG(13.5,27,54 mg/kg)可分别延长正常小鼠和心肌缺血小鼠常压耐缺氧条件下的存活时间;BDG(10.5,21,42 mg/kg)可以对抗心电图的ST段偏移;BDG(10.5,21 mg/kg)可以减少血清LD含量及降低血清LDH活力;BDG(10.5,21,42 mg/kg)可降低血清CK活力、提高SOD活力和减少MDA含量;BDG(21,42 mg/kg)可降低心肌含水量;BDG对心肌组织损伤有一定的改善作用.结论 BDG能提高小鼠的耐缺氧能力,保护大鼠心肌缺血损伤,该作用可能与稳定心肌细胞膜、减少心肌酶的漏出、抗氧自由基有关.

    作者:郑锐;李维祖;闵小芬;尹艳艳 刊期: 2010年第05期

  • 外燥对小鼠气道与大肠功能影响的实验研究

    目的 观察外燥对小鼠气道与大肠功能的影响.方法 120只无特定病原体级(SPF)昆明种小鼠随机分为常温常湿组,常温燥组,温燥组,凉燥组,每组30只.于处理后第6,12,18天检测各组气道液黏多糖(RS)、大肠液黏多糖(CS)与粪便含水率(WF).结果 温燥组第12天,第18天 RS持续下降,凉燥组第12天为减少(P<0.05);温燥组、凉燥组CS先升高、后持续降低(第18天,P<0.05);温燥组RS与CS呈平行减少.结论 外燥可致肺津生成减少与宣输失司;肺气则无津以降,而失舟楫传导之职,肠液分泌减少,其病机主在肺卫,并为研究外燥伤营卫、津血之燥提供基础资料.

    作者:胡利群;丁建中;张六通;王明明;贺尚荣 刊期: 2010年第05期

  • 紫花野芝麻挥发油化学成分分析

    目的 分析紫花野芝麻挥发油化学成分.方法 水蒸气蒸馏法提取挥发油,利用毛细管气相色谱-质谱联用技术结合计算机检索,对挥发油化学成分进行分析鉴定,用面积归一化法测定各化合物在挥发油中的相对含量.结果 共鉴定出29个化合物,占挥发油总成分的74.11%.结论 紫花野芝麻挥发油主要成分为三十一烷、二十九烷、三十六烷,5,6,7,7a-四氢-4,4,7a-三甲基-2-四氢苯并呋喃、6,10,14-三甲基-十五烷酮.

    作者:朱庆华;赵丽迎;李金楠;于静;邓雁如 刊期: 2010年第05期

  • 孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B3活性

    目的 从绿藻孔石莼中分离具有抗病毒活性蛋白多糖提取物. 方法 新鲜孔石莼经pH 7.0的磷酸盐缓冲液提取和硫酸铵沉淀得到粗提取物,大孔树脂层析分离得到蛋白多糖.经紫外扫描、高温高压处理(121℃,15min)和糖苷酶水解测定提取物的性质.MTT法检测蛋白多糖对Hela细胞的毒性,细胞病变法(CPE)检测蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)引起的细胞病变抑制作用.通过样品对细胞的保护作用、对CVB3增殖的影响、对CVB3感染细胞的综合作用,初步研究了样品抗病毒作用的机理.结果 从孔石莼中提取了蛋白多糖,得率为0.5%.毒性试验结果表明,孔石莼蛋白多糖对HeLa细胞的半数中毒浓度TC50大于8mg·ml-1.孔石莼蛋白多糖具有显著的抗CVB3活性,通过试验测得孔石莼蛋白多糖对CVB3主要是预防作用和直接杀灭作用,其IC50为3.7μg·ml-1.结论 从孔石莼中分离到具有抗病毒活性的蛋白多糖,具有很好的抗CVB3活性.

    作者:罗振宇;陈薪研;王小燕;瞿畅;张美英;安卫征;熊盛 刊期: 2010年第05期

  • 延胡索产地醋煮工艺的研究

    目的 优选出延胡索佳产地醋煮工艺.方法 首先对温度、用醋量和拌润时间进行了单因素考察,然后采用正交实验,以用醋量、拌润时间和粒度作为正交设计因素,再采用HPLC法测定延胡索中延胡索乙素、原阿片碱和去氢紫堇碱3种有效成分的含量,后获得延胡索佳产地醋煮工艺.结果 延胡索佳产地醋煮工艺即选小个子药材加40%的醋和适量水拌润4 h后煮至醋液吸尽;大个药材应适当破碎后再炮制.结论 优选出的延胡索佳产地醋煮工艺简单易操作,稳定可行.

    作者:田永亮;窦志英;曹柳;王萍;李迎春 刊期: 2010年第05期

  • 《内经》病位辨证探析

    辨别病位是临床辨证论治的重要内容之一,<黄帝内经>许多篇章都谈及了辨别病位这一问题,其定位方法涉及到症状学、病因学、藏象学、经络学、五行学说等诸方面学说,并对后世中医诊断学产生了深远影响.文章对<黄帝内经>诸篇病位辨证的条文进行研究,就<内经>病位辨证原则和定位方法作一阐述.

    作者:庄燕鸿 刊期: 2010年第05期

  • 丹参对糖尿病肾病大鼠肾脏水通道蛋白-2表达的影响

    目的 探讨肾脏水通道蛋白-2(AQP-2)的表达与糖尿病肾病大鼠水液代谢异常及丹参防治作用的机制.方法 60只健康SD大鼠分为正常组(10只),剩余50只采用高糖高脂饲料刺激加小剂量STZ诱导糖尿病大鼠模型成功30只,随机分为模型组、对照组、观察组每组各10只;免疫组织化学检测AQP-2在各组大鼠肾脏中的分布及蛋白质的表达;RT-PCR方法检测各组大鼠AQP-2 mRNA的表达,并以β-actin相对定量.结果 肾脏免疫组化显示,AQP-2主要在肾脏的集合管表达.在4组动物的肾脏AQP-2蛋白质[相对阳性面积:正常组(0.119±0.035),模型组(0.188±0.027),对照组(0.158±0.036),观察组(0.154±0.033)]和mRNA[正常组(0.51±0.004),模型组(0.81±0.059),对照组(0.78±0.090),观察组(0.70±0.027)]的表达上观察组较模型组均下调(P<0.01).结论 在糖尿病模型大鼠肾脏组织中AQP-2表达增多,AQP-2的增多可能参与了糖尿病多尿的形成.丹参对水通道蛋白的表达有下调作用,这可能是其利水作用的机制,也是其防治糖尿病肾病的基础.

    作者:胡波;范红伟;王燕午;陈冰雪;王振国;李俊勇;李锋 刊期: 2010年第05期

  • 青海产暗紫贝母化学成分的气相色谱-质谱联用分析

    目的 分析暗紫贝母鳞茎乙醚提取物中的化学成分.方法 采用索式提取法以乙醚为提取剂提取暗紫贝母鳞茎中的化学成分,运用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对化学成分进行研究,并应用色谱峰面积归一化法测定各组分的相对百分含量.结果 从暗紫贝母鳞茎乙醚提取物中鉴定出17种成分.结论 GC/MS方法简便、快速、灵敏度高,用此方法对暗紫贝母化学成分进行分析,可进一步提高对暗紫贝母药效物质基础的认识.

    作者:韵海霞;陈志 刊期: 2010年第05期

  • 针刺对肥胖模型大鼠中胰岛素和胰岛素底物表达的影响

    目的 观察针刺对肥胖大鼠血清胰岛素含量和胰岛组织胰岛素受体底物1,2(IRS-1,IRS-2)表达的影响,探讨针刺对高脂饮食性肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响.方法 采用实时定量PCR技术测定胰岛素受体底物1,2(IRS-1,IRS-2)基因表达水平, 酶联免疫测定法测定血清中胰岛素的含量,生化比色法测定血清葡萄糖含量. 结果 针刺治疗取得良好减肥疗效的同时,肥胖大鼠血清中葡萄糖及胰岛素水平明显回降,而胰岛组织胰岛素受体底物1(IRS-1)基因表达水平却明显升高.结论 针刺可改善肥胖大鼠胰岛素信号转导,减轻胰岛素抵抗.

    作者:龚美蓉;徐斌;毛珍;邵清华;孙永 刊期: 2010年第05期

  • 复方红豆杉胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

    目的 采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法观察复方红豆杉胶囊对血管生成的影响.方法 种蛋在孵育7d后制备CAM模型,复方红豆杉胶囊低、高剂量含药血清、生理盐水、硫酸鱼精蛋白、空白血清滴加于CAM表面载体上,作用48h后观察胚胎存活情况,显微镜下计数CAM载体周围的一、二级血管数目.结果 复方红豆杉胶囊低、高剂量组均有抑制CAM血管生成作用,一、二级血管数目明显少于生理盐水和空白血清组(P<0.01).结论 复方红豆杉胶囊具有明显的抑制CAM血管生成的作用.

    作者:杨爱珍;刘向荣;王蕊;厉璐帆;马世平 刊期: 2010年第05期

  • 直立型川麦冬植株生物学性状与块根产量、品质的相关性研究

    目的 研究直立型川麦冬生物学性状与块根产量、品质的相关性规律,确定影响直立型川麦冬块根产量的主要因素.方法 在直立型川麦冬主产区,原位动态法采集样品,测定麦冬植株生物学性状;苯酚-硫酸比色法和紫外分光光度法分别测定麦冬多糖含量和皂苷含量;运用SPSS软件分析麦冬生物学性状与块根产量、品质的相关性规律.结果表明直立型川麦冬是植株综合性状好、块根产量高、品质优良的新品系,影响直立型川麦冬块根产量和品质的主要因素有块根数X5、植株冠幅X2、植株分蘖数X3、植株高度X1、鲜块根总重Y,其回归方程为:Z12=2.924Y+0.118X5+5.313,Y=0.343X5+0.688X1+0.250X2-3.195,Y=0.341Z12-0.039X5-1.814,X5=5.142X3+10.023(P<0.001***).结论 直立型川麦冬植株生物学性状与麦冬块根产量和品质密切相关,科学筛选优质麦冬资源与培育高产良好性状的株系是直立型川麦冬新品系育成的重要途径.

    作者:李芳令;张兴国;程方叙;梁力 刊期: 2010年第05期

  • 低分子肝素钙联合复方丹参注射液治疗稳定型心绞痛97例临床观察

    本研究组自2009-02~2010-03,我科收治不稳定型心绞痛(UAP)患者97例,在常规治疗基础上加用低分子肝素钙联合复方丹参注射液治疗治疗,疗效明显,总结报告如下.

    作者:罗丽君 刊期: 2010年第05期

  • 大蒜多糖中单糖组分的毛细管电泳研究

    目的 建立高效毛细管电泳法(HPCE)分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比.方法 大蒜多糖样品经2 mol/L硫酸降解为单糖后,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮( PMP)衍生化,用毛细管区带电泳(CZE)法测定单糖组成.结果 大蒜多糖中葡萄糖(Glc)、半乳糖醛酸(GalUA)、鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、阿拉伯糖(Arab)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖(Gal)的摩尔比为18.4∶6.99∶4.21∶4.38∶3.15∶7.21∶4.99.结论 该方法灵敏度高,结果准确可靠,可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制.

    作者:马晓丽;孟磊;孙莲;李新霞;吕成军 刊期: 2010年第05期

时珍国医国药杂志

时珍国医国药杂志

主管:湖北省黄石市卫生局

主办:时珍国医国药杂志社